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文檔簡介
ICS
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中華人民共和國國家標準
GB/TXXXXX—XXXX
木瓜秀粉蚧檢疫鑒定方法
DetectionandidentificationofParacoccusmarginatusWilliams&Granarade
Willink
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(征求意見稿)
(2022年2月15日)
XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施
GB/TXXXXX—XXXX
木瓜秀粉蚧檢疫鑒定方法
1范圍
本標準規(guī)定了木瓜秀粉蚧ParacoccusmarginatusWilliams&GranaradeWillink的檢疫鑒定方法。
本標準適用于木瓜秀粉蚧的檢疫鑒定。
2規(guī)范性引用文件
本文件沒有規(guī)范性引用文件。
3術語和定義
下列術語和定義適用于本文件。
3.1
腹臍circulus
又名腹裂,位于腹部腹面第3、4腹節(jié)的中部,常以局部地角質化的狹窄的硬化框為界限,多為圓
形、卵圓形、長方形或沙漏形的表皮區(qū),其數(shù)目和大小在不同的蚧蟲種類中變化很大,也有的種類無腹
臍。
3.2
背孔ostioles
又名背裂。一般兩對,均在背板兩側,前背孔在前胸,后背孔在第6腹節(jié)。其形如人眼,具二片孔
瓣,瓣上有三格腺和毛,瓣緣或硬化。
3.3
肛環(huán)analring
位于背末,是一個環(huán)狀結構。環(huán)上有成列環(huán)孔和6根環(huán)毛,此環(huán)為肛門的開口。
3.4
刺孔群cerarius
一般分布在背緣,稱背緣刺孔群或簡稱刺孔群,有的分布在體背則稱背刺孔群。每一刺孔群一般有
1對錐狀刺(簡稱錐刺),一群三格腺,另外或有數(shù)根毛(簡稱附毛)。這是緣蠟絲的分泌和支持機構。
3.5
盤孔diskpores
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圓孔狀的泌蠟結構,此類孔可分為:三格腺,呈三角形或近三角形,其內具三格;多格腺,圓形,
具1中心格,周圍多格(6格~12格),為盤腺中最大者,一般分布在陰門附近;五格腺,大小介于
三格腺和多格腺之間,其中心1格,周圍5格,呈五角形或近五角形。
3.6
柱腺cylindricalducts
管狀的泌蠟結構,又稱管腺或領腺,開口處內向有不同高度的環(huán)或領。
3.7
尾瓣anallobes
腹末節(jié)之突出部分。
4木瓜秀粉蚧基本信息
中文名:木瓜秀粉蚧。
學名:ParacoccusmarginatusWilliams&GranaradeWillink,1992。
異名:無。
中文別名:木瓜粉蚧。
英文名:papayamealybug。
分類地位:半翅目Hemiptera,胸喙亞目Sternorrhyncha,粉蚧科Pseudococcidae,秀粉蚧屬Paracoccus,
木瓜秀粉蚧是一種重要的農林害蟲,可通過空氣氣流進行短距離擴散,也可借助水、床土、人類、
家畜和野生動物擴散,易隨果實、苗木和接穗的調運而遠距離傳播。
木瓜秀粉蚧其他信息參見附錄A。
5方法原理
5.1形態(tài)學鑒定
根據(jù)木瓜秀粉蚧的為害狀,在現(xiàn)場可借助手持放大鏡檢查寄主植物,挑取成蟲,制作成玻片,用顯
微鏡觀察,依據(jù)雌成蟲的形態(tài)特征對其進行種類鑒定。
5.2DNA條形碼鑒定
根據(jù)成蟲或幼蟲樣品,通過擴增具有種類鑒別特征的DNA條形碼序列與其他粉蚧同源序列的最大
相似度進行鑒定。
6儀器、用具和試劑
6.1儀器、用具
體視顯微鏡、顯微鏡、手持放大鏡、眼科鑷子、小毛筆、解剖針、眼科手術刀、接種環(huán)、載玻片、
蓋玻片、培養(yǎng)皿、小燒杯、比色板、酒精燈、水浴裝置(如加熱板等)、樣品袋。
PCR儀、冷凍混合球磨儀、超凈工作臺、電泳儀、凝膠成像分析儀、核酸蛋白檢測儀、微量組織搗
碎儀、高速冷凍離心機、研磨機、臺式小型離心機、制冰機、旋渦震蕩器、移液、器、電子天平、pH
計、水浴鍋、純水儀、高壓滅菌器、超低溫冰箱等。
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6.2試劑
10%氫氧化鉀或10%氫氧化鈉、蒸餾水、70%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、酸性品紅、加拿大樹
脂、丁香油、甘油、二甲苯、苯酚。
動物基因組DNA提取試劑盒、10×PCR緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、DNA擴增引物
