臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程

臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程

第一節(jié)臨床血液學(xué)檢驗(yàn)

血常規(guī)檢查

【標(biāo)本】

抗凝靜脈血(有些儀器也可用末梢血)。

【方法】

血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀測(cè)定法。

【試劑】

血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀配套試劑。

【操作】

詳見(jiàn)自己實(shí)驗(yàn)室血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀使用手冊(cè)。

【附注】

1.血常規(guī)包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白濃度、

紅細(xì)胞比積、血小板計(jì)數(shù)等項(xiàng)目。這些項(xiàng)目亦有相應(yīng)的手工方法，詳

見(jiàn)有關(guān)資料。

2.半自動(dòng)及全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀從設(shè)計(jì)上均要求用抗凝靜脈

血。其優(yōu)點(diǎn)為：

(1)靜脈血能正確地反映病人實(shí)際情況，重復(fù)性好；

(2)利于延長(zhǎng)儀器的使用壽命；

(3)解決了采血盤(pán)的交叉感染問(wèn)題等。

3.血細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)用EDTA-K2：為抗凝劑(EDTA-K2?2H201.5~

2.2mg可抗凝1ml血)。

4.貯血容器應(yīng)選用有蓋塑料管。抗凝血采集后在室溫中貯存應(yīng)

不超過(guò)6h;如需制作血涂片應(yīng)在2h內(nèi)完成。

5.測(cè)定前必須將EDTA?匕抗凝血充分混勻。

6.血細(xì)胞分析儀測(cè)定最適溫度為18?22C,低于15C或高于

30℃,均可使細(xì)胞體積發(fā)生改變，影響各參數(shù)的結(jié)果。

7.血細(xì)胞分析儀用于白細(xì)胞分類(lèi)只能當(dāng)作一種過(guò)篩手段，當(dāng)白細(xì)

胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板的任何一項(xiàng)有明顯

升高或降低；白細(xì)胞分類(lèi)出現(xiàn)異常結(jié)果（中間細(xì)胞群百分率＞8.0%）;

紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的任何一個(gè)直方圖出現(xiàn)異常圖形等情況，須

用顯微鏡檢查及分類(lèi)。

嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)

【標(biāo)本】

末梢血或抗凝靜脈血。

【方法】

直接計(jì)數(shù)法。

【試劑】

1.Hinkelmann液；

2.乙醇-伊紅稀釋液；

3.伊紅-丙酮稀釋液。

【操作】

1.小試管中加稀釋液0.38ml。

2.常法取末梢血20ul,加入管內(nèi)混勻，待紅細(xì)胞溶解后兩側(cè)充

池。

3.靜置3~5min,用低倍鏡（必要時(shí)用高倍鏡）鏡下計(jì)數(shù)10

個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。總數(shù)X20X10。=嗜酸性粒細(xì)胞/L

【附注】

1.血液稀釋后應(yīng)于1h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢。

2.充池前要充分混勻，但又不宜用力過(guò)猛。

3.住院病人采集標(biāo)本時(shí)間力求統(tǒng)一，以免受日間生理變化的影

響。

紅細(xì)胞沉降率測(cè)定

【標(biāo)本】

抗凝靜脈血。

【方法】

魏氏法。

【試劑】

109mmol/L枸椽酸鈉溶液。

【操作】

1.3nlmx100mm試管1支，在2ml容量處刻上記號(hào)，加抗凝劑

0.4ml0

2.靜脈采血后，取下針頭，加血至刻度，旋轉(zhuǎn)混合。

3.用血沉管(300mmx2.5mm)吸取上述混勻血液至"0"刻度

處，拭去管外附著的血液，將管垂直立在血沉架上。

4.記時(shí)，室溫中靜置lh,觀察血漿高度，以紅細(xì)胞下沉的毫米

數(shù)報(bào)告之。

【附注】

1.紅細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質(zhì)，血漿

中脂類(lèi)的量和質(zhì)，紅細(xì)胞的大小與數(shù)量，是否成串錢(qián)相聚以及血沉管

的內(nèi)徑、清潔度、放置位置是否垂直，室溫高低等因素都有關(guān)系。

2.標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)空腹。

3.血液和抗凝劑的比例要準(zhǔn)確。

4.血沉管內(nèi)徑要標(biāo)準(zhǔn)（2.5mm）,放置要垂直。

5.做血沉的標(biāo)本要在采集后3h內(nèi)測(cè)定，并充分混勻。

6.室溫過(guò)低、過(guò)高和貧血時(shí)，對(duì)結(jié)果有影響。為此，血沉應(yīng)盡

量放在18~25C室溫下測(cè)定。室溫過(guò)高時(shí)血沉加快，可以按溫度系

數(shù)校正。室溫過(guò)低時(shí)血沉減慢，無(wú)法校正。

網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

【標(biāo)本】

末梢血或抗凝靜脈血。

【方法】

百分計(jì)數(shù)法。

【試劑】

10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液或10g/L煌焦油藍(lán)ACD溶液。

【操作】

1.于小試管中滴加1滴煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液或煌焦油藍(lán)ACD

溶液。

2.加入末梢血或靜脈血2滴于上述試管中，混勻。

3.靜置15?20min后，取用1滴制成薄片。

4.油鏡下檢查1000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，以百分率或絕對(duì)

值報(bào)告。

【附注】

1.活體染色時(shí)間不能過(guò)短，室溫低時(shí)，放37C溫箱。

2.網(wǎng)織紅細(xì)胞也可用Miller窺盤(pán)計(jì)數(shù)法、熒光染色或流式細(xì)胞

儀計(jì)數(shù)。

嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

【標(biāo)本】

末梢血。

【方法】

百分計(jì)數(shù)法。

【試劑】

1.甲醇；

2.堿性亞甲基藍(lán)染液（保存2?3周）。

【操作】

1.按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。

2.用堿性亞甲基藍(lán)染液染色1?2niin,水洗待干。

3.用油鏡計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞數(shù)，以百分率

報(bào)告。

【附注】

1.用堿性亞甲基藍(lán)染液染色后，紅細(xì)胞呈淺藍(lán)綠色，嗜堿性點(diǎn)

彩呈深藍(lán)色。

2.也可用瑞氏染色，嗜堿性點(diǎn)彩呈藍(lán)黑色。

3.由于點(diǎn)彩紅細(xì)胞分布不勻，必要時(shí)擴(kuò)大計(jì)數(shù)紅細(xì)胞數(shù)。

第二節(jié)體液及排泄物檢查

尿液檢驗(yàn)

尿常規(guī)檢查

【標(biāo)本】

新鮮尿液。

【方法】

化學(xué)試帶法。

【試劑】

各型號(hào)尿液化學(xué)分析儀配套試帶。

【操作】

詳見(jiàn)自己實(shí)驗(yàn)室的尿液化學(xué)分析儀使用手冊(cè)。

【附注】

1.尿常規(guī)檢查使用尿液化學(xué)分析儀，目前能進(jìn)行8~10項(xiàng)檢測(cè)

