（高清版）WST 461-2024 糖化血紅蛋白檢測指南

ICS11.020CCSC50WSWS/T461—2024代替WS/T461—2015GuidelineformeasurementofhemoglobinA1CIWS/T461—2024 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4符號與縮略語 25生物學(xué)特性和臨床意義 26檢驗(yàn)前過程 27檢驗(yàn)過程 28檢驗(yàn)后過程 5附錄A（資料性）HbA1c參考系統(tǒng) 6附錄B（資料性）HbA1c檢測的影響因素 8參考文獻(xiàn) WS/T461—2024本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)代替WS/T461—2015《糖化血紅蛋白檢測》，與WS/T461—2015相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——?jiǎng)h除了“引言”（見2015年版的“引言”——增加了“規(guī)范性引用文件”（見第2章）；——更改了“術(shù)語和定義”（見3.3、3.4，見2015年版的2.3——增加了“符號與縮略語”（見第4章）；——增加了“生物學(xué)特性和臨床意義”（見第5章）；——調(diào)整技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容框架結(jié)構(gòu)，根據(jù)分析流程進(jìn)行技術(shù)指標(biāo)分層細(xì)化；——?jiǎng)h除了“干擾”，將其相關(guān)內(nèi)容改編為附錄B（見2015年版的第4章，見附錄B——增加了對各檢測方法分析原理的描述（見7.1）；——更改了室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價(jià)方案的設(shè)計(jì)和要求（見7.4，見2015年版的7.3、9.1、9.2——更改了性能驗(yàn)證技術(shù)指標(biāo)的設(shè)定（見7.3.2、7.3.3、7.3.4，見2015年版的6.2）；——更改了“結(jié)果報(bào)告”（見8.1，見2015年版的第8章——更改了“參考區(qū)間”（見8.2，見2015年版的8.2）；——更改了“異常結(jié)果的處理”（見8.3，見2015年版的7.4）；——?jiǎng)h除了WS/T461—2015的附錄B、附錄C，相關(guān)內(nèi)容以規(guī)范性引用文件代替（見2015年版的附錄B、附錄C）。本標(biāo)準(zhǔn)由國家衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)委員會臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會負(fù)責(zé)技術(shù)審查和技術(shù)咨詢,由國家衛(wèi)生健康委醫(yī)療管理服務(wù)指導(dǎo)中心負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)性和格式審查,由國家衛(wèi)生健康委員會醫(yī)政司負(fù)責(zé)業(yè)務(wù)管理、法規(guī)司負(fù)責(zé)統(tǒng)籌管理。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京醫(yī)院/國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院、上海市臨床檢驗(yàn)中心、復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳文祥、張?zhí)鞁?、張傳寶、郭立新、王清濤、居漪、郭瑋、程歆琦、王冬環(huán)、續(xù)勇。本標(biāo)準(zhǔn)于2015年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。1WS/T461—2024糖化血紅蛋白檢測指南本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了糖化血紅蛋白檢測的技術(shù)要點(diǎn)和質(zhì)量要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于開展糖化血紅蛋白檢測的實(shí)驗(yàn)室，有關(guān)體外診斷產(chǎn)品廠商可參照使用。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。