（高清版）WST 408-2024 定量檢驗(yàn)程序分析性能驗(yàn)證指南

WSWS/T408—2024代替WS/T408—2012,WS/T416—2013,WS/T420—2013和WS/T4GuidelinefortheverificationofanalyticalperformanceofquantitativeexaminationproceduresWS/T408—2024IWS/T420—2013《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》和WS/T49——更改了范圍，標(biāo)準(zhǔn)用途限于臨床實(shí)驗(yàn)室分析性能驗(yàn)證；——整合了重復(fù)內(nèi)容，更改了部分方案設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京醫(yī)院/國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心、民航總醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)WS/T408—2024突出的分析性能問(wèn)題。對(duì)濃度跨度大的檢驗(yàn)項(xiàng)目或某些原理的檢驗(yàn)程序，有時(shí)可見(jiàn)線性不種情況下，需參考有關(guān)文獻(xiàn)酌情制定適宜驗(yàn)WS/T408—20241定量檢驗(yàn)程序分析性能驗(yàn)證指南本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)定量檢驗(yàn)程序分析性能GB/T22576.1—2018醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室——質(zhì)量和能力的要求第一部分：通用GB/T21415—2008體外診斷醫(yī)療器械——生物樣品中量的測(cè)量——校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量WS/T356參考物質(zhì)互換性評(píng)估指南WS/T403臨床化學(xué)檢驗(yàn)常用項(xiàng)目分析質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS/T406臨床血液檢驗(yàn)常用項(xiàng)目分析質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS/T409臨床定量檢測(cè)方法分析總誤差的評(píng)估3.13.23.3序測(cè)量參考物質(zhì)所得結(jié)果的程序間關(guān)系，與兩程序測(cè)量常規(guī)臨床注：互換性與參考物質(zhì)的基質(zhì)和分析物的性質(zhì)有關(guān)，也與指定測(cè)量程序的原理和性能有關(guān)；不互換性反映參考物3.4分析測(cè)量范圍analyticalmeasurWS/T408—202423.53.63.73.8樣品特定效應(yīng)sample-specific臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)臨床需要的分析性能水平和目前技術(shù)水平制定檢驗(yàn)程序分析性能性能指標(biāo)限值，一般包括隨機(jī)誤差（標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)）和系統(tǒng)誤差（偏倚）限值]，作為驗(yàn)證結(jié)果解建議及檢驗(yàn)程序制造或研發(fā)者的性能聲明等。WS/T403和WS/T406分別給項(xiàng)目分析性能（隨機(jī)誤差、系統(tǒng)誤差和總誤差）規(guī)范建項(xiàng)性能驗(yàn)證可獨(dú)立進(jìn)行，也可根據(jù)各項(xiàng)驗(yàn)證方WS/T408—202434.3數(shù)據(jù)處理近醫(yī)學(xué)決定水平或相關(guān)病理情況下的臨床常見(jiàn)水平，避免極端水差（SBR）和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SWLn2——每批實(shí)驗(yàn)的重復(fù)檢測(cè)數(shù)。在SWL大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)差（S0）情況下，可考慮檢驗(yàn)差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，可用卡方（x2）檢v——自由度。WS/T408—20244()2SWR4SM4v()2SWR4SM4 n1(n2?1)+n1?1查x2 n1(n2?1)+n1?15.4結(jié)果解釋一般情況下，若SWL小于或接近實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的分析不精密度標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為該檢驗(yàn)程序精密度可接受。