水質(zhì) 糞大腸菌群的測定 濾膜法(HJ 347.1-2018部分代替HJ-T 347-2007)

目次

前言.................................................................................................................................................ii

1適用范圍.......................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件...........................................................................................................................1

3術(shù)語和定義...................................................................................................................................1

4方法原理.......................................................................................................................................1

5干擾和消除...................................................................................................................................1

6試劑和材料...................................................................................................................................2

7儀器和設(shè)備...................................................................................................................................2

8樣品...............................................................................................................................................3

9分析步驟.......................................................................................................................................3

10結(jié)果計算與表示.........................................................................................................................5

11精密度和準確度.........................................................................................................................6

12質(zhì)量保證和質(zhì)量控制.................................................................................................................6

13廢物處理.....................................................................................................................................7

14注意事項.....................................................................................................................................7

附錄A（資料性附錄）糞大腸菌群檢驗記錄及報告格式............................................................8

i

前言

為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》和《中華人民共和國水污染防治法》，保護生態(tài)

環(huán)境，保障人體健康，規(guī)范水中糞大腸菌群的測定方法，制定本標準。

本標準規(guī)定了測定地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中糞大腸菌群的濾膜法。

本標準是對《水質(zhì)糞大腸菌群的測定多管發(fā)酵法和濾膜法（試行）》（HJ/T347-2007）

濾膜法部分的修訂。

本標準首次發(fā)布于2007年，原起草單位為中國環(huán)境監(jiān)測總站。本次為第一次修訂。

本次修訂的主要內(nèi)容如下：

——完善了方法原理的表述；

——增加了檢出限；

——增加了規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、干擾和消除、儀器和設(shè)備、樣品采集、樣品

保存、精密度和準確度、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制、廢物處理等章節(jié)；

自本標準實施之日起，《水質(zhì)糞大腸菌群的測定多管發(fā)酵法和濾膜法（試行）》（HJ/T

347-2007）廢止。

本標準的附錄A為資料性附錄。

本標準由生態(tài)環(huán)境部生態(tài)環(huán)境監(jiān)測司、法規(guī)與標準司組織制訂。

本標準起草單位：遼寧省環(huán)境監(jiān)測實驗中心。

本標準驗證單位：大連市環(huán)境監(jiān)測中心、丹東市環(huán)境監(jiān)測中心站、錦州市環(huán)境監(jiān)測中心

站、遼陽市環(huán)境監(jiān)測站、鐵嶺市環(huán)境保護監(jiān)測站和沈陽市疾病預防控制中心。

本標準生態(tài)環(huán)境部2018年12月26日批準。

本標準自2019年6月1日起實施。

本標準由生態(tài)環(huán)境部解釋。

ii

水質(zhì)糞大腸菌群的測定濾膜法

1適用范圍

本標準規(guī)定了測定水中糞大腸菌群的濾膜法。

本標準適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中糞大腸菌群的測定。

本方法的檢出限：當接種量為100ml時，檢出限為10CFU/L；當接種量為500ml時，

檢出限為2CFU/L。

2規(guī)范性引用文件

本標準引用了下列文件或其中的條款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本適用于本

標準。

GB/T14581水質(zhì)湖泊和水庫采樣技術(shù)指導

HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導

HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標準。

3.1

糞大腸菌群fecalcoliforms

又稱耐熱大腸菌群（thermotolerantcoliforms）。44.5℃培養(yǎng)24h，能在MFC選擇性培養(yǎng)

基上生長，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，并形成藍色或藍綠色菌落的腸桿菌科細菌。

3.2

菌落形成單位colony-formingunits（CFU）

單位體積樣品中的細菌群落總數(shù)。

4方法原理

樣品通過孔徑為0.45μm的濾膜過濾，細菌被截留在濾膜上，然后將濾膜置于MFC選

擇性培養(yǎng)基上，在特定的溫度（44.5℃）下培養(yǎng)24h，膽鹽三號可抑制革蘭氏陽性菌的生長，

糞大腸菌群能生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸使指示劑變色，通過顏色判斷是否產(chǎn)酸，并通過呈藍色或