WS/T225臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的采集與處理WS/T408定量檢驗(yàn)程序分析性能驗(yàn)證指南WS/T641臨床檢驗(yàn)定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制WS/T661靜脈血液標(biāo)本采集指南ISOGuide80:2014Guidanceforthein-housepreparationofqualitycontrolmaterials(QCMs)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1分析系統(tǒng)analyticalsystem適合對某檢驗(yàn)項(xiàng)目在規(guī)定濃度范圍內(nèi)給出分析結(jié)果的一組按規(guī)定條件使用的儀器和裝置，包括試劑和物品。注：對于臨床檢驗(yàn)，分析系統(tǒng)主要由按規(guī)定[來源：改寫自ISO/IEC導(dǎo)則99-2007，定義3.2]3.2驗(yàn)證verification通過提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定。[來源：GB/T19000—2016，定義3.8.12]3.3糖化血紅蛋白hemoglobinA1c；HbA1c血液中葡萄糖與血紅蛋白1個(gè)或2個(gè)β鏈N末端纈氨酸反應(yīng)，發(fā)生不可逆糖基化所形成的穩(wěn)定化合物。Units，NPU）委員會的數(shù)據(jù)庫中，HbA的NPU全稱記為血紅蛋白β鏈（血液）-N-（1-脫氧果糖-1-基）血紅蛋稱IFCC單位）為mmol/mol，常用單位（又稱NGSP單位）為％。兩者可通過主方程在規(guī)定測量范圍內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)換注3：使用NGSP單位時(shí)，為避免與相對百分號（％）混3.42WS/T461—2024主方程masterequation在規(guī)定檢測范圍內(nèi)，用于HbA1c檢測結(jié)果國際單位和常用單位換算的經(jīng)驗(yàn)方程。注2：主方程適用于患者樣本HbA檢測結(jié)果的換算，未經(jīng)驗(yàn)證，不可用于制備物（如校準(zhǔn)品、質(zhì)控品）標(biāo)示值的換4符號與縮略語下列符號與縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)。DCCT：糖尿病控制和并發(fā)癥試驗(yàn)(DiabetesControlandComplicationsTrial)IFCC：國際臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會（InternationalFederationofClinicalChemistryandLaboratoryMedicine）NGSP：美國國家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（NationalGlycohemoglobinStandardizationProgram）POCT：即時(shí)檢驗(yàn)（Point-of-Caretesting）SOP：標(biāo)準(zhǔn)操作程序（StandardOperationProcedure）5生物學(xué)特性和臨床意義血液中HbA1c的濃度與紅細(xì)胞壽命（平均120天）及同時(shí)期內(nèi)血糖的濃度有關(guān)，反映檢測前約2~3個(gè)月的平均血糖水平，不受每天血糖波動的影響，也不受運(yùn)動或食物的影響。HbA1c是目前評估糖尿病患者長期（2～3個(gè)月）血糖控制狀況的主要指標(biāo)之一，也是調(diào)整降糖治療方案的重要依據(jù)，與糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生及發(fā)展有密切關(guān)系。2011年世界衛(wèi)生組織（WHO）建議在條件具備的國家和地區(qū)采用HbA1c診斷糖尿病，診斷切點(diǎn)為≥6.5％HbA1c（48mmol/mol）同時(shí)指出，當(dāng)HbA1c＜6.548mmol/mol）時(shí)，不能排除經(jīng)靜脈血糖檢測診斷的糖尿病?！吨袊?型糖尿病防治指南（2020年版）》推薦在采用標(biāo)準(zhǔn)化檢測方法且有嚴(yán)格質(zhì)量控制的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，可以將HbA1c≥6.548mmol/mol）作為糖尿病的補(bǔ)充診斷標(biāo)準(zhǔn)。使用HbA1c診斷糖尿病時(shí)，需考慮可能影響糖化血紅蛋白檢測的其他因素（見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B）。HbA1c的局限性是檢測結(jié)果對調(diào)整治療后的評估存在“延遲效應(yīng)”，不能精確反映患者低血糖的風(fēng)險(xiǎn)，也不能反映血糖波動的特征。6檢驗(yàn)前過程6.1標(biāo)本采集6.1.1通常情況下，采集HbA1c標(biāo)本時(shí)患者無需空腹，也無特定采血時(shí)間要求。6.1.2按照WS/T661的要求采集靜脈全血用于HbA1c檢測。