（PH、蛋白、葡萄糖、酮體、隱血、尿膽紅素、尿膽素原、亞硝酸鹽、

比重、白細(xì)胞）。這些項(xiàng)目亦有相應(yīng)的手工方法，詳見(jiàn)有關(guān)資料。

2.必須了解所用試帶各膜塊注意事項(xiàng)、藥物干擾。

3.要注意尿液化學(xué)分析儀測(cè)定結(jié)果與手工法的差異，必要時(shí)用

手工法復(fù)查。

4.尿液化學(xué)分析儀檢測(cè)僅是一個(gè)過(guò)篩手段，當(dāng)?shù)鞍?、隱血、白

細(xì)胞等出現(xiàn)異常結(jié)果（如尿蛋白"+”或以上）時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鏡檢。

5.尿液顏色、透明度等一般性狀異常時(shí)也應(yīng)報(bào)告。

本-周氏（Bence-Jones）蛋白定性檢查

【標(biāo)本】

新鮮尿液。

【方法】

熱沉淀反應(yīng)法。

【試劑】

1.200g/L磺基水楊酸溶液；

2.2moi/L醋酸鹽緩沖溶液（pH4.9土0.1）。

【操作】

1.先將尿液用磺基水楊酸法作蛋白定性檢查，如呈陰性反應(yīng)，

則可認(rèn)為尿液標(biāo)本中本-周氏蛋白陰性。

2.取透明尿液4ml于試管中，再加入醋酸鹽緩沖液1ml,混勻

后，放置56C水浴中15分鐘。如有渾濁或出現(xiàn)沉淀，再將試管放入

沸水中，煮沸3分鐘，觀察試管中渾濁或沉淀的變化，如渾濁變清、

渾濁減弱或沉淀減少，均提示本-周氏蛋白陽(yáng)性。若煮沸后，渾濁增

加或沉淀增多，表明此尿液中還有其它蛋白質(zhì)，此時(shí)應(yīng)將試管從沸水

中取出，立即過(guò)濾。如濾液開(kāi)始透明，溫度下降后渾濁，再煮沸時(shí)又

透明，提示本-周氏蛋白為陽(yáng)性。

【附注】

1.過(guò)多的本-周氏蛋白，在90C以上不易完全溶解，故需與對(duì)

照管比較，也可將尿液稀釋后再測(cè)。

2.煮沸過(guò)濾除去尿中白、球蛋白時(shí)，動(dòng)作要迅速，并需保持高

溫，否則本-周氏蛋白也會(huì)濾去。

尿乳糜定性檢查

【標(biāo)本】

新鮮尿液。

【試劑】

1.乙醛(AR);

2.蘇丹川醋酸乙醇染色液或猩紅染色液。

【操作】

1.取尿5?10ml,加乙醛2~3ml,混合振搖后，使脂肪溶于乙

醒。靜置數(shù)分鐘后，2000r/min離心5min。

2.吸取乙醛與尿液的界面層涂片，加蘇丹川醋酸乙醇染色液或

猩紅染色液1滴。

3.鏡檢觀察是否有紅色脂肪小滴。

【附注】

1.尿液中加少量飽和氫氧化鈉，再加乙醛，有助于澄清。

2.將分離的乙醛層隔水蒸干，若留有油狀沉淀，也可加蘇丹in,

鏡檢證實(shí)有無(wú)脂肪小滴。

尿膽色素原定性試驗(yàn)

【標(biāo)本】

新鮮尿液。

【試劑】

1.對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑；

2.飽和醋酸鈉溶液；

3.氯仿；

4.正丁醇。

【操作】

1.在試管中，加入尿標(biāo)本2ml及對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑2ml,

混合。

2.立即加飽和醋酸鈉溶液4ml,混合，加氯仿3ml,振搖混合后,

上層水溶液呈紅色者為陽(yáng)性反應(yīng)。

3.陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)用下法證實(shí)：如尿膽原含量多，用一次氯仿不能

完全抽提尿膽原，應(yīng)多次用氯仿抽提，直至氯仿層呈淡粉紅色或無(wú)色

為止，再觀察上層水溶液色澤。如上層水溶液為紅色時(shí)，再加正丁醇

4ml抽提，如水溶液仍呈紅色則證實(shí)尿中膽色素元為陽(yáng)性。

【附注】

1.醋酸鈉溶液必須為飽和液。

2.當(dāng)尿膽色素原濃度太高時(shí)，應(yīng)將尿標(biāo)本稀釋25~100倍。

3.尿液必須新鮮，不能久置。

尿苯丙酮酸定性試驗(yàn)

【標(biāo)本】

新鮮尿液。

【方法】

三氯化鐵法。

【試劑】

1.100g/L三氯化鐵液；

2.磷酸鹽沉淀劑。

【操作】

1.尿液4ml加磷酸鹽沉淀劑1ml,混勻，靜置3min,如出現(xiàn)沉

淀，可用濾紙過(guò)濾或離心除去。

2.濾液中加入濃鹽酸2~3滴和100g/L三氯化鐵溶液2?3滴，

每加1滴立即觀察顏色變化。以尿液顯藍(lán)綠色并持續(xù)2-4min,為陽(yáng)

性。

【附注】

1.尿中若含酚類(lèi)藥物（如水楊酸制劑）及氯丙嗪，也可與氯化

鐵結(jié)合顯色，試驗(yàn)前應(yīng)停用此類(lèi)藥物。膽紅素也可造成假陽(yáng)性。

2.小兒出生后6周內(nèi)不易查出。故于出生6周后檢查為宜。

3.大多數(shù)苯丙酮尿癥患者的尿液可出現(xiàn)陽(yáng)性。但約1/4?1/2病

例可能會(huì)漏檢

4.亦可采用2,4-二硝基苯肺法。

尿沉渣檢查

【標(biāo)本】

新鮮尿液（最好采集清晨中段尿）。

【方法】

顯微鏡檢查法。

【操作】

1.取刻度離心管,倒入混合后的新鮮尿液10ml,1500r/min離

心5mino

2.棄去上層清液，留下0.2ml沉渣，輕搖離心管，使尿沉渣有

形成分充分混勻。

3.取尿沉渣0.02ml,滴在載玻片上，用18mmx18mm的蓋玻片

覆蓋。

4.鏡檢觀察，用10x10鏡頭，觀察其中有形成分的全貌及管

型。用10x40鏡頭觀察鑒定細(xì)胞成分及計(jì)算數(shù)量，應(yīng)觀察10個(gè)視

野所見(jiàn)最低和最高值，記錄結(jié)果。管型用高倍鏡鑒定，但計(jì)數(shù)數(shù)量按

低倍鏡觀察20個(gè)視野，算出一個(gè)視野的平均值，記錄結(jié)果。尿結(jié)晶

和鹽類(lèi)數(shù)量以每一高倍視野+、2+、3+、4+報(bào)告。

【附注】

1.清晨空腹第一次尿（一般情況應(yīng)采集中段尿），應(yīng)在lh內(nèi)送

檢。

2.見(jiàn)到各種上皮細(xì)胞也應(yīng)報(bào)告，報(bào)告方式參照白細(xì)胞。

3.亦可采用染色尿沉渣鏡檢。

尿沉渣定量檢查

【標(biāo)本】

新鮮晨尿。

【方法】

一小時(shí)尿沉渣計(jì)數(shù)法。

【操作】

1.標(biāo)本收集：患者先排尿棄去，準(zhǔn)確收集3h尿液于干燥容器

內(nèi)送檢（標(biāo)本留取時(shí)間5:30~8:30）?

