MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用課件

MICM檢測在惡性血液病中的運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用背景介紹

血液病是原發(fā)于造血系統(tǒng)的疾病，或影響造血系統(tǒng)伴發(fā)血液異常改變，以貧血、出血、發(fā)熱為特征的疾病。

出血性疾病貧血癥白細(xì)胞疾病常見血液病造血系統(tǒng)惡性腫瘤MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用惡性血液病類型MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICMFAB形態(tài)學(xué)診斷(Morphology)：包括血液和骨髓形態(tài)學(xué)及組織化學(xué)染色。免疫學(xué)檢查(Immunology)遺傳學(xué)檢查(Cytogenetics)分子生物學(xué)檢查(Molecular)檢測方法MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用一、形態(tài)學(xué)

是診斷的基礎(chǔ)，任何淋巴造血系統(tǒng)增生性疾病的診斷都離不開形態(tài)學(xué)診斷。形態(tài)學(xué)診斷技術(shù)包括

細(xì)胞學(xué)：外周血、骨髓涂片組織學(xué)：骨髓活檢、血凝塊MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用外周血涂片檢測（血液病血常規(guī)）：用來觀察外周血細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量。是對血液分析儀檢測的血常規(guī)的鏡下檢測補(bǔ)充。檢測內(nèi)容包括：白細(xì)胞如粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞；紅細(xì)胞；血小板。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用骨髓涂片檢測：

1、骨髓增生程度，G:E，骨髓小粒及脂肪油滴有無及分度。

2、粒細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、單核細(xì)胞系統(tǒng)、巨核細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞系統(tǒng)以及其他細(xì)胞（網(wǎng)狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、退化細(xì)胞等）的形態(tài)及比例。血小板的情況。

3、骨髓小粒

4、有無轉(zhuǎn)移瘤和寄生蟲。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用骨髓病理檢測：在高倍鏡下觀察骨髓的組織結(jié)構(gòu)和各成分的分布及相互關(guān)系。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用

骨髓活檢和骨髓/血涂片骨髓/血涂片骨髓涂片細(xì)胞細(xì)微結(jié)構(gòu)清楚

評估紅系、粒系增生情況及幼稚細(xì)胞比例具有優(yōu)勢骨髓纖維化、細(xì)胞致密可干抽可做組織化學(xué)染色（如鐵染）對缺鐵性貧血、慢性疾病引起的貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、和急性白血病的診斷尤其有幫助。骨髓活檢骨髓活檢顯示骨髓的組織結(jié)構(gòu)和各成分的分布及相互關(guān)系，對巨核細(xì)胞的評估具有優(yōu)勢不存在干抽和骨髓稀釋可做免疫組織化學(xué)染色對再生障礙性貧血、低增生性白血病、淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、骨髓增生性腫瘤的診斷具有重要價(jià)值骨髓涂片看細(xì)胞、骨髓活檢看結(jié)構(gòu)，相互補(bǔ)充相互驗(yàn)證不能相互替代血凝塊：廢物利用、骨髓活檢的補(bǔ)充MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用骨髓活檢常見問題標(biāo)本取材條件：要求穿刺1cm以上骨髓組織診斷不明確：取材部位是否有病灶保存液：10%福爾馬林固定MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用二、細(xì)胞組織化學(xué)染色以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，運(yùn)用化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)研究細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分的分布及變化的檢測方法。對某些血液病的診斷、鑒別診斷、療效、判斷預(yù)后有一定的意義。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用常用的細(xì)胞化學(xué)染色有：