推薦使用乙二胺四乙酸鹽（EDTA鹽）為抗凝劑的采血管，也可根據(jù)檢測方法選用其他種類的抗凝劑。6.1.3可按照WS/T225的要求采集手指末梢血用于POCT方法檢測。6.2標(biāo)本處理、保存和運(yùn)輸6.2.1標(biāo)本采集后應(yīng)確保血液與抗凝劑充分混勻。6.2.2應(yīng)根據(jù)檢測方法的原理和性能選用適宜的標(biāo)本保存和運(yùn)輸條件。通常情況下，全血標(biāo)本在2℃~8℃條件下可以穩(wěn)定保存1周；在-70℃或更低溫度條件下可穩(wěn)定保存至少1年；不宜在-20℃條件下長期保存。7檢驗(yàn)過程7.1檢測方法7.1.1概述3WS/T461—2024HbA1c常規(guī)檢測方法有多種，常見的檢測方法包括離子交換色譜法、免疫法、酶法、毛細(xì)管電泳法、親和層析法等；7.1.2離子交換色譜法HbA1c的β鏈N末端纈氨酸與葡萄糖結(jié)合后，糖基化的血紅蛋白所帶正電荷的數(shù)量小于未糖基化的血紅蛋白，使HbA1c的等電點(diǎn)降低。用不同離子濃度的緩沖液在不同的時(shí)間將血紅蛋白從陽離子交換柱中洗脫下來，根據(jù)所得各組分的峰面積計(jì)算HbA1c占總血紅蛋白的比例。7.1.3免疫法用已知濃度過量的抗體與HbA1c特異性結(jié)合形成可溶性免疫復(fù)合物，測定該復(fù)合物的濃度直接得到HbA1c濃度或測定剩余抗體含量間接得到HbA1c結(jié)果。7.1.4酶法HbA1c的β鏈N末端經(jīng)酶解生成的糖化氨基酸復(fù)合物，在果糖基氨基酸氧化酶及過氧化物酶的作用下發(fā)生顯色反應(yīng)，用光譜法測定顯色產(chǎn)物，得到HbA1c結(jié)果。7.1.5毛細(xì)管電泳法在堿性緩沖溶液和高壓電場作用下，不同血紅蛋白在毛細(xì)管內(nèi)的遷移時(shí)間有所不同而實(shí)現(xiàn)分離，根據(jù)所得組分的峰面積計(jì)算HbA1c結(jié)果。7.1.6親和層析法血紅蛋白糖化所形成的二元醇可與固定相中硼酸基團(tuán)所攜帶的羥基發(fā)生可逆的結(jié)合，使用山梨醇對糖化血紅蛋白進(jìn)行分離洗脫。該法硼酸基團(tuán)與HbA1c的結(jié)合是非特異性的，其他血紅蛋白的糖化產(chǎn)物也可發(fā)生結(jié)合，故其實(shí)質(zhì)上檢測的是標(biāo)本中的“總”糖化血紅蛋白,通過校準(zhǔn)換算得到HbA1c結(jié)果。7.2分析系統(tǒng)7.2.1分析系統(tǒng)的選擇實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選用檢測結(jié)果可溯源至IFCC一級參考方法的分析系統(tǒng)，包括儀器、試劑和校準(zhǔn)物（見本標(biāo)準(zhǔn)附錄A）。注：HbA溯源認(rèn)證計(jì)劃包括下列類型（IFCC系統(tǒng)和NGSP系統(tǒng)之間的關(guān)系見本標(biāo)準(zhǔn)附錄A）：或二級參考方法進(jìn)行比對。IFCC在其網(wǎng)站（www.ifcchba1c.o對方法進(jìn)行比對。NGSP在其網(wǎng)站（）公實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選用儀器、試劑和校準(zhǔn)品配套的分析系統(tǒng)，并進(jìn)行性能驗(yàn)證和性能評價(jià)（見本標(biāo)準(zhǔn)第7.3條）。不推薦使用非配套分析系統(tǒng)進(jìn)行HbA1c檢測。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)知曉可能對所選分析系統(tǒng)產(chǎn)生影響的因素（見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B）。7.2.2分析系統(tǒng)的使用在處理標(biāo)本時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵循對潛在生物傳染性標(biāo)本處理的相關(guān)規(guī)定。分析過程中應(yīng)遵循生物安全規(guī)則，并妥善處理廢棄物。應(yīng)按照本標(biāo)準(zhǔn)和制造商的操作說明制定檢測方法的SOP文件，并嚴(yán)格按照SOP文件的要求操作。作步驟、質(zhì)量控制、干擾、結(jié)果的計(jì)算程序、參考區(qū)間和（或）醫(yī)學(xué)決定水平、檢驗(yàn)結(jié)果可報(bào)告區(qū)間、臨床7.3性能驗(yàn)證4WS/T461—20247.3.1性能驗(yàn)證的通用要求新的分析系統(tǒng)用于檢測前，應(yīng)按照制造商的說明進(jìn)行校準(zhǔn)和性能驗(yàn)證，包括精密度、正確度、線性和可報(bào)告范圍等。當(dāng)改變分析系統(tǒng)時(shí)（如更換設(shè)備、儀器組件、試劑等也需進(jìn)行性能驗(yàn)證。