2.準(zhǔn)確測(cè)量3h尿量，充分混合。取混勻尿液10ml,置刻度離

心管中，1500r/min離心5min,用吸管吸棄上層尿液9ml,留下1ml,

充分混勻。吸取混勻尿液1滴，注于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)。細(xì)胞共數(shù)10

個(gè)大方格，管型共數(shù)20個(gè)大方格。最終計(jì)算出紅細(xì)胞/h、白細(xì)胞/h、

管型/h。

【附注】

1.尿液應(yīng)新鮮，PH應(yīng)在6以下。

2.尿液比重最好在1.026以上。

3.如尿液中含多量磷酸鹽時(shí)，應(yīng)加少量稀醋酸液（切勿加多），

使其溶解；含大量尿酸鹽時(shí)，應(yīng)加溫使其溶解。

4.亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自動(dòng)分析儀進(jìn)行尿沉渣

定量檢查，詳見(jiàn)有關(guān)資料。

絨毛膜促性腺激素檢測(cè)

【標(biāo)本】

新鮮尿液。

【方法】

金標(biāo)抗體檢測(cè)法。

【操作】

見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)。

【附注】

若質(zhì)控點(diǎn)和測(cè)定點(diǎn)均不呈現(xiàn)紅色，表示試劑失效。

糞便檢驗(yàn)

糞便的顯微鏡檢查

【標(biāo)本】

新鮮糞便。

【方法】

直接涂片鏡檢法。

【操作】

1.潔凈玻片上加等滲鹽水1~2滴，選擇糞便的不正常部分，或

挑取不同部位的糞便做直接涂片（最好取大玻片，制成涂片后，應(yīng)覆

以蓋片。涂片的厚度以能透過(guò)印刷物字跡為準(zhǔn)）檢查。

2.在涂片中如發(fā)現(xiàn)疑似包囊，則在該涂片上滴加1滴碘液，在高

倍鏡下仔細(xì)鑒別，如仍不能決定時(shí)，可取全量糞便濃縮法檢查。

隱血試驗(yàn)

【標(biāo)本】

新鮮糞便。

【方法】

免疫學(xué)檢測(cè)法。

【操作】

取一片潔凈干燥的載玻片，滴加2~3滴蒸像水，取糞便少許，

調(diào)成均勻混懸液。取糞便隱血試紙條，按說(shuō)明書(shū)操作，將試紙條的反

應(yīng)端浸濕。在5min內(nèi)觀察結(jié)果。以反應(yīng)線及質(zhì)控線均呈藍(lán)色帶為陽(yáng)

性。

【附注】

1.若兩條線均不顯色，說(shuō)明試紙條失效。

2.本法由于間斷性出血或出血在糞便中分布不均等因素，可造

成假陰性結(jié)果。

3.本法由于藥物等原因，對(duì)正常人檢查有時(shí)會(huì)得到陽(yáng)性結(jié)果。

4.亦可采用化學(xué)試帶法、鄰甲聯(lián)苯胺法、愈創(chuàng)木酯法等。收集

標(biāo)本前3日應(yīng)禁食動(dòng)物性食物及富含葉綠素食物、鐵劑、中藥。但本

法不受動(dòng)物血紅蛋白的干擾，試驗(yàn)前不須禁食肉類(lèi)。

糞膽素檢查

【標(biāo)本】

新鮮糞便。

【方法】

氯化高汞煮沸法。

【試劑】

飽和氯化高汞溶液。

【操作】

1.于小試管內(nèi)置糞便一小塊，加飽和氯化高汞溶液數(shù)毫升。

2.將糞塊調(diào)勻，加熱煮沸3min,立即觀察顏色反應(yīng)。

【附注】

1.結(jié)果不易判定時(shí)，應(yīng)注意糞便顏色，必要時(shí)以鹽水代替試劑

做空白對(duì)照。

2.當(dāng)糞便顆粒經(jīng)煮沸后如有紅色又有綠色出現(xiàn)，說(shuō)明標(biāo)本內(nèi)既

含糞膽素又含膽紅素，常見(jiàn)于腸炎、腹瀉等。

腦脊液檢驗(yàn)

潘氏（Pandy）球蛋白定性試驗(yàn)

【標(biāo)本】

新鮮腦脊液。

【試劑】

5%苯酚溶液（棕色瓶?jī)?nèi)保存）。

【操作】

取試劑2~3ml,置于小試管內(nèi)，用毛細(xì)滴管滴入腦脊液1?2滴,

襯以黑色背景，立即觀察結(jié)果，報(bào)告陰性或陽(yáng)性及陽(yáng)性的程度。

細(xì)胞計(jì)數(shù)

【標(biāo)本】

新鮮腦脊液。

【試劑】

1.細(xì)胞計(jì)數(shù)板；

2.紅細(xì)胞稀釋液；

3.冰乙酸；

4.1%冰乙酸。

【操作】

1.細(xì)胞總數(shù)：

(1)澄清腦脊液：混勻后用滴管直接滴入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)10個(gè)大

方格內(nèi)紅、白細(xì)胞數(shù)，其總和即為每u1的細(xì)胞數(shù)。(如細(xì)胞較多，

可計(jì)數(shù)一大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)X10)。

(2)渾濁或帶血腦脊液：用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液

20ul,加入含紅細(xì)胞稀釋液0.38ml的小試管內(nèi)，混勻后滴入計(jì)數(shù)池

內(nèi)，用低倍鏡計(jì)數(shù)4個(gè)大方格中的細(xì)胞總數(shù)，再乘以50即為每ul腦

脊液的細(xì)胞總數(shù)。

2.白細(xì)胞數(shù)：

(1)非血性標(biāo)本：小試管內(nèi)放入冰乙酸1?2滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使

內(nèi)壁沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液3~4滴，數(shù)分鐘

后，混勻充入計(jì)數(shù)池，按細(xì)胞總數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。

(2)血性標(biāo)本：將混勻的腦脊液用1%冰乙酸溶液稀釋后，按細(xì)

胞總數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，結(jié)果x稀釋倍數(shù)。

3.細(xì)胞分類(lèi)：

(1)直接分類(lèi)法：白細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將低倍鏡換成高倍鏡，直接

在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞核的形態(tài)分別計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞及

單核細(xì)胞)和多核細(xì)胞，應(yīng)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，并以百分率表示。若白

