臨床基因擴(kuò)增PCR實驗室SOP標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件(32項)

臨床基因擴(kuò)增實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序編寫人：審核人：批準(zhǔn)人：啟用日期：年月日XXX醫(yī)院前言為使基因擴(kuò)增檢驗技術(shù)有效地應(yīng)用于臨床，更好地為疾病的預(yù)防、診斷和治療服務(wù)，保證檢驗質(zhì)量，嚴(yán)格按照《臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法》(衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號文)附件《臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》要求，制定本實驗室管理文件，本實驗室任何實驗均需遵循本管理文件中規(guī)定執(zhí)行。臨床基因擴(kuò)增檢驗技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴(kuò)增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù)，快速、可靠、準(zhǔn)確、安全、收費合理方式下，以規(guī)范的操作對臨床標(biāo)本進(jìn)行分析。本室采用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑盒。開展的檢測項目：1、乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量檢測2、人巨細(xì)胞病毒（HCMV）核酸定量檢測文件編號文件名稱頁碼PCR-BZCZCX-001分子實驗室設(shè)置、人員配置和職責(zé)管理程序6--10PCR-BZCZCX-002分子實驗室分區(qū)的配置、功能、管理程序11--16PCR-BZCZCX-003分子實驗室設(shè)施和環(huán)境管理程序17PCR-BZCZCX-004臨床標(biāo)本管理程序18PCR-BZCZCX-005標(biāo)本采集、驗收、保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序19-21PCR-BZCZCX-006標(biāo)本唯一性編號標(biāo)準(zhǔn)操作程序22-23PCR-BZCZCX-007分子實驗室儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)程序24-25PCR-BZCZCX-008分子實驗室儀器設(shè)備的管理程序26-28PCR-BZCZCX-009分子實驗室儀器設(shè)備的管理程序29-30PCR-BZCZCX-010化學(xué)試劑的管理及配制操作程序31-32PCR-BZCZCX-011分子實驗室PCR試劑性能質(zhì)檢程序33-34PCR-BZCZCX-012樣本核酸提取操作程序35-36PCR-BZCZCX-013分子實驗室一次性離心管和吸嘴的質(zhì)檢程序37-38PCR-BZCZCX-014分子實驗室HBV-DNA室內(nèi)質(zhì)控程序39-41PCR-BZCZCX-015分子實驗室檢測結(jié)果報告和審簽管理程序42-43PCR-BZCZCX-016分子實驗室試劑、耗材的購買和管理程序44-45PCR-BZCZCX-017分子實驗室生物防護(hù)和清潔廢棄物處理程序46-49文件編號文件名稱頁碼PCR-BZCZCX-018分子實驗室記錄管理程序50-52PCR-BZCZCX-019分子實驗室抱怨和應(yīng)急處理程序53-56PCR-BZCZCX-020分子實驗室保密制度57PCR-BZCZCX-021分子實驗室人員實習(xí)、培訓(xùn)和進(jìn)修管理程序58PCR-BZCZCX-022ABI-7500Plus熒光定量PCR儀使用、維護(hù)和校準(zhǔn)程序59-65PCR-BZCZCX-023儀器設(shè)備的使用、維護(hù)操作程序（離心機(jī)）66-68PCR-BZCZCX-024儀器設(shè)備的使用、維護(hù)操作程序（移液器）69-71PCR-BZCZCX-025實驗室儀器使用、維護(hù)程序（冰箱）維護(hù)程序（冰箱）維護(hù)程序（冰箱）72-73PCR-BZCZCX-026實驗室儀器使用、維護(hù)程序（生物安全柜）74-76PCR-BZCZCX-027恒溫金屬浴的使用、維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作和校準(zhǔn)程序77-78PCR-BZCZCX-028實驗室儀器使用、維護(hù)程序（旋渦混合器）79PCR-BZCZCX-029移動紫外消毒車使用、維護(hù)程序80-81PCR-BZCZCX-030溫度校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序82-83PCR-BZCZCX-031乙肝病毒（HBV）核酸提取標(biāo)準(zhǔn)操作程序84-88PCR-BZCZCX-032人巨細(xì)胞病毒（HCMV）核酸提取標(biāo)準(zhǔn)操作程序89-95XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件文件編號：PCR-BZCZCX版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共1頁受控狀態(tài)：受控號：標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室設(shè)置、人員配置和職責(zé)管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-001版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共5頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：為了分子實驗室的規(guī)范管理，特制訂本程序。2.范圍：分子實驗室。3.職責(zé)： 3.1臨床PCR檢驗實驗室工作人員共同遵守、相互督促。3.2因科研活動需要，進(jìn)入實驗區(qū)域（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本準(zhǔn)備區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)）的非本室人員需首先熟悉本程序的各項規(guī)定并嚴(yán)格遵守執(zhí)行。4.實驗室設(shè)置：4.1實驗室設(shè)計為：專用走廊、試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)組成。三個區(qū)域各有一個緩沖間。（見設(shè)置圖）4.2三個工作區(qū)各配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標(biāo)識。試劑準(zhǔn)備區(qū)—白色、樣品處理區(qū)—蘭色、基因擴(kuò)增區(qū)—紅色。4.3工作區(qū)的配置、功能、內(nèi)務(wù)管理制度見各工作區(qū)文件。4.4實驗室須嚴(yán)格遵守試劑區(qū)→樣本區(qū)→擴(kuò)增區(qū)的流向制度，嚴(yán)禁誤入和逆進(jìn)入各工作區(qū)。4.5實驗室流程：PCR室工作人員上班后，由過道走廊→試劑區(qū)→樣本區(qū)→擴(kuò)增區(qū)流向，XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室設(shè)置、人員配置和職責(zé)管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-001版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共5頁受控狀態(tài)：受控號：打開排風(fēng)、光源、溫控裝置。2）標(biāo)本接收區(qū)接收標(biāo)本、驗收登記后離心（不開蓋），由內(nèi)走廊入口將標(biāo)本送入標(biāo)本制備區(qū)緩沖間（標(biāo)本制備區(qū)內(nèi)門關(guān)閉）。3）PCR工作人員按從試劑區(qū)→樣本區(qū)→擴(kuò)增區(qū)更衣開始流水操作。4.6工作開始時，按開啟實驗區(qū)門。工作結(jié)束，內(nèi)務(wù)整理完畢，關(guān)閉實驗區(qū)。4.7實驗室內(nèi)嚴(yán)禁飲食、吸煙。5.人員配置：5.1人員要求：5.1.1鑒于PCR檢測干擾因素較多，結(jié)果分析復(fù)雜，其應(yīng)用需要與臨床充分溝通。因此，PCR實驗室工作人員應(yīng)具備大學(xué)?？埔陨蠈W(xué)歷，掌握相關(guān)學(xué)科知識及應(yīng)用能力（實驗技能、分析能力、溝通能力）。5.1.2PCR實驗室工作人員應(yīng)取得上崗培訓(xùn)合格證書。5.1.3在崗未取得培訓(xùn)合格證書者，必須由具有上崗培訓(xùn)合格證書者對其先作專業(yè)培訓(xùn)，在條件許可時，應(yīng)在最短時間內(nèi)獲得上崗培訓(xùn)合格證書。其臨床PCR檢驗過程須在具有培訓(xùn)合格證書的技術(shù)人員監(jiān)督指導(dǎo)下完成，其臨床PCR檢驗報告須由具培訓(xùn)合格證書的技術(shù)人員審核簽發(fā)。5.1.4實驗室工作人員上崗前必須學(xué)習(xí)掌握PCR實驗室管理文件及要求，并由實驗室負(fù)責(zé)人核查。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室設(shè)置、人員配置和職責(zé)管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-001版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共5頁受控狀態(tài)：受控號：5.2人員配置：實驗室根據(jù)工作開展情況配備足夠數(shù)量的工作人員。目前，實驗室配置人員為3人。實驗室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)實驗室全面管理、技術(shù)指導(dǎo)、解決與臨床溝通及技術(shù)疑難問題。實驗室負(fù)責(zé)人不在崗時，應(yīng)指定代理人負(fù)責(zé)。5.3人員培訓(xùn)：5.3.1實驗室負(fù)責(zé)人（或其指定代理人）每年必須參加上級管理部門組織的有關(guān)PCR內(nèi)容的會議及再繼續(xù)教育培訓(xùn)。5.3.2實驗室其他人員每年要進(jìn)行1次專業(yè)學(xué)習(xí)。5.3.3未取得培訓(xùn)合格證書者，在有條件情況下，完成上崗培訓(xùn)，取得上崗培訓(xùn)合格證書。6.工作人員職責(zé)：6.1中、高級職務(wù)人員職責(zé)：6.1.1結(jié)合實驗室特點，參與指導(dǎo)實驗室發(fā)展規(guī)劃的制定工作，編寫技術(shù)管理件。6.1.2熟悉、追蹤本學(xué)科國內(nèi)外最新學(xué)術(shù)發(fā)展動態(tài)，引進(jìn)先進(jìn)的技術(shù)和方法：6.1.3承擔(dān)部分臨床檢測工作、部分帶教工作。組織制定醫(yī)療、科研的實驗方案。6.1.4解決本學(xué)科實驗技術(shù)的重要問題，設(shè)定新實驗項目。6.1.5通過學(xué)術(shù)報告、專題講座等形式培養(yǎng)本室的相關(guān)技術(shù)人員。