7.3.2精密度通常使用實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或變異系數(shù)（CV）來描述實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不精密度水平。應(yīng)按照WS/T408的要求設(shè)計(jì)精密度驗(yàn)證方案和計(jì)算精密度。HbA1c檢測的CV要求見本標(biāo)準(zhǔn)表1。7.3.3正確度應(yīng)按照WS/T408的要求設(shè)計(jì)正確度驗(yàn)證方案。HbA1c檢測的分析質(zhì)量要求見本標(biāo)準(zhǔn)表1。注：實(shí)驗(yàn)室可通過參加正確度驗(yàn)證計(jì)劃評價(jià)7.4分析質(zhì)量要求HbA1c檢測的分析質(zhì)量要求見本標(biāo)準(zhǔn)表1。注：實(shí)驗(yàn)室可通過參加經(jīng)衛(wèi)生行政部門認(rèn)定的室間質(zhì)量評價(jià)機(jī)構(gòu)組織的室間質(zhì)量評價(jià)活動或IFCC、NGSP等組織的HbA認(rèn)證計(jì)劃評價(jià)所用分析系統(tǒng)的總誤差。表1HbA1c檢測的分析質(zhì)量要求HbA濃度水平>50mmol/mol參考值±8.6相對值）＜2.8%>6.7％HbA參考值±6.0相對值）＜2.0%此處HbA濃度水平的劃分僅用于分析質(zhì)量要求的設(shè)定，與臨床意義不相關(guān)。不同檢測單位和不同濃度水平區(qū)間對應(yīng)的分析質(zhì)量要求是不同的，使用時(shí)應(yīng)注意區(qū)分，避免混淆。7.5質(zhì)量控制與保證7.5.1室內(nèi)質(zhì)量控制質(zhì)控品的選擇質(zhì)控品應(yīng)均一、穩(wěn)定、與患者待測樣本具有相似或相同的基質(zhì)。所選質(zhì)控品的濃度應(yīng)至少具有2個(gè)濃度水平（包括正常值和異常高值水平）。通常使用商品化質(zhì)控品。若實(shí)驗(yàn)室需使用自制質(zhì)控品，宜按照ISOGuide80:2014的要求制備。室內(nèi)質(zhì)控的頻次和時(shí)機(jī)應(yīng)基于分析系統(tǒng)的性能、分析批長度以及錯(cuò)誤結(jié)果對患者危害的風(fēng)險(xiǎn)確定實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控的頻次和時(shí)機(jī)。應(yīng)保證每個(gè)工作日開始檢測標(biāo)本前至少進(jìn)行一次包含兩個(gè)水平（正常和異常高值水平）的室內(nèi)質(zhì)控；使用新開瓶、新復(fù)溶試劑或新色譜柱/層析柱進(jìn)行標(biāo)本檢測前，宜首先進(jìn)行質(zhì)控品的檢測。質(zhì)控規(guī)則、質(zhì)控界限和失控情況應(yīng)按照WS/T641的要求設(shè)定適宜的質(zhì)控規(guī)則和質(zhì)控界限。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)記錄室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，繪制質(zhì)控圖。若發(fā)現(xiàn)結(jié)果失控需分析查找原因并采取必要的糾正措施，再次進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控且結(jié)果在控后方可進(jìn)行標(biāo)本的檢測。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)做好失控原因分析和糾正措施的記錄。7.5.2室間質(zhì)量評價(jià)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期參加經(jīng)衛(wèi)生行政部門認(rèn)定的室間質(zhì)量評價(jià)機(jī)構(gòu)組織的室間質(zhì)量評價(jià)活動，以保證HbA1c檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。頻次為每年至少1次。室間質(zhì)量評價(jià)計(jì)劃的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不宜低于HbA1c檢測的允許總誤差要求（見本標(biāo)準(zhǔn)第7.3.4條）。室間質(zhì)量評價(jià)計(jì)劃的成績不合格時(shí)，應(yīng)查找原因并及時(shí)糾正。5WS/T461—20248檢驗(yàn)后過程8.1結(jié)果報(bào)告8.1.1應(yīng)根據(jù)臨床需要，報(bào)告IFCC單位和/或NGSP單位結(jié)果（見本標(biāo)準(zhǔn)第3.3條、第3.4條和本標(biāo)準(zhǔn)附錄A）。注：根據(jù)國際共識，在國家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、指南文件、專業(yè)期刊等發(fā)表HbA檢測相關(guān)內(nèi)容時(shí)，宜同8.1.2使用NGSP單位報(bào)告結(jié)果時(shí)，應(yīng)至少保留一位小數(shù)。