若SWL大于規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，可考慮進(jìn)行上述統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，若SWL明顯大于規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，提示分析不精密度不可接受。必要時(shí)，還可結(jié)合其他隨機(jī)誤差（若采用參考物質(zhì)檢測(cè)方式，正確度驗(yàn)證應(yīng)檢測(cè)至少2個(gè)濃度水平的參考物質(zhì)，對(duì)每種參考物質(zhì)進(jìn)行至少10次重復(fù)檢測(cè)；若采用程序?qū)Ρ确绞?，?yīng)檢測(cè)至少20份患者樣品，每份樣品用每種程序檢測(cè)1次。互換的參考物質(zhì)，本標(biāo)準(zhǔn)稱此類檢驗(yàn)項(xiàng)目為A類。對(duì)于此類檢驗(yàn)項(xiàng)目，正確度驗(yàn)證的目的是保證檢驗(yàn)結(jié)6.2通過(guò)參考物質(zhì)檢測(cè)驗(yàn)證正確度WS/T408—20245記錄或計(jì)算參考物質(zhì)定值（c）和定值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度（u上述第1、2、3類參考物質(zhì)一般會(huì)給第4類參考物質(zhì)定值為同程序組均值，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為該均值的標(biāo)準(zhǔn)誤，即實(shí)驗(yàn)室間標(biāo)準(zhǔn)差除以參加計(jì)算各檢測(cè)值的均值（m）和標(biāo)準(zhǔn)差（s按下列公式計(jì)算偏倚（b）及其標(biāo)準(zhǔn)差（sb偏倚的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢驗(yàn)可用簡(jiǎn)化的t檢驗(yàn)，若偏倚的絕對(duì)值若|b|大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的偏倚，且大于2sb，提示檢驗(yàn)程序正確度不可接受；若|b|大于實(shí)偏倚，但小于2sb，提示檢驗(yàn)程序精密度不足或所選參考物質(zhì)不確定度太大，應(yīng)分析原因，酌情考慮重6.3通過(guò)程序?qū)Ρ闰?yàn)證正確度按上述方案用待驗(yàn)證檢驗(yàn)程序和對(duì)比程序檢測(cè)樣品，記錄計(jì)算差值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，即為檢驗(yàn)程序的偏倚（b）及其標(biāo)準(zhǔn)差（sb）。偏倚的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢參見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第6.2.3條。在|b|大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定偏倚但小于2sb情況下，提示兩種檢驗(yàn)程序中的一種），WS/T408—20246度對(duì)已知濃度進(jìn)行線性回歸，計(jì)算特定回歸參數(shù)，與規(guī)7.2樣品準(zhǔn)備與檢測(cè)來(lái)自不同個(gè)體的樣品），也可以是由2個(gè)高低濃度樣品按不同比例混合而制備的系列混合樣品系列混合樣品，但對(duì)于不便制備混合樣品的檢驗(yàn)項(xiàng)目（如血細(xì)胞分析可能適宜選用患者樣品。釋樣品，應(yīng)合理選用添加物和稀釋劑，盡量減小可能的樣品互換性改7.3數(shù)據(jù)處理以已知濃度做自變量（x各單次檢測(cè)濃度做因變量（y進(jìn)行直線回歸，得回歸方程： （8）用回歸方程計(jì)算各已知濃度下的預(yù)測(cè)值（),用下式計(jì)算直線回歸的剩余標(biāo)準(zhǔn)差（s）:n1——樣品數(shù)；n2——每樣品的重復(fù)檢測(cè)數(shù)。按本標(biāo)準(zhǔn)第5.3條所述方法計(jì)算批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SWR在Sy|x＞SWR情況下，可用F檢驗(yàn)判斷Sy|x是否顯著大于SWR（有無(wú)顯著非線性用下列公式計(jì)算F值及Sy|x和SWR的自由度（Vy|x和VWR 查F表或用辦公軟件相關(guān)函數(shù)計(jì)算特定假排除概率（如0.05）下于臨界F值，則認(rèn)為Sy|x顯著大于SWR。WS/T408—20247在Sy|x顯著大于SWR情況下，可按下式計(jì)算非線性標(biāo)準(zhǔn)差（SNLSNL=√Sy|x2?SWR2…………………（13）7,4結(jié)果解釋一般情況下，若Sy|x不顯著大于SWR，認(rèn)為檢驗(yàn)程序的線性可接受；若Sy|x顯著大于SWR，若Sy|x顯著大于SWR，且SNL顯著大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的非線性標(biāo)準(zhǔn)差，提示檢驗(yàn)程序線性不可接受。