1、過氧化酶又稱髓過氧化酶(Myeloperoxidase，MPO或POX)：陽性為棕黑色。用于急性白血病的鑒別：急性粒細(xì)胞白血病為陽性，其中M3為強(qiáng)陽性，急性單核細(xì)胞白血病為弱陽性，急性淋巴細(xì)胞白血病為陰性。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用2、非特異性酯酶（NSE）：包括中性非特異性酯酶（α-NAE，棕黑色）、酸性非特異性酯酶（A-NAE，棕紅色），堿性非特異性酯酶（α-NBE，棕紅色）。意義：急性單核細(xì)胞白血病強(qiáng)陽性，且能被氟化鈉抑制。急性粒細(xì)胞白血病弱陽性或陰性，不被氟化鈉抑制。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用3、特異性酯酶（SE）：陽性紅寶石色顆粒。意義：急性粒細(xì)胞白血病陽性或強(qiáng)陽性。急性單核細(xì)胞白血病陰性。慢粒急粒變陽性增強(qiáng)。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用4、蘇丹黑B染色（SBB）：陽性為黑色。意義：和POX基本一樣。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用5、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）：陽性為灰黑色或黑色。計(jì)算陽性率和積分值：陽性率：計(jì)數(shù)100個(gè)中性桿狀核和分葉核粒細(xì)胞，觀察其陽性細(xì)胞的個(gè)數(shù)，即為陽性率。(正常值＜40%)

陽性指數(shù)：（+）×1+（++）×2+（+++）×3+（++++）×4的總和。（正常值40-80分）意義：升高見于嚴(yán)重感染，類白，急淋，骨纖，真紅，再障，ITP,淋巴瘤等。降低見于慢粒，急性粒細(xì)胞白血病，PNH。故可用于慢粒和類白、骨纖；再障和PNH；急粒和急淋的鑒別。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用6、糖原染色（PAS）：陽性為紅色。可以計(jì)算陽性率和陽性指數(shù)。意義：（1）正常情況下，紅細(xì)胞系統(tǒng)的原、幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞；粒細(xì)胞系統(tǒng)的原粒細(xì)胞、原單核細(xì)胞和大多數(shù)淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)。自早幼粒階段以后的粒細(xì)胞和幼單核細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng)。（2）急淋、紅白血病、戈謝病的原始細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)或陽性反應(yīng)；缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙、MDS亦可呈陽性反應(yīng)；急性粒細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、良性淋巴細(xì)胞增多癥、尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)。巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等幼紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)。偶有個(gè)別幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。（3）幫助鑒別不典型巨核細(xì)胞和霍奇金細(xì)胞，巨核細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)；霍奇金細(xì)胞呈弱陽性或陰性反應(yīng)。（4）幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺癌骨髓轉(zhuǎn)移的腺癌細(xì)胞，腺癌細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用7、酸性磷酸酶染色（ACP）：陽性酶活性部位出現(xiàn)紅色沉淀，胞核為藍(lán)色。意義：1、鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-匹克細(xì)胞，前者陽性，后者為陰性。2、多毛細(xì)胞白血病為陽性反應(yīng)，且耐L-酒石酸的抑制作用。淋巴肉瘤細(xì)胞和慢性淋巴細(xì)胞白血病的淋巴細(xì)胞，酸性磷酸酶染色也呈陽性反應(yīng)，但此酸可被L-酒石酸抑制。3、T淋巴細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，而B淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用8、鐵染色（Fe染色）：陽性為淡綠色。細(xì)胞內(nèi)鐵觀察有核紅細(xì)胞；細(xì)胞外鐵觀察骨髓小粒及網(wǎng)狀細(xì)胞。意義：（1）鐵低見于缺鐵性貧血；（2）鐵高見于再生障礙性貧血、巨幼紅細(xì)胞性貧血、白血病、感染和多次輸血病人；（3）環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞（RS），環(huán)鐵大于15%，見于RAS。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用鐵粒幼紅細(xì)胞定義MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用三、免疫分型應(yīng)用：1、確定系來源：利用不同系有特定的抗原表達(dá)可以確定髓系/B系/T/NK系/組織細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。