8.1.3檢測報(bào)告應(yīng)注明參考區(qū)間（見本標(biāo)準(zhǔn)第8.2條）。8.2參考區(qū)間根據(jù)DCCT等研究報(bào)道，HbA1c的參考區(qū)間為20mmol/mol～42mmol/mol（IFCC單位）或4.0%~6.0％（NGSP單位）。實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)人群適宜性、量值溯源適宜性等對文獻(xiàn)報(bào)道的參考區(qū)間進(jìn)行適宜性評價(jià)。如結(jié)論為不確定，則需進(jìn)行驗(yàn)證后使用；若評價(jià)和驗(yàn)證的結(jié)果不適用，則應(yīng)建立適用于本醫(yī)療機(jī)構(gòu)的參考區(qū)間。8.3異常結(jié)果處理8.3.1對于檢測結(jié)果低于參考區(qū)間下限或高于分析系統(tǒng)可報(bào)告范圍上限的標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行復(fù)核。并宜與臨床醫(yī)生溝通。8.3.2對于檢測結(jié)果與患者臨床表現(xiàn)不符的標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行分析，并與臨床醫(yī)生溝通，結(jié)合患者既往病史，考慮可能的影響因素（見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B），采取相應(yīng)的措施。8.3.3對于已確認(rèn)或可能由血紅蛋白變異體引起的異常結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室可選用不受該變異體影響的分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測（見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B），或與臨床醫(yī)生溝通，改用其他檢測指標(biāo)。6WS/T461—2024HbA1c參考系統(tǒng)A.1IFCC參考系統(tǒng)A.1.1IFCCHbA1c一級參考方法20世紀(jì)90年代，IFCC成立了工作組，致力于實(shí)現(xiàn)HbA1c檢測的標(biāo)準(zhǔn)化。經(jīng)過多年研究，建立了IFCCHbA1c一級參考方法。該法基于肽譜-高效液相色譜質(zhì)譜法（HPLC-ESI/MS）或肽譜-高效液相色譜毛細(xì)管電泳法（HPLC-CE使用特定的蛋白內(nèi)切酶（Glu-C）對溶血處理后血液標(biāo)本進(jìn)行酶解，得到糖基化和非糖基化的β鏈N末端六肽，用HPLC-ESI/MS或HPLC-CE對所得肽段進(jìn)行檢測，通過峰面積計(jì)算HbA1c的濃度。IFCC一級參考方法能排除HbS、HbC、HbF和氨基甲酰化血紅蛋白等的干擾，具有高度的特異性和準(zhǔn)確性。IFCC一級參考方法是HbA1c參考系統(tǒng)的核心組成部分。IFCC正是基于該法從分子水平對HbA1c進(jìn)行了明確的定義；采用mmol/mol作為HbA1c的國際單位，使其關(guān)聯(lián)至國際單位（SI單位）制。根據(jù)IFCC、美國糖尿病學(xué)會（ADA）、歐洲糖尿病學(xué)會（EASD）、國際糖尿病聯(lián)合會（IDF）和國際兒童和青少年糖尿病協(xié)會（ISPAD）發(fā)表的聯(lián)合共識，IFCC一級參考方法是HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化的唯一有效基礎(chǔ)。A.1.2HbA1c有證參考物質(zhì)歐盟參考物質(zhì)與測量研究所（IRMM）和IFCC聯(lián)合研制了人血基質(zhì)高度純化的糖化血紅蛋白和血紅蛋白有證參考物質(zhì)（IRMM/IFCC-466和IRMM/IFCC-467），用于IFCC一級參考方法的校準(zhǔn)。由于使用該參考物質(zhì)配制校準(zhǔn)溶液的過程復(fù)雜，不易操作，IRMM又研制了具有系列濃度的有證參考物質(zhì)ERMAD-500/IFCC，可直接用于IFCC一級參考方法的校準(zhǔn)。目前，國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源聯(lián)合委員會（JCTLM）的參考物質(zhì)數(shù)據(jù)庫認(rèn)可并收錄的HbA1c有證參考物質(zhì)有三種。除ERMAD-500/IFCC外，還包括由我國國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心（NCCL）研制的GBW09181a~09183a（冰凍人溶血基質(zhì)及法國國家計(jì)量院（LNE）研制的LNEHbA1c401～403（凍干人溶血液基質(zhì)）。