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室設(shè)置、人員配置和職責(zé)管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-001版本號：第2版第0次修改頁碼：第4頁；共5頁受控狀態(tài)：受控號：6.1.6協(xié)助科主任擬訂實驗室建設(shè)方案和精密貴重儀器、大型設(shè)備的配置方案。6.1.7參與精密儀器、大型設(shè)備的可行性論證，組織安裝、調(diào)試、維修工作。6.2初級職務(wù)人員職責(zé)：6.2.1在上級技術(shù)人員的指導(dǎo)下，參加具體臨床檢測工作的技術(shù)操作，參與制定與本室工作有關(guān)的操作規(guī)范和儀器設(shè)備的使用規(guī)程。6.2.2負(fù)責(zé)本室儀器設(shè)備的保養(yǎng)和一般故障的維修工作，定期檢查儀器設(shè)備的完好狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)問題，主動會同有關(guān)部門及時解決。6.2.3積極參加室內(nèi)外各種技術(shù)培訓(xùn)，認(rèn)真學(xué)習(xí)與本專業(yè)技術(shù)有關(guān)的理論知識，不斷提高技術(shù)平。6.2.4幫助進(jìn)修生和實習(xí)生的技術(shù)工作。6.2.5完成上級技術(shù)人員交辦的與技術(shù)工作有關(guān)的其它任務(wù)。6.3工作人員行為規(guī)范：6.3.1有強(qiáng)烈的時間觀念，按時上下班，不遲到、不早退。6.3.2.每天實驗完成后要清潔實驗室，擦拭工作臺面。6.3.3實驗人員須保持儀表整潔，工作區(qū)域須穿工作服，離開時應(yīng)換下。6.3.4實驗室內(nèi)不得飲食。6.3.5工作區(qū)域內(nèi)收集標(biāo)本外，不得擅離工作崗位，特殊情況需請假。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室設(shè)置、人員配置和職責(zé)管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-001版本號：第2版第0次修改頁碼：第5頁；共5頁受控狀態(tài)：受控號：6.3.6上班時間內(nèi)除操作規(guī)范，不得隨意更改操作步驟。6.3.7嚴(yán)格遵守實驗流程，盡量減少往返走動。6.3.8操作過程中應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)、認(rèn)真、專心，不得與他人交談，不得同時做與實驗無關(guān)的事情。如確有需要，應(yīng)暫停工作，并記錄下已進(jìn)行的步驟。6.3.9每日實驗結(jié)束后及時記錄，報告單按時發(fā)送，原始記錄存檔清晰，以備查詢，文件記錄不骯臟、破損。6.3.10語言有禮貌、舉止講文明，對待來訪病人或電話應(yīng)和藹禮貌，解釋明確耐心，不得推脫或生硬回絕。6.3.11應(yīng)本著敬業(yè)愛崗的精神，努力做好本職工作，愛護(hù)儀器，節(jié)約消耗品，減少浪費。6.3.12晚上下班要關(guān)門、關(guān)窗、檢查空調(diào)和儀器的電源是否關(guān)閉，處理好廢棄物。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室分區(qū)的配置、功能、管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-002版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共6頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：規(guī)范分子實驗室各區(qū)的配置、功能、內(nèi)務(wù)管理等。2.適用范圍：PCR實驗室。3.樣本接收區(qū)：3.1配置：計算機(jī)、操作臺及其他耗品和辦公用品若干。3.2功能：負(fù)責(zé)病人標(biāo)本的接收、驗收、登記、檢驗結(jié)果的報告和簽發(fā)、抱怨的接受處理，Tip頭和離心管的分裝，檢驗試劑的外內(nèi)包裝驗收。分離的標(biāo)本、項目登記單隨分離的標(biāo)本傳遞到標(biāo)本處理區(qū)。3.3內(nèi)務(wù)管理3.3.1本區(qū)內(nèi)不允許與基因檢測無關(guān)的工作人員和病人進(jìn)入。3.3.2本區(qū)無人在崗時要關(guān)好房門，以保證檢驗報告及其他物品的安全。3.3.3各種物品放置有序，清潔物與可疑污染物（如檢驗申請單）要分開放置。3.3.4本區(qū)內(nèi)工作有相關(guān)文件的則按文件規(guī)定執(zhí)行，無相關(guān)文件的暫不作具體規(guī)定。4．試劑準(zhǔn)備區(qū)：4.1配置：普通冰箱一臺，離心機(jī)，空調(diào)，加樣器，可移動紫外燈一臺、辦公用品若干。4.2.消耗品：消耗品包括酒精和次氯酸鈉，一次性手套，一次性帽子，各種尺寸的能高壓消毒的試劑容器，制備核酸的試劑，及反應(yīng)試劑（例如酶，緩沖液，XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室分區(qū)的配置、功能、管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-002版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共6頁受控狀態(tài)：受控號：dNTPs），Eppendoff管，帶濾心的吸嘴。4.3功能：儲存溶液的準(zhǔn)備，應(yīng)用液、主混合液的準(zhǔn)備，分裝，成品試劑和化學(xué)試劑的貯存，75%乙醇等簡單試劑的配制。工作完畢立即清洗工作場地。其他的工作不準(zhǔn)進(jìn)入。4.4.1著裝和標(biāo)識。該區(qū)工作服白色為標(biāo)識。4.4.2進(jìn)入本區(qū)時先開門，隨后關(guān)上，進(jìn)入緩沖間；在緩沖間內(nèi)換上專用工作服、鞋帽，做好工作人員出入實驗室記錄，打開緩沖間門，進(jìn)入工作區(qū)，隨后將緩沖間門關(guān)上。非工作人員嚴(yán)禁入內(nèi)。4.4.3PCR擴(kuò)增體系的試劑配制和分裝、化學(xué)試劑的配制在本區(qū)內(nèi)完成即可。根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)本驗收登記表，取出當(dāng)天實驗須配制和使用的試劑，其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。配制好的試劑需通過傳遞窗再分送至Ⅱ區(qū)使用。實驗中所使用的離心管、吸頭等需經(jīng)高壓滅菌處理，使用時應(yīng)在消毒有效期內(nèi)。4.4.4做好當(dāng)天冰箱溫度和臨床PCR檢驗流程記錄表，通過傳遞窗再分送至Ⅱ區(qū)記錄。4.4.5本區(qū)內(nèi)的所有設(shè)備物品（除滅好菌的耗品外）均為本區(qū)內(nèi)專用，且要有明顯的標(biāo)識，不得移出使用，也不得從事本區(qū)規(guī)定以外的工作。4.4.6本區(qū)在工作開始前和工作中、工作結(jié)束后全過程均要嚴(yán)格按照各相關(guān)文件的規(guī)定操作。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室分區(qū)的配置、功能、管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-002版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共6頁受控狀態(tài)：受控號：4.4.7每天須記錄本區(qū)的溫度和濕度，記錄時間為本區(qū)溫控設(shè)備開啟后半小時。4.4.8取下口罩、帽子放入垃圾筒。將本區(qū)所有廢棄物裝入垃圾袋，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，離開實驗區(qū)時帶走垃圾袋，隨后關(guān)上實驗區(qū)門。進(jìn)入緩沖間，脫下鞋套放入垃圾袋，然后將垃圾袋封口，脫下Ⅰ區(qū)專用工作服，打開Ⅰ區(qū)門，帶出垃圾，，關(guān)上門。5．標(biāo)本處理區(qū)：5.1配置：冰箱一臺，生物安全柜一臺，冷凍高速離心機(jī)一臺，混勻器一臺，加樣器一套，可移動紫外消毒車一臺、金屬浴一臺，空調(diào)一臺，其他耗品、辦公用品若干。5.2功能：本區(qū)負(fù)責(zé)各種臨床樣本、質(zhì)控樣本的核酸提取純化，儲藏，樣本貯藏，在這一工作區(qū)完成。5.3內(nèi)務(wù)管理：5.3.1工作人員進(jìn)入本區(qū)前必須在緩沖間內(nèi)換上本區(qū)專用的工作服、鞋帽等，非本室工作人員嚴(yán)禁入內(nèi)。5.3.2標(biāo)識、著裝。該區(qū)為藍(lán)色工作服。其他要求同上述。5.3.3進(jìn)入工作區(qū)，打開傳遞窗門，取出當(dāng)天用的PCR試劑，做好當(dāng)天冰箱溫度和臨床PCR檢驗流程記錄表，通過傳遞窗再分送至III區(qū)記錄。試劑放4℃冰XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室分區(qū)的配置、功能、管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-002版本號：第2版第0次修改頁碼：第4頁；共6頁受控狀態(tài)：受控號：箱暫存。5.3.4這一工作區(qū)的試劑和消耗品切不可帶入PCR加樣區(qū)，因為它們可能污染了不準(zhǔn)備擴(kuò)增的核酸。同樣，剩余的主混合液，酶，或者其他試劑也不準(zhǔn)返回試劑準(zhǔn)備區(qū)。5.3.5氣溶膠可引起污染，故應(yīng)避免實驗室內(nèi)不必要的走動。通過實驗室內(nèi)部的排風(fēng)調(diào)節(jié)，能減少過道區(qū)形成的氣溶膠對標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)的污染。每次加入待檢核酸后含反應(yīng)混合物反應(yīng)容器必須關(guān)閉，以避免樣品間的交叉污染。對于可能有傳染性的材料，必須遵守關(guān)于處理和消毒的已制定的SOP文件要求。5.3.6本區(qū)每天在工作時利用本區(qū)的溫控設(shè)備使本區(qū)的溫度控制在15~25℃之間。用過的加樣頭必須丟棄于相應(yīng)濃度的消毒液容器里。5.3.7每天須記錄本區(qū)的溫度、濕度，記錄時間為溫控設(shè)備開啟后半小時。5.3.8標(biāo)本處理過程均需嚴(yán)格遵守各種標(biāo)本處理的SOP文件。5.3.9取出冰箱中的PCR試劑，處理好的樣品加入試劑后通過傳遞窗送入Ⅲ區(qū)。5.3.10實驗前、實驗后記錄、衛(wèi)生清潔處理、進(jìn)出實驗室記錄、溫控記錄等要求。6．基因擴(kuò)增區(qū)：6.1配置：7500Plus實時熒光定量PCR檢測儀一臺，可移動紫外消毒車一臺，XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室分區(qū)的配置、功能、管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-002版本號：第2版第0次修改頁碼：第5頁；共6頁受控狀態(tài)：受控號：電腦一臺，空調(diào)一臺，其他耗品、辦公用品若干。