藍綠色菌落計數(shù)，測定樣品中糞大腸菌群濃度。

5干擾和消除

5.1活性氯具有氧化性，能破壞微生物細胞內(nèi)的酶活性，導致細胞死亡，可在樣品采集（8.1）

1

時加入硫代硫酸鈉溶液（6.6）消除干擾。

5.2重金屬離子具有細胞毒性，能破壞微生物細胞內(nèi)的酶活性，導致細胞死亡，可在樣品

采集（8.1）時加入乙二胺四乙酸二鈉溶液（6.7）消除干擾。

6試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑或生物試劑，實驗用水為蒸餾

水或去離子水。

6.1MFC培養(yǎng)基。

胰胨10g

蛋白胨5g

酵母浸膏3g

氯化鈉5g

乳糖12.5g

膽鹽三號1.5g

1%苯胺藍水溶液10ml

1%玫瑰紅酸溶液（溶于8.0g/L氫氧化鈉液中）10ml

將上述培養(yǎng)基中的成分（除苯胺藍和玫瑰紅酸外），溶解于1000ml水中，調(diào)節(jié)pH至

7.4，分裝于三角燒瓶內(nèi)，于115℃高壓蒸汽滅菌20min，儲存于冷暗處備用。臨用前，按上

述配方比例，用滅菌吸管分別加入已煮沸滅菌的1%苯胺藍水溶液1ml及1%玫瑰紅酸溶液

（溶于8.0g/L氫氧化鈉液中）1ml，混合均勻。如培養(yǎng)物中雜菌不多，則不加玫瑰紅酸亦

可。加熱溶解前，加入1.2%～1.5%瓊脂可制成固體培養(yǎng)基。也可選用市售成品培養(yǎng)基。配

制好的培養(yǎng)基避光、干燥保存，必要時在5℃±3℃冰箱中保存，分裝到平皿中的培養(yǎng)基可

保存2～4周。配制好的培養(yǎng)基不能進行多次融化操作，以少量勤配為宜。當培養(yǎng)基顏色變

化，或脫水明顯時應廢棄不用。

6.2無菌濾膜：直徑50mm，孔徑0.45μm的醋酸纖維濾膜，按無菌操作要求包扎，經(jīng)121℃

高壓蒸汽滅菌20min，晾干備用；或?qū)V膜放入燒杯中，加入實驗用水，煮沸滅菌3次，15

min/次，前2次煮沸后需更換水洗滌2～3次。

6.3無菌水：取適量實驗用水，經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。

6.4硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O）。

6.5乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2O8Na2·2H2O）。

6.6硫代硫酸鈉溶液：ρ（Na2S2O3）=0.10g/ml

稱取15.7g硫代硫酸鈉（6.4），溶于適量水中，定容至100ml，臨用現(xiàn)配。

6.7乙二胺四乙酸二鈉溶液：ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O）=0.15g/ml

稱取15g乙二胺四乙酸二鈉（6.5），溶于適量水中，定容至100ml，此溶液可保存30d。

7儀器和設(shè)備

7.1采樣瓶：1L、500ml或250ml帶螺旋帽或磨口塞的廣口玻璃瓶。

2

7.2高壓蒸汽滅菌器：115℃、121℃可調(diào)。

7.3恒溫培養(yǎng)箱：允許溫度偏差44.5℃±0.5℃。

7.4過濾裝置：配有砂芯濾器和真空泵，抽濾壓力勿超過-50kPa。

7.5pH計：準確到0.1pH單位。

7.6培養(yǎng)皿：直徑90mm。

7.7一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

注：玻璃器皿及采樣器具試驗前要按無菌操作要求包扎，121℃高壓蒸汽滅菌20min備用。

8樣品

8.1樣品采集

點位布設(shè)及采樣頻次按照GB/T14581、HJ/T494和HJ/T91的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

采集微生物樣品時，采樣瓶（7.1）不得用樣品洗滌，采集樣品于滅菌的采樣瓶中。樣

品采集量可根據(jù)水體實際情況而定，一般不少于250ml。

采集河流、湖庫等地表水樣品時，可握住瓶子下部直接將帶塞采樣瓶插入水中，約距水

面10～15cm處，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使樣品灌入瓶內(nèi)然后蓋上瓶塞，將采樣瓶從水