2、確定細(xì)胞分化階段：不同發(fā)育階段細(xì)胞，其抗原表達(dá)不同。

3、預(yù)后判斷：有些抗原表達(dá)和淋巴瘤/白血病預(yù)后相關(guān)，如白血病患者有CD7+與CD34+共表達(dá)，示預(yù)后不好。

4、治療方法選擇-治療靶向

5、療效判斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測所以我們可以用于血液疾病的診斷如白血病、多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤、MDS等；以及一些疾病的鑒別診斷如再障、ITP、MPD。運(yùn)用于微小殘留病灶的監(jiān)測等。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用常用的方法：流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色法。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用白血病分類中免疫分型的應(yīng)用與意義

常用的抗原：1、白血病系列分化抗原

T淋巴細(xì)胞白血病：CD3、CD5、CD7。

B淋巴細(xì)胞白血?。篊D10、CD19、CD22。

NK淋巴細(xì)胞白血?。篊D16、CD56、CD57。

髓系白血?。篊D13、CD14、CD33、MPO（髓過氧化物酶）。

紅白血?。篏lyA（血型糖蛋白A）。

巨核細(xì)胞白血病：CD41、CD42、CD61。

MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用2.白血病系列非特異性抗原

CD34、HLA－DR為早期細(xì)胞抗原，無系列特異性，可與CD38聯(lián)合運(yùn)用于免疫分型。一般而言，干/祖細(xì)胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始細(xì)胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38＋，而幼稚細(xì)胞（如早幼粒細(xì)胞）CD34－、HLA－DR－、CD38＋。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用3、白細(xì)胞共同抗原

CD45為白細(xì)胞共同抗原，其表達(dá)量在淋巴細(xì)胞最高，單核細(xì)胞，成熟粒細(xì)胞，早期造血細(xì)胞（blasts）依次減弱。紅細(xì)胞（中，晚幼紅細(xì)胞，成熟紅細(xì)胞）不表達(dá)CD45。用SSC/CD45PerCP雙參數(shù)分析可十分容易鑒別骨髓和血液中的原始或成熟細(xì)胞。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用AML：1、M0：其特征為T、B細(xì)胞標(biāo)記的陰性（即CD19、CD20、CD22與CD3、CD5、CD7、CD10）。作為干、祖細(xì)胞標(biāo)記的CD34、CD38和HLA-DR均為陽性，具有特征性的TdT標(biāo)記應(yīng)有至少30%的原始細(xì)胞會(huì)呈陽性表達(dá)。而髓系特征不能過多，通常是CD13、CD33、CD117中的任何一項(xiàng)呈陽性表達(dá)；CD68、MPO大多陰性。若髓系有兩個(gè)以上標(biāo)記呈陽性，應(yīng)考慮未成熟的急性髓細(xì)胞白血病。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用2、M1：M1與M0相似不易區(qū)分，M1一般CD13＋、CD33＋、HLA-DR－，但CD34表達(dá)少于M0，可能表達(dá)部分CD15。3、M2：M0與M1的主要區(qū)別是成熟度增加，CD15較M1較顯著，CD34弱于M1，CD13有時(shí)表達(dá)強(qiáng)于CD33，多數(shù)病例HLA－DR（-）。4、M3：高顆粒性，多數(shù)情況HLA－DR（-）或表達(dá)減少，CD34少于M2、一般CD13弱（＋），可有CD2表達(dá)。

MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用5、M4與M5：兩型表型相似，但M4較M5表達(dá)更多的CD34（＋），重要的表型為CD13、CD33、HLA－DR、CD14和CD15，CD33可表達(dá)強(qiáng)于CD13；CD33（＋）、CD13（－）、CD34（－）很可能為M5，但只出現(xiàn)在少數(shù)病人中，部分M5可見CD56（＋）。

MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用6、M6：M6較少見且特征不明顯，一般HLA－DR，CD34、CD13、CD33陽性。7、M7：巨核細(xì)胞白血病，在AML中少于1％。一般CD61（GpⅢa）和/或CD41（GpⅡb-Ⅲa）陽性，而注意由于血小板粘附造成的假陽性以及一些不明原因出現(xiàn)的假陰性。這時(shí)候可以借助于小巨核酶標(biāo)（CD41免疫組織化學(xué)染色）MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用ALL：WHO分型分為B祖細(xì)胞型，CD10＋或CD10－，前B細(xì)胞型，B細(xì)胞型，T細(xì)胞型。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用1、B祖細(xì)胞型ALL：FAB標(biāo)準(zhǔn)的L1或L2，一般TdT(+)HLA-DR(+)，CD19(+)，此型又分為2個(gè)亞型，CD10＋和CD10－，前者預(yù)后好，多數(shù)病例CD24＋，CD34＋，CD20表達(dá)隨成熟度增加而增加。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用2、前B細(xì)胞型ALL：一般為CD19＋，CD24，HLA－DR＋，胞漿CD22＋，CD10＋，TdT隨CD20變化，CD34多為陰性。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用3、B細(xì)胞型ALL：即成熟B細(xì)胞型ALL；即FAB標(biāo)準(zhǔn)的L3，表型為CD19、CD20、CD22、CD24且sIg（多數(shù)為IGM）陽性，多數(shù)病例CD10＋。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用4、T－ALL：表達(dá)CD1、CD2、CD5、CD7、CD4/CD8雙陽與極少膜表面CD3、TdT多為陽性。另一常見亞型為皮質(zhì)早期表達(dá)CD2、CD5、CD7、TdT強(qiáng)表達(dá)。髓質(zhì)期亞型表達(dá)CD2、CD5、CD7、與CD3＋CD4＋/CD3+CD8+,很少見TdT表達(dá)。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用雜合型白血病：隨著流式技術(shù)的廣泛應(yīng)用，我們發(fā)現(xiàn)許多病例并不能嚴(yán)格劃分為淋系或髓系，真正的雙表型病人多為t(9；22)或（11q23），現(xiàn)在雜合型的誤診率很高。最重要的系特異性抗原在B系、T系、髓系分別為CD22、CD3和MPO。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用即染色體異常

包括染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)量異常

根據(jù)這些特征性的異常，對惡性血液病進(jìn)行診斷和分類、預(yù)后分層及指導(dǎo)治療。四、細(xì)胞遺傳學(xué)MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用核型描述首先列出染色體總數(shù)，然后是性染色體組成，接著列出異常的染色體數(shù)目或形態(tài)。下列統(tǒng)一的命名符號：A-G染色體組的名稱1-22染色體編號X,Y性染色體del缺失der結(jié)構(gòu)重排的染色體dup重復(fù)inv倒位t易位+/-在染色體符號前表示染色體增加或減少，在染色體符號后表示染色體多出或缺少一部分MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用人類23對染色體MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用上面的核型描述就是46，XY。例如46，XY，t(8;21)(q22;q22)MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用（一）、染色體檢測在白血病中的意義MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用1950196019701980199020002010確定染色體數(shù)目=46發(fā)現(xiàn)Ph；發(fā)現(xiàn)+21各種顯帶技術(shù)出現(xiàn)；發(fā)現(xiàn)多數(shù)AL患者伴有染色體異常FISH出現(xiàn)；闡明某些染色體異常的分子學(xué)改變SKYCGHPCR技術(shù)FLT3-ITD(1996)c-KIT突變（1993）…………..芯片技術(shù)：cDNAarrayArray-CGH、SNP-array、測序技術(shù)的發(fā)展大量基因突變的發(fā)現(xiàn)：JAK2、NPM、CEBPA、PAX5、IKZF1、FLT3、RUNX1、WT1、RAS、NOTCH1…………..新一代高通量測序技術(shù)；各種遺傳學(xué)改變間的相互作用血液腫瘤遺傳學(xué)研究的歷史MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用