6.2功能：將樣品檢材（來自樣品準(zhǔn)備區(qū)）和主混合液（來自試劑準(zhǔn)備區(qū)）加入成為反應(yīng)混合物，并在這唯一區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。6.3內(nèi)務(wù)管理：6.3.1著裝、標(biāo)識。該區(qū)工作服為粉紅色。工作人員進(jìn)入本區(qū)前須在緩沖間內(nèi)換上專用的工作服、鞋帽等。非本室工作人員嚴(yán)禁進(jìn)入本區(qū)。6.3.2本區(qū)每天在工作時利用本區(qū)的溫控設(shè)備，使本區(qū)的溫度控制在15~25℃范圍內(nèi)。6.3.3進(jìn)入工作區(qū)，打開傳遞窗門，取出加好試劑待擴(kuò)增的樣本。做好當(dāng)天PCR檢驗流程記錄表。擴(kuò)增好必須棄于去指定的容器里。工作結(jié)束及下班前，必須清潔和凈化（去污染）實驗臺表面。6.3.4在緩沖間更換衣服，拖鞋，并帶手套和帽子。在此區(qū)域里手套應(yīng)該經(jīng)常更換。離開房間時應(yīng)將工作服留下。6.3.5按熒光擴(kuò)增儀的標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件對各種樣本進(jìn)行檢測。本區(qū)在工作開始前、工作中和工作結(jié)束后的全過程均要按各相關(guān)文件的規(guī)定操作。6.3.6每天須記錄本區(qū)內(nèi)的溫度、濕度，記錄時間為溫控設(shè)備開啟后半小時。6.3.7本區(qū)內(nèi)的所有設(shè)備、物品為本區(qū)內(nèi)專用，且要有明顯的標(biāo)識，不得移出使用，也不得從事本區(qū)工作范圍以外的事項。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室分區(qū)的配置、功能、管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-002版本號：第2版第0次修改頁碼：第6頁；共6頁受控狀態(tài)：受控號：6.3.8作好擴(kuò)增儀的維護(hù)、實驗數(shù)據(jù)的記錄、質(zhì)控記錄。實驗前準(zhǔn)備、實驗后消毒記錄等。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室設(shè)施和環(huán)境管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-003版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共1頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：為了防止實驗室的污染，特制訂本程序。2.范圍：分子實驗室。3.職責(zé)：分子實驗室工作人員。4.實驗室環(huán)境：4.1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ區(qū)的空氣流向由實驗室區(qū)域外向內(nèi)。4.2Ⅱ、Ⅲ這兩區(qū)應(yīng)空氣對流通暢，但兩區(qū)之間不應(yīng)存在空氣對流。4.3實驗室工作臺應(yīng)為寬60-80cm，長不小于200cm的堅固、平整、光滑、耐酸、耐紫外照射的臺面，臺面距地面高度80cm。4.4實驗室各區(qū)上方應(yīng)安裝40W日光燈一盞，近工作臺上方安裝兩只40W紫外燈。緩沖間上方安裝一只40W紫外燈。4.5Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ區(qū)應(yīng)有空氣恒溫設(shè)備（如冷暖空調(diào)），室溫宜為18-25℃,空氣濕度宜≤70%.4.6儀器設(shè)備、標(biāo)本架、槍頭盒、離心管盒各區(qū)均專用，且有各區(qū)專用標(biāo)志,各物品須擺放整齊,滅菌的物品須與未滅菌物品嚴(yán)格區(qū)分放置。4.7冰箱內(nèi)試劑分類擺放。4.8消毒和污物處理見各自的SOP。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序臨床標(biāo)本管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-004版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共1頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：規(guī)范標(biāo)本采集、運送、貯存、廢棄的管理，確保檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性。2.范圍：臨床各類標(biāo)本，涉及標(biāo)本的采集、處理、保存。3.責(zé)任人：分子實驗室工作人員和臨床護(hù)士。4.工作程序：4.1實驗室所有臨床標(biāo)本必須有唯一性編號，標(biāo)本的唯一性編號須字跡清晰明了，不得隨意作任何涂改。4.2所有標(biāo)本均可能具有傳染性，須嚴(yán)格遵守醫(yī)院有關(guān)院內(nèi)感染及醫(yī)用垃圾管理和處理規(guī)定，工作人員注意保持并隨時檢查容器的完整和無標(biāo)本外泄發(fā)生。4.3標(biāo)本的采集、運送、保存見相應(yīng)的操作程序文件。4.4接收標(biāo)本時應(yīng)該核對標(biāo)本與檢驗申請單的一致性。工作人員有權(quán)拒收與檢驗申請單不一致的標(biāo)本、標(biāo)識不清的標(biāo)本。檢驗申請有不清晰情況時，應(yīng)即時與臨床科室或相關(guān)人員聯(lián)系核實。4.5標(biāo)本接受人須檢查標(biāo)本狀態(tài)：標(biāo)本不合要求（使用不適當(dāng)?shù)娜萜?、容器有破損、標(biāo)本外泄污染、標(biāo)本溶血、標(biāo)本量不足等），工作人員有權(quán)拒受標(biāo)本，應(yīng)記錄其狀態(tài)并通知臨床重新送檢。4.6檢測前標(biāo)本處理時，工作人員須仔細(xì)核對標(biāo)本與標(biāo)本資料記錄的一致性，準(zhǔn)確無誤時，方可進(jìn)行處理。4.7標(biāo)本的廢棄處理見“廢棄物的處理程序”XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序標(biāo)本采集、驗收、保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-005版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：1、目的：保證所接收的標(biāo)本符合實驗要求,保證標(biāo)本的保存質(zhì)量。2、適用范圍：門診患者和病區(qū)患者送檢標(biāo)本。3、責(zé)任人：XX科人員、臨床護(hù)士和運送部人員。4、標(biāo)本的采集（標(biāo)本由醫(yī)護(hù)人員采集）血液標(biāo)本：病區(qū)標(biāo)本由護(hù)士采集，門診標(biāo)本由門診抽血處專人采集，全血樣本根據(jù)需要選擇真空無菌無抗凝專用試管抽取靜脈血2ml或于含EDTA-K2真空采集管中抽取靜脈血2ml。痰標(biāo)本：用一次性無菌痰杯（帶蓋）收集清晨第一口痰標(biāo)本送檢。對于無痰或少痰的患者，可用45℃加溫的100g/LNaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo)本。生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用一次性滅菌取樣拭子采集樣本，及時送檢。采集生殖道拭子標(biāo)本，要求病人在采樣2小時內(nèi)排尿，采樣時，將棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口2~3cm，轉(zhuǎn)動一周以獲得上皮細(xì)胞。將取樣后的棉拭子管加1ml無菌生理鹽水。宮頸脫落細(xì)胞：宮頸脫落細(xì)胞由醫(yī)生用專用取樣宮頸刷（滅菌，一次性）采集樣本，及時送檢。采集要求病人在采樣有24小時內(nèi)不能有性交，采樣時，用無菌棉球輕拭宮頸表面過多的分泌物及血跡，宮頸刷到達(dá)宮頸外口上方10mm左XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序標(biāo)本采集、驗收、保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-005版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：右，部分毛刷覆蓋宮頸外口表面，用適當(dāng)?shù)耐饬Τ粋€方向轉(zhuǎn)3圈。取出后將毛刷置于細(xì)胞保存液中，封蓋。及時送檢。腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時送檢。乳汁標(biāo)本：由病人直接擠入1.5ml無菌EP管中，封蓋送檢。尿液標(biāo)本：由病人自留尿液于無菌封閉的杯中送檢。注：定期對臨床醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行有關(guān)標(biāo)本采集、保存、運輸?shù)戎R的培訓(xùn)。5、標(biāo)本的運送：標(biāo)本由送檢人員統(tǒng)一收取，運送容器為一次性無抗凝劑真空試管，4小時內(nèi)送到遺傳科標(biāo)本接收區(qū)。6、標(biāo)本驗收程序：6.1對符合檢測要求的標(biāo)本及時地用計算機(jī)條碼系統(tǒng)進(jìn)行簽收，然后進(jìn)行唯一性編號（詳見標(biāo)本唯一性編號標(biāo)準(zhǔn)操作程序）。6.2認(rèn)真查對姓名，條碼號，ID號，病區(qū)床號，項目及標(biāo)本性狀等。對不符合要求者記入拒收標(biāo)本記錄表中，并及時通知采樣科室，正確及時地補(bǔ)采樣，以免延誤病人的檢測報告。7、標(biāo)本的保存：HBV-DNA：血樣標(biāo)本4~8℃短期保存（2天），或分離出血清，-20℃下保存（兩周以上）。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序標(biāo)本采集、驗收、保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-005版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：HCV-RNA：血樣標(biāo)本應(yīng)盡快分離血清（或血漿），-20℃保存，保存期不得超過2周。長期保存需存放在-70℃以下。痰、乳汁、尿、全血、胸腹水、腦脊液標(biāo)本置4℃下短期保存。血清、血漿、胸腹水、腦脊液和處理后的痰、尿-20℃下長期保存。注：所有標(biāo)本在報告發(fā)出后保存1周。由專人負(fù)責(zé)，確保標(biāo)本保存的溫度及狀態(tài)正常，1周后丟棄并做記錄。特殊標(biāo)本處理：對暫不檢測的項目或規(guī)定時間外收到的零散標(biāo)本，要隨時登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤檢驗。對特殊標(biāo)本或特殊病人的標(biāo)本，實行“首接”負(fù)責(zé)制。所謂特殊標(biāo)本是指難于采集的標(biāo)本，以及特殊病人的標(biāo)本?！笆捉印必?fù)責(zé)制是指無論那位工作人員，一旦收到標(biāo)本，均須負(fù)其責(zé)任，及時和正確保管，轉(zhuǎn)送標(biāo)本到有關(guān)實驗室或有關(guān)人員，同時作交班記錄和雙簽名，不得以任何借口推托。