尿路惡性腫瘤尿液中的標(biāo)記物

FDP：膀胱癌細(xì)胞產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，增加外周血管的通透性，外滲的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，在纖維蛋白酶作用下分解為FDP（纖維蛋白降解產(chǎn)物）。敏感性和特異性分別為68%、78%。端粒酶：在生殖細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)，體細(xì)胞中不表達(dá)，敏感性和特異性分別為74%、79%。透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸酶：二者合用敏感性、特異性達(dá)92%、85%。FCM：敏感性、特異性分別為58%、83%（非整倍體細(xì)胞）。BLCA-4：為核基蛋白的一種，對(duì)膀胱癌診斷的敏感性、特異性達(dá)96%、100%。其它標(biāo)記物：細(xì)胞角蛋白、LewisX抗原、微衛(wèi)星及表面分子，如M344抗原、19A211、DD23、CD44等。膀胱癌新的腫瘤標(biāo)記物---NMP22

膀胱鏡檢+組織活檢：膀胱癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)缺點(diǎn)：侵入性，不適合大量人口普查，主觀影響因素大。尿細(xì)胞學(xué)檢查：診斷膀胱癌及術(shù)后監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)常用非侵入性檢查。缺點(diǎn)：假陰性高、敏感性差。目前，迫切需要侵入性小，更敏感、更客觀的診斷技術(shù)。

NMPs(nuclearmatrixprotein,核基蛋白）是細(xì)胞核的動(dòng)態(tài)骨架，決定細(xì)胞核的形態(tài)，維持DNA的三維結(jié)構(gòu)，是細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)單位。

NMP22（NMPs的一種）是尿路上皮特異性腫瘤相關(guān)標(biāo)記物。在BTCC中NMP22因腫瘤細(xì)胞凋亡由細(xì)胞核釋放進(jìn)入尿中。NMPs的生物學(xué)特性1974年Berezney和Caffy首次提出NMPs的概念。研究證明：NMPs主要由核纖層蛋白、核孔復(fù)合體、核糖蛋白網(wǎng)架結(jié)構(gòu)構(gòu)成，是細(xì)胞核內(nèi)部框架結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵部分。決定胞核的形態(tài)，調(diào)控有絲分裂過(guò)程。在DNA復(fù)制，RNA合成，激素的連接，基因表達(dá)的調(diào)控中起重要作用。NMPs與腫瘤的關(guān)系

NMPs在許多重要的生理活動(dòng)中起關(guān)鍵作用，許多細(xì)胞癌變都伴隨著NMP的改變。許多腫瘤特異性NMPs被發(fā)現(xiàn)：Robert(1996)對(duì)癌變和正常膀胱組織進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)了6種存在于癌變組織中的蛋白，而正常組織中無(wú)表達(dá)，它們是NMPs,BLCA-1~BLCA6。Mark(1996）對(duì)膀胱癌病人的尿液進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)一種核基質(zhì)蛋白NMP22的含量特別高，用NMP22值預(yù)測(cè)膀胱癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性，有較高的敏感性和特異性。NMP22的檢測(cè)單抗的制備：膀胱癌細(xì)胞核------提純NMP22-----免疫小鼠-----獲取單抗（mAB302-22,Mab302-18)----制備酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒（ELLIS）。檢測(cè)：試劑盒（標(biāo)準(zhǔn)品、參照品、檢驗(yàn)樣品）------與NMP22結(jié)合-----洗滌后與標(biāo)有地高辛的單抗反應(yīng)------與抗地高辛酶聯(lián)抗體反應(yīng)------鄰苯二胺顯色-----與標(biāo)準(zhǔn)品吸收光度曲線比較。（抗原在尿液中的濃度直接反映于呈色強(qiáng)度）臨界值的確定

David等用尿NMP22值診斷膀胱癌的研究中用6.4u/ml和10.0u/ml作臨界值，結(jié)果與膀胱鏡檢和活檢對(duì)比：敏感性特異性6.4u/ml68.2%79.8%10.0u/ml48.5%91.8%Sinan等報(bào)道：敏感性特異性6.4u/ml88%69%10.0u/ml73%81%

