（高清版）GBT 38479-2021 殼聚糖含量測定 高效液相色譜法

殼聚糖含量測定高效液相色譜法2021-12-31發(fā)布2022-07-01實(shí)施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口。本文件起草單位：中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所、中國科學(xué)院海洋研究所、山東陸海藍(lán)圣生物科技股份有限公司、山東衛(wèi)康生物醫(yī)藥科技有限公司、青島科技大學(xué)、中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國科學(xué)院過程工程研究所。1殼聚糖含量測定高效液相色譜法本文件規(guī)定了用高效液相色譜法測定殼聚糖含量的方法。本文件適用于殼聚糖含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。殼聚糖chitosan甲殼素脫去N-乙?；?5%以上的物質(zhì)。殼聚糖乙酰化制備成甲殼素后進(jìn)行酸水解，高效液相色譜法檢測水解液中氨基葡萄糖鹽酸鹽的濃度，外標(biāo)法定量計(jì)算得到樣品中殼聚糖的含量。5試劑或材料GB/T6682規(guī)定的一級水。5.2乙腈色譜純。5.3鹽酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)36%～38%。純度≥99.9%5.5氨基葡萄糖鹽酸鹽純度≥99%。25.6乙腈-水溶液量取800mL乙腈和200mL水，混合均勻。5.7氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品溶液稱取氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品1.0g,加水溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成質(zhì)量濃度為10mg/mL的儲備溶液。分別量取儲備溶液適量，稀釋定容至10mL容量瓶中，得到一系列質(zhì)量濃度為的氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品溶液。6儀器設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配有蒸發(fā)光散射檢測器。6.2色譜柱：氨基柱(250mm×4.6mm,5μm)。6.3有機(jī)相微孔濾膜：0.45μm。6.4電子分析天平：感量為0.1mg、0.01g。6.5電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。6.6粉碎機(jī)。6.70.3mm標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩。6.8恒溫磁力攪拌器。6.9集熱式磁力恒溫?cái)嚢杵鳌?.10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。7測定步驟7.1樣品預(yù)處理稱取殼聚糖樣品1kg,用粉碎機(jī)粉碎，過0.3mm標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩，“四分法”采樣至50g,置于60℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重。7.2樣品中氨基葡萄糖的含量(w?)測定稱取殼聚糖樣品1.0g,加10mL水溶解，過濾，濾液中滴加0.1mL12mol/L鹽酸，過0.45μm有機(jī)相微孔濾膜，進(jìn)樣檢測。樣品中的氨基葡萄糖含量按式(1)計(jì)算：……………式中：w?——樣品中的氨基葡萄糖含量，%;p?——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的氨基葡萄糖鹽酸鹽的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);V?——溶液體積，單位為毫升(mL);M——氨基葡萄糖的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol);m?——樣品質(zhì)量，單位為毫克(mg);M?——氨基葡萄糖鹽酸鹽的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol)。測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。37.3酸水解溶液制備7.3.1乙酰化處理殼聚糖樣品1.0g,加入100mL甲醇、1.5mL乙酸酐，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24h,反應(yīng)結(jié)束后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮回收甲醇，濃縮液干燥得殼聚糖乙?；瘶悠?。7.3.2酸水解稱取上述(7.3.1)殼聚糖乙?；瘶悠?0mg,加入3.0mL鹽酸和0.5mL水，置于集熱式磁力恒溫?cái)嚢杵髦刑荻壬郎厮崴猓?5℃反應(yīng)1.5h,75℃反應(yīng)1.5h,100℃反應(yīng)4h。反應(yīng)結(jié)束后，去除剩余鹽酸，加水溶解，得酸水解溶液。7.4.1色譜條件色譜條件如下：a)檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器(檢測條件：霧化溫度30℃,蒸發(fā)溫度60℃,氮?dú)饬魉?.5L/min);b)色譜柱：氨基柱(250mm×4.6mm,5μm);c)流動相：乙腈-水(80:20,體積分?jǐn)?shù));7.4.2色譜測定分別取氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品溶液、酸水解溶液適量，過0.45μm有機(jī)相微孔濾膜，按照色譜分析條件，進(jìn)樣測定。氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品溶液的液相色譜圖參見附錄A。8結(jié)果計(jì)算殼聚糖含量按式(2)計(jì)算：式中：w——?dú)ぞ厶呛浚?;p——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的氨基葡萄糖鹽酸鹽的質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);V——酸水解溶液體積，單位為毫升(mL);M?——甲殼素的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol);m——?dú)ぞ厶且阴；瘶悠焚|(zhì)量，單位為毫克(mg);M?——氨基葡萄糖鹽酸鹽的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol);w?——樣品中的氨基葡萄糖含量，%。測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。9重復(fù)性重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的1.5%410檢出限和定量限本方法檢出限為0.3