對于做長期病情動態(tài)考察的病人標(biāo)本一律置-20℃下長期保存，使用時再按需取出檢測。注：定期對本科室工作人員進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序標(biāo)本唯一性編號標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-006版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：規(guī)范待檢標(biāo)本的唯一識別標(biāo)記的編碼規(guī)則，保證在任何時候?qū)?biāo)本的識別不發(fā)生混淆。2.適用范圍：基因擴(kuò)增實驗室所開展的檢測項目。3.操作人：分子實驗室人員和臨床護(hù)士。4.操作方法：XX科已使用條形碼系統(tǒng)，其條形碼已具備唯一性標(biāo)識，但由于病區(qū)標(biāo)本多，項目雜，不能做到PCR檢測項目標(biāo)本的條形碼單獨特征性區(qū)分，且條形碼不具有連續(xù)性，這給上機(jī)標(biāo)本編輯檢測號帶來不便和影響工作效率。因此，必須重新為帶有條形碼的標(biāo)本編號。編號原則詳見下述。4.1按檢測類型+檢測日期+檢測順序進(jìn)行。4.2編號步驟：Ⅰ.對當(dāng)天送來的標(biāo)本，根據(jù)編號的基本原則編號，每個樣本的每個檢測項目對應(yīng)一個唯一的編號（如2018年1月1日檢測的第3個乙肝標(biāo)本為HBV-DNA2018010103或20180101HBVDNA03）Ⅱ.用筆在每張檢驗申請單和對應(yīng)的樣品管上作好相同的標(biāo)記。Ⅲ.做好標(biāo)本的接收記錄，每個樣本的記錄都應(yīng)包括以下信息:接收時間、醫(yī)院、科室、送檢醫(yī)生、患者姓名、性別、年齡、標(biāo)本類別、標(biāo)本狀態(tài)、送標(biāo)本者、接收人、標(biāo)本唯一統(tǒng)編號等。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序標(biāo)本唯一性編號標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-006版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：Ⅳ.處理好樣品、點樣后，將反應(yīng)管放入擴(kuò)增儀上開始擴(kuò)增。Ⅴ.擴(kuò)增得到結(jié)果后，先在統(tǒng)計簿上填入結(jié)果，作好記錄，再依次把實驗結(jié)果填入相應(yīng)申請單。Ⅵ.發(fā)放檢驗報告單。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)程序文件編號：PCR-BZCZCX-007版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證儀器設(shè)備得到正確無誤的操作使用、穩(wěn)定狀態(tài)，保障儀器設(shè)備的使用壽命和結(jié)果檢測的準(zhǔn)確性。2.范圍：PCR涉及的主要設(shè)備，包括：7500Plus熒光擴(kuò)增儀，離心機(jī)，可調(diào)式移液器，恒溫金屬浴，生物安全柜等。3.職責(zé)： 3.1操作者必須嚴(yán)格遵循操作程序的規(guī)定。3.2實驗室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)程序的落實和督導(dǎo)。4.儀器設(shè)備的操作使用：4.1儀器設(shè)備的使用授權(quán)：僅本實驗室工作人員有權(quán)使用實驗室的儀器設(shè)備，儀器設(shè)備的使用者在使用前首先必須熟悉儀器設(shè)備的操作使用程序并經(jīng)科室主任考核認(rèn)可。4.2儀器的使用：儀器設(shè)備的使用嚴(yán)格遵守分區(qū)使用管理，儀器設(shè)備的使用必須嚴(yán)格遵循儀器設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。5.儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)：5.1維護(hù)保養(yǎng)的實施：按PCR實驗室儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)的SOP文件進(jìn)行。5.2維護(hù)保養(yǎng)應(yīng)有及時的實施記錄，實驗室負(fù)責(zé)人對記錄應(yīng)及時檢查，核實。6.儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序：6.1校準(zhǔn)方法：XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)程序文件編號：PCR-BZCZCX-007版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：6.1.1可調(diào)式移液器校準(zhǔn)應(yīng)送到該地區(qū)計量單位進(jìn)行校準(zhǔn)。6.1.2恒溫金屬浴使用經(jīng)檢定的溫度計進(jìn)行日常溫度監(jiān)控，廠家每年校準(zhǔn)一次。6.2校準(zhǔn)安排在不進(jìn)行樣本檢測的日期完成。6.3校準(zhǔn)后設(shè)備要貼上本次校準(zhǔn)的日期及下次校準(zhǔn)的預(yù)定日期。6.4校準(zhǔn)記錄保存在各自的設(shè)備檔案中.。6.5校準(zhǔn)計劃：6.5.1啟用前校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用前實施校準(zhǔn)。6.5.2周期性校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用后定期進(jìn)行校準(zhǔn)，具體參見各儀器校正SOP。6.5.3維修后校準(zhǔn)：設(shè)備經(jīng)維修后須經(jīng)校準(zhǔn)后才可重新投入使用。6.5.4校準(zhǔn)計劃外的校準(zhǔn)：在日常工作中懷疑某些已校準(zhǔn)設(shè)備出現(xiàn)偏差時，應(yīng)對其作計劃外校準(zhǔn)。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室儀器設(shè)備的管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-008版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證PCR實驗室儀器設(shè)備得到妥善的管理。2.范圍：PCR實驗室的所有儀器設(shè)備。3.職責(zé)：3.1儀器設(shè)備的管理、維護(hù)、保養(yǎng)等的具體事項由設(shè)備操作人員負(fù)責(zé)執(zhí)行。3.2由PCR實驗室負(fù)責(zé)人組織執(zhí)行和監(jiān)督管理。4.工作內(nèi)容：4.1建檔管理。儀器設(shè)備的檔案管理應(yīng)包括以下內(nèi)容：4.1.1儀器設(shè)備的一般情況：名稱，制造商，型號，序號，接受日期，接收狀態(tài)（全新，改裝，原件調(diào)撥等），啟用日期，目前放置地點，接受人員簽字等。4.1.2儀器設(shè)備的相關(guān)文件：儀器設(shè)備的說明書，操作手冊，保修卡等，有關(guān)文件（或復(fù)印件）的文件序號，名稱，保存方式，管理負(fù)責(zé)人等。4.1.3儀器設(shè)備的損壞，故障，修理須作如下記錄：日期，設(shè)備名稱，設(shè)備標(biāo)記號，損壞或故障的表現(xiàn)，損壞或故障的原因，修理人員及單位，修理的結(jié)果，記錄人員簽名，質(zhì)量負(fù)責(zé)人簽名等。4.1.4有問題的儀器設(shè)備加貼明顯的紅色停用標(biāo)識，標(biāo)識上應(yīng)有停用XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室儀器設(shè)備的管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-008版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：日期及原因；可搬動的儀器移至設(shè)備處報修，不可移動的設(shè)備原地使用布罩封存待修，直至修復(fù)校驗后重新標(biāo)識。4.1.5儀器設(shè)備的報廢處理：因使用壽命，損壞，故障導(dǎo)致儀器設(shè)備不能滿足檢測需要時，該設(shè)備即行報廢。由管理人填寫報廢申請，科質(zhì)量負(fù)責(zé)人核實，設(shè)備處批準(zhǔn)后由質(zhì)量負(fù)責(zé)人在設(shè)備檔案中簽名注銷。4.2儀器設(shè)備實行嚴(yán)格的分區(qū)專用。4.3使用的儀器設(shè)備應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)和鑒定，具體見文件SOP；4.4為保持儀器設(shè)備工作狀態(tài)的穩(wěn)定，應(yīng)對其進(jìn)行定期的，必要的維護(hù)和保養(yǎng)，見文件SOP；4.5為使7500Plus熒光定量PCR檢測儀處于穩(wěn)定的工作狀態(tài)，在該電腦上不得使用非本室的外來U盤，不能在電腦里加載其它程序和軟件；在使用本室U盤進(jìn)行資料備份時，需在報告系統(tǒng)電腦上預(yù)先殺毒方可使用。5、儀器故障時的標(biāo)記、放置程序：5.1步驟：a）用紅牌故障標(biāo)志標(biāo)示故障儀器。b）小型儀器送儀器部門維修。c）大型貴重儀器關(guān)閉電源開關(guān)，取下電源插頭。用相應(yīng)防塵罩遮蔽儀器。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室儀器設(shè)備的管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-008版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：d）維修完成后取下紅色故障標(biāo)示，換上黃色未校準(zhǔn)標(biāo)示牌。e）調(diào)試實驗通過，去掉未校準(zhǔn)標(biāo)示牌,換上綠色運行標(biāo)牌。f）儀器重新正常使用。5.2修復(fù)后設(shè)備必須經(jīng)校準(zhǔn)、檢定或檢測滿足要求后方能正常投入使用。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室儀器設(shè)備的管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-009版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證PCR檢測可靠性和準(zhǔn)確性。2.范圍：PCR檢測前質(zhì)控、樣本分離純化質(zhì)控、統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控。3.職責(zé)：由分子實驗室工作人員具體操作，負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)本落實。4.試劑質(zhì)檢管理：4.1對PCR檢測的試劑首先要驗收其三證是否齊全（生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品注冊證、經(jīng)營許可證）。