細(xì)胞少于100個(gè)，應(yīng)直接寫(xiě)出單核、多核細(xì)胞的具體數(shù)字。

(2)染色分類(lèi)法：如直接分類(lèi)不易區(qū)分細(xì)胞時(shí)，可將腦脊液離

心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均勻薄膜，置室

溫或37C溫箱內(nèi)待干，進(jìn)行瑞氏染色后用油鏡分類(lèi)。

如見(jiàn)有不能分類(lèi)的細(xì)胞，應(yīng)另行描述報(bào)告。

【附注】

1.腦脊液常規(guī)包括一般性狀檢查、潘氏(Pandy)球蛋白定性試

驗(yàn)及細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.計(jì)數(shù)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行。

3.細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)注意新型隱球菌與白細(xì)胞的區(qū)別。

4.計(jì)數(shù)池用后，應(yīng)用75%乙醇消毒60min。

漿膜腔積液檢查

漿膜粘蛋白定性試驗(yàn)(Rivalta反應(yīng))

【標(biāo)本】

新鮮漿膜腔積液。

【試劑】

冰醋酸。

【操作】

取100ml量筒，加蒸鐳水100ml,滴入冰醋酸0.1ml(PH3~5),

充分混勻，靜止數(shù)分鐘，將穿刺液靠近量筒液面逐滴輕輕滴下，在黑

色背景下，觀察白色霧狀沉淀的發(fā)生及其下降速度等，報(bào)告陰性或陽(yáng)

性及陽(yáng)性的程度。

細(xì)胞學(xué)檢查

【標(biāo)本】

新鮮漿膜腔積液。

【操作】

1.細(xì)胞總數(shù)及有核細(xì)胞計(jì)數(shù)

方法基本與腦脊液同，漏出液中有核細(xì)胞數(shù)量常在100x1()6/1

以下；滲出液中有核細(xì)胞數(shù)量較多，常在500X1(T/L以上。

2.細(xì)胞分類(lèi)：

穿刺液應(yīng)在抽出后立即離心，用沉淀物涂片后以瑞氏染色法進(jìn)行

分類(lèi)。必要時(shí)制備稍厚涂片，在干燥前放置乙醛乙醇等量混合液中固

定30min,用蘇木素-伊紅(HE)或巴氏法染色查找癌細(xì)胞。

精液檢查

精子活動(dòng)率

【標(biāo)本】

新鮮精液。

【操作】

取新鮮標(biāo)本混勻后，在溫?zé)岵Ｆ嫌酶弑剁R觀察100個(gè)精子，計(jì)

數(shù)活動(dòng)精子與不活動(dòng)精子的比例，計(jì)算精子活動(dòng)的百分率。

【附注】

如室溫低于10℃時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本先放入37C溫育5~10min后鏡檢。

精子活力

【標(biāo)本】

新鮮精液。

【操作】

取上述新鮮濕片標(biāo)本，觀察精子的活動(dòng)力，以。級(jí)至IV級(jí)報(bào)告。

精子計(jì)數(shù)

【標(biāo)本】

新鮮精液。

【試劑】

精子稀釋液。

【操作】

1.于小試管內(nèi)加精子稀釋液o.38ml,吸液化精液20ul,加入稀

釋液內(nèi)搖勻。

2.充分搖勻后，滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置1?2min,待精子

下沉后，以精子頭部作為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3.如精子數(shù)少，可計(jì)數(shù)2個(gè)大方格內(nèi)精子數(shù)，數(shù)得總數(shù)乘10萬(wàn)

即為每毫升精液內(nèi)精子數(shù)，再換算成X107L報(bào)告。

4.如精子數(shù)多，可計(jì)數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)精子數(shù)，加6個(gè)零，即為

每ml精液內(nèi)精子數(shù)再換算成xlO'/L報(bào)告。

【附注】

1.收集精液前應(yīng)避免性生活3—7天，精液宜用清潔干燥之小瓶

收集，避孕套內(nèi)的精液不宜采集。收集精液標(biāo)本后應(yīng)在一小時(shí)內(nèi)檢查,

冬季應(yīng)注意保溫。

2.出現(xiàn)一次異常結(jié)果，應(yīng)隔一周后復(fù)查，反復(fù)查2~3次方能得

出比較正確的結(jié)果。

3.如低倍鏡、高倍鏡檢查均無(wú)精子，應(yīng)將精液離心沉淀后再涂

片檢查，如兩次均無(wú)精子，報(bào)告“無(wú)精子”。

精子形態(tài)觀察

【標(biāo)本】

新鮮精液。

【試劑】

革蘭或瑞氏染液。

【操作】

革蘭或瑞氏染色后用油鏡觀察，報(bào)告異常精子的百分比。

前列腺液檢查

【標(biāo)本】

新鮮前列腺液（臨床醫(yī)師作前列腺按摩術(shù)后，采集標(biāo)本于清潔玻

片上，立即送檢）。

【操作】

1.肉眼觀：記錄液體顏色、是否混有血液、粘稠度（有無(wú)膿塊）。

2.濕片鏡檢：高倍鏡下觀察白細(xì)胞、紅細(xì)胞、卵磷脂小體，其

次為上皮細(xì)胞、精子、淀粉樣體等，必要時(shí)革蘭染色查細(xì)菌。

陰道分泌物檢查

【標(biāo)本】

陰道分泌物。

【操作】

1.清潔度：取陰道分泌物，用生理鹽水涂片，高倍鏡檢查，根

據(jù)所含白細(xì)胞（或膿細(xì)胞）、上皮細(xì)胞、桿菌、球菌的多少，分成I~

IV度。

2.滴蟲(chóng)檢查：在濕片鏡下如見(jiàn)梨形，比白細(xì)胞大2倍，頂端有

鞭毛4根，在25?42C溫度下可活動(dòng)的滴蟲(chóng)（在寒冷天氣，標(biāo)本要

采取保溫措施），報(bào)告之。

3.霉菌檢查：在濕片高倍鏡下如見(jiàn)卵圓形霉菌袍子，報(bào)告之。

痰液檢查

顯微鏡檢查

【標(biāo)本】

痰液。

【操作】

選擇膿樣、干酪樣或帶膿樣血液部分，取1小塊置玻片上，直接

與生理鹽水混合，涂成薄片，加蓋片后輕壓之，用低倍鏡及高倍鏡檢

查。注意有無(wú)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、彈力纖維、枯什曼螺旋體、

夏科-雷登結(jié)晶、膽紅素結(jié)晶、硫磺樣顆粒（放線菌塊）、寄生蟲(chóng)卵

（可見(jiàn)蛔蟲(chóng)卵、肺吸蟲(chóng)卵）、痢疾阿米巴、真菌袍子、心力衰竭細(xì)胞、

載碳細(xì)胞、癌細(xì)胞等。

嗜酸性粒細(xì)胞檢查

【標(biāo)本】

痰液。

【試劑】

瑞氏或伊紅-美藍(lán)染色液。

（操作

取痰液做直接涂片，干燥后用瑞氏或伊紅-美藍(lán)染色液染色，油

鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，報(bào)告嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。