(PcoF1、LepR1)、ddH2O、Taq酶、DNAMarker、瓊脂糖、DNA染料。
7現(xiàn)場檢疫
目測植株、枝葉和果有無被粉蚧危害的癥狀(長勢衰弱,莖、葉扭曲變形,有白色蠟粉),用手持
擴大鏡重點檢查植物的幼嫩部分(嫩葉、葉片、花芽和葉柄),此外,果萼下和植株空隙內均是粉蚧易
藏匿的部位,一旦發(fā)現(xiàn)粉蚧蟲體,應將粉蚧連同枝葉裝入樣品袋中,做好現(xiàn)場記錄,送實驗室進行鑒定。
8實驗室鑒定
8.1形態(tài)學鑒定
8.1.1若蟲的培養(yǎng)
當只發(fā)現(xiàn)有粉蚧若蟲時,應將其接入木瓜果實上并置于25℃~28℃、RH65%~75%條件下培養(yǎng),
待發(fā)育至成蟲時再挑取雌成蟲作形態(tài)鑒定,玻片制作方法參見附錄B。
8.1.2粉蚧科PseudococcidaeWestwood的鑒定特征
粉蚧科的雌成蟲具有下列特征:觸角端節(jié)較其前節(jié)長而大,約呈紡錘形;背孔0對~2對,位于前
胸及第6腹部背側;腹臍0個~5個,位于體腹面中區(qū)成1縱列,一般1個,位于第3、4腹節(jié)腹板間;
背緣有一系列刺孔群,左右側成對,基數(shù)為18對,可少至零,或更多;每刺孔群為由錐刺及腺群組成;
體表常具有三格腺。
8.1.3秀粉蚧屬Paracossus屬的鑒定特征
成蟲體通常寬橢圓形。臀瓣通常發(fā)達,具硬化棒,從端毛或棒毛基部延伸,觸角通常8節(jié)。足發(fā)達,
爪無齒,跗冠毛端部膨大;透明孔通常出現(xiàn)在后足基節(jié)和脛節(jié)上。刺孔群最多18對,除了頭部和胸部刺
孔群有3或4根錐刺之外,其余刺孔群有2根錐刺;除了末對刺孔群之外沒有附毛。腹臍有或無。背部具
蕈狀腺,有時出現(xiàn)在腹部。具領狀腺。腹部具多格腺,三格腺有。
8.1.4木瓜秀粉蚧雌成蟲形態(tài)特征
生態(tài)鑒別特征
雌成蟲體嫩黃色,卵圓形,約2.2mm長、1.4mm寬;體表具有白色粉狀蠟質物,背部蠟粉厚度分布
不均,不足以掩蓋體色,但亦無不連續(xù)裸露區(qū);體緣有短蠟絲[4]。卵囊發(fā)達,位于腹面后部(參見附錄
圖C.1和圖C.2)。
玻片標本形態(tài)特征觀察
雌成蟲玻片標本主要顯微鑒定特征如下:
——體觸角8節(jié);
——背面具有14對~17對刺孔群,其中第1、2、4、5、7、9對刺群孔具有2根錐刺;
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——蟲體背面缺多格腺,三格腺分散分布,大多位于剛毛附近。蕈狀管通常限于刺孔群邊緣區(qū)。背
部無領狀管。肛環(huán)剛毛長平均136μm,約為肛環(huán)寬度的1.4倍;
——腹部腹面具有多格腺,通常位于第六到第八腹節(jié)的前端和后端,腹部第4節(jié)和第5節(jié)則僅限于后
端。三格腺集中分布于剛毛基部附近。盤孔不常見,若有則與背面盤孔大小相同。蕈狀管位于前胸
到第1腹節(jié)中部外側,每節(jié)側面3個~6個。同一大小的領狀管明顯呈簇狀分布于蟲體邊緣和腹部第3
至第8節(jié)中部及中部外側區(qū)域,第一腹節(jié)通常有2個~3個。臀葉背面無蕈狀管;
——后足基節(jié)有大量透明孔;后足脛節(jié)無透明孔(參見附錄圖C.3~圖C.5)。
8.1.5木瓜秀粉蚧與近似種的區(qū)別
木瓜秀粉蚧可以通過下列形態(tài)特征與秀粉蚧屬其他種區(qū)別:
——蕈狀管僅存在于身體邊緣;
——其后足脛節(jié)無透明孔。
同時滿足上述兩種特征即可判定為木瓜秀粉蚧。木瓜秀粉蚧與秀粉蚧屬南亞分布種的分類檢索表參
見附錄D。
8.2分子生物學鑒定
8.2.1基因組DNA提取
由于粉蚧的個體小,因此建議選用適用微量樣品提取的商用試劑盒,取樣一般以單頭蟲體為宜,提
取方法參照試劑盒說明步驟。
8.2.2DNA質量檢查
用核酸蛋白檢測儀測定DNA的純度與濃度,分別取得260nm和280nm處的吸光值,核酸的純度和
濃度計算式見式(1)、式(2)。
DNA純度=OD260/OD280··········································(1)
DNA濃度=50×OD260μg/mL····································(2)
式中:
DNA純度——OD260與OD280的比值;
OD260——指核酸在260nm的吸光值;
OD280——指蛋白質在280nm的吸光值;
PCR級DNA溶液的OD260與OD280的比值應為1.7~1.9,若DNA濃度高于100ng/μL,則應稀釋至100
ng/μL。
8.2.3PCR檢測
擴增引物
PCR擴增引物采用粉蚧科線粒體COI5′端片段基因的通用引物PcoF1/LepR1,引物序列見表1。
表1引物名稱及序列
產物大小
引物名稱引物序列參考文獻
(bp)
PcoF1上游引物:5′-CCTTCAACTAATCATAAAAATATYAG-3′Parketal.
