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第第頁(yè)土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶(S—FDA)試劑盒說(shuō)明書土壤熒光素二乙酸酯(FDA)水解酶(SoilFluoresceindiacetate,SFDA)試劑盒說(shuō)明書微量法100T/48S注意:正式測(cè)定之前選擇23個(gè)預(yù)期差別大的樣本做猜測(cè)定。測(cè)定意義:FDA水解反應(yīng)能特別好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變動(dòng)以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化,是土壤質(zhì)量研究中的緊要生物學(xué)指標(biāo)之一、測(cè)定原理:FDA是一種無(wú)色化合物,在介質(zhì)中能被很多土壤酶所催化水解,并經(jīng)脫水反應(yīng),產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素,穩(wěn)定不易被分解,并在490nm處有強(qiáng)汲取峰,通過(guò)檢測(cè)490nm處的吸光值變動(dòng)可計(jì)算得FDA水解酶活性。自備試驗(yàn)用品及儀器:天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。試劑構(gòu)成和配制:標(biāo)準(zhǔn)液:液體4mL×1瓶,4℃保管。試劑一:液體40mL×1瓶,4℃保管。試劑二:粉劑1瓶,20℃避光保管,臨用前加4mL試劑三溶解。試劑三:液體40mL×1瓶,4℃保管。樣本處理:稱取風(fēng)干過(guò)3050目篩土壤約0.1g,備用。測(cè)定操作表:空白管標(biāo)準(zhǔn)管對(duì)照管測(cè)定管樣本(g)0.050.05標(biāo)準(zhǔn)液(μL)40雙蒸水(μL)40試劑一(μL)200200240200試劑二(μL)40充分混勻,30℃,震蕩1h試劑三(μL)16016016016010000g,25℃,離心5min,取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定490nm處吸光值A(chǔ),△A1=A標(biāo)準(zhǔn)管A空白管,△A2=A測(cè)定管A對(duì)照管注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。酶活性計(jì)算公式:a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。SFDA活性(μmol/d/g土樣)=(△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品)×V反總÷W=0.96×(△A2÷△A1)÷Wb.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。SFDA活性(μmol/d/g土樣)=(△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品)×V反總÷W=0.96×(△A2÷△A1)÷WC標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度100μmol/L;V反總:反應(yīng)總體積,0.4mL;W:樣本質(zhì)量,g注意事項(xiàng):1.盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保管樣品,否則很難
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