(高清版)GBT 40348-2021 植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)的測定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法

植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40348—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國生化檢測標準化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國測試技術(shù)研究院生物研究所、四川大學(xué)、甘肅中商食品質(zhì)量檢驗檢測有限公公司、甘肅省商業(yè)科技研究所有限公司。1GB/T40348—2021植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1范圍本文件規(guī)定了植物源產(chǎn)品中辣椒素類物質(zhì)含量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本文件適用于辣椒及其制品中N-壬酸香草酰胺、辣椒素和二氫辣椒素含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。辣椒素類物質(zhì)capsaicinoid在辣椒果實中產(chǎn)生辣味的N-香草基酰胺類生物堿物質(zhì)的統(tǒng)稱。注：其中辣椒素、二氫辣椒素兩種物質(zhì)的含量約占辣椒素類物質(zhì)總量的90%,是影響辣度最[來源：GB/T21266—2007,3.3,有修改]4原理標法定量。5試劑或材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1.1無水硫酸鈉(Na?SO?)。5.1.2甲酸(CHOOH):色譜純。5.2標準品5.2.1N-壬酸香草酰胺標準品：純度≥98%;分子式：C??H??NO?;CAS號：2444-46-4。5.2.2辣椒素標準品：純度≥99%;分子式：CigH??NO?2GB/T40348—20215.3.1單一標準儲備液：分別準確稱取N-壬酸香草酰胺、辣椒素、二氫辣椒素標準品適量(精確至0.1mg),用甲醇溶解并配制成質(zhì)量濃度均為100mg/L的辣椒素類物質(zhì)單一標準儲備液，于4℃下避光保存?zhèn)溆茫行跒?個月。5.3.2混合標準溶液I:分別準確移取適量各辣椒素類物質(zhì)單一標準儲備液，用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為0.100mg/L,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為1.00mg/L的混合標準溶液I,現(xiàn)配現(xiàn)用。5.3.3混合標準溶液Ⅱ:分別準確移取適量各辣椒素類物質(zhì)單一標準儲備液，用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為0.100mg/L,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為10.0mg/L的混合標準溶5.3.4低濃度混合標準工作溶液：分別準確移取適量混合標準溶液I,用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為1.50ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為15.0ng/mL、30.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、5.3.5高濃度混合標準工作溶液：分別準確移取適量混合標準溶液Ⅱ,用甲醇稀釋配制成N-壬酸香草酰胺質(zhì)量濃度為1.50ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL,辣椒素和二氫辣椒素質(zhì)量濃度均為150ng/mL、300ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、0.22μm尼龍濾膜。溫度可調(diào)20℃~80℃。6.5渦旋混勻器。6.6組織搗碎機。取鮮辣椒(辣椒醬或半固態(tài)辣椒制品)約1kg,用組織搗碎機制成勻漿，混勻，制備好的試樣均分成取干辣椒(辣椒粉或固態(tài)辣椒制品)約250g,用電動粉碎機粉碎過425μm(40目)篩，制備好的試3GB/T40348—20217.3辣椒油等油狀樣品8試驗步驟旋混勻，于60℃水浴下超聲提取15min,然后在8000g下離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至100mL容量液相色譜參考條件如下：時間/min0381148.2.2質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：a)離子源：電噴霧離子源(ESI源);b)掃描方式：正離子模式；c)其他質(zhì)譜參考條件參見附錄A。8.2.3定性測定在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果樣品中待測物的色譜峰保留時間和標準工作溶液中對應(yīng)峰的保留時間一致(相對誤差在士2.5%以內(nèi)),且樣品譜圖中待測物監(jiān)測離子的相對豐度和濃度相當?shù)臉藴势返南鄬ωS度一致，允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應(yīng)的待測物。表2定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差士25士308.2.4定量測定在相同實驗條件下，依據(jù)樣品中各辣椒素類物質(zhì)的含量選擇合適質(zhì)量濃度范圍的標準工作溶液由低到高濃度依次進樣分析，以待測物的定量離子峰面積為縱坐標，溶液質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，應(yīng)使樣品溶液中各待測物的質(zhì)量濃度在標準工作曲線質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，超過標準工作曲線質(zhì)量濃度上限的樣品應(yīng)稀釋后進樣分析。在8.2.1和8.2.2條件下，各辣椒素類物質(zhì)的參考保留時間參見附錄A中表A.1,總離子流圖及多反應(yīng)監(jiān)測圖分別參見附錄B中圖B.1和圖B.2～圖B.4。8.3平行試驗按8.1和8.2的規(guī)定對同一試樣進行兩次平行測定。9試驗數(shù)據(jù)處理試樣中待測物質(zhì)含量按照式(1)計算：……(1)式中：w——試樣中待測物質(zhì)的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——由標準工作曲線得到的待測物質(zhì)質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V——試樣定容體積，單位為毫升(mL);f——試樣溶液稀釋倍數(shù)；計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。10精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。5GB/T40348—202111其他本方法測定N-壬酸香草酰胺、辣椒素和二氫辣椒素的檢出限和定量限參見表3。表3三種辣椒素類物質(zhì)的檢出限和定量限單位為毫克每千克化合物名稱檢出限定量限鮮辣椒、辣椒醬及半固態(tài)辣椒制品干辣椒、辣椒粉、固態(tài)辣椒制品及辣椒油等油狀樣品鮮辣椒、辣椒醬及半固態(tài)辣椒制品干辣椒、辣椒粉、固態(tài)辣椒制品及辣椒油等油狀樣品N-壬酸香草酰胺0.06350.3180.1270.635辣椒素0.06110.3050.1220.611二氫辣椒素0.06110.3050.1220.6116GB/T40348—2021(資料性)c)干燥氣溫度：350℃;化合物名稱保留時間/min定量離子對定性離子對源內(nèi)碎裂電壓/V碰撞能量/VN-壬酸香草酰胺辣椒素二氫辣椒素GB/T40348—2021(資料性)三種辣椒素類物質(zhì)的LC-MS/MS總離子流圖和多反應(yīng)監(jiān)測圖B.1三種辣椒素類物質(zhì)的LC-MS/MS總離子流圖見圖B.1。310.8-0.6-0.4-r/min圖B.1三種辣椒素的總離子流圖B.