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LepR1下游引物:5′-TAAACTTCTGGATGTCCAAAAAATCA-3′(2011)
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反應體系
PCR反應體系見表2。
表2反應體系
試劑名稱加樣量(μL)
10×PCRBuffer3.0
dNTPMixture(10mM)2.4
上游引物(10M)0.5
下游引物(10M)0.5
Taq酶(5U/L)0.2
DNA模板(10~100ng/μL)2.0
ddH2O補足反應總體積為30μL
注:1、反應體系中各試劑的量可使用等效的PCR預混液,具體情況根據(jù)采用的試劑進行調整;2、若DNA模板濃度低
于10ng/μL,則應適當增加模板用量。
反應條件
循環(huán)前94℃預變性1min;94℃變性1min,45℃退火1.5min,72℃延伸1.5min,5個循環(huán);94℃變
性1min,51℃退火1.5min,72℃延伸1min,36個循環(huán);最后72℃延伸5min,體系溫度降至4℃,結束PCR
擴增(當使用不同儀器和試劑時,可根據(jù)要求將反應參數(shù)作適當調整)。
對照設置
上述反應中均需同時作空白對照(以滅菌蒸餾水代替模板DNA),各做2個重復。
8.2.4瓊脂糖凝膠電泳檢測
PCR產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析,每個樣品取5μL擴增產物與1μL的6×加樣緩沖液混合均
勻進行點樣,用DNAMarker作分子標記,在1×TAE中以5V/cm的電壓電泳40min,在凝膠成像系統(tǒng)
上觀察并拍攝記錄結果。
8.2.5PCR產物測序及標準序列
取剩余PCR擴增產物20μL,使用DNA產物純化回收試劑盒純化回收產物,將回收產物及相應的
上下游引物提供給有資質的生物技術公司進行雙向測序,將得到的雙向序列拼接后去掉兩端的引物即可
用于比對鑒定。
木瓜秀粉蚧DNA條形碼標準序列:
ACTTATATATTTAATTTTTGGATTTTGATCAAGATTAATAGGTTTATCAATAAGTTTTATTATTCGA
ATTGAATTAATAAATTTAAATAATAATTTTAATAATAATATAATTTATTATATAATAATTACTATT
CATGCTTTTATTATAATTTTTTTTATAACTATACCTATTATTATTGGAAGATTAAGTAATTGATTAT
TACCTTTAATATTAATATCTTCAGATTTAATTTTTCCTCGTTTAAATAATTTTAGATTTTGATTATT
AATTCCATCTTTAATTTTTATAATATTAAATATATTATTAAATAATAATATTAATACTGGATGAAC
ATTATATCCTCCTTTAATTAATCAAAATTTTATTACATTAAATTTTATTATTTTTTCATTACATTTA
AATGGTTTATCTTCAATTTTTAGATCTATTAATTTTATTTCATCTATTTTTATTATTAATAATAATA
ATTTTTTTTTAAATAATTTTTCTTTATATATTTGATCAATTATTGTTACTACAATTTTATTAATTATT
TCAATTCCTATTTTATCTAGAGCTATTACTATAATTATTTTAGATAATAATTTAAACATAAATTTTT
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TTAATCCAATAGGAAATGGTAATCCTATTTTATATCAACATTTATTT
8.2.6序列比對分析
測序獲得數(shù)據(jù)后,采用MEGA6軟件打開峰圖文件,檢查序列的單一性,對序列進行拼接,并去
除兩端的引物序列,登陸NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLST同源性比對。
9結果判定
9.1形態(tài)學方法
以雌成蟲的形態(tài)特征為依據(jù),符合8.1.4和8.1.5特征時可鑒定為木瓜秀粉蚧。
9.2分子生物學方法
根據(jù)待測樣品測序獲得的基因序列在NCBI數(shù)據(jù)庫與上述木瓜秀粉蚧DNA條形碼標準序列或已知
木瓜秀粉蚧COI基因序列(NCBI登陸號:JN797604.1、MT707300.1和MN901467.1等)進行BLAST比對
的結果,如序列長度最高覆蓋率≥85%且最大相似度≥99%,則可判定待測樣品為木瓜秀粉蚧。
10樣品保存
木瓜秀粉蚧各齡若蟲、蛹和成蟲均可浸泡在70%乙醇溶液或乙醇-甘油保存液中保存,將浸泡標本
置-18℃以下冷凍,可長期保存;成蟲也可制成玻片標本保存,玻片標本應置于陰暗干燥處保存;危害
狀標本可干燥后,固定在標本盒中,加入樟腦丸防蟲,置于干燥處保存。用作分子生物學鑒定的若蟲、
蛹和成蟲則置于2.0mL的凍存管,加入適量100%乙醇,-70℃冷凍保存;用于分子生物學鑒定所剩余的
DNA進行分裝后,-70℃冷凍保存。記錄害蟲名稱、來源、寄主、截獲時間、地點、截獲人、鑒定人等
相關信息,一般保存期至少為一年。
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附錄A
(資料性附錄)
木瓜秀粉蚧的其他信息
A.1分布
木瓜秀粉蚧原產于中美洲地區(qū)(墨西哥、伯利茲、危地馬拉和哥斯達黎加),現(xiàn)報道分布國家和地
區(qū)有:安提瓜和巴布達、巴巴多斯、伯利茲、多米尼加、哥斯達黎加、古巴、瓜德羅普、海地、荷屬安
的列斯、開曼群島、美國、美屬維爾京群島、墨西哥、圣基茨和尼維斯、危地馬拉、小安的列斯群島、