第三節(jié)血栓與止血的檢驗(yàn)

血管壁與內(nèi)皮細(xì)胞檢驗(yàn)

出血時(shí)間（BT）

出血時(shí)間檢測(cè)是指皮膚受特定條件的外傷后，出血自行停止所需

的時(shí)間。此過(guò)程反映皮膚毛細(xì)血管與血小板相互作用，包括血小板粘

附，血小板活化和釋放以及血小板聚集等反應(yīng)。

1.出血時(shí)間“測(cè)定器法”自肘前窩凹下二橫指處，經(jīng)常規(guī)消毒

后，使刀片由“測(cè)定器”內(nèi)刺入皮膚，啟動(dòng)秒表，每隔半分鐘用干凈

濾紙吸干流出的血液，直至出血自然停止，按停秒表，記錄出血時(shí)間。

2.Duke法，自耳垂或指尖取血。

（方法與操作】

見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）

（注意事項(xiàng)】

測(cè)定器法：

1.采取部位應(yīng)保暖，血液應(yīng)自動(dòng)流出。

2.由于刺入皮膚的刀片長(zhǎng)度和深度均固定，故“測(cè)定器法”的

結(jié)果較為準(zhǔn)確。

3.濾紙吸干流出血液時(shí)，應(yīng)避免與傷口接觸。

4.試驗(yàn)前1周內(nèi)不能服用抗血小板藥物，如阿司匹林等，以免

影響結(jié)果。

血小板數(shù)量和功能檢驗(yàn)

血小板計(jì)數(shù)和平均血小板體積測(cè)定

血小板計(jì)數(shù):

目視計(jì)數(shù)法。

【標(biāo)本】

末梢血或抗凝靜脈血。

（方法與操作】

見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

【試劑】

1.草酸鐵法稀釋液。

2.許汝和稀釋液。

【附注】

1.血小板稀釋液要清潔。防微粒和細(xì)菌污染。試管和吸管也應(yīng)

清潔、干凈。

2.針刺應(yīng)稍深，使血流通暢。拭去第一滴血后，首先采血作血

小板檢測(cè)，動(dòng)作要快，防止血小板聚集和破壞。采取標(biāo)本后盡快計(jì)數(shù)。

3.血液稀釋液充分混勻后，滴入計(jì)數(shù)池內(nèi)后，要靜置l（F15niin。

室溫高時(shí)注意保持計(jì)數(shù)池周?chē)臐穸?，以免水分蒸發(fā)。

4.計(jì)數(shù)時(shí)光線要適中，注意有折光性的血小板與雜質(zhì)灰塵相區(qū)

別，附在血細(xì)胞旁邊的血小板也要注意，不要漏掉。

血小板計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)

【標(biāo)本】

末梢血。

（方法與操作】

使用血小板計(jì)數(shù)儀及與其相匹配的稀釋液。操作詳見(jiàn)儀器使用說(shuō)

明書(shū)。

平均血小板體積（MPV）測(cè)定

【標(biāo)本】

根據(jù)儀器的要求用末稍血或靜脈取血注入抗凝管（EDTA.Na2或肝

素）

（方法與操作】

自動(dòng)化血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀均可檢測(cè)

血小板功能檢驗(yàn)

血小板粘附試驗(yàn)

【標(biāo)本】

自靜脈取血1.0-l.5mL

【方法】

1.玻珠柱法：

（1）操作：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

（2）注意事項(xiàng)：

1）取血過(guò)程必須順利，掌握血液通過(guò)玻珠柱的速度，流速

太快，粘附率降低，流速太慢會(huì)使粘附率增高。

2）玻珠柱為一次性用具，用后即棄去。

3）待用玻珠柱應(yīng)置于干燥器中貯存，受潮后粘附率下降。

2.玻璃濾器法：

【標(biāo)本】

自靜脈取血1.5mlo

（方法與操作】

見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

血小板聚集試驗(yàn)（PAgT）

【標(biāo)本】

自肘靜脈取血4.5ml注入于含0.5ml109mmol/L枸椽酸鈉的硅化

離心管內(nèi)，充分混勻。

【試劑】

1.富含血小板血漿（PRP）及貧含血小板血漿（PPP）。

2.血小板聚集誘導(dǎo)劑ADP、腎上腺素、膠原、瑞斯托霉素

（Ristocetin）等。

［方法與操作】

PAgT比濁法，按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）步驟操作。

（注意事項(xiàng)】

1.血標(biāo)本中pH6.8飛.5之間時(shí)，可測(cè)得最佳結(jié)果。pH<6.4或

>10.0時(shí)，可使聚集抑制或消失。

2.阿司匹林、潘生丁、肝素、雙香豆素等可抑制聚集，尤其阿

司匹林抑制聚集作用時(shí)間可持續(xù)1周。

3.采血后標(biāo)本應(yīng)放在15~25C下，切忌冰箱內(nèi)保存，并在3h內(nèi)

作完實(shí)驗(yàn)。

凝血因子檢驗(yàn)

全血凝固時(shí)間檢驗(yàn)（CT）

【標(biāo)本】

靜脈取血3mlo

（方法與操作】

試管法、硅管法操作參見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

【附注】

1.靜脈取血要一針見(jiàn)血，盡量減少組織液和空氣混入。

2.水浴箱溫度要恒定，過(guò)高或過(guò)低，可影響結(jié)果。

活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定（APTT）

【標(biāo)本】

自靜脈取血，用109mmo1/L枸椽酸鈉作1:9抗凝。

【試劑】

市售成套試劑。

［方法與操作】

按試劑及有關(guān)儀器說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。

【附注】

1.標(biāo)本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，最遲不超過(guò)2h。

2.分離血漿應(yīng)在3000r/min,離心lOmin。

3.本試驗(yàn)較試管法全血凝血時(shí)間敏感，能檢出因子削：C<25%

輕型血友病。

血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定（PT,一期法）

【標(biāo)本】

靜脈血1.8ml,用109mmol/L枸椽酸鈉0.2ml抗凝。

【試劑】

1.組織凝血活酶浸出液；

2.0.025mol/LCaCh液;

（方法與操作】

見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

【附注】

1.采血后宜在lh內(nèi)完成，置冰箱4C保存，不應(yīng)超過(guò)4h,-20C

下可放置2周，-70C可放置6個(gè)月。

2.水溫箱控制在37C±1C,過(guò)高過(guò)低均影響結(jié)果。

簡(jiǎn)易凝血活酶生成試驗(yàn)（STGT）

【標(biāo)本】

取全血0.04ml加5nli蒸偏水，混勻，即成溶血液，備用。

（方法與操作】

見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）

循環(huán)抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)

凝血酶時(shí)間測(cè)定（TT）

【標(biāo)本】

自靜脈取血「1.5ml,注入枸椽酸鈉抗凝管內(nèi)，混勻。

（方法與操作】

見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）

【試劑】

1.109mmol/L枸椽酸鈉液

2.凝血酶溶液

【附注】

1.采血后宜在lh內(nèi)完成，置冰箱內(nèi)保存不應(yīng)超過(guò)4h。

2.肝素或EDTA.Na2抗凝血漿不宜作本試驗(yàn)。

第四節(jié)溶血性貧血的檢驗(yàn)