GBW09181a～09183a和LNEHbA1c401～403均具有良好的互換性，可用于HbA1c檢測的量值傳遞，正確度驗(yàn)證和方法比對等。A.1.3IFCCHbA1c參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)IFCC組織了HbA1c參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)每年進(jìn)行兩次國際間參考實(shí)驗(yàn)室比對研究，以持續(xù)監(jiān)控參考實(shí)驗(yàn)室的參考測量能力、驗(yàn)證和維持主方程的有效性、適時(shí)對HbA1c有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行賦值、穩(wěn)定性研究等。我國的NCCL、上海市臨床檢驗(yàn)中心（SCCL）和北京市臨床檢驗(yàn)中心（BCCL）是該參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的成員。A.2NGSP參考系統(tǒng)A.2.1NGSP參考方法1993年，美國臨床化學(xué)會（AACC）成立委員會，制定糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化方案，1996年起開始實(shí)施美國國家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃，即NGSP。NGSP使用DCCT方法（一種經(jīng)優(yōu)化具有較高分辨率的離子交換色譜法）為參考方法。DCCT方法具有雄厚的臨床試驗(yàn)和應(yīng)用基礎(chǔ)，產(chǎn)生了廣泛的國際影響，但該法存在非特異性因素，檢測時(shí)還有其他組分與HbA1c共洗脫，故其結(jié)果高于IFCC參考方法。A.2.2NGSP參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)NGSP組織建立了一級和二級參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)。NGSP一級參考實(shí)驗(yàn)室以DCCT方法為參考方法，二級參考實(shí)驗(yàn)室以離子交換色譜法、親和層析法和毛細(xì)管電泳法等為指定比對方法（DCM），開展HbA1c常規(guī)方法與參考方法/DCM的比對工作，對常規(guī)方法進(jìn)行認(rèn)證。該網(wǎng)絡(luò)每月進(jìn)行參考實(shí)驗(yàn)室比對研究，以持續(xù)監(jiān)控和維持參考實(shí)驗(yàn)室的參考測量能力。我國復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院是NGSP二級參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的成員。A.3IFCC系統(tǒng)與NGSP系統(tǒng)的關(guān)系7WS/T461—2024IFCC系統(tǒng)是高度特異和準(zhǔn)確的一級參考方法，具有完整的計(jì)量學(xué)溯源鏈，可溯源至國際單位（SI單位）制；NGSP系統(tǒng)的DCCT方法直接與臨床試驗(yàn)研究相關(guān)，對臨床工作有明確的指導(dǎo)意義。但兩者的結(jié)果存在系統(tǒng)性差異，采用的單位也不同。為解決此問題，IFCC聯(lián)合NGSP等專業(yè)團(tuán)體，通過大量患者樣本方法比對的研究，證明了IFCC系統(tǒng)的結(jié)果與NGSP系統(tǒng)的DCCT方法、日本的KO500方法及瑞典的MonoS方法的結(jié)果之間均具有良好的相關(guān)性，并由此推導(dǎo)得到相應(yīng)的回歸方程，即主方程。目前，IFCC系統(tǒng)與NGSP系統(tǒng)的主方程可表示為NGSP=0.09148×IFCC+2.152及IFCC=10.93×NGSP-23.50。通過主方程，IFCC系統(tǒng)的結(jié)果得以與DCCT等臨床試驗(yàn)研究相聯(lián)系，NGSP系統(tǒng)的結(jié)果得以溯源至IFCC一級參考方法。主方程的維持對IFCC系統(tǒng)和NGSP系統(tǒng)極為重要。因此IFCC系統(tǒng)和NGSP系統(tǒng)開展長期合作，持續(xù)進(jìn)行方法比對研究。負(fù)責(zé)組織IFCC參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)運(yùn)行的荷蘭比阿特麗克斯皇后醫(yī)院參考實(shí)驗(yàn)室和組織NGSP參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)運(yùn)行的美國密蘇里大學(xué)醫(yī)學(xué)院參考實(shí)驗(yàn)室同時(shí)運(yùn)行IFCC和NGSP參考方法，且互為網(wǎng)絡(luò)核心實(shí)驗(yàn)室成員。