英屬維爾京群島、波多黎各、法屬圭亞那、菲律賓、柬埔寨、斯里蘭卡、泰國、印度(安得拉邦、阿魯
納恰爾邦、古吉拉特邦、查饃克什米爾、卡納塔克邦、喀拉拉邦、馬哈拉施特拉邦、奧里薩邦、旁遮普、
泰米爾納德邦、特里普拉邦、西孟加拉)、印度尼西亞、中國(廣東、海南、云南、臺灣)、以色列、
肯尼亞、老撾、馬來西亞、馬爾代夫、馬提尼克島、毛里求斯、蒙特色拉特島、莫桑比克、提利斯、尼
日利亞、北瑪麗安娜冰島、阿曼、巴基斯坦、帕勞群島。
A.2寄主
已知記錄了50科153屬,主要有:爵床科Acanthaceae:穿心蓮Andrographispaniculata、十字爵床
Crossandrainfundibuliformis、黃蝦衣花Pachystachyslutea;番杏科Aizoaceae:假海馬齒Trianthema
portulacastrum;莧科Amaranthaceae:土牛膝Achyranthesaspera、Aervajavanica、Aervalanata、蓮子草
Alternantherasessilis、皺果莧Amaranthusviridis、青葙Celosiaargentea、Digeramuricata;漆樹科
Anacardiaceae:杧果Mangiferaindica、檳榔青Spondiaspinnata;番荔枝科Annonaceae:刺果番荔枝Annona
muricata、番荔枝Annonasquamosa;傘形科Apiaceae:積雪草Centellaasiatica;夾竹桃科Apocynaceae:
大紫蟬Allamandablanchetii、大葉糖膠樹Alstoniamacrophylla、牛角瓜Calotropisgigantea、牛角瓜
Calotropisgigantea、長春花Catharanthusroseus、匙羹藤Gymnemasylvestre、歐洲夾竹桃Neriumoleander、
白花雞蛋花Plumeriaalba、紅雞蛋花Plumeriarubra、蛇根木Rauvolfiaserpentina;天南星科Araceae:
Philodendronlacerum;棕櫚科Arecaceae:椰子Cocosnucifera、海棗Phoenixdactylifera、王棕Roystonea
regia;天門冬科Asparagaceae:晚香玉Polianthestuberosa;菊科Asteraceae:藿香薊Ageratumconyzoides、
Ambrosiaperuviana、鬼針草Bidenspilosa、夜香牛屬Cyanthillium、大麻葉澤蘭Eupatoriumcannabinum、
向日葵Helianthusannuus、銀膠菊Partheniumhysterophorus、蟛蜞菊Sphagneticolacalendulacea、萬壽菊
Tageteserecta、羽芒菊Tridaxprocumbens、百日菊Zinniaelegans;紫葳科Bignoniaceae:黃鐘花Tecoma
stans;橄欖科Burseraceae:Commiphoracaudata;桔??艭ampanulaceae:半邊蓮屬Lobelia;番木瓜科
Caricaceae:番木瓜Caricapapaya;白花菜科Cleomaceae:Cleomeviscosa;旋花科Convolvulaceae:蕹菜
Ipomoeaaquatica、Ipomoeacarnea、虎掌藤Ipomoeapes-tigridis;閉鞘姜科Costaceae:Cheilocostus
speciosus;葫蘆科Cucurbitaceae:Cucumismaderaspatanus、廣東絲瓜Luffaacutangula、苦瓜Momordica
charantia;大戟科Euphorbiaceae:鐵莧菜屬Acalypha、熱帶鐵莧菜Acalyphaindica、紅桑Acalypha
wilkesiana、波氏巴豆Crotonbonplandianus、飛揚草Euphorbiahirta、一品紅Euphorbiapulcherrima、橡
膠樹Heveabrasiliensis、麻風樹Jatrophacurcas、Jatrophaglandulifera、琴葉珊瑚花Jatrophaintegerrima、
紅珊瑚Jatrophamultifida、佛肚樹Jatrophapodagrica、Jatrophatanjorensis、Manihotchlorosticta、木薯
Manihotesculenta、蓖麻Ricinuscommunis;豆科Fabaceae:Acaciaferruginea、Acacialeucophloea、落花
生Arachishypogaea、羊蹄甲Bauhiniapurpurea、木豆Cajanuscajan、臘腸樹Cassiafistula、蝶豆Clitoria
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ternatea、菽麻Crotalariajuncea、多枝草合歡Desmanthusvirgatus、Erythrinaabyssinica、刺桐Erythrina
variegata、格力豆Gliricidiasepium、大豆Glycinemax、銀合歡Leucaenaleucocephala、大含羞草Mimosa
pigra、含羞草Mimosapudica、菜豆Phaseolusvulgaris、牧豆樹Prosopisjuliflora、小鹿藿Rhynchosiaminima、
塞納決明Sennaalexandrina、Sennaauriculata、大花田菁Sesbaniagrandiflora、Sesbaniapunicea、酸豆
Tamarindusindica、長序灰毛豆Tephrosianoctiflora、灰毛豆Tephrosiapurpurea、軟莢豆Teramnuslabialis、