美國(guó)FDA進(jìn)行大量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后，在兼顧敏感性和特異性的基礎(chǔ)上確定臨界值為10.0u/ml。NMP22與其它方法的比較Craig對(duì)330名可疑病人進(jìn)行尿NMP22測(cè)定、尿脫落細(xì)胞檢查與組織活檢對(duì)比：敏感性特異性P值NMP22100%85%（臨界值10u/ml)<0.001

尿脫落細(xì)胞33%100%Albert按分期分級(jí)進(jìn)行了比較：

敏感性（%)NMP22測(cè)定尿脫落細(xì)胞檢查Ta83.320.0T197.764.4G186.237.9G297.244.4G3

90.080.0Landman等對(duì)47例證實(shí)為膀胱癌的病人，分別用NMP22、端粒酶、BTA、尿細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)行比較（敏感性%）。NMP22和端粒酶比BTA、尿細(xì)胞學(xué)檢查具有更高的靈敏度。

分期

分級(jí)

TaT1或更高CisG1G2G3NMP22818267698693端粒酶8091100657293BTA406433133679尿細(xì)胞學(xué)40266766379

NMP22與膀胱癌分期分級(jí)的關(guān)系David等對(duì)臨床分期不同病人的尿NMP22值比較：例數(shù)平均值u/ml中位數(shù)u/mlP值Ta4431.18.42T16169.359.3<0.02Miyanga等將病人分為表淺組（Tis,Ta,T1),浸潤(rùn)組（T2、T3、T4）進(jìn)行比較，陽(yáng)性率前者為70%，后者為100%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0.05)。NMP22與膀胱癌分級(jí)的關(guān)系David等對(duì)分級(jí)不同病人的尿NMP22進(jìn)行比較:

例數(shù)平均值u/ml中位數(shù)u/mlP值G11312.43.02<0.001(G1vsG2)G22724.29.14無(wú)顯著差異G32634.539.5<0.001(G1vsG3)影響NMP22的因素年齡、性別、種族、吸煙等

Gennaro等報(bào)道：健康組樣本中〈50歲比〉50歲值要低，女性高于男性。與種族、吸煙無(wú)明顯相關(guān)性。不受非泌尿系良性疾病的影響：如糖尿病、心臟病、自身免疫病等。泌尿系疾病對(duì)NMP22的影響：

Miyanaga等對(duì)面280位住院和門診病人、20位健康者進(jìn)行比較：

NMP22u/ml

陽(yáng)性比陽(yáng)性率中位數(shù)范圍TCC38/4780.9%40.10.0-6731.3有TCC史11/3234.4%6.10.5-555.7其它尿路癌11/2642.3%6.00.0-544.9尿結(jié)石13/2650.0%11.11.4-3207.7尿路感染19/19100%150.627.2-58228.4BPH5/3215.6%4.20.0-258.9其它疾病15/4334.9%5.00.0-206.6腎臟疾病11/4325.6%5.90.3-197.1健康者0/200.0%1.80.2-6.8不同時(shí)段的尿液影響:Miyanaga等分別取6,12,18時(shí),三個(gè)不同時(shí)段的尿液標(biāo)本檢測(cè),結(jié)果顯示不同時(shí)段的尿液標(biāo)本值,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.血尿的影響:Schacfer研究報(bào)道,尿標(biāo)本中含有3.0X106/ml紅細(xì)胞時(shí),相當(dāng)于10個(gè)/HP,NMP22值很少超過(guò)10u/ml.血清NMP22與尿NMP22的關(guān)系:Miyanaga,Akaza等對(duì)血清,尿NMP22分別測(cè)定,結(jié)果兩者之間無(wú)顯著差異.尿NMP22檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)敏感性強(qiáng):比脫細(xì)胞檢查更敏感,尤其在Ta期和高分化腫瘤時(shí),準(zhǔn)確性強(qiáng).不受血尿影響:BTA等方法因含有血樣造成檢查結(jié)果有誤．無(wú)痛苦，無(wú)創(chuàng)傷的檢測(cè)．方法簡(jiǎn)單