多數(shù)AML患者有非隨機(jī)性染色體改變，包括易位、倒位、插入、缺失、擴(kuò)增、等臂染色體等

染色體異常在AML診斷、分型、預(yù)后評價(jià)、發(fā)病機(jī)制研究及靶向治療藥物研發(fā)方面有重要價(jià)值

一些特殊的細(xì)胞遺傳學(xué)異常在WHO分型建議中已被列為特殊亞型

對不同細(xì)胞遺傳學(xué)類型的血液腫瘤患者進(jìn)行個(gè)體化治療可以獲得更好的療效MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用AML常見染色體異常t(8;21)t(15;17)10%8%inv(16)/t(16;16)11q23異常5-10%3-5%30％20％

45％單一異常：45%≥2種異常：55%-5/5q-；-7/7q-；＋8；-Y；+11；+13；+21;+22 3q26；del(9q) t(6;9)；t(9;22)等MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用AML的WHO分型

伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AML

伴多系發(fā)育異常的AML

繼發(fā)于MDS；無MDS病史

治療相關(guān)性AML烷化劑相關(guān)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑相關(guān)；其它

無法分類的AML

髓細(xì)胞肉瘤

Down’s綜合征相關(guān)AMLMICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AMLAMLwitht(8;21)(q22;q22)AMLwithinv(16)(p13.1q22)ort(16;16)APLwitht(15;17)(q22;q12)AMLwitht(9;11)(p22;q23)AMLwitht(6;9)(p23;q34)AMLwithinv(3)(q21q26.2)ort(3;3)AML-M7witht(1;22)(p13;q13)RUNX1-RUNX1T1CBFB-MYH11PML-RARAMLLT3-MLLDEK-NUP214RPN1-EVI1RBM15-MKL1?AMLwithmutatedNPM1?AMLwithmutatedCEBPA

通常AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)，原始細(xì)胞比例為20%，但如果t(8;21)、t(15;17)

或inv(16)陽性，則不論原始細(xì)胞比例為多少，白血病診斷成立MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用AML染色體異常的預(yù)后分級預(yù)后等級

好 中 差

核型類型

t(8;21)、t(15;17)、

inv(16)

正常、+8、+21、+22、

del(9q)、del(7q)、t(9;11)(p13;q23)-5、del(5q)、-7、inv(3)、復(fù)雜異常、t(8;16)(p11;p13)

、inv(3)(q21q26)、11q23異常（t(9;11)除外）、

t(6;9)(p23;q34)等MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用（二）、染色體在MDS中的意義。已報(bào)道的MDS患者骨髓細(xì)胞染色體核型異常較多,其中以–5、–7、+8、5q–、7q–、11q–、12q–、20q–較為多見。經(jīng)過很多作者反復(fù)證實(shí)，MDS患者有無染色體異常以及異常的類型對于診斷分型、評估預(yù)后和治療決策都具有極為重要的意義,因此，細(xì)胞遺傳學(xué)檢查必須列為MDS常規(guī)檢測項(xiàng)目之一。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用

MDS的重現(xiàn)染色體異常

非平衡異常：+8，-7或del(7q),-5或del(5q),del(20q),-Y,i(17q)或t(17p),-13或del(13q),del(11q),del(12p)或t(12p),del(9q),idic(X)(q13)

其中+8，del(20q),和-Y，在不符合形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的情況下不能作為MDS的確診依據(jù)平衡異常：t(11;16)(q23;p13.3),t(3;21)(q26.2;q22.1),t(1;3)(p36.3;q21.1),t(2;11)(p21;q23),inv(3)(q21q26.2),t(6;9)(p23;q34)MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MDS預(yù)后判斷MDS的國際預(yù)后積分系統(tǒng)（IPSS）MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用五、分子生物學(xué)檢測

分子診斷常用技術(shù)核酸分子雜交技術(shù)熒光原位雜交（FISH）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR、多重PCR技術(shù)基因測序Sanger測序法、二代測序技術(shù)MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用熒光原位雜交(FISH)

生命科學(xué)中的“釣魚”技術(shù)原理：通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交目的：獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體或多種基因狀態(tài)的信息