中取出。如果沒有水流，可握住瓶子水平往前推。采樣量一般為采樣瓶容量的80%左右。樣

品采集完畢后，迅速扎上無菌包裝紙。

從龍頭裝置采集樣品時，不要選用漏水龍頭，采水前將龍頭打開至最大，放水3～5min，

然后將龍頭關(guān)閉，用火焰灼燒約3min滅菌或用70%～75%的酒精對龍頭進行消毒，開足龍

頭，再放水1min，以充分除去水管中的滯留雜質(zhì)。采樣時控制水流速度，小心接入瓶內(nèi)。

采集地表水、廢水樣品及一定深度的樣品時，也可使用滅菌過的專用采樣裝置采樣。

在同一采樣點進行分層采樣時，應自上而下進行，以免不同層次的攪擾。

如果采集的是含有活性氯樣品，需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液（6.6），以除去

活性氯對細菌的抑制作用（每125ml容積加入0.1ml的硫代硫酸鈉溶液）；如果采集的是重

金屬離子含量較高的樣品，則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液（6.7），以消除干

擾（每125ml容積加入0.3ml的乙二胺四乙酸二鈉溶液）。

注：15.7mg硫代硫酸鈉（6.4）可去除樣品中1.5mg活性氯，硫代硫酸鈉用量可根據(jù)樣品實際活性氯

量調(diào)整。

8.2樣品保存

采樣后應在2h內(nèi)檢測，否則，應10℃以下冷藏但不得超過6h。實驗室接樣后，不能

立即開展檢測的，將樣品在4℃以下冷藏并在2h內(nèi)檢測。

9分析步驟

9.1樣品過濾

根據(jù)樣品的種類判斷接種量，最小過濾體積為10ml，如接種量小于10ml時應逐級稀釋。

3

先估計出適合在濾膜上計數(shù)所使用的體積，然后再取這個體積的1/10和10倍，分別過濾。理

想的樣品接種量是濾膜上生長的糞大腸菌群菌落數(shù)為20～60個，總菌落數(shù)不得超過200個。

當最小過濾體積為10ml，濾膜上菌落密度仍過大時，則應對樣品進行稀釋。1:10稀釋的方法

為：吸取10ml樣品，注入盛有90ml無菌水（6.3）的三角燒瓶中，混勻，制成1:10稀釋樣品。

樣品接種量參考表見表1。

表1接種量參考表

接種量（ml）

樣品類型

1001010.110-210-310-410-5

水源水▲▲▲

地表水湖泊（水庫）▲▲▲

河流▲▲▲

生活污水▲▲▲

廢水處理前▲▲▲

工業(yè)廢水

處理后▲▲▲

地下水▲▲▲

用滅菌鑷子以無菌操作夾取無菌濾膜（6.2）貼放在已滅菌的過濾裝置（7.4）上，固定

好過濾裝置，將樣品充分混勻后抽濾，以無菌水（6.3）沖洗器壁2～3次。樣品過濾完成后，

再抽氣約5s，關(guān)上開關(guān)。

9.2培養(yǎng)

用滅菌鑷子夾取濾膜移放在MFC培養(yǎng)基（6.1）上，濾膜截留細菌面向上，濾膜應與培

養(yǎng)基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然后將培養(yǎng)皿倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，44.5℃±0.5℃