4.2外包裝檢查：包裝應(yīng)完整、無污、無損，各標(biāo)識清晰（廠家名稱、品名、批準(zhǔn)文號、生產(chǎn)日期、有效期、貯存條件等）。4.3內(nèi)包裝檢查：內(nèi)包裝是否有破損、泄漏，內(nèi)容物是否齊全，是否有相應(yīng)的使用說明書，是否有肉眼可見的變質(zhì)等。4.4上述檢查在試劑準(zhǔn)備區(qū)完成，并同時進(jìn)行記錄，記錄放在試劑準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)。4.5試劑盒的性能檢查(見試劑性能檢查SOP)5.室內(nèi)質(zhì)控：5.1.質(zhì)控品的來源：由試劑公司提供。5.1.質(zhì)控品處理：質(zhì)控品與樣本同時處理，排列順序為：臨床樣本、陰性質(zhì)控品陽性質(zhì)控品，具體見室內(nèi)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)操作程序。6.室間質(zhì)控：必須參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的全國臨床基因擴(kuò)增檢驗項目的室間質(zhì)XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室儀器設(shè)備的管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-009版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：量評價。6.1室間質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗收：收到質(zhì)控血清后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)況明對血清的數(shù)量、批號、包裝進(jìn)行驗收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求置-20℃以下保存與標(biāo)本處理區(qū)。6.2質(zhì)控標(biāo)本的檢測按常規(guī)臨床標(biāo)本對待，若需要，檢測前先根據(jù)說明對質(zhì)控物進(jìn)行復(fù)溶。6.3室間質(zhì)控樣本必須按實驗室常規(guī)工作一樣進(jìn)行，由負(fù)責(zé)常規(guī)工作的人員測試，工作人員必須使用實驗室的常規(guī)檢測方法和試劑，不得特殊對待。檢測結(jié)果須在截止日期前上報。6.4室間質(zhì)評的檢測結(jié)果和反饋結(jié)果均記錄于室間質(zhì)評記錄表，根據(jù)反饋結(jié)果分析室間質(zhì)評的狀態(tài)，如有失控應(yīng)查找原因，并采取相應(yīng)的措施。7.實驗結(jié)果的判斷：7.1實驗結(jié)果合格，即發(fā)報告。7.2實驗結(jié)果不合格，報告實驗室負(fù)責(zé)人，會同有關(guān)人員，查找原因，妥善解決。7.3每次檢測質(zhì)控結(jié)果須有記錄。7.4失控原因及糾正措施須有記錄。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序化學(xué)試劑的管理及配制操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-010版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證實驗室化學(xué)試劑安全使用及正確配制。2.適用范圍：基因擴(kuò)增檢測實驗室常用化學(xué)試劑(NaOH、乙醇、含氯消毒片)。3.管理程序:3.1化學(xué)試劑的購買或領(lǐng)用：每次實驗前清點試劑，發(fā)現(xiàn)試劑存量不足時，及時領(lǐng)用或提交進(jìn)購申請。發(fā)現(xiàn)有試劑過期或明顯變質(zhì)時要立即報廢，并將報廢試劑妥善處理。3.2化學(xué)試劑貯存：臨床基因擴(kuò)增實驗室常用化學(xué)試劑均置于避光、陰涼、干燥處保存。實驗中常用到的一些化學(xué)試劑則根據(jù)要求保存于不同環(huán)境(如預(yù)冷乙醇保存于4℃)。PCR試劑貯存于-20℃或以下。3.3化學(xué)試劑使用：臨床基因擴(kuò)增實驗室常用化學(xué)試劑均無毒性或僅有低腐蝕性，故使用時主要應(yīng)注意分類、分區(qū)保存、關(guān)注失效日期和使用后的及時清潔等。3.4化學(xué)試劑由專人負(fù)責(zé)管理，未經(jīng)主任許可不能隨意帶出實驗室。4.化學(xué)試劑配制：4%的NaOH配制1.用天平稱取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。2.200ml量桶取100ml雙蒸水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。3.搖三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序化學(xué)試劑的管理及配制操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-010版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：4.緩緩傾倒入250ml廣口瓶中密封保存?zhèn)溆谩?5%酒精的配制常規(guī)消毒的75%酒精由醫(yī)院藥劑科提供。含氯消毒液的配制1升水加2片含氯消毒片濃度為500mg/L。一般桌面，器具和地面的消毒只要使有效氯達(dá)到500mg/L,即可達(dá)到消毒作用。如需加大消毒力度，則有效氯濃度加大。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室PCR試劑性能質(zhì)檢程序文件編號：PCR-BZCZCX-011版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證每批用于臨床實驗的試劑的質(zhì)量良好。2.適用范圍：各種用于臨床實驗的核酸擴(kuò)增熒光檢測試劑。3.操作人：實驗室負(fù)責(zé)人及工作人員。4.質(zhì)檢步驟：4.1收到試劑后，目測試劑是否處在凍存狀態(tài)。4.2核對試劑品種和數(shù)量，檢查試劑批號。4.3及時將試劑轉(zhuǎn)入－20℃以下冰箱保存。取出陽性、陰性對照，提取液、稀釋液，從傳遞窗傳至Ⅱ區(qū)保存。將上述檢測核對情況在記錄本上登記。4.4最遲在前批次試劑存量尚可維持常規(guī)實驗一周時，按如下要求對新批號試劑進(jìn)行效驗實驗。4.5效驗實驗要求設(shè)置：空白對照、陰性對照、陽性對照各一，陽性標(biāo)準(zhǔn)品梯度（104、105、106、107）。4.6出現(xiàn)如下情況中任何一種的，判斷為試劑不合格，不能用于臨床檢測：a）空白對照和陰性對照出現(xiàn)擴(kuò)增。如擴(kuò)增曲線CT值大于35，需重復(fù)實驗確證試劑污染。b）陽性對照和陽性標(biāo)準(zhǔn)品均未檢出，或陽性對照未檢出而陽性標(biāo)準(zhǔn)品檢出率大幅下降，表示試劑失效或檢測靈敏度大幅下降。4.7陽性對照未檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品檢測正常，提示樣品提取液可能存在問題。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室PCR試劑性能質(zhì)檢程序文件編號：PCR-BZCZCX-011版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：重復(fù)新舊提取液陽性對照實驗，確定提取液失效問題。更換提取液后該批試劑方可使用。4.8空白對照無擴(kuò)增，陰性對照有擴(kuò)增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。單獨用提取液點樣上機(jī)，出現(xiàn)擴(kuò)增，需更換提取液后方可使用該批試劑。4.9陽性對照檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴(kuò)增曲線明顯系統(tǒng)性CT值4.9偏大3個循環(huán)以上。提示陽性標(biāo)準(zhǔn)品存在問題。更換陽性標(biāo)準(zhǔn)品后該批試劑方可投入使用。4.10空白對照、陰性對照無擴(kuò)增，陽性對照正常檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)出的標(biāo)準(zhǔn)曲線之斜率（－2.6～－3.4）、截距（36～44）、相關(guān)性（﹤－0.98）均在使用范圍內(nèi)，表明該批試劑良好，可以投入臨床使用。4.11將實驗結(jié)果歸入記錄。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序樣本核酸提取操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-012版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室樣本預(yù)處理的操作過程。2.范圍：經(jīng)《臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室樣本接收程序》確認(rèn)合格的樣本。3.工作流程：血清、胸腹水、腦脊液標(biāo)本的DNA獲?。?）按待測標(biāo)本數(shù)和定量標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)，取0.5ml離心管做好標(biāo)記；2）取待測樣本血清100ul，胸腹水、腦脊液離心后取沉淀，分別加到1.5ml離心管中；3）分別加入裂解液100ul，裂解液使用前應(yīng)振搖混懸；4）然后分別加入待測標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品50ul，振蕩混懸，室溫靜置10分鐘；12000rpm離心5min，去上清；5）加入150ul洗滌液，振蕩混懸，12000rpm離心5min，去上清；6）加入150ul重復(fù)洗滌液振蕩混，12000rpm離心5min，去上清備用。痰標(biāo)本處理：標(biāo)本加入等量的半胱氨酸液化劑或NaOH液化，室溫振搖25-30分鐘，取0.5ml加入1.5ml離心管中，12000rpm離心10min，吸去上清，沉淀用500ul生理鹽水充分混懸，12000rpm離心10min，吸去上清，沉淀中加入裂解液100uL，振蕩混懸，室溫靜置10分鐘；（標(biāo)準(zhǔn)品無需NaOH液化處理，直接加入裂解液100ul振蕩混勻，室溫靜置10分鐘）。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序樣本核酸提取操作程序文件編號：PCR-BZCZCX-012版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：2）10000rpm離心5min，去上清；加入150ul洗滌液，振蕩混懸,10000rpm離心5min，去上清；加入150uL重復(fù)洗滌，振蕩混懸，10000rpm離心5min，去上清備用。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室一次性離心管和吸嘴的質(zhì)檢程序文件編號：PCR-BZCZCX-013版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證每批用于臨床實驗的離心管和吸嘴的質(zhì)量良好。2.