必要時(shí)，還可結(jié)合其他隨機(jī)誤差（分析不精密度和非特異性）驗(yàn)證結(jié)果，作綜合分定效應(yīng)（非特異性與規(guī)定的相關(guān)指標(biāo)比較，得出驗(yàn)證結(jié)論。8.2通過(guò)干擾試驗(yàn)驗(yàn)證特異性水平或重要參考區(qū)間限值。應(yīng)準(zhǔn)備足夠體積的樣（如抗凝劑）等，可根據(jù)檢驗(yàn)程序的測(cè)量原理及其已知可能干擾因素，酌情選擇試驗(yàn)干擾物。溶解，樣品基質(zhì)不發(fā)生明顯變化。添加原液時(shí)，應(yīng)向基按上述方案用待驗(yàn)證程序檢測(cè)基礎(chǔ)樣品和添加樣品，記錄），d=c+?c0……………………（14）WS/T408—20248兩樣品差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢驗(yàn)可用簡(jiǎn)化的t檢驗(yàn)，若|d|＞2sd，則認(rèn)為存在顯著差異。若總偏倚大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的偏倚，且|d|＞8.3通過(guò)程序?qū)Ρ闰?yàn)證特異性按上述方案用待驗(yàn)證檢驗(yàn)程序和對(duì)比程序檢測(cè)樣品，記錄按本標(biāo)準(zhǔn)第5.3條所述方法計(jì)算待驗(yàn)證程序和對(duì)比程序的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（sWR1和sWR2計(jì)算每個(gè)樣品的每個(gè)程序結(jié)果的均值，計(jì)算每個(gè)樣品兩程序均值的差值（d計(jì)算全部下式計(jì)算d的精密度相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)差（sPRn——每個(gè)樣品每種程序的重復(fù)檢測(cè)數(shù)。若sd＞sPR，可按本標(biāo)準(zhǔn)第7.3條所述方法檢驗(yàn)差異是否差（sss一般情況下，若sd接近sPR，或sss小于或接近實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的樣品特定效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差，認(rèn)為檢驗(yàn)程序的若sss大于實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的樣品特定效應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差，且sd明顯大于sPR，當(dāng)對(duì)比程序?yàn)閰⒖紲y(cè)量程序時(shí)，提示檢驗(yàn)程序存在不可接受的樣品特定效應(yīng)；當(dāng)對(duì)比程序?yàn)槌Ｒ?guī)檢驗(yàn)程序時(shí)，提示他隨機(jī)誤差（分析不精密度和非線性）驗(yàn)證結(jié)果，作綜合分WS/T408—20249出的分析性能情況（如不精密度、非線性、非特異性等表現(xiàn)）僅反映HDL-C的可能情況，其他類別檢驗(yàn)和應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)室條件等，酌情選擇適宜的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)及實(shí)相關(guān)要求，但由于某種原因，實(shí)驗(yàn)室擬改用程序B進(jìn)行HDL根據(jù)有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和指南，實(shí)驗(yàn)室規(guī)定HDL-C允許總隨機(jī)誤差4允許系統(tǒng)誤差5根據(jù)工作經(jīng)驗(yàn)、A.2精密度驗(yàn)證 (>1.5mmol/L）的剩余血清，混勻，分裝5份，密封，-70℃保存。用程序B對(duì)樣品進(jìn)行5批檢測(cè)，每），將5批實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于電子表格B2～D6，用AVERAGE和STDEV函數(shù)計(jì)算批均值和批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差SWRi（E2~E6、F2～F6計(jì)算SWRi2（G2～G6SWL計(jì)算結(jié)果為0.0242mmol/L；進(jìn)行x2檢驗(yàn)；按公式（5）計(jì)算自由度V（E14按公式（4）計(jì)算x2值（E15，結(jié)果為17.6用CHIINV函數(shù)計(jì)算0.05假排除概率下的臨界x2值（x2critE16，結(jié)果為22.4x2＜x2crit，故SWL不明顯高于S0。SWL＜S0，無(wú)須進(jìn)行x2檢驗(yàn)。