培養(yǎng)24h±2h。

9.3對照試驗

9.3.1空白對照

每次試驗都要用無菌水（6.3）按照步驟9.1和9.2進行實驗室空白測定。

9.3.2陽性及陰性對照

將糞大腸菌群的陽性菌株（如大腸埃希氏菌Escherichiacoli）和陰性菌株（如產(chǎn)氣腸桿

菌Enterobacteraerogenes）制成濃度為40～600CFU/L的菌懸液，分別按照9.1～9.2步驟培養(yǎng)，

陽性菌株應呈現(xiàn)陽性反應，陰性菌株應呈現(xiàn)陰性反應，否則，該次樣品測定結(jié)果無效，應查

明原因后重新測定。

4

10結(jié)果計算與表示

10.1結(jié)果判讀

MFC培養(yǎng)基上呈藍色或藍綠色的菌落為糞大腸菌群菌落，予以計數(shù)。

MFC培養(yǎng)基上呈灰色、淡黃色或無色的菌落為非糞大腸菌群菌落，不予計數(shù)。

結(jié)果判讀參考圖片見圖1。

陽性菌落陰性菌落（箭頭指示處）

無菌落生長

圖1結(jié)果判讀參考圖片

10.2結(jié)果計算

樣品中的糞大腸菌群數(shù)（CFU/L），按照公式（1）進行計算：

C11000

C（1）

f

5

式中：C——樣品中糞大腸菌群數(shù)，CFU/L；

C1——濾膜上生長的糞大腸菌群菌落總數(shù)，個；

1000——將過濾體積的單位由ml轉(zhuǎn)換為L；

f——樣品接種量，ml；

注：若平行樣結(jié)果都在20～60CFU/L范圍內(nèi)，最終結(jié)果取平均值以幾何平均計算。

10.3結(jié)果表示

測定結(jié)果保留至整數(shù)位，最多保留兩位有效數(shù)字，當測定結(jié)果≥100CFU/L時，以科學

計數(shù)法表示。糞大腸菌群檢驗記錄及報告格式參見附錄A。

11精密度和準確度

11.1精密度

6個實驗室對低濃度（地下水，濃度均值為2.0×102CFU/L）、中濃度（地表水，濃度

均值為1.6×105CFU/L）和高濃度（生活污水，濃度均值為1.6×107CFU/L）三個不同濃度

糞大腸菌群的實際樣品和有證標準樣品（濃度為3670MPN/L，可接受范圍為330～

7710MPN/L）進行了6次重復測定：實驗室內(nèi)相對標準偏差范圍分別為5.3%～12%、0.81%～

2.1%、0.51%～4.2%和7.7%～9.8%；實驗室間相對標準偏差分別為6.8%、3.9%、4.0%和3.6%；

實驗室間95%置信區(qū)間見表2。

表2實驗室間95%置信區(qū)間

低濃度（CFU/L）中濃度（CFU/L）高濃度（CFU/L）標準樣品（CFU/L）

均值95%置信區(qū)間均值95%置信區(qū)間均值95%置信區(qū)間均值95%置信區(qū)間

1.4×102～9.8×104～8.2×106～3.8×102～

2.0×1021.6×1051.6×1076.1×102

2.9×1022.6×1053.0×1079.9×102

11.2準確度

6個實驗室對含糞大腸菌群濃度為3670MPN/L（可接受范圍為330～7710MPN/L）的標

準樣品進行了6次重復測定：相對誤差范圍為-19%～-32%；相對誤差最終值為：-23%±10%。

注：微生物檢測數(shù)據(jù)為偏態(tài)分布，其測定結(jié)果全部經(jīng)以10為底對數(shù)轉(zhuǎn)換后進行計算。

12質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

12.1培養(yǎng)基檢驗

更換不同批次培養(yǎng)基時要進行陽性和陰性菌株檢驗，將糞大腸菌群測定的陽性菌株（如

大腸埃希氏菌Escherichiacoli）和陰性菌株（如產(chǎn)氣腸桿菌Enterobacteraerogenes）配成適

宜濃度，按樣品過濾（9.1）的要求使濾膜上生長的菌落數(shù)為20～60個，然后按培養(yǎng)（9.2）

6

的要求進行操作，陽性菌株應生長為藍色或藍綠色菌落，陰性菌株應生長為灰色、淡黃色、

無色或無菌落生長。否則，該次樣品測定結(jié)果無效，應查明原因后重新測定。

12.2對照試驗

12.2.1空白對照

每次試驗都要用無菌水做實驗室空白測定（9.3.1），培養(yǎng)后的培養(yǎng)基上不得有任何菌落

生長。否則，該次樣品測定結(jié)果無效，應查明原因后重新測定。

12.2.2陽性及陰性對照

定期按照9.3.2進行陽性及陰性對照試驗，陽性菌株應呈現(xiàn)陽性反應，陰性菌株應呈現(xiàn)