熒光標(biāo)記探針探針變性樣本DNA變性雜交熒光原位雜交（Fluorescenceinsituhybridization,FISH）MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用FISH檢測BCR/ABL融合基因BCR/ABL基因正常BCR/ABL基因融合9號22號雙色單融合探針，檢測染色體易位ablbcrMICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)PCR95℃72℃,dNTP,酶,Mg2+55℃按照上述步驟重復(fù)操作，PCR產(chǎn)物呈指數(shù)擴(kuò)增模板DNA擴(kuò)增倍數(shù)T=2n(n:循環(huán)次數(shù))MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用Sanger測序法DNA雙脫氧鏈終止法測序MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用各個(gè)平臺的特點(diǎn)FISH平臺PCR平臺測序平臺靈敏度百分之一萬分之一十分之一精確度精確假陽性精確價(jià)格高低較高優(yōu)點(diǎn)結(jié)果直觀有商品化試劑盒對微小、復(fù)雜異常有優(yōu)勢可以檢測基因的表達(dá)量靈敏度高，監(jiān)測MRD基因序列一目了然檢測基因突變的金標(biāo)準(zhǔn)缺點(diǎn)成本高應(yīng)用較短的cDNA探針時(shí)效率下降不能發(fā)現(xiàn)未知異常、染色體數(shù)目異常需知道確切的斷裂位點(diǎn)耗時(shí)較長標(biāo)本類型肝素鈉抗凝骨髓3mlEDTA抗凝骨髓3mlEDTA抗凝骨髓3mlMICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用血液病分子診斷的意義MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用CBFB/MYH11AML1/ETOPML/RARaE2A/PBX1MLL/AF4BCR/ABLTEL/AML1SIL/TAL1EVI1HOX11MLL/AF10MLL-AF9MLL/ENLNPM1/ALKNPM/MLF1MLL/ELLMLL/AFXMLL/AF1q