A.3正確度驗(yàn)證A.3.1通過(guò)參考物質(zhì)檢測(cè)驗(yàn)證正確度用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見(jiàn)附件電子表格），G本實(shí)驗(yàn)n為10，列于M3，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值（c）及其b的計(jì)算結(jié)果為0.038mmol/L；實(shí)驗(yàn)室規(guī)定允許偏倚為5折算為絕對(duì)偏倚（b0）為0.075mmo對(duì)GBW09195數(shù)據(jù)做相同處理，得b0.030mmol/L，Sb0.0205mmol/L，b00.051mmol/L。WS/T408—2024A.3.2通過(guò)程序?qū)Ρ闰?yàn)證正確度選用程序A做對(duì)比程序。收集HDL-C1mmol/L～1.7mmol/L臨床標(biāo)本血清20份，用程序A和程序B檢用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見(jiàn)附件電子表格處理過(guò)程如將兩種程序測(cè)定20份樣品結(jié)果列于電子表格B2～C21，計(jì)算每份樣品兩程序結(jié)果的差值（程序B-程用AVERAGE和STDEV函數(shù)計(jì)算差值的均值（b）和標(biāo)準(zhǔn)差（sbD24、D25b和sb計(jì)算結(jié)果分別為計(jì)算程序A檢測(cè)結(jié)果均值（mB22實(shí)驗(yàn)室規(guī)定允許偏倚為5折算為絕對(duì)偏倚（b0）為0A.4線性驗(yàn)證選用5水平混合樣品（由低到高，樣品1～5）進(jìn)行線性驗(yàn)證，收集HDL-C＜1mmol/L和＞2mmol/L臨床標(biāo)本血清，混勻，得樣品1和5，精密等體積混合樣品1和5，得樣品3，同法混合樣品1和3及3和5，用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見(jiàn)附件電子表格處理過(guò)程如值（D2、D6），按稀釋比例計(jì)算水平2～3的已知值（D3～D5），將5水平已知值（D2～D6）粘貼于另兩自由度（Vy|xC20）等回歸參數(shù)，Sy|x結(jié)果為0.0318；按A2.1所述方法計(jì)算平均批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SWR）（G2）及其自由度（VWR）（H2），SWR計(jì)算結(jié)果為0.0186，Sy|x似明顯大于SWR；），），將檢測(cè)值（均值）對(duì)已知值作圖（見(jiàn)附件），圖中實(shí)線為y=x直線，虛線為檢測(cè)值擬合線，可見(jiàn)檢按公式（13）計(jì)算非線性標(biāo)準(zhǔn)差（SNLD25結(jié)果為0.0258mmol/L；SNL＜SNL0，認(rèn)為程序B的非線A.5特異性驗(yàn)證A.5.1通過(guò)干擾實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證特異性根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目性質(zhì)、方法原理等，認(rèn)為影響HDL-C結(jié)果的主要因素可能是血清中的其他脂蛋白，尤其是極低密度脂蛋白（VLDL），擬試驗(yàn)VLDL對(duì)程序B的干擾。VLDL是血清甘油三脂（TG）的主要來(lái)源，臨床標(biāo)本中常見(jiàn)的較高TG水平為3mmol/L～5mmol/L，收集此濃度范圍的臨床標(biāo)本清，做基礎(chǔ)樣品；取基礎(chǔ)樣品2份，分別精密加入10％體積的干擾物原液或生理鹽水，混勻；用程序B用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見(jiàn)附件電子表格處理過(guò)程如將基礎(chǔ)樣品和添加樣品檢測(cè)結(jié)果分列于電子表格B2～B11和C2～C11，用AVERAGE函數(shù)計(jì)算其均值（B13、C13用STDEV函數(shù)計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)差（B14、C14用公式（13）和（14）計(jì)算兩樣品均值的差值（d）及其標(biāo)準(zhǔn)差（sdC15、C16結(jié)果分別為0.0150mmol/L和0.0057mmol/L，d＞2sd，提示較高水平VLDL可能對(duì)程序B有明顯影響，可使HDL-C結(jié)果升高約1.2%;WS/T408—2024正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示程序B偏倚小于3A3實(shí)驗(yàn)室規(guī)定允許偏倚為5其他干擾試驗(yàn)未見(jiàn)明A.5.2通過(guò)程序?qū)Ρ闰?yàn)證特異性選用程序A做對(duì)比程序。收集HDL-C1mmol/L～1.7mmol/L臨床標(biāo)本血清20份，用程序A和程序B檢用Excel辦公軟件處理數(shù)據(jù)（見(jiàn)附件電子表格處理過(guò)程如將兩種程序測(cè)定20份樣品結(jié)果列于電子表格B3～C22和G3～H22，用AVERAGE函數(shù)計(jì)算各程序各樣品的均值（m