陰性反應，否則，該次樣品測定結(jié)果無效，應查明原因后重新測定。

13廢物處理

使用后的廢物及器皿須經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30min或使用液體消毒劑（自制或市售）

滅菌后，器皿方可清洗，廢物作為一般廢物處置。

14注意事項

當樣品渾濁度較高時，應選用其他方法。

7

附錄A

（資料性附錄）

糞大腸菌群檢驗記錄及報告格式

表A.1糞大腸菌群測定檢驗記錄

項目名稱：檢驗日期：年月日

檢驗方法方法依據(jù)

滅菌鍋型號出廠編號

培養(yǎng)箱型號出廠編號

培養(yǎng)基滅菌溫度（℃）培養(yǎng)溫度（℃）

樣品編號：

過濾體積ml

濾膜上生長的菌落總數(shù)個

稀釋倍數(shù)（D）倍

結(jié)果CFU/L

檢驗者：校對：審核：

注：可根據(jù)實際工作需要自行設(shè)計表格，至少要包括上述信息。

表A.2糞大腸菌群測定數(shù)據(jù)報告格式

樣品來源

采/送樣日期分析日期

樣品數(shù)量

樣品狀態(tài)

監(jiān)測點位樣品編號監(jiān)測頻次

標準方法名稱標準方法編號

測定值：監(jiān)測結(jié)果：

備注

注：可根據(jù)實際工作需要自行設(shè)計表格，至少要包括上述信息。

8

中華人民共和國國家環(huán)境保護標準

HJ347.1-2018

部分代替HJ/T347-2007

水質(zhì)糞大腸菌群的測定濾膜法

Waterquality—Determinationoffecalcoliform—Membranefiltration

（發(fā)布稿）

本電子版為發(fā)布稿。請以中國環(huán)境出版集團出版的正式標準文本為準。

水質(zhì)糞大腸菌群的測定濾膜法

1適用范圍

本標準規(guī)定了測定水中糞大腸菌群的濾膜法。

本標準適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中糞大腸菌群的測定。

本方法的檢出限：當接種量為100ml時，檢出限為10CFU/L；當接種量為500ml時，

檢出限為2CFU/L。

2規(guī)范性引用文件

本標準引用了下列文件或其中的條款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本適用于本

標準。

GB/T14581水質(zhì)湖泊和水庫采樣技術(shù)指導

HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導

HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標準。

3.1

糞大腸菌群fecalcoliforms

又稱耐熱大腸菌群（thermotolerantcoliforms）。44.5℃培養(yǎng)24h，能在MFC選擇性培養(yǎng)

基上生長，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，并形成藍色或藍綠色菌落的腸桿菌科細菌。

3.2

菌落形成單位colony-formingunits（CFU）

單位體積樣品中的細菌群落總數(shù)。

4方法原理

樣品通過孔徑為0.45μm的濾膜過濾，細菌被截留在濾膜上，然后將濾膜置于MFC選

擇性培養(yǎng)基上，在特定的溫度（44.5℃）下培養(yǎng)24h，膽鹽三號可抑制革蘭氏陽性菌的生長，

糞大腸菌群能生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸使指示劑變色，通過顏色判斷是否產(chǎn)酸，并通過呈藍色或