Vignamungo、綠豆Vignaradiata、豇豆Vignaunguiculata;蝎尾蕉科Heliconiaceae:蝎尾蕉屬Heliconia;
唇形科Lamiaceae:Menthaarvensis、甘牛至Origanummajorana、柚木Tectonagrandis;樟科Lauraceae:
鱷梨Perseaamericana;千屈菜科Lythraceae:散沫花Lawsoniainermis、石榴Punicagranatum;金虎尾科
Malpighiaceae:Malpighiaemarginata、金虎尾Malpighiaglabra;錦葵科Malvaceae:咖啡黃葵Abelmoschus
esculentus、黃葵Abelmoschusmoschatus、惡味苘麻Abutilonhirtum、吉貝Ceibapentandra、黃麻Corchorus
capsularis、棉屬Gossypium、毛可可Guazumaulmifolia、木芙蓉Hibiscusmutabilis、朱槿Hibiscus
rosa-sinensis、玫瑰茄Hibiscussabdariffa、小懸鈴花Malvaviscusarboreus、黃花棯Sidaacuta、可可
Theobromacacao;楝科Meliaceae:印楝Azadirachtaindica、楝Meliaazedarach、面包果Artocarpusaltilis、
菠蘿蜜Artocarpusheterophyllus、榕屬Ficus、桑Morusalba;芭蕉科Musaceae:Musaparadisiaca;桃金
娘科Myrtaceae:番石榴Psidiumguajava;紫茉莉科Nyctaginaceae:黃細心Boerhaviadiffusa、直立黃細心
Boerhaviaerecta;木樨科Oleaceae:素馨屬Jasminum;芝麻科Pedaliaceae:Sesamumorientale;葉下珠科
Phyllanthaceae:余甘子Phyllanthusemblica、麻德拉斯葉下珠Phyllanthusmaderaspatensis;胡椒科
Piperaceae:胡椒屬Piper、蓽拔Piperlongum;禾本科Poaceae:Uniolapaniculata、玉蜀黍Zeamays;蓼
科Polygonaceae:海葡萄屬Coccoloba;鼠李科Rhamnaceae:滇刺棗Ziziphusmauritiana;薔薇科Rosaceae:
Pseudocydoniasinensis、薔薇屬Rosa;茜草科Rubiaceae:梔子屬Gardenia、長隔木屬Hamelia、黃花龍船
花Ixoracoccinea、海濱木巴戟Morindacitrifolia、洋玉葉金花Mussaendafrondosa、Neonaucleapurpurea、
長管糙葉豐花草Spermacocearticularis;蕓香科Rutaceae:Citrusaurantium、調料九里香Murrayakoenigii;
無患子科Sapindaceae:紅毛丹Nepheliumlappaceum;山欖科Sapotaceae:人心果Manilkarazapota;苦木
科Simaroubaceae:Ailanthusexcelsa;茄科Solanaceae:辣椒Capsicumannuum、夜香樹Cestrumnocturnum、
洋金花Daturametel、煙草Nicotianatabacum、番茄Solanumlycopersicum、茄Solanummelongena、龍葵
Solanumnigrum、水茄Solanumtorvum、Solanumtrilobatum、土豆Solanumtuberosum、黃果茄Solanum
virginianum、睡茄Withaniasomnifera;馬鞭草科Verbenaceae:假連翹Durantaerecta、馬纓丹Lantana
camara;葡萄科Vitaceae:仙素蓮Cissusquadrangularis、葡萄Vitisvinifera;蒺藜科Zygophyllaceae:蒺
藜Tribulusterrestris。
A.3生物學特性
木瓜秀粉蚧喜溫暖干燥的氣候,在18℃~30℃之間均可完成生活史。發(fā)育周期與溫度和取食植物有
關,雌蟲和雄蟲的發(fā)育有效積溫分別為294度.日和303度.日。雌蟲若蟲共三齡,無翅,可短距離爬行或
隨氣流移動;生活史平均歷期約1個月,產卵期1~2周,平均產卵300粒,25℃時雌蟲產卵量最大,37℃
以上產卵被抑制。卵孵化期10天左右,若蟲孵化后開始尋找合適的位置取食。雄蟲共五齡(包括成蟲),
第四齡時形成一個白色長筒型繭,羽化后的雄成蟲有翅,飛行能力較弱。雌成蟲依靠性激素吸引雄蟲交
配,在室溫條件下全年可繁殖,但有些寄主植物上無法完成受精。
木瓜秀粉蚧屬刺吸式口器,主要在寄主植物莖干、葉背、花和果實等汁液豐富的部位取食,同時向
植物體內注射毒性物質,導致葉片枯萎黃化、植株滯育、葉片卷縮變形、落花落果、同時產生大量蜜露
產生煙煤病,最終引起植物死亡。蟲口密度大時形成厚的白色蠟質層,導致果實弱小畸形影響可食用性。
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附錄B
(資料性附錄)
玻片標本制作
B.1固定
挑取蚧蟲置入70%乙醇中殺死固定2h,以備制作玻片標本。如需長期保存,則在70%乙醇中加入
少量甘油(70%乙醇:甘油為50:1)作為保存液。
B.2脫脂透明
選取經固定的成熟蟲體,用眼科手術刀在蟲體背面前端或側面刺一小孔,若為較干燥的蟲體,加熱
回軟5min后再刺小孔,移入加有10%氫氧化鉀(或10%氫氧化鈉)溶液的小燒杯中,用酒精燈加熱10
min~30min,水浴控溫在80℃~90℃,以不沸騰為宜,直至體外蠟質和蟲體內含物全部融化;將蟲