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

標(biāo)本】

1.簡(jiǎn)易法，靜脈血為宜。

2.比色法，用肝素抗凝管，抽取靜脈血1.0一1.5011,混勻。

(方法及操作與試劑】

1.簡(jiǎn)易法：用配有6號(hào)針頭的干燥無(wú)菌注射器取靜脈血

1.01.5ml,立即滴入試管架上含有不同量的NaCL及蒸偏水的各管

中，每管1滴，貧血患者可加2滴，搖勻，靜置，室溫2h,觀察結(jié)

果。詳見(jiàn)《臨床實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)上冊(cè)》。

2.比色法：見(jiàn)《臨床實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)上冊(cè)》。

【附注】

1.簡(jiǎn)易法：

(1)試劑配制要準(zhǔn)確，每次配制量不宜過(guò)大，廠2個(gè)月內(nèi)需更

換1次試劑。

(2)如取耳垂血要使血液流出暢通，如靜脈血要求注射器干燥。

(3)如用抗凝血，以去纖維蛋白或肝素抗凝血為合適。

(4)如開(kāi)始及完全溶血的結(jié)果不易判斷時(shí)，可離心后觀察。

(5)地中海貧血的滲透脆性降低，需作低濃度NaCL液檢測(cè)。

2.比色法：

(1)如在室溫下實(shí)驗(yàn)，需在2小時(shí)內(nèi)比色結(jié)束。

(2)血與NaCL緩沖液的PH值及溫度對(duì)檢查結(jié)果均有一定影響。

紅細(xì)胞自體溶血試驗(yàn)

本試驗(yàn)是測(cè)定患者的紅細(xì)胞在自體血清中經(jīng)孵育后，自發(fā)發(fā)生的

溶血程度。

【試劑】

1.100g/L葡萄糖(無(wú)菌);

2.等滲鹽水（無(wú)菌）；

3.HiCN稀釋液;

4.0.4.1101/LATP生理鹽水無(wú)菌液。

（方法與操作】

見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第二版。

【附注】

應(yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作規(guī)程。

臨床微生物及寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)

細(xì)菌涂片檢查

涂片不染色顯微鏡檢查

1.標(biāo)本要求：各種標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。

2.試驗(yàn)方法：直接涂片法、壓滴法或懸滴法。

3.操作步驟：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

4.結(jié)果觀察：觀察標(biāo)本中有無(wú)細(xì)菌或真菌，如有再觀察細(xì)菌的形

態(tài)及運(yùn)動(dòng)情況，報(bào)告所見(jiàn)。

5.注意事項(xiàng)：注意微生物操作安全；標(biāo)本量不宜太多，以免影響

觀察；涂片制作后立即觀察，涂片干涸后應(yīng)重新制作涂片。

涂片革蘭染色顯微鏡檢查

1.標(biāo)本要求：各種標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。

2.試驗(yàn)方法：常規(guī)法、快速法。

3.操作步驟：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

4.結(jié)果觀察：觀察染色涂片有無(wú)細(xì)菌或真菌，如有則進(jìn)一步觀察

細(xì)菌的染色性、形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)及排列方式。涂片中如有細(xì)胞，則觀

察細(xì)菌菌體在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外。報(bào)告所見(jiàn)。

5.注意事項(xiàng)：涂片厚薄適宜均勻；固定及染色不能超時(shí)，否則染

色變性；只能報(bào)告所見(jiàn)細(xì)菌的染色性、形態(tài)、特殊結(jié)構(gòu)及排列方式，

不能直接報(bào)告細(xì)菌菌種如報(bào)告涂片見(jiàn)淋病奈瑟菌、白喉棒狀桿菌。

涂片抗酸染色顯微鏡檢查

1.標(biāo)本要求：各種標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。

2.試驗(yàn)方法：萋尼染色法、快速染色法或熒光（金胺-羅丹）染

色法。

3.操作方法：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

4.結(jié)果觀察：抗酸菌在萋尼染色法中呈紅色，在金胺-羅丹染色

法中呈熒光金黃色。

5.觀察染色涂片有無(wú)抗酸桿菌，如有則進(jìn)一步觀察細(xì)菌數(shù)量大致

情況。涂片中如有細(xì)胞，則觀察菌體在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外。報(bào)告所見(jiàn)。

6.注意事項(xiàng)：涂片厚薄適宜均勻；固定及染色不能超時(shí)，否則染

色變性；只能報(bào)告有無(wú)抗酸桿菌，如有，可報(bào)告其數(shù)量大致情況及是

否在細(xì)胞內(nèi)，不能直接報(bào)告見(jiàn)分枝桿菌或結(jié)核分枝桿菌，因奴卡菌屬、

放線菌屬細(xì)菌也可為抗酸陽(yáng)性菌。

涂片墨汁染色顯微鏡檢查

1.標(biāo)本要求：各種標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。

2.試驗(yàn)方法：直接染色法。

3.操作步驟：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

4.結(jié)果觀察：涂片背景為黑色，新型隱球菌或細(xì)菌莢膜在染色中

呈折光環(huán)形菌體結(jié)構(gòu)。

5.觀察染色涂片有新型隱球菌或細(xì)菌莢膜時(shí)為檢查陽(yáng)性。報(bào)告所

見(jiàn)。

6.注意事項(xiàng)：染液與標(biāo)本液的比例為1:1,比例不當(dāng)影響觀察效

果；只能報(bào)告所見(jiàn)即有無(wú)折光性環(huán)狀樣菌體，不能直接報(bào)告見(jiàn)新型隱

球菌等。

寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)操作

瘧原蟲(chóng)檢查

1.標(biāo)本要求：間日瘧及三日瘧患者應(yīng)在發(fā)作后數(shù)小時(shí)至10小時(shí)采

血，惡性瘧患者在發(fā)作后20小時(shí)左右采血。

2.試驗(yàn)方法：薄血片或厚血片染色鏡檢。

3.試驗(yàn)材料：瑞氏-姬姆薩染色液、顯微鏡等。

4.操作步驟：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

5.結(jié)果判斷：薄片須找100或100以上個(gè)視野，厚片須找20個(gè)視

野或以上才能報(bào)告“未找到瘧原蟲(chóng)”。

6.注意事項(xiàng)：見(jiàn)瘧原蟲(chóng)時(shí)必須進(jìn)行分類(lèi)。

微絲坳檢查

1.標(biāo)本要求：采血時(shí)間以晚上9?12時(shí)前后為宜。

2.試驗(yàn)方法：鮮血片法、厚血片法、試管濃集法。

3.試驗(yàn)材料：枸椽酸鈉等。

4.操作步驟：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

蟲(chóng)卵及包囊濃縮檢查

1.標(biāo)本要求：新鮮糞便取蠶豆大小，放于大小與大號(hào)青霉素相似

的瓶?jī)?nèi)。

2.試驗(yàn)方法：漂浮法、清水沉淀法。

3.試驗(yàn)材料：一般檢驗(yàn)常規(guī)材料。

4.操作步驟：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

肛門(mén)擦拭子蟲(chóng)卵檢查

1.標(biāo)本要求：隨機(jī)取樣送檢。

2.試驗(yàn)方法：軟透明紙肛門(mén)拭子檢查法、棉拭子肛門(mén)擦拭法等。

3.試驗(yàn)材料：一般常規(guī)實(shí)驗(yàn)用品。

4.操作步驟：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第二版）。

臨床免疫學(xué)檢查

傳染病免疫學(xué)檢查

乙型肝炎血清標(biāo)志物（HBV-M）檢測(cè)