MLL/AF1p

PLZF/RARaMLL/AF6MLL/MLL（dupMLL）TLS/ERGTEL/PDGFRTEL/ABLSET/CANDEK/CANMLL/AF17E2A/HLFNPM/RARaAML1/MDS1MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用CBFB/MYH11：Inv(16)(p13q22)是急性髓系白血病(AML)特征性染色體異常，通常見于AML-M4Eo亞型，占總AML患者的10%，其中50％發(fā)生在AML-M4Eo中。帶有Inv(16)(p13q22)的病人通常有較好的預(yù)后。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用AML1/ETO：出現(xiàn)在所有的t(8,21)陽性的AML中，同時(shí)也出現(xiàn)在具有復(fù)雜移位的t(8,21)陰性的AML病例中。其主要出現(xiàn)在AML-M2這一亞型中，大約有20-40%病例具有t(8,21)。在非常少見的AML-M1，AML-M4和t-AML中也有報(bào)道。t(8,21)異位是一個(gè)較好的標(biāo)志，它的存在使這類病例對一些藥物有較好的反應(yīng)。因此基于細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)的檢測結(jié)果，可以為病人選擇風(fēng)險(xiǎn)低的較好的治療方案。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用PML/RARa：t(15,17)易位是APL的一個(gè)典型標(biāo)志，其易位造成了15號染色體上的PML基因和17號染色體上的RARa基因的融合，產(chǎn)生了一個(gè)融合基因PML/RARa。檢測PML/RARa融合基因的存在與否，對APL的診斷，判斷ATRA的療效和預(yù)后復(fù)發(fā)都非常重要。PML/RARa陽性強(qiáng)烈預(yù)示著復(fù)發(fā)的可能，而其持續(xù)性陰性則預(yù)示病人有更長的生存期。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用PLZF/RARa：t(11;17)(q23;q21)易位，特定的在急性早幼粒白血病或急性非淋巴細(xì)胞白血病M3型中發(fā)現(xiàn)。功能尚不明確。預(yù)后明顯差與有t(15;17)易位的ANLLM3型，其對ATRA的化療無反應(yīng)。NPM/RARa:t(5;17)(q35;q22)易位發(fā)生于急性非淋巴細(xì)胞白血病，見于M3，即急性早幼粒細(xì)胞白血病。病例少，有記載的只有2例兒童病例，2例的復(fù)發(fā)時(shí)間都短，預(yù)后可能不樂觀。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用BCR/ABL：在超過95%的CML病人的白血病細(xì)胞中，30%（20-50%）的成人ALL和2-10%的兒童ALL中，以及小于2%的淋巴瘤和骨髓瘤的病例中有BCR/ABL融合基因。在CML中BCR/ABL大部分是p210型的，少許p190，極少數(shù)p230。ALL患者的BCR/ABL融合基因是p190型（60%）。在ALL中，Ph陽性和隨之出現(xiàn)的BCR/ABL融合基因是一個(gè)非常不好的標(biāo)志，它影響著病人血相的完全緩解率和可能的生成率。該基因陽性的病人，可用格列衛(wèi)進(jìn)行治療，并可進(jìn)行療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用E2A/PBX1：t(1:19)的ALL中檢測到，尤其是前B-ALL病例中。臨床癥狀都比較兇險(xiǎn)。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。MLL/AF4：見于與t(4;11)相關(guān)的前BALL。預(yù)后不良但該融合基因的存在似乎能增強(qiáng)高劑量的Ara-C的療效?？捎糜诏熜ПO(jiān)測和微小殘留的檢測。TEL/AML1：見于t(12;21)(p13;q22)兒童ALL。都是前B細(xì)胞ALL。其白細(xì)胞比較低。預(yù)后較好，復(fù)發(fā)較遲?？捎糜诏熜ПO(jiān)測和微小殘留的檢測。EVI1：定位于染色體3q26。見于MDS和CML。預(yù)后不良，MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用MLL/ELL:t(11;19)(q23;p13.1)占11q23異常的3.8%，為AML特征性異常，年齡以成人為主。白細(xì)胞20×109/L，F(xiàn)AB分型M4或M5，預(yù)后不良，2年無病生存率50%。NPM/MLF1：t(3;5)(q25.1;q34)易位，在MPS,MDS,ANLL（M2,M4,M6）中有發(fā)現(xiàn)。預(yù)后非常差1，中位生存期少于1年。MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用FLT3-ITD，F(xiàn)ms樣酪氨酸激酶3-內(nèi)服串聯(lián)重復(fù)序列，13q13.1NPM1，核仁磷酸蛋白1，5q35急性髓系白血病FLT3ITD–NPM1+預(yù)后較好FLT3ITD+NPM1+或FLT3ITD–NPM1–預(yù)后中等FLT3ITD+NPM1–預(yù)后較差急髓相關(guān)突變檢測FLT3-TKD，F(xiàn)ms樣酪氨酸激酶3-TK區(qū)域點(diǎn)突變，13q12，預(yù)后不良MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用CEBPA基因位于19q13.11，CCAAT盒/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白，粒細(xì)胞分化過程中起重要作用，預(yù)后良好c-KIT基因位于4q11-21，t(8;21)和inv(16)伴c-KIT突變在AML預(yù)后危險(xiǎn)分級中由“低?！鄙墳椤爸形！盢-Ras為Ras基因家族成員之一，見于10%左右的M4、M5、M6，該突變預(yù)后意義尚不明MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用多發(fā)性骨髓瘤MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后分層預(yù)后較差（20個(gè)月）p53缺失1q21擴(kuò)增IgH發(fā)生t(4;14),t(14;16)易位

預(yù)后中等（40個(gè)月）RB1缺失D13S319缺失預(yù)后較好（50個(gè)月）IgH發(fā)生t(11;14)易位或者其他遺傳改變MICM檢測在惡性血液病中運(yùn)用骨髓增殖性腫瘤20