適用范圍：分子實驗室。3.操作人：實驗室負(fù)責(zé)人及實驗人員。4.離心管質(zhì)檢：目測是否管子有破損、畸形、管蓋不嚴(yán)等情況。4.1離心管的PCR抑制物質(zhì)檢:從新購的樣品離心管中，抽取3支，采用已知的中、低2個濃度（105和103IU/ml）的HBVDNA質(zhì)控血清，使用抽取的離心管按程序進(jìn)行檢測，每一濃度雙管重復(fù)，同時使用已知無PCR抑制物的進(jìn)口或無DNase和Rnase的離心管作為對照，然后觀察測定結(jié)果。如果檢測待檢離心管結(jié)果較對照或預(yù)期結(jié)果明顯偏低，如低1--2個數(shù)量級，則證明其有抑制物的存在。4.2離心管的密封性質(zhì)檢方法：抽取3支新購離心管，每管準(zhǔn)確加入一定量如500ul（對1.5ml離心管）或50ul（對0.2ml離心管）水，在離心機(jī)上12000轉(zhuǎn)離心10分鐘，看其是否有破損和漏液情況發(fā)生，然后按核酸提取程序煮沸或金屬浴加熱，觀察其是否有爆蓋或漏液現(xiàn)象，如果有則應(yīng)進(jìn)行更換處理。5.帶濾芯吸頭的質(zhì)檢：5.1對帶濾芯吸頭密封性的質(zhì)檢：首先制備一個含1%~2%甘油及色素（如甲基橙、紅墨水、藍(lán)墨水等）的水溶液，如果吸頭的最大體積為100ul，則將加樣器吸取體積調(diào)至110~120ul，再套上吸頭后吸取上述有色液體。如果吸頭質(zhì)量好，則有色液體不應(yīng)出現(xiàn)在濾芯以上，否則說明濾芯不嚴(yán)。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室一次性離心管和吸嘴的質(zhì)檢程序文件編號：PCR-BZCZCX-013版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：5.2帶濾芯吸頭質(zhì)量的質(zhì)檢：加樣器吸取量設(shè)至擴(kuò)增加樣所需的體積，使用待評價帶濾芯吸頭對一份107陽性模板,來回吸取10次（模擬10份陽性樣本的吸?。?，將最后1次的吸取液加至一含擴(kuò)增反應(yīng)液的管中，之后，換一個新吸頭，連續(xù)吸取10份陰性模板,將最后1次的吸取液加至一含擴(kuò)增反應(yīng)液的管中,按所用試劑方法進(jìn)行擴(kuò)增檢測。強(qiáng)陽性樣本應(yīng)為強(qiáng)陽性，陽性弱或出現(xiàn)陰性說明吸頭可能含有擴(kuò)增抑制物。陰性樣本應(yīng)為陰性，出現(xiàn)陽性則表明吸頭不能有效地防止氣溶膠對加樣器的污染。5.3記錄質(zhì)檢日期,離心管和吸嘴批號。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室HBV-DNA室內(nèi)質(zhì)控程序文件編號：PCR-BZCZCX-014版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：隨時了解并控制實驗室檢測的精密度變化。2.適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光定量檢測實驗室。3.操作人：實驗室工作人員。4.操作步驟：4.1低值定值質(zhì)量控制品4.1.1醫(yī)院自配HBV陽性血清。4.1.2每管200μl。7管/盒。置于Ⅱ區(qū)-20℃冰箱,有效期半年。4.1.3本質(zhì)控適用于利用基因擴(kuò)增技術(shù)檢測HBV-DNA實驗室，進(jìn)行HBV-DNA檢測的質(zhì)量控制，試劑方法評估等。4.1.4質(zhì)控品定值定值標(biāo)準(zhǔn)來源于國家技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)的GBW(E)090031所提供的乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。項目名稱平均數(shù)（X）IU/ml靶值（LOG）標(biāo)準(zhǔn)差（S）變異系數(shù)（CV）X±2S（IU/ml）低值3.63E±0.55.560.264.68％1.10E+05~1.20E+0.64.2質(zhì)控流程：4.2.1工作人員進(jìn)入II區(qū),取出中值質(zhì)控血清,恢復(fù)室溫,低速離心,放置項目標(biāo)本最后位置,同樣本一起操作。操作程序見標(biāo)本DNA流程SOP。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室HBV-DNA室內(nèi)質(zhì)控程序文件編號：PCR-BZCZCX-014版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：4.2.2記錄結(jié)果,每天將結(jié)果登記在質(zhì)控圖中,得出質(zhì)控曲線。4.3.3分析質(zhì)控圖形4.3.3.1如果在X±3s線以外，則為失控，應(yīng)立即報告有關(guān)負(fù)責(zé)人，迅速查找原因。必要時復(fù)測標(biāo)本，然后方可發(fā)出報告，并將失控情況、查找過程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄。4.3.3.2如果在X±2s線以外，或出現(xiàn)連續(xù)5點以上在一側(cè)等規(guī)律變化，均應(yīng)即使向有關(guān)負(fù)責(zé)人反映，并積極查找原因。但當(dāng)天的檢驗結(jié)果一般可以發(fā)出。4.3.3.3通過觀察圖形的規(guī)律性變化進(jìn)行誤差分析，消除誤差來源。曲線漂移：提示有系統(tǒng)誤差，準(zhǔn)確度發(fā)生了一次性的向上或向下改變。這種變化往往是由于一個新的情況引起的。如更換不同批號試劑，啟用新批號的質(zhì)控血清、操作人員的變換等。在找原因時，應(yīng)重點注意“漂移”前后發(fā)生了那些變動的因素。趨勢性變化：向下或向上的趨勢性變化表明檢測的準(zhǔn)確度發(fā)生了漸漸地變化。這種變化往往是由于一個逐漸改變的因素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價的降低等。連續(xù)多點分布在靶值一側(cè)：目前，一般認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測結(jié)果連續(xù)5天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)，則應(yīng)迅速查找原因，爭取盡快使之回復(fù)圍繞在靶值隨機(jī)分布的狀態(tài)。因為按照統(tǒng)計學(xué)原理，由純隨機(jī)誤差造成的這種情況的可能性很小。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室HBV-DNA室內(nèi)質(zhì)控程序文件編號：PCR-BZCZCX-014版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)可能性小于1.5％。因此凡出現(xiàn)連續(xù)5天以上出現(xiàn)在靶值同一側(cè)者均有可能存在非隨機(jī)誤差因素。如結(jié)果與靶值偏離并不太大，不會給臨床使用帶來太大影響時，一般化驗報告可以照常填發(fā)。4.3.3.4其他規(guī)律變化（周期性等）：通過圖形的資料對比進(jìn)行誤差分析，消除誤差來源。每個月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測結(jié)果的X和s與該批測定的X和s進(jìn)行比較。如果X發(fā)生了變化，說明準(zhǔn)確度發(fā)生了變化提示有非隨機(jī)誤差存在。如果當(dāng)月s不同側(cè)表明檢測的精密度發(fā)生了變化。將使用同一批號質(zhì)控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐在月上升，應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，則主要提示常規(guī)工作的精密度下降，應(yīng)重點從操作、管理上找原因。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室檢測結(jié)果報告和審簽管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-015版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：確保結(jié)果的準(zhǔn)確發(fā)放。2.范圍：PCR檢測試驗報告的審核、發(fā)放及管理。3.職責(zé)：經(jīng)相關(guān)培訓(xùn)后獲得上崗資格的工作人員方有權(quán)審核簽發(fā)檢驗報告。4.工作流程：4.1報告的要求：檢測報告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰、客觀。4.2報告的形式:見各檢測項目SOP文件規(guī)定。4.3實時熒光PCR測定時，其檢測數(shù)據(jù)要經(jīng)過分析，避免因非特異性熒光而造成假陽性,根據(jù)質(zhì)控品判斷PCR擴(kuò)增的有效性，只有當(dāng)質(zhì)控品的擴(kuò)增結(jié)果符合有關(guān)項目SOP條件時，才可發(fā)出報告,否則應(yīng)重新測定。4.4檢測項目其結(jié)果報告HBV-DNA以每毫升活力單位（IU／ml）報告，如結(jié)果高于測定方法線性范圍上限，則對樣本稀釋后再測，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)；如結(jié)果低于方法的測定范圍下限，則報告小于測定范圍下限，不能報告為“0”、“陰性”或其它各種形式的結(jié)果。4.5服務(wù)臺工作人員憑“取檢驗報告單憑證領(lǐng)取單”（或發(fā)票）發(fā)放檢驗報告。4.6當(dāng)臨床科室醫(yī)生要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)先確認(rèn)對方身份，核對其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號等情況，方可報告，并明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準(zhǔn)。4.7當(dāng)患者要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)讓患者提供病人檢驗報告單憑證號碼后XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室檢測結(jié)果報告和審簽管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-015版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：方可告知對方其檢測結(jié)果，并需明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準(zhǔn)；不得在無有效證據(jù)的情況下以任何方式提供諸如某人做過某項檢查和/或檢測結(jié)果的信息（包括提示性、暗示性語言）。當(dāng)需郵寄報告時，應(yīng)由患者填寫地址及郵政編碼等，并作記錄。本實驗室暫不提供其它的報告方式。