【方法】

ELISA法。

【試劑】

國(guó)內(nèi)有商品化試劑盒供應(yīng)。但必須按規(guī)定使用經(jīng)中國(guó)藥品生物制

品檢定所檢定并貼有“中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定合格”字樣的防

偽標(biāo)簽的試劑。

【操作】

按試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)書(shū)進(jìn)行。

【附注】

1.試劑盒應(yīng)置冰箱中保存，取出后平衡至室溫方可使用，未用

完的微孔條須密封保存；

2.每次應(yīng)設(shè)空白1孔（不加標(biāo)本及標(biāo)酶試劑，其余各步相同）,

陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔;

3.洗滌液須用蒸鐳水或去離子水配制，洗滌時(shí)各孔均應(yīng)加滿(mǎn)洗

液，以防孔口內(nèi)邊緣有游離酶殘存不能洗凈；

4.用洗板機(jī)洗板，每次洗板反復(fù)5遍，最后一次要求微孔內(nèi)不

殘留洗滌液，如達(dá)不到要求，需扣干；

5.洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)設(shè)定30―60秒的浸泡時(shí)間；

6.滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體均勻并棄去一滴。滴

加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準(zhǔn)確，注意勿將試劑滴在孔壁上；

7.37C溫育須采用水浴箱，不可使用37C干式恒溫箱，且微孔

條必須接觸37℃水浴水面，不可懸空；

8.不同批號(hào)試劑不可混合使用。

【結(jié)果判斷】

酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)450/630nm比色測(cè)定；

1.HBsAg、抗一HBs、HBeAg;

臨界值(C.0)=陰性對(duì)照孔A值的均值Nx2.1(陰性對(duì)照A值

<0.05時(shí)按0.05W；

標(biāo)本A值S/C.O>1為HBsAg,抗一HBs、HBeAg陽(yáng)性(S/N>2.1);

標(biāo)本A值S/C.0<1為HBsAg、抗一HBs、HBeAg陰性(S/N<2.1)。

2.抗一HBe、抗一啊；

臨界值(C.O)=陰性對(duì)照孔A值的均值Nx0.5;

標(biāo)本A值S/C.0<1者為抗一HBe、抗一HB,陽(yáng)性(S/NC0.50);

標(biāo)本A值S/C.O>1者為抗一HBe、抗一HBc陰性(S/N>0.50)。

抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M(Anti-HAV-IgM)測(cè)定

【方法】

ELISA法。

【試劑】

市售合格試劑、要求同HBV兩對(duì)半；

【操作】

按試劑說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，要求可參考HBV兩對(duì)半；

【結(jié)果判斷】

要求同HBV兩對(duì)半中HBsAg。

抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白G(Anti-HCV-IgG)測(cè)定

【方法】

ELISA法。

【試劑】

市售合格試劑、要求同HBV兩對(duì)半。

【操作】

按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行、要求可參考HBV兩對(duì)半。

【結(jié)果判斷】

1.陰性對(duì)照：正常情況下，A值40.08;

2.陽(yáng)性對(duì)照：正常情況下，A值》0.50;

3.臨界值(C.O)=陰性對(duì)照均值x2.8。

陰性對(duì)照孔A值＞0.08應(yīng)舍棄、如所有陰性對(duì)照孔A值均＞0.08,

試驗(yàn)應(yīng)重做。陰性對(duì)照孔A值＜0.05時(shí)以0.05計(jì)算。

標(biāo)本A值S/C.O)1者為陽(yáng)性。

標(biāo)本A值S/C.OC1為陰性。

抗HIV(1+2)測(cè)定

在選用測(cè)定方法時(shí)、需根據(jù)自身?xiàng)l件和需要加以綜合考慮、盡管

所述方法靈敏度特異性都很高、但在實(shí)際工作中，假陽(yáng)性仍然可見(jiàn),

為達(dá)到最佳的檢測(cè)目的，一般需采用下列程序。

ELISA,金標(biāo)等過(guò)篩試驗(yàn)陰性排除后；陽(yáng)性者應(yīng)以同類(lèi)另一方法

或另類(lèi)某種方法重新過(guò)篩試驗(yàn)，以排除假陽(yáng)性，若仍為陽(yáng)性，可用免

疫印跡法證實(shí)，再次排除假陽(yáng)性，經(jīng)重復(fù)檢測(cè)均為陽(yáng)性者，方可慎重

發(fā)出陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告。

【方法】

1.篩選：ELISA法、金標(biāo)法、明膠凝集試驗(yàn)、免疫熒光法和乳

膠凝集試驗(yàn)等。

試劑：必須使用經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定并貼有“中國(guó)藥

品生物制品檢定所檢定合格”防偽標(biāo)簽的商品試劑盒。

2.確認(rèn)：免疫印跡法和放射免疫沉淀試驗(yàn)。

試劑：使用經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生部正式批準(zhǔn)的快速免疫轉(zhuǎn)印試劑盒和相應(yīng)

的放射免疫沉淀試劑盒。

【操作】

按試劑說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。

【結(jié)果判斷】

按試劑說(shuō)明書(shū)要求判定。

【附注】

1.判斷是否感染HIV應(yīng)十分慎重，對(duì)可能是陽(yáng)性的樣品還應(yīng)結(jié)

合其它測(cè)定項(xiàng)目的結(jié)果和臨床情況作出判斷。

2.金標(biāo)法必須使用當(dāng)天新鮮血清才能保證最佳結(jié)果，否則易產(chǎn)

生非特異性顯色反應(yīng)。血漿必須去掉纖維蛋白，否則易造成膜過(guò)濾阻

塞。

肥達(dá)氏反應(yīng)

【方法】

大孔反應(yīng)凝集試驗(yàn)。

【試劑】

試劑市售。

【操作】

按試劑盒內(nèi)使用說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，在大孔反應(yīng)板內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，較傳統(tǒng)