體移入盛有堿液的透明比色皿中,用解剖針、接種環(huán)、小毛筆等輕輕擠壓、清理蟲體,直至徹底清除內
含物、蟲體變?yōu)榍鍧嵧该?。加熱還可用水浴、溫箱等方法,脫脂時間以標本透明為準。
B.3清洗
把蟲體從氫氧化鉀溶液中移入熱蒸餾水中清洗、浸泡,更換蒸餾水3次~5次,以清除蟲體表面和內
部的堿液。
B.4染色
移入酸性品紅(酸性品紅95%乙醇飽和溶液)中染色,也可用其它染料使蟲體著色,染色時間視標
本著色情況而定,一般在8h以上。
B.5脫水
用70%乙醇洗掉多余染色劑,移入95%乙醇中,視染色程度浸泡1min~3min,洗去浮色,再將
蚧蟲移入裝有無水乙醇的比色板中,終止脫色5min,但不能停留過久,以免過度褪色。
B.6透明
移入二甲苯酚(二甲苯:苯酚為3:1)內5min~10min進一步透明;移入二甲苯中1min~3min使
顏色固定;移入丁香油中20min~30min或更長。
B.7整姿與封片
在載玻片上加一滴樹脂,移入蟲體,用接種環(huán)或昆蟲針等工具整姿,用蓋玻片封片。在玻片兩側貼
上標簽,注明產地、寄主、采集日期、采集人等信息。待玻片晾干后,即可進行鏡檢。
B
3
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附錄C
(資料性附錄)
木瓜秀粉蚧活蟲體(成蟲、若蟲)外觀特征圖
圖C.1木瓜秀粉蚧在木瓜上的為害狀
圖C.2木瓜秀粉蚧在琴葉珊瑚葉片(左)、花蕾(右上)和枝芽(右下)上的危害狀
4
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圖C.3木瓜秀粉蚧雌成蟲玻片圖
圖C.4木瓜秀粉蚧雌成蟲后足基節(jié)透明孔
1
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圖C.5木瓜秀粉蚧雌性形態(tài)特征
a.前足爪;b.蕈狀管;c.三格腺;d.半透明孔;e.領狀管;f.后足爪;g.多格腺;h.短尾環(huán)毛;
i.臀瓣刺孔群;j.附毛;k.盤孔;l.背毛;m.刺孔群錐毛(引自MillerDG&MillerGL,2002)
1
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附錄D
(資料性附錄)
木瓜秀粉蚧與近似種分類檢索表
D.1秀粉蚧屬雌成蟲已知種分類檢索表
1有腹臍………………..……2
無腹臍……………….…….8
2背面蕈狀腺最多9個,若腹部有,則不在刺孔群附近………………Paracoccuskeralae
背面蕈狀腺至少16個,有時超過40個,總有一些蕈狀腺單獨出現(xiàn)在1到2個腹部刺孔群附
近………………..………..……………..…………..…………3
3后足脛節(jié)有透明孔……………….…..…….4
后足脛節(jié)無透明孔…………………….……………..………..P.marginatus
4頭部和胸部邊緣有領狀腺……………..……….………….5
頭部和胸部邊緣無領狀腺………………..……….……..P.invectus(部分)
5腹部腹面具多格腺,在第四和第五腹節(jié)呈雙列并到達腹節(jié)邊緣,兩觸角基部之間無領狀
腺…………………….………6
腹部腹面具多格腺,在第四和第五腹節(jié)呈單列但不達這兩腹節(jié)邊緣,兩觸角基部之間具有領狀
腺……………………………7
6后足基節(jié)明顯大于前足基節(jié)。背剛毛短硬,不呈鞭毛狀,長度7.5μm~15.0μm…………...……...
………………..P.interceptust
后足基節(jié)與前足基節(jié)大小相似。所有背剛毛鞭毛狀,長度15μm~40μm,最長為第七腹節(jié)達到
40μm………………………….…….P.cognatus
7所有刺孔群均明顯,除了頭部外,每一個刺孔群都包含成對的錐刺,其中有1到2個刺孔
群可能具有3或4個錐刺。腹部蕈狀腺僅出現(xiàn)在腹部邊緣,在亞緣和亞中部區(qū)
無…..……..…………………………P.burnerae
部分在頭、胸和前腹節(jié)的刺孔群通常不明顯,有時縮小至單一的圓錐毛,或為纖細的腺剛毛。腹部
蕈狀腺出現(xiàn)在腹部亞緣和亞中部區(qū)域…….………………..……..P.tripurae
8蕈狀腺出現(xiàn)在腹部腹面…………….……….P.murreeanus
腹部腹面無蕈狀腺…………..……………9
9背蕈狀腺幾乎無,僅腹部有1到2個(偶爾無)。在第七和第八腹節(jié)的背剛毛最長達到
35μm….................................................................................................................…………….....P.neocarens
背蕈狀腺數(shù)量較多,至少在胸部有。在第七和第八腹節(jié)的背最長剛毛約15μm…………....…….10
10背蕈狀腺出現(xiàn)在腹部后段…………..….P.invectus(部分)
腹部后段缺背蕈狀腺……………………..11
11胸部腹面缺多格腺,多格腺在腹部各節(jié)之間呈單列出現(xiàn)。后腿節(jié)有少量透明
孔…………………………..………P.nellorensis
胸部腹面具多格腺,多格腺在腹部各節(jié)之間呈雙列或三列排列。后腿節(jié)無透明孔…………….P.evae
(注:本檢索表依據(jù)WilliamsDJ(2004)所列灰粉蚧屬南亞種制作)
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參考文獻
[1]陳敏敏,木瓜秀粉介殼蟲于四種寄主植物上之生命表,臺灣大學昆蟲學研究所學位論文(碩士)2014.