這些工作解決了IFCC系統(tǒng)與NGSP系統(tǒng)的關(guān)系問題，為實(shí)現(xiàn)HbA1c檢測的標(biāo)準(zhǔn)化奠定了基礎(chǔ)。HbA1c檢測的標(biāo)準(zhǔn)化已取得明顯進(jìn)展。然而，臨床工作中兩種分析系統(tǒng)并行的狀況仍長期存在。國內(nèi)外專業(yè)團(tuán)體也在持續(xù)對IFCC系統(tǒng)與NGSP系統(tǒng)的科學(xué)合理應(yīng)用進(jìn)行研究，并已達(dá)成一系列國際共識，從而盡力避免為HbA1c臨床應(yīng)用帶來困惑。目前，相關(guān)國際共識建議：在以IFCC一級參考方法為溯源基礎(chǔ)的前提下，根據(jù)臨床需要以IFCC單位和/或NGSP單位報(bào)告HbA1c結(jié)果。8WS/T461—2024（資料性）HbA1c檢測的影響因素B.1概述實(shí)驗(yàn)室應(yīng)知曉HbA1c檢測的影響因素。影響HbA1c檢測結(jié)果的因素主要包括兩個(gè)方面：生理病理因素和檢測方法因素。HbA1c是血液中葡萄糖與紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白結(jié)合形成的產(chǎn)物，引起血紅蛋白數(shù)量與質(zhì)量變化的生理病理因素均可能影響HbA1c測定。根據(jù)分析原理，異常血紅蛋白、高血脂、黃疸等因素可對部分HbA1c檢測方法產(chǎn)生影響。本附錄列出了HbA1c檢測的常見影響因素，供實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行HbA1c檢測時(shí)參考。其中一些影響因素是方法（或分析系統(tǒng)）特異的，可通過選擇不同方法原理或不同分析系統(tǒng)消除干擾，但某些影響因素在HbA1c檢測中難以克服，則需考慮使用其他替代檢測項(xiàng)目。B.2生理病理影響因素B.2.1年齡年齡是影響HbA1c水平的獨(dú)立因素，30歲以后，每增加10年，HbA1c水平增長0.1％。B.2.2種族和民族種族和民族是獨(dú)立于血糖濃度影響HbA1c水平的因素。引起種族間HbA1c差異的生理因素尚不明確，包括一些生物學(xué)因素（如紅細(xì)胞壽命的差異、血紅蛋白糖基化水平的差異、紅細(xì)胞跨膜葡萄糖濃度梯度等）的不均一性等。我國是一個(gè)多民族國家，不同民族所生活的海拔也不盡相同，目前關(guān)于我國不同民族之間、不同海拔之間HbA1c水平的差異有待進(jìn)一步研究。B.2.3血紅蛋白病異常血紅蛋白病是指血紅蛋白（Hb）一級分子結(jié)構(gòu)異常，也稱為血紅蛋白變異體或不穩(wěn)定血紅蛋白病，主要是由于血紅蛋白的α、β、γ鏈上的點(diǎn)突變而引起的血紅蛋白氨基酸序列的改變。血紅蛋白變異體可引起紅細(xì)胞壽命或者血紅蛋白糖基化速率的改變，使HbA1c不能正確反映平均血糖水平；此外。根據(jù)分析原理，血紅蛋白變異體可對部分HbA1c檢測方法產(chǎn)生影響（參見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B.3.1）。常見的血紅蛋白變異體包括：HbF（Hb的β鏈由γ鏈替代）、HbS(β鏈第6位谷氨酸被纈氨酸替代）、HbC(β鏈第6位賴氨酸被谷氨酸替代）、HbE(β鏈第26位谷氨酸被賴氨酸替代）等。B.2.4貧血B.2.4.1缺鐵性貧血缺鐵導(dǎo)致HbA1c水平升高，但其機(jī)制尚不完全明確。可能與紅細(xì)胞壽命延長有一定關(guān)系。B.2.4.2溶血性貧血溶血性貧血是造成紅細(xì)胞壽命縮短最為常見的疾病，可導(dǎo)致HbA1c水平降低。B.2.4.3急性失血后貧血急性失血后貧血患者短期內(nèi)丟失大量血液，引起血容量降低和貧血，造成血紅蛋白與血液中葡萄糖接觸時(shí)間短，可導(dǎo)致HbA1c水平偏低，應(yīng)避免在急性失血后的2個(gè)月內(nèi)檢測HbA1c。B.2.5慢性腎衰腎病患者因頻繁透析而影響紅細(xì)胞壽命，導(dǎo)致其HbA1c水平低于正常人；還可因血液中尿素水平高增加了氨甲?；t蛋白形成，影響部分HbA1c檢測方法（參見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B.3）B.2.6妊娠9WS/T461—2024妊娠早期（12周內(nèi)）由于促紅細(xì)胞生成素分泌增多，造成紅細(xì)胞代謝旺盛、壽命縮短、新生紅細(xì)胞增多，可導(dǎo)致HbA1c水平下降。中期妊娠（13周～27周）和晚期妊娠（28周后）時(shí)HbA1c水平常升高。B.2.7藥物B.2.7.1維生素C維生素C的攝入是否會影響HbA1c水平，目前研究結(jié)論不一。有研究表明，維生素C≥50mg/dL會對某些HbA1c分析系統(tǒng)產(chǎn)生干擾，但這一濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于口服維生素C所能達(dá)到的血藥濃度0.4mg/dL）。