的肥達(dá)氏反應(yīng)結(jié)果更清晰，每次試驗(yàn)均須做陰、陽(yáng)性對(duì)照管（孔）。

【結(jié)果判斷】

為便于觀察，每10ml稀釋菌液中（70億菌/ml）,加入20.Og/L

美蘭溶液5ul（微升），結(jié)果更清晰。

凝集價(jià)0>1:80、H>1:160才有診斷價(jià)值。但近斯接種過(guò)傷寒,

付傷寒菌苗者其凝集價(jià)亦可升高。

抗“0”抗體屬I(mǎi)gM,出現(xiàn)早、維持時(shí)間僅數(shù)日，抗H抗體屬I(mǎi)gG,

出現(xiàn)較晚、但維持時(shí)間可達(dá)數(shù)年。

抗鏈球菌溶血素0（ASO）檢查

【方法】

膠乳凝集法。

【試劑】

市售成套商品試劑。

【操作】

按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.A、S、0膠乳加入后，輕輕搖動(dòng)到指定的時(shí)間應(yīng)立刻紀(jì)錄結(jié)

果。再放置一段時(shí)間后出現(xiàn)的清晰凝集不列為陽(yáng)性。室溫降低10℃,

在膠乳試劑加入后應(yīng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間2min,室溫升高10℃應(yīng)縮短反應(yīng)

時(shí)間2min。陽(yáng)性質(zhì)控血清應(yīng)在本說(shuō)明書(shū)指定的時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)清晰凝集,

但不能將陽(yáng)性質(zhì)控血清出現(xiàn)凝集的時(shí)間視為判斷結(jié)果的時(shí)間界限。

2.溶血、脂血、高膽紅素血癥、高膽固醇血癥、類(lèi)風(fēng)濕因子陽(yáng)

性以及標(biāo)本被細(xì)菌污染都不會(huì)影響本試驗(yàn)。

3.膠乳試劑不可冰凍，放置在4C冰箱保存，有效期可達(dá)1年,

但用前必須搖勻。

4.本試驗(yàn)用的滴管口徑以及裝膠乳試劑的塑料瓶的口徑應(yīng)同樣

大小，保證液滴大小一致。

梅毒血清學(xué)檢查

快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片法（RPR）

【試劑】

本試驗(yàn)有商品試劑盒。RPR抗原懸液呈均勻，灰黑色無(wú)雜質(zhì)。6~

10℃暗處可保存1年。

【操作】

按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

【結(jié)果判斷】

陰性標(biāo)本不凝集，陽(yáng)性標(biāo)本反應(yīng)液中可見(jiàn)明顯黑色凝集顆粒，根

據(jù)顆粒大小報(bào)告+-++++。如有需要，陽(yáng)性標(biāo)本也可在RPR卡片上將血

清用生理鹽水作1:2一1:32稀釋后，按定性試驗(yàn)方法做半定量試驗(yàn)。

【附注】

1.此試驗(yàn)的最佳溫度為23~29C,溫度過(guò)高，反應(yīng)性可能增強(qiáng)。

溫度過(guò)低，靈敏度可能下降；

2.觀察結(jié)果要及時(shí)；

3.被檢血清中若反應(yīng)素過(guò)多，有可能抑制“反應(yīng)性”，而出現(xiàn)前

帶現(xiàn)象。半定量試驗(yàn)有助于澄清此問(wèn)題。因此呈粗糙非反應(yīng)性結(jié)果的

血清宜再做半定量試驗(yàn)。

甲苯胺紅不加熱血清法（TRUST）

【試劑】

本試驗(yàn)有商品試劑盒。

【操作】

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

【結(jié)果判斷】

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，根據(jù)粉紅色凝塊有無(wú)及大小報(bào)告-、土、+―++++。

【附注】

1.待測(cè)血清及TRUST抗原于測(cè)定前放室溫平衡（23?29。；

2.陽(yáng)性反應(yīng)需做半定量試驗(yàn)，操作方法同RPR半定量試驗(yàn)。

螺旋體血球凝集法（TPHA）

【試劑】

市售成套試劑。

【操作】

按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

【結(jié)果判斷】

定性試驗(yàn)：將標(biāo)本最終稀釋成1:40與未致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，作

為陰性對(duì)照；同樣將該標(biāo)本最終稀釋成1:80與致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，

如出現(xiàn)明顯之凝集現(xiàn)象為陽(yáng)性。對(duì)出現(xiàn)陽(yáng)性的標(biāo)本，可進(jìn)一步作1:5、

1:10……的倍比系列稀釋進(jìn)行半定量試驗(yàn)，以呈現(xiàn)明顯凝集反應(yīng)的最

高稀釋倍數(shù)作為該血清樣本的凝集效價(jià)。

【附注】

1.以致病的梅毒螺旋體致敏明膠粒子代替紅細(xì)胞的TPPA試驗(yàn)與

TPHA試驗(yàn)一樣，在試驗(yàn)的原理，操作及結(jié)果的判斷方面基本一致。

TPPA已有商品化試劑盒供應(yīng)；

2.梅毒血清學(xué)檢查，傳統(tǒng)的康一華氏反應(yīng)已被陶汰，目前常用

的方法除上述不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）、RPR、TRUST、TPHA、TPPA

外，還有性病研究試驗(yàn)VDRL及熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)FTA-ABS等；

其中的FTATBS、TPHA、TPPA,屬特異性的密螺旋體抗原試驗(yàn)，而VDRL、

USR、RPR、TRUST則屬非特異性的脂類(lèi)抗原試驗(yàn)，實(shí)際應(yīng)用時(shí)常以其

一種作為篩選檢查，而用FTA-ABS或TPHA或TPPA作證實(shí)試驗(yàn)。

腫瘤免疫學(xué)檢查

甲胎蛋白（AFP）測(cè)定

【方法】

ELISA法。

【試劑】

本試驗(yàn)有商品試劑盒。

【操作】

按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

【結(jié)果判斷】

1.定性：顯色為陽(yáng)性，無(wú)色為陰性；

2.定量：酶標(biāo)儀測(cè)定，測(cè)49211nl波長(zhǎng)吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線（吸

光度為縱坐標(biāo)，AFP含量為橫坐標(biāo)），得出標(biāo)本中AFP含量，乘以稀

釋倍數(shù)后發(fā)出定量報(bào)告。

【附注】

操作中有關(guān)要求可參考乙肝兩對(duì)半試驗(yàn)。定量的試劑目前以進(jìn)口

的ELISA法AFP測(cè)定試劑盒為佳。此外，也可用放射免疫（雙抗體）

法對(duì)AFP進(jìn)行定量測(cè)定，操作按市售放免試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

自身抗體一類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)測(cè)定

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和紅斑狼瘡患者的血清中常存在高滴度的RF,

國(guó)內(nèi)普通使用膠乳凝集試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定。此外，也可用雙抗原夾心ELISA

法測(cè)定，其測(cè)定的操作程序按市售試劑盒進(jìn)行。

【方法】

膠乳凝集試驗(yàn)。

【試劑】

市售試劑盒。

【操作】

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

［結(jié)果判斷］

按說(shuō)明書(shū)要求。

【附注】

1.每次試驗(yàn)必須設(shè)陰、陽(yáng)對(duì)照；

2.RF膠乳試劑