蔬菜水果中克百威的檢測 量子點微球熒光免疫層析法

蔬菜水果中克百威的檢測量子點微球熒光免疫層析法范圍本文件規(guī)定了蔬菜水果中克百威的量子點微球熒光免疫層析快速檢測方法。本文件適用于辣椒、青菜、豇豆、芹菜、韭菜、黃瓜、蘋果、柑橘和梨中克百威的快速檢測。本方法檢測克百威的檢出限為0.0035mg/kg，定量限為0.0085mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T27417合格評定化學分析方法確認和驗證指南NY/T788-2018農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準則術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。原理本方法以量子點微球為熒光標記物，基于競爭抑制免疫層析技術原理，通過熒光信號讀取儀進行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設定的標準曲線計算樣品中待測物質(zhì)的含量，對蔬菜水果中的克百威進行半定量或定量檢測。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純水：應符合GB/T6682，二級水。克百威標準物質(zhì)：純度≥99%，或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。乙腈（C2H3N）。磷酸氫二鉀（K2HPO4）。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。樣品提取液配置：準確稱取5.6g磷酸氫二鉀（5.4）、0.41g磷酸二氫鉀（5.5），乙腈（5.3）100mL用水溶解并定容至1L。樣本凈化管：不同廠家材料可能不一致，本方法不做規(guī)定，目的為樣本基質(zhì)凈化。樣品稀釋液配置（0.01mol/L磷酸鹽緩沖液）：準確稱取5.6g磷酸氫二鉀（5.4）、0.41g磷酸二氫鉀（5.5），用水溶解并定容至1L克百威標準品儲存液（100mg/L）：準確稱取克百威標準物質(zhì)（5.2）10mg（精確至0.01mg），置于100mL容量瓶中，用乙腈（5.3）溶解并定容至刻度，搖勻后-20°C冷凍避光保存，有效期6個月。儀器和設備分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。微量移液器：20～200μL、100～1000μL和1～10mL。旋渦混合器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。恒溫孵育器：設定溫度誤差不超過±1度。熒光免疫分析儀：激發(fā)波長為365±5nm，發(fā)射波長為610±5nm。離心機：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。攪碎機：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。離心管：1.5mL和50mL?？税偻孔狱c微球熒光免疫層析快速檢測卡（含ID卡，內(nèi)設對應批次標準曲線）。試樣制備分樣和粉碎取不少于100g具有代表性的蔬菜水果樣品，充分均質(zhì)混勻，分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標記，留樣置于-20°C避光保存。蔬菜水果取樣部位參考NY/T788-2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準則》。試樣前處理準確稱取2g±0.1g樣本于50mL離心管中。向上述離心管中依次加入樣本提取劑3mL（5.6），蓋上蓋子漩渦混勻2min。取1mL提取后上清液到一支樣本凈化管（5.7）中，在漩渦振蕩器上震蕩混勻1min，4000rpm離心2min。取50μL離心后上清液加入700μL克百威樣本稀釋液（5.8），混勻后用于檢測。注：不同廠家檢測卡所用的樣品前處理方法可能不同，應按照產(chǎn)品使用說明中規(guī)定方法進行操作。檢測步驟測試前打開熒光免疫分析儀（6.5），確認試劑盒中的ID卡與試劑盒的批號是否匹配后插入ID卡，在儀器測試界面點擊“讀ID卡/讀項目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點擊“確認”即可使用。將恒溫孵育器（6.4）開機，待溫度升至37℃即可使用。從包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在半小時內(nèi)使用。將檢測卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測液于檢測卡的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應10min。反應時間結(jié)束后立即將檢測卡插入讀取儀中，點擊儀器界面的“測試”，儀器會自動給出定量測試結(jié)果，15min后測試無效。注：不同廠家讀卡儀所用儀器界面設置可能不同，應按照儀器使用說明中規(guī)定方法進行。9結(jié)果表述樣品中克百威的含量由熒光分析儀自動計算并顯示，單位為毫克/千克（mg/kg）。10其他本方法參比標準為GB23200.112《食品安全國家標準植物源性食品中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-柱后衍生法》。注：性能指標計算方法見附錄A。附錄A（資料性）產(chǎn)品性能指標計算A.1檢出限和定量限通過對20個獨立的空白樣品進行測定，檢出限以空白樣品20次測定結(jié)果的均值加3倍標準偏差計算；定量限以空白樣品20次測定結(jié)果的均值加10倍標準偏差計算。A.2準確度綜合考慮目標分析物國家標準限量值或禁用目標分析物的參比方法定量限，制備低、中、高三個濃度水平的盲樣，每個濃度水平進行至少6次重復實驗。三個濃度水平的平均加標回收率應在70-130%（需討論確定）。A.3重復性采用三批驗證產(chǎn)品進行檢測，每批至少6次重復測定中等濃度水平的樣品，相對標準偏差（RSD）應小于15%。A.4特異性目標分析物及其結(jié)構(gòu)類似物的標準品用緩沖液配制成系列梯度濃度，做出標準曲線，得出IC50（半抑制濃度）后按照式（1）計算交叉反應率。（1）A.5假陰性率在實驗條件下達到的實際最低檢