土壤熒光素二乙酸酯（FDA）水解酶（S-FDA）試劑盒說(shuō)明書(shū)

第第頁(yè)土壤熒光素二乙酸酯（FDA）水解酶（S—FDA）試劑盒說(shuō)明書(shū)土壤熒光素二乙酸酯（FDA）水解酶（SoilFluoresceindiacetate，SFDA）試劑盒說(shuō)明書(shū)微量法100T/48S注意：正式測(cè)定之前選擇23個(gè)預(yù)期差別大的樣本做猜測(cè)定。測(cè)定意義：FDA水解反應(yīng)能特別好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變動(dòng)以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的緊要生物學(xué)指標(biāo)之一、測(cè)定原理：FDA是一種無(wú)色化合物，在介質(zhì)中能被很多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在490nm處有強(qiáng)汲取峰，通過(guò)檢測(cè)490nm處的吸光值變動(dòng)可計(jì)算得FDA水解酶活性。自備試驗(yàn)用品及儀器：天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。試劑構(gòu)成和配制：標(biāo)準(zhǔn)液：液體4mL×1瓶，4℃保管。試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保管。試劑二：粉劑1瓶，20℃避光保管，臨用前加4mL試劑三溶解。試劑三：液體40mL×1瓶，4℃保管。樣本處理：稱取風(fēng)干過(guò)3050目篩土壤約0.1g，備用。測(cè)定操作表：空白管標(biāo)準(zhǔn)管對(duì)照管測(cè)定管樣本（g）0.050.05標(biāo)準(zhǔn)液（μL）40雙蒸水（μL）40試劑一（μL）200200240200試劑二（μL）40充分混勻，30℃，震蕩1h試劑三（μL）16016016016010000g，25℃，離心5min，取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定490nm處吸光值A(chǔ)，△A1=A標(biāo)準(zhǔn)管A空白管，△A2=A測(cè)定管A對(duì)照管注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。酶活性計(jì)算公式：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。SFDA活性（μmol/d/g土樣）=（△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品）×V反總÷W=0.96×（△A2÷△A1）÷Wb.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。SFDA活性（μmol/d/g土樣）=（△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品）×V反總÷W=0.96×（△A2÷△A1）÷WC標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度100μmol/L；V反總：反應(yīng)總體積，0.4mL；W：樣本質(zhì)量，g注意事項(xiàng)：1.盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保管樣品，否則很難