[2]顧渝娟,劉海軍,梁帆,馬駿,李海林.一種重要的有害生物—木瓜秀粉蚧.植物檢疫,2015,29(2):57~60.
[3]昆蟲學名詞審定委員會.2000.昆蟲學名詞.科學出版社.18~24.
[4]湯祊德.1992.中國粉蚧科.中國農業(yè)科技出版社.6~10.
[5]武三安.2000.中國綿秀粉蚧屬種類記述(同翅目:蚧總科:粉蚧科).動物分類學報,25(1):59~72.
[6]AmarasekareKG,ChongJH.,EpskyND&MannionCM.Effectoftemperatureonthelifehistoryofthemealybug,
Paracoccusmarginatus(Hemiptera:Pseudococcidae)underlaboratoryconditions,JournalofEconomicEntomology,2008,
101(6):1789~1804.
[7]AmarasekareKG,MannionCM&EpskyND.Efficiencyandestablishmentofthreeintroducedparasitoidsofthe
mealybugParacoccusmarginatus(Hemiptera:Pseudococcidae),Biologicalcontrol,2009,51:91~95.
[8]AmarasekareKG,MannionCM&EpskyND.FieldassessmentofthreeintroducedparasitoidsofParacoccusmarginatus
(Hemiptera:Pseudococcidae).NationalEntomologicalSocietyofAmericaAnnualMeeting.2007.
[9]ChenSP,WongJY&WuWZ.Preliminaryreportontheoccurrenceofpapayamealybug,Paracoccusmarginatus
WilliamsandGranaradeWillink,inTaiwan,JournalofTaiwanAgriculturalResearch,201160(1):72~76.
[10]/creatures/fruit/mealybugs/papaya_mealybug.htm
[11]/catalogue/Paracoccusmarginatus/
[12]KalaniyangodaDB,SaumyapaliMRY&HewageLC.Biologyandcontrolofpapayamealybug(Paracoccusmarginatus)
usingherbaloils,JournalofAgriculturalScienceandTechnology,2011,A1:484~488.
[13]KaushalyaAG,CatharineMM,LanceO,etal.Development,survival,andreproductionofParacoccusmarginatus
(Hemiptera:Pseudococcidae)ondifferenthostplantspecies,EnvironmentalEntomology,2008,37(3):630~635.
[14]MillerDR&MillerGL.RedescriptionofParacoccusmarginatusWilliamsandGranaradeWillink(Hemiptera:
Coccoidea:Pseudococcidae),includingdescriptionsoftheimmaturestagesandadultmale,ProceedingofEntomological
SocietyofWashington,2002,104(1):1~23.
[15]MuhammadZA,Ri-RongHe,Mu-TaoWu,etal.Firstreportofthepapayamealybug,Paracoccusmarginatus(Hemiptera:
Pseudococcidae),inChinaandgeneticrecordforitsrecentinvasioninAsiaandAfrica.FloridaEntomologist,2015,98(4):
1157~1162.
[16]MuniappanR,ShepardBM,WatsonWW,etal.Firstreportofpapayamealybug,Paracoccusmarginatus(Hemiptera:
Pseudococcidae),inIndonesiaandIndia.Journalofagriculturalurbanentomology,2008,25(1):37~40.
[17]Park,DS,SuhSJ,HebertPDN,OhHW,HongKJ(2011)DNAbarcodesfortwoscaleinsectfamilies,mealybugs
(Hemiptera:Pseudococcidae)andarmoredscales(Hemiptera:Diaspididae).BulletinofEntomologicalResearch
101:429–434.
[18]WilliamsDJ&GranaradeWillinkMC.MealybugsofCentralandSouthAmerica,CABInternational,1992,Wallingford,
England.
[19]WilliamsDJ.MealybugsofSouthernAsia.2004,TheNaturalHistoryofMuseum,London.
2
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_________________________________
3
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前言
本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分:標準的結構和編寫》給出的規(guī)則起草。
請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。