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室試劑、耗材的購買和管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-016版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：規(guī)定試劑購買原則、驗收的程序和試劑的正確貯存。2.范圍：適用于實驗室所購的診斷試劑盒、實驗耗材。3.職責(zé)：3.1本程序由實驗室工作人員一個月統(tǒng)計一次試劑采購訂單，提交給負(fù)責(zé)人，負(fù)責(zé)人審核好后，開始訂貨。3.2本程序的改動，可由任一使用本程序的工作人員提出，經(jīng)論證其合理性后，報經(jīng)科主任批準(zhǔn)簽字后實施。4.工作程序：4.1試劑的購買和管理4.1.1試劑購買原則：試劑的購買須本著“質(zhì)優(yōu)價廉”進(jìn)行，所購基因診斷試劑必須三證齊全（生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品注冊證、經(jīng)營許可證），并能與7500Plus熒光定量PCR檢測儀相配套。4.1.2試劑購買程序：1）試劑廠家的確定：購買時首先考慮中標(biāo)試劑。中標(biāo)廠家無試劑情況下考慮操作方便、質(zhì)量好的廠家，提交西藥庫，由西藥庫決定購買。2）試劑廠商的變更：為保證試劑使用的穩(wěn)定性，原則上一年內(nèi)不變更試劑廠商，如在使用過程中發(fā)現(xiàn)質(zhì)量問題，由室負(fù)責(zé)人向科主任提出申請，交試劑審核小組討論決定。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室試劑、耗材的購買和管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-016版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共2頁受控狀態(tài)：受控號：4.1.3試劑的驗收：供貨商送來試劑后由科專門人員和項目操作人員共同驗收，在廠家的供貨清單上簽字，項目操作人員負(fù)責(zé)試劑質(zhì)量驗收（內(nèi)外包裝），科專門人員核對試劑的數(shù)量和價格，供貨清單交室試劑管理人員保管，試劑驗收后登記。4.1.4試劑貯存：試劑登記后，及時放入試劑貯存區(qū)的冰箱，保存條件按說明書規(guī)定進(jìn)行。4.1.5試劑的質(zhì)檢：按試劑質(zhì)檢SOP進(jìn)行。4.2實驗耗材的購買和管理4.2.2購買：由實驗室負(fù)責(zé)人填寫申請，按需提出所購耗材的品名、規(guī)格、數(shù)量，由科室主管采購人員交院設(shè)備科購買。4.2.3驗收：消耗品購進(jìn)后由科相關(guān)人員驗收。核對數(shù)量、規(guī)格，查驗外包裝是否破損，如發(fā)生破損或其它質(zhì)量問題，給予退回。4.2.4貯存：消耗品按要求存入各區(qū)指定位置。4.3項目具體負(fù)責(zé)人發(fā)現(xiàn)試劑或耗材少于一定的數(shù)量時（不足2周使用時），應(yīng)向室負(fù)責(zé)人提出，以便及時購買；使用過程中發(fā)現(xiàn)試劑有質(zhì)量問題時向室負(fù)責(zé)人提出，由室負(fù)責(zé)人核實后采取措施。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室生物防護(hù)和清潔廢棄物處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-017版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：對各種危險因素采取有效的控制措施，預(yù)防實驗室中存在的污染源對實驗室、實驗人員和環(huán)境的污染。2.范圍：分子實驗室全體人員。3.職責(zé)：所有工作人員必須在工作中嚴(yán)格遵守本程序各項措施規(guī)定。4.工作流程：臨床實驗室工作人員應(yīng)知曉在實驗工作中存在的污染途徑和防護(hù)措施。4.1感染途徑：4.1.1空氣傳播：其他病原體及化學(xué)物的氣溶膠。4.1.2直接接種：工作中偶然的針刺、碎玻璃劃傷直接引起傳染。4.1.3皮膚、粘膜接觸：臨床標(biāo)本中的感染源通過破損皮膚，粘膜接觸造成感染。4.1.4化學(xué)物質(zhì)：溴化乙錠（EB）、焦碳酸二乙酯（DEPC）、丙烯酰胺有致癌性。若處理的擴(kuò)增片段來自潛在的腫瘤基因，應(yīng)考慮采取保護(hù)措施。4.2預(yù)防措施4.2.1來自所有病人的血液、體液、痰等標(biāo)本都被認(rèn)為是具有傳染性。標(biāo)本采集、運送過程中，應(yīng)保持容器完好，無泄漏。完成檢測后及時處理。4.2.2處理標(biāo)本的工作人員都應(yīng)戴上雙層手套，穿防護(hù)服，戴帽子、口罩。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室生物防護(hù)和清潔廢棄物處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-017版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：4.2.3實驗過程中若接觸血液或其它標(biāo)本、毒物等后必須立即徹底清洗。4.2.4在實驗過程中，病人標(biāo)本或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水沖洗。4.2.5實驗過程中在使用針具等銳器時，盡量小心防止受傷。若被銳器刺破時，應(yīng)立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時進(jìn)行預(yù)防補(bǔ)救措施。4.2.6在實驗過程中病人標(biāo)本（血液、體液）外漏時，應(yīng)立即用10％次氯酸鈉消毒，再用75％酒精擦凈消毒。4.2.7實驗完畢離開時，應(yīng)脫下所有該實驗區(qū)個人防護(hù)裝備。4.2.8標(biāo)本處理區(qū)應(yīng)備有急救包,包內(nèi)存有75%酒精,復(fù)合碘、棉簽、創(chuàng)口貼等。5.實驗室的清潔:5.1PCR實驗室人員要明確造成污染的來源有前一次PCR產(chǎn)物、檢測樣本及陽性質(zhì)控物，標(biāo)準(zhǔn)品。PCR實驗室人員要明確造成污染的途徑有空氣，吸液嘴，移液器的氣腔、外表，標(biāo)本處理過程中的開蓋閉蓋，手套，夾取標(biāo)本用的鑷子，標(biāo)本處理的公用設(shè)備如離心機(jī)、樣本架等。5.2離心管在使用前要經(jīng)高壓消毒滅菌。5.3所有滅好菌的物品先放置在試劑準(zhǔn)備區(qū)，在滅菌效期內(nèi)由傳遞窗傳至各區(qū)。5.4工作人員工作結(jié)束后，實驗臺面均應(yīng)用10%次氯酸鈉清潔液的抹布擦拭，XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室生物防護(hù)和清潔廢棄物處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-017版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：再用75%乙醇清潔，最后用清水擦拭。5.5移液器的外表每天用75%乙醇清潔一次，加樣器的氣腔每月用75%乙醇浸洗一次。5.6夾標(biāo)本用的鑷子應(yīng)浸泡在75%乙醇中，使用過的試管架、凈化臺及操作臺面用10%次氯酸鈉擦拭1遍后，再用75%酒精擦拭1遍，然后用紫外燈至少照射60min。5.7已滅菌的離心管在取用時須用鑷子取，不允許用手去拿。5.8各區(qū)實驗結(jié)束后，應(yīng)做好各區(qū)的清潔工作，并將各區(qū)的廢棄物、垃圾帶出實驗區(qū)，打開該區(qū)紫外燈進(jìn)行紫外線消毒60分鐘，作好實驗后處理記錄。5.9每天須對各區(qū)的地面進(jìn)行清潔，各區(qū)地面的清潔抹布須嚴(yán)格分開使用，清潔順序嚴(yán)格按一區(qū)到三區(qū)順序進(jìn)行。5.10污染的處理：實驗中若在操作臺面發(fā)生液體外瀉，應(yīng)立即用浸有10%次氯酸鈉溶液的衛(wèi)生紙覆蓋污染處，半小時后再用軟布浸水擦拭干凈。5.11實驗用過Tip頭、離心管的處理見廢棄物處理程序。5.1210%次氯酸鈉每月新配一次。5.13對使用過的一次性手套，應(yīng)將其反一面后再丟入專用拉圾袋中。5.14對以上所有的生物垃圾在移交給技工時，應(yīng)作好交接記錄，確保焚燒。6.實驗室廢棄物處理:XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室生物防護(hù)和清潔廢棄物處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-017版本號：第2版第0次修改頁碼：第4頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：6.1實驗過程中的廢液缸應(yīng)裝有足量濃度的施爾康消毒液，在實驗完成后將廢液缸中棄置物轉(zhuǎn)入密閉垃圾桶袋中。每天更換廢液缸里面的施爾康消毒液，并保證用量為廢液缸內(nèi)總液量的1/3左右。6.2臨床標(biāo)本，擴(kuò)增后產(chǎn)物及一次性使用物品等實驗材料，實驗完畢密封包裝進(jìn)行焚燒。6.3檢查操作臺面和設(shè)備內(nèi)是否有遺漏的吸頭，試管等。如有，撿起置于施爾康消毒液廢液缸內(nèi)，并立即用1%次氯酸鈉對可能污染區(qū)域擦拭2-3遍，再用75%酒精擦拭1遍，最后用清水擦拭。6.4擴(kuò)增后的反應(yīng)管嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)打開。6.5手套、口罩等廢棄物投入廢物桶，交接給專人處理并做好登記。6.6實驗區(qū)域的所有垃圾袋以黃色為標(biāo)志，各區(qū)域垃圾在實驗區(qū)緩沖間內(nèi)封口，實驗完畢后移出各實驗區(qū)域，在公共走廊內(nèi)移交專人處理，并做好記錄。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室記錄管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-018版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證試驗資料的原始性、真實性、可靠性，便于回顧。2.范圍：檢驗過程產(chǎn)生的數(shù)據(jù)資料，諸如病人信息資料、樣本資料、檢測數(shù)據(jù)、檢驗結(jié)果等。3.職責(zé)：檢測人員對記錄負(fù)責(zé)，室負(fù)責(zé)人對管理措施的落實和監(jiān)督負(fù)責(zé)。4.工作流程：4.1試驗記錄分為兩個部分：4.1.1檢測前的記錄：病人信息資料、樣本資料的書面記錄。4.1.2檢測結(jié)果的電子記錄。4.1.3記錄的種類：PCR標(biāo)本接收記錄、臨床拒收標(biāo)本記錄、PCR檢驗流程記錄、PCR結(jié)果記錄、PCR質(zhì)控記錄、抱怨記錄、室間質(zhì)量評價記錄、試劑和消耗品的質(zhì)檢記錄、應(yīng)急記錄、人員培訓(xùn)記錄。4.2記錄方法：4.2.1接受標(biāo)本記錄：以書面形式記錄病人信息、樣本信息、是否保存，同時對樣本作標(biāo)識，記錄人簽名；檢驗時，將標(biāo)識的樣本、記錄本帶入樣本處理間處理。4.2.2PCR擴(kuò)增檢測記錄：a）記錄文件必須保存在非系統(tǒng)分區(qū)中，如D盤、E盤等。保存路徑要清晰、便捷、易查找。