藍綠色菌落計數(shù)，測定樣品中糞大腸菌群濃度。

5干擾和消除

5.1活性氯具有氧化性，能破壞微生物細胞內(nèi)的酶活性，導致細胞死亡，可在樣品采集（8.1）

1

時加入硫代硫酸鈉溶液（6.6）消除干擾。

5.2重金屬離子具有細胞毒性，能破壞微生物細胞內(nèi)的酶活性，導致細胞死亡，可在樣品

采集（8.1）時加入乙二胺四乙酸二鈉溶液（6.7）消除干擾。

6試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑或生物試劑，實驗用水為蒸餾

水或去離子水。

6.1MFC培養(yǎng)基。

胰胨10g

蛋白胨5g

酵母浸膏3g

氯化鈉5g

乳糖12.5g

膽鹽三號1.5g

1%苯胺藍水溶液10ml

1%玫瑰紅酸溶液（溶于8.0g/L氫氧化鈉液中）10ml

將上述培養(yǎng)基中的成分（除苯胺藍和玫瑰紅酸外），溶解于1000ml水中，調(diào)節(jié)pH至

7.4，分裝于三角燒瓶內(nèi)，于115℃高壓蒸汽滅菌20min，儲存于冷暗處備用。臨用前，按上

述配方比例，用滅菌吸管分別加入已煮沸滅菌的1%苯胺藍水溶液1ml及1%玫瑰紅酸溶液

（溶于8.0g/L氫氧化鈉液中）1ml，混合均勻。如培養(yǎng)物中雜菌不多，則不加玫瑰紅酸亦

可。加熱溶解前，加入1.2%～1.5%瓊脂可制成固體培養(yǎng)基。也可選用市售成品培養(yǎng)基。配

制好的培養(yǎng)基避光、干燥保存，必要時在5℃±3℃冰箱中保存，分裝到平皿中的培養(yǎng)基可

保存2～4周。配制好的培養(yǎng)基不能進行多次融化操作，以少量勤配為宜。當培養(yǎng)基顏色變

化，或脫水明顯時應廢棄不用。

6.2無菌濾膜：直徑50mm，孔徑0.45μm的醋酸纖維濾膜，按無菌操作要求包扎，經(jīng)121℃

高壓蒸汽滅菌20min，晾干備用；或?qū)V膜放入燒杯中，加入實驗用水，煮沸滅菌3次，15

min/次，前2次煮沸后需更換水洗滌2～3次。

6.3無菌水：取適量實驗用水，經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。

6.4硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O）。

6.5乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2O8Na2·2H2O）。

6.6硫代硫酸鈉溶液：ρ（Na2S2O3）=0.10g/ml

稱取15.7g硫代硫酸鈉（6.4），溶于適量水中，定容至100ml，臨用現(xiàn)配。

6.7乙二胺四乙酸二鈉溶液：ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O）=0.15g/ml

稱取15g乙二胺四乙酸二鈉（6.5），溶于適量水中，定容至100ml，此溶液可保存30d。

7儀器和設(shè)備

7.1采樣瓶：1L、500ml或250ml帶螺旋帽或磨口塞的廣口玻璃瓶。

2

7.2高壓蒸汽滅菌器：115℃、121℃可調(diào)。

7.3恒溫培養(yǎng)箱：允許溫度偏差44.5℃±0.5℃。

7.4過濾裝置：配有砂芯濾器和真空泵，抽濾壓力勿超過-50kPa。

7.5pH計：準確到0.1pH單位。

7.6培養(yǎng)皿：直徑90mm。

7.7一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

注：玻璃器皿及采樣器具試驗前要按無菌操作要求包扎，121℃高壓蒸汽滅菌20min備用。

8樣品

8.1樣品采集

點位布設(shè)及采樣頻次按照GB/T14581、HJ/T494和HJ/T91的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

采集微生物樣品時，采樣瓶（7.1）不得用樣品洗滌，采集樣品于滅菌的采樣瓶中。樣

品采集量可根據(jù)水體實際情況而定，一般不少于250ml。

采集河流、湖庫等地表水樣品時，可握住瓶子下部直接將帶塞采樣瓶插入水中，約距水

面10～15cm處，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使樣品灌入瓶內(nèi)然后蓋上瓶塞，將采樣瓶從水