本文件由全國植物檢疫標準化技術委員會(SAC/TC271)提出并歸口。
本標準起草單位:中華人民共和國廣州海關,中華人民共和國杭州海關,中華人民共和國上海海關,中
國檢驗檢疫科學研究院,廣東省農業(yè)科學院。
本標準起草人:馬駿,顧渝娟,林莉,李獻鋒,武目濤,吳志毅,王書平,梁帆,徐晗,趙菊鵬,齊國
君,魏霜。
I
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木瓜秀粉蚧檢疫鑒定方法
1范圍
本標準規(guī)定了木瓜秀粉蚧ParacoccusmarginatusWilliams&GranaradeWillink的檢疫鑒定方法。
本標準適用于木瓜秀粉蚧的檢疫鑒定。
2規(guī)范性引用文件
本文件沒有規(guī)范性引用文件。
3術語和定義
下列術語和定義適用于本文件。
3.1
腹臍circulus
又名腹裂,位于腹部腹面第3、4腹節(jié)的中部,常以局部地角質化的狹窄的硬化框為界限,多為圓
形、卵圓形、長方形或沙漏形的表皮區(qū),其數(shù)目和大小在不同的蚧蟲種類中變化很大,也有的種類無腹
臍。
3.2
背孔ostioles
又名背裂。一般兩對,均在背板兩側,前背孔在前胸,后背孔在第6腹節(jié)。其形如人眼,具二片孔
瓣,瓣上有三格腺和毛,瓣緣或硬化。
3.3
肛環(huán)analring
位于背末,是一個環(huán)狀結構。環(huán)上有成列環(huán)孔和6根環(huán)毛,此環(huán)為肛門的開口。
3.4
刺孔群cerarius
一般分布在背緣,稱背緣刺孔群或簡稱刺孔群,有的分布在體背則稱背刺孔群。每一刺孔群一般有
1對錐狀刺(簡稱錐刺),一群三格腺,另外或有數(shù)根毛(簡稱附毛)。這是緣蠟絲的分泌和支持機構。
3.5
盤孔diskpores
1
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圓孔狀的泌蠟結構,此類孔可分為:三格腺,呈三角形或近三角形,其內具三格;多格腺,圓形,
具1中心格,周圍多格(6格~12格),為盤腺中最大者,一般分布在陰門附近;五格腺,大小介于
三格腺和多格腺之間,其中心1格,周圍5格,呈五角形或近五角形。
3.6
柱腺cylindricalducts
管狀的泌蠟結構,又稱管腺或領腺,開口處內向有不同高度的環(huán)或領。
3.7
尾瓣anallobes
腹末節(jié)之突出部分。
4木瓜秀粉蚧基本信息
中文名:木瓜秀粉蚧。
學名:ParacoccusmarginatusWilliams&GranaradeWillink,1992。
異名:無。
中文別名:木瓜粉蚧。
英文名:papayamealybug。
分類地位:半翅目Hemiptera,胸喙亞目Sternorrhyncha,粉蚧科Pseudococcidae,秀粉蚧屬Paracoccus,
木瓜秀粉蚧是一種重要的農林害蟲,可通過空氣氣流進行短距離擴散,也可借助水、床土、人類、
家畜和野生動物擴散,易隨果實、苗木和接穗的調運而遠距離傳播。
木瓜秀粉蚧其他信息參見附錄A。
5方法原理
5.1形態(tài)學鑒定
根據(jù)木瓜秀粉蚧的為害狀,在現(xiàn)場可借助手持放大鏡檢查寄主植物,挑取成蟲,制作成玻片,用顯
微鏡觀察,依據(jù)雌成蟲的形態(tài)特征對其進行種類鑒定。
5.2DNA條形碼鑒定
根據(jù)成蟲或幼蟲樣品,通過擴增具有種類鑒別特征的DNA條形碼序列與其他粉蚧同源序列的最大
相似度進行鑒定。
6儀器、用具和試劑
6.1儀器、用具
體視顯微鏡、顯微鏡、手持放大鏡、眼科鑷子、小毛筆、解剖針、眼科手術刀、接種環(huán)、載玻片、
蓋玻片、培養(yǎng)皿、小燒杯、比色板、酒精燈、水浴裝置(如加熱板等)、樣品袋。
PCR儀、冷凍混合球磨儀、超凈工作臺、電泳儀、凝膠成像分析儀、核酸蛋白檢測儀、微量組織搗
碎儀、高速冷凍離心機、研磨機、臺式小型離心機、制冰機、旋渦震蕩器、移液、器、電子天平、pH
計、水浴鍋、純水儀、高壓滅菌器、超低溫冰箱等。
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6.2試劑
10%氫氧化鉀或10%氫氧化鈉、蒸餾水、70%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、酸性品紅、加拿大樹
脂、丁香油、甘油、二甲苯、苯酚。
動物基因組DNA提取試劑盒、10×PCR緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、DNA擴增引物
(PcoF1、LepR1)、ddH2O、Taq酶、DNAMarker、瓊脂糖、DNA染料。
7現(xiàn)場檢疫
目測植株、枝葉和果有無被粉蚧危害的癥狀(長勢衰弱,莖、葉扭曲變形,有白色蠟粉),用手持
擴大鏡重點檢查植物的幼嫩部分(嫩葉、葉片、花芽和葉柄),此外,果萼下和植株空隙內均是粉蚧易
藏匿的部位,一旦發(fā)現(xiàn)粉蚧蟲體,應將粉蚧連同枝葉裝入樣品袋中,做好現(xiàn)場記錄,送實驗室進行鑒定。
8實驗室鑒定
8.1形態(tài)學鑒定
8.1.1若蟲的培養(yǎng)
當只發(fā)現(xiàn)有粉蚧若蟲時,應將其接入木瓜果實上并置于25℃~28℃、RH65%~75%條件下培養(yǎng),
待發(fā)育至成蟲時再挑取雌成蟲作形態(tài)鑒定,玻片制作方法參見附錄B。
8.1.2粉蚧科PseudococcidaeWestwood的鑒定特征
粉蚧科的雌成蟲具有下列特征:觸角端節(jié)較其前節(jié)長而大,約呈紡錘形;背孔0對~2對,位于前
胸及第6腹部背側;腹臍0個~5個,位于體腹面中區(qū)成1縱列,一般1個,位于第3、4腹節(jié)腹板間;
背緣有一系列刺孔群,左右側成對,基數(shù)為18對,可少至零,或更多;每刺孔群為由錐刺及腺群組成;
體表常具有三格腺。
8.1.3秀粉蚧屬Paracossus屬的鑒定特征
成蟲體通常寬橢圓形。臀瓣通常發(fā)達,具硬化棒,從端毛或棒毛基部延伸,觸角通常8節(jié)。足發(fā)達,
爪無齒,跗冠毛端部膨大;透明孔通常出現(xiàn)在后足基節(jié)和脛節(jié)上。刺孔群最多18對,除了頭
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