因此常規(guī)劑量服用維生素C可能不會對HbA1c水平產(chǎn)生顯著影響。B.2.7.2利巴韋林可引起可逆性溶血性貧血，導(dǎo)致HbA1c降低。B.2.7.3α干擾素可引起可逆性溶血性貧血，導(dǎo)致HbA1c降低。B.2.7.4阿片類藥物可引起HbA1c假性升高，影響機(jī)制尚不明確B.2.7.5乙酰水楊酸鹽長期大劑量服用乙酰水楊酸鹽會導(dǎo)致血紅蛋白乙?；痣x子交換色譜法和毛細(xì)管電泳法檢測結(jié)果偏高，親和層析色譜法則不受影響（參見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B.3）。B.2.8其他生理病理影響因素B.2.9酗酒長期酗酒會導(dǎo)致血紅蛋白乙酰化，引起離子交換色譜法和毛細(xì)管電泳法檢測結(jié)果偏高，親和層析色譜法則不受影響（參見本標(biāo)準(zhǔn)附錄B.3）。B.2.9.1鉛中毒鉛中毒可引起HbA1c假性升高，影響機(jī)制尚不明確。B.3檢測方法影響因素B.3.1影響離子交換色譜法檢測的因素B.3.1.1血紅蛋白病變異血紅蛋白HbS、HbC、HbD和HbE等可使離子交換色譜法檢測結(jié)果假性降低或升高，主要取決于變異血紅蛋白的種類和所采用的分析系統(tǒng)。NGSP的官方網(wǎng)站公布了部分常用分析系統(tǒng)及其干擾因素（/factors.asp）。B.3.1.2氨甲?；t蛋白腎病患者血液中尿素水平高增加了氨甲酰化血紅蛋白形成，可引起離子交換色譜法檢測結(jié)果偏高。B.3.1.3乙?；t蛋白長期大劑量服用乙酰水楊酸鹽或酗酒導(dǎo)致的乙酰化血紅蛋白可引起離子交換色譜法檢測結(jié)果偏高。B.3.2影響毛細(xì)管電泳法檢測的因素B.3.2.1氨甲?；t蛋白氨甲酰化血紅蛋白形成可引起毛細(xì)管電泳法檢測結(jié)果偏高。B.3.2.2乙?；t蛋白WS/T461—2024乙酰化血紅蛋白可引起毛細(xì)管電泳法檢測結(jié)果偏高。B.3.2.3高血脂甘油三酯＞15mmol/L、膽固醇＞8.5mmol/L可干擾毛細(xì)管電泳法檢測，導(dǎo)致結(jié)果偏低。B.3.3影響免疫法檢測的因素B.3.3.1高血脂乳糜微粒(≥15000FTU）可影響免疫法的HbA1c檢測，導(dǎo)致結(jié)果偏低。B.3.4影響酶法檢測的因素B.3.4.1膽紅素膽紅素影響酶法檢測HbA1c，導(dǎo)致結(jié)果偏低，干擾程度隨膽紅素濃度的增加而增加。B.3.5影響POCT方法檢測的因素B.3.5.1溶血通常情況下，溶血是HbA1c檢測過程中的一個(gè)步驟，因此標(biāo)本溶血不會干擾HbA1c檢測結(jié)果。但受分析原理影響，部分POCT方法不能檢測溶血的標(biāo)本。WS/T461—2024參考文獻(xiàn)[1]GillettMJ.InternationalExpertCommitteereportontheroleoftheA1cassayinthediagnosisofdiabetes:DiabetesCare,2009,32(7):1327-1334.[2]WorldHealthorganization.Useofglycatedhaemoglobin(HbA1c)inthediagnosisofdiabetesmellitus:abbreviatedreportofaWHOconsultation.Geneva.2011:1-25.志,2021,13(4):317-411[4]HanasR,JohnG;InternationalHbA(1c)ConsensusCommittee.2010ConsensusstatementontheworldwidestandardizationofthehemoglobinA(1c)measurement.ClinChemLabMed,2010,48(6):775-7566.[5]IFCCScientificDivision,NordinG,DybkaerR.Recommendationfortermandmeasurementunitfor"HbA1c".ClinChemLabMed,2007,45(8):1081-1082.[6]JeppssonJO,KoboldU,BarrJ,etal.ApprovedIFCCreferencemethodforthemeasurementofHbA1cinhumanblood.ClinChemLabMed,2002,40(1):78-89.[7]IFCCScientificDivision,MoscaA,GoodallI,HoshinoT,etal.Globalstandardizationofglycatedhemoglobinmeasurement:thepositionoftheIFCCWorkingGroup.ClinChemLabMed,2007,45(8):1077-80.[8]JonesW,ScottJ,LearyS,etal.Stabilityofwholebloodat-70degreesCformeasurementofhemoglobinA(1c)inhealthyindividuals.ClinChem.2004Dec;50(12):2460-2461.[9]Weyk