中取出。如果沒有水流，可握住瓶子水平往前推。采樣量一般為采樣瓶容量的80%左右。樣

品采集完畢后，迅速扎上無菌包裝紙。

從龍頭裝置采集樣品時，不要選用漏水龍頭，采水前將龍頭打開至最大，放水3～5min，

然后將龍頭關(guān)閉，用火焰灼燒約3min滅菌或用70%～75%的酒精對龍頭進行消毒，開足龍

頭，再放水1min，以充分除去水管中的滯留雜質(zhì)。采樣時控制水流速度，小心接入瓶內(nèi)。

采集地表水、廢水樣品及一定深度的樣品時，也可使用滅菌過的專用采樣裝置采樣。

在同一采樣點進行分層采樣時，應自上而下進行，以免不同層次的攪擾。

如果采集的是含有活性氯樣品，需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液（6.6），以除去

活性氯對細菌的抑制作用（每125ml容積加入0.1ml的硫代硫酸鈉溶液）；如果采集的是重

金屬離子含量較高的樣品，則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液（6.7），以消除干

擾（每125ml容積加入0.3ml的乙二胺四乙酸二鈉溶液）。

注：15.7mg硫代硫酸鈉（6.4）可去除樣品中1.5mg活性氯，硫代硫酸鈉用量可根據(jù)樣品實際活性氯

量調(diào)整。

8.2樣品保存

采樣后應在2h內(nèi)檢測，否則，應10℃以下冷藏但不得超過6h。實驗室接樣后，不能

立即開展檢測的，將樣品在4℃以下冷藏并在2h內(nèi)檢測。

9分析步驟

9.1樣品過濾

根據(jù)樣品的種類判斷接種量，最小過濾體積為10ml，如接種量小于10ml時應逐級稀釋。

3

先估計出適合在濾膜上計數(shù)所使用的體積，然后再取這個體積的1/10和10倍，分別過濾。理

想的樣品接種量是濾膜上生長的糞大腸菌群菌落數(shù)為20～60個，總菌落數(shù)不得超過200個。

當最小過濾體積為10ml，濾膜上菌落密度仍過大時，則應對樣品進行稀釋。1:10稀釋的方法

為：吸取10ml樣品，注入盛有90ml無菌水（6.3）的三角燒瓶中，混勻，制成1:10稀釋樣品。

樣品接種量參考表見表1。

表1接種量參考表

接種量（ml）

樣品類型

1001010.110-210-310-410-5

水源水▲▲▲

地表水湖泊（水庫）▲▲▲

河流▲▲▲

生活污水▲▲▲

廢水處理前▲▲▲

工業(yè)廢水

處理后▲▲▲

地下水▲▲▲

用滅菌鑷子以無菌操作夾取無菌濾膜（6.2）貼放在已滅菌的過濾裝置（7.4）上，固定

好過濾裝置，將樣品充分混勻后抽濾，以無菌水（6.3）沖洗器壁2～3次。樣品過濾完成后，

再抽氣約5s，關(guān)上開關(guān)。

9.2培養(yǎng)

用滅菌鑷子夾取濾膜移放在MFC培養(yǎng)基（6.1）上，濾膜截留細菌面向上，濾膜應與培

養(yǎng)基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然后將培養(yǎng)皿倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，44.5℃±0.5℃

培養(yǎng)24h±2h。

9.3對照試驗

9.3.1空白對照

每次試驗都要用無菌水（6.3）按照步驟9.1和9.2進行實驗室空白測定。

9.3.2陽性及陰性對照

將糞大腸菌群的陽性菌株（如大腸埃希氏菌Escherichiacoli）和陰性菌株（如產(chǎn)氣腸桿

菌Enterobacteraerogenes）制成濃度為40～600CFU/L的菌懸液，分別按照9.1～9.2步驟培養(yǎng)，

陽性菌株應呈現(xiàn)陽性反應，陰性菌株應呈現(xiàn)陰性反應，否則，該次樣品測定結(jié)果無效，應查

明原因后重新測定。

4

10結(jié)果計算與表示

10.1結(jié)果判讀

MFC培養(yǎng)基上呈藍色或藍綠色的菌落為糞大腸菌群菌落，予以計數(shù)。

MFC培養(yǎng)基上呈灰色、淡黃色或無色的菌落為非糞大腸菌群菌落，不予計數(shù)。

結(jié)果判讀參考圖片見圖1。

陽性菌落陰性菌落（箭頭指示處）

無菌落生長

圖1結(jié)果判讀參考圖片

10.2結(jié)果計算

樣品中的糞大腸菌群數(shù)（CFU/L），按照公式（1）進行計算：

C11000

C（1）

f