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室記錄管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-018版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：b）文件夾目錄結(jié)構(gòu)要求層次感分明：一整年的實驗結(jié)果均保存在一個年度文件夾里，如“2019年”文件夾；每個年度文件夾又包含12個月文件夾，如“9月”、“10月”，每天的實驗結(jié)果就保存在當(dāng)月文件夾里。c）SDS文件保存時以當(dāng)天日期命名，如2019年9月10日的保存為20190910HBV，20190910XB。d）若某天進(jìn)行了多次實驗，須保存多個SDS文件，命名時在后面以01、02、03等字母標(biāo)識，如2019年9月10日做的兩次實驗，分別保存為20190910HBV01和20190910HBV02，20190910XB01和20190910XB02。e）為了防止儲存實驗結(jié)果的電腦發(fā)生系統(tǒng)崩潰、硬件故障等問題導(dǎo)致實驗結(jié)果丟失、無法查詢等情況，每個月的實驗結(jié)果記錄文件都要用移動存儲設(shè)備（如U盤、移動硬盤等）拷貝備份；如“2019年實驗結(jié)果備份”。4.2.3電子保存的軟件備份要求：a）保存周期：每一個月進(jìn)行一次電子報告的軟件備份；安排在每月的最后一個工作日完成。備份路徑為D盤PCR備份。b）備份注明：備份由分子實驗室人員進(jìn)行。4.3記錄的歸檔：4.3.1PCR標(biāo)本接收記錄、臨床拒收標(biāo)本記錄、PCR檢驗流程記錄、PCR結(jié)果記錄裝訂成冊。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室記錄管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-018版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共3頁受控狀態(tài)：受控號：4.3.2記錄保存期為3年，科室統(tǒng)一保管。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室抱怨和應(yīng)急處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-019版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：為避免因儀器設(shè)備發(fā)生故障和試劑盒發(fā)生質(zhì)量問題而影響到臨床檢測報告的及時性和準(zhǔn)確性，特制定本程序。保證對抱怨的正確處理，提高工作質(zhì)量。2.范圍：來自于患者，臨床醫(yī)護(hù)人員和/或?qū)嶒炇夜ぷ魅藛T針對檢測結(jié)果質(zhì)量、服務(wù)質(zhì)量和/或?qū)嶒炇夜芾淼葐栴}的投訴和/或抱怨。注：本程序適用于檢驗科權(quán)限內(nèi)能處理解決的問題?？剖也荒芡咨平鉀Q的，移交醫(yī)院醫(yī)務(wù)處，遵循醫(yī)務(wù)處處理程序和辦法。3.職責(zé)：3.1實驗室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)抱怨的處理，必要時應(yīng)會同科主任采取更進(jìn)一步的措施。3.2對于外部抱怨，任何一個工作人員不得推卸，須負(fù)責(zé)將抱怨人領(lǐng)到實驗室負(fù)責(zé)人處或科主任處，對電話抱怨須作記錄并及時報告負(fù)責(zé)人。4.工作流程：4.1抱怨的接受：執(zhí)行者在接受抱怨時，應(yīng)記錄抱怨者姓名、地址、聯(lián)系方式、抱怨內(nèi)容（必要時首先穩(wěn)定抱怨者情緒）。4.2抱怨的處理：4.2.1能當(dāng)時處理的抱怨應(yīng)給予及時解決，記錄處理意見及結(jié)果。4.2.2不能當(dāng)即答復(fù)的報怨應(yīng)約定反饋時間，同時為了防止報怨的擴(kuò)大化，根XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室抱怨和應(yīng)急處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-019版本號：第2版第0次修改頁碼：第2頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：據(jù)情況盡快召集有關(guān)人員處理。4.2.3抱怨的處理以抱怨者的滿意為目的，但必須以遵重科學(xué)，遵重事實為原則，在不違背科學(xué)原則，醫(yī)療行為規(guī)范的基礎(chǔ)上，爭取抱怨者最大程度的理解。4.3抱怨處理的方式：4.3.1患者對服務(wù)態(tài)度抱怨的處理方式：a）接到抱怨后，由室負(fù)責(zé)人責(zé)成相關(guān)人員向患者致歉。b）對患者提出的合理要求及時進(jìn)行處理。c）調(diào)查事情原委，根據(jù)調(diào)查結(jié)果對相關(guān)責(zé)任人進(jìn)行處罰。d）記錄抱怨及其處理結(jié)果。4.3.2患者對結(jié)果準(zhǔn)確性抱怨的處理方式a）為患者展示原始實驗數(shù)據(jù)。b）向患者解釋相關(guān)實驗程序和可能臨床情況，幫助患者解除疑慮。c）如確有實驗結(jié)果不符合有效性要求或出現(xiàn)錯誤，則應(yīng)及時糾正錯誤，重新實驗以得到準(zhǔn)確結(jié)果。同時由室負(fù)責(zé)人向患者致歉以爭取得到其諒解，按有關(guān)條例對責(zé)任人進(jìn)行相應(yīng)處罰，并記錄。4.3.3醫(yī)生對檢測結(jié)果和臨床診斷的符合率抱怨的處理方式a）針對醫(yī)生抱怨的檢查項目進(jìn)行從實驗前到實驗后的全程調(diào)查，查找是否存在影響結(jié)果的因素，并形成書面報告。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室抱怨和應(yīng)急處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-019版本號：第2版第0次修改頁碼：第3頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：b）就調(diào)查發(fā)現(xiàn)的問題進(jìn)行針對性解決。c）與醫(yī)生建立定期交流機(jī)制，定期了解臨床使用情況和對臨床作出解釋。4.3.4醫(yī)生對結(jié)果發(fā)放時效性抱怨的解決方式a）嚴(yán)格按承諾時間發(fā)放臨床報告。b）在與醫(yī)生交流會上就報告發(fā)放過程及時間作出解釋，獲取臨床對結(jié)果報告時效性的理解。4.4 抱怨處理程序：a）接到抱怨。b）記錄抱怨。c）提出針對具體抱怨的處理方法。d）將處理方法交室負(fù)責(zé)人審核。e）征求抱怨方對處理方法的意見。f）執(zhí)行解決方案。g）記錄最后的處理結(jié)果。5.應(yīng)急處理：5.1為避免因儀器設(shè)備發(fā)生故障和試劑盒發(fā)生質(zhì)量問題而影響到臨床檢測報告的及時性和準(zhǔn)確性，嚴(yán)格遵循下列程序。5.2工作程序：XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室抱怨和應(yīng)急處理程序文件編號：PCR-BZCZCX-019版本號：第2版第0次修改頁碼：第4頁；共4頁受控狀態(tài)：受控號：5.2.1實驗室負(fù)責(zé)人接到儀器設(shè)備故障的報警后，立即現(xiàn)場確認(rèn)異常情況的性質(zhì)和故障程度并及時排除。5.2.2儀器設(shè)備故障本室不能解決的，應(yīng)及時通知有關(guān)設(shè)備維修人員或供應(yīng)商，具體程序見儀器設(shè)備管理程序。對于發(fā)生故障的儀器設(shè)備，及時維修的同時，采取以下處理辦法。5.2.3有滿足使用要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備。5.2.4可借用其他部門儀器設(shè)備時，核實該設(shè)備的使用狀態(tài)良好后可借用。5.2.5替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時，必須同時滿足實驗室管理措施（特別是防污染）的要求。5.2.6試劑盒質(zhì)量發(fā)生問題，經(jīng)核實后，及時通知供貨商更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)量檢測，合格后方可使用。5.2.7儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問題不能得到解決，預(yù)期將會影響到檢測報告的及時發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它實驗室檢查（該實驗室同樣應(yīng)為獲同類認(rèn)準(zhǔn)的PCR檢測實驗室）；如己影響到報告的及時發(fā)出，應(yīng)向病人或相關(guān)病區(qū)公告，取得病人和醫(yī)生的諒解。5.2.8影響到檢測報告的情況，應(yīng)在應(yīng)急處理登記表作記錄。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室保密制度文件編號：PCR-BZCZCX-020版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共1頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：為了確保實驗室工作的有序開展；保護(hù)病人的隱私權(quán)，防止不必要的醫(yī)患糾紛，特制定此制度。2.本程序的改動程序：本程序的改動，可由任一使用本程序的工作人員提出，經(jīng)論證其合理性后，報經(jīng)科主任批準(zhǔn)簽字后實施。3.適用范圍：本實驗室所有人員應(yīng)熟知并遵守本程序。4.職責(zé)：4.1實驗室所有原始資料包括病人的原始化驗單、實驗原始記錄及總匯表應(yīng)各自歸檔保存于專柜中。所有病人資料和實驗檢測記錄非經(jīng)許可，一般人員不可查詢或借閱，特殊情況時必須在科主任或本室負(fù)責(zé)人同意的情況下方可查詢。4.2當(dāng)臨床科室要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)先確認(rèn)對方身份，核對其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號（或檢驗報告單憑證號碼）情況后，由室負(fù)責(zé)人或其授權(quán)者報告結(jié)果，并明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準(zhǔn)。4.3實驗室所有標(biāo)本建擋保存，放置在-20℃以下冰箱，并建立標(biāo)本擋案，冰箱上鎖，科研所需保留的核酸模板由使用者自行保管，但不得用于其它用途。XXX醫(yī)院XX科分子生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)化操作程序分子實驗室人員實習(xí)、培訓(xùn)和進(jìn)修管理程序文件編號：PCR-BZCZCX-021版本號：第2版第0次修改頁碼：第1頁；共1頁受控狀態(tài)：受控號：1.目的：保證分子實驗室有足夠的技術(shù)力量和發(fā)展?jié)摿Α?.范圍：分子實驗室人員培訓(xùn)。3.職責(zé)：分子實驗室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)督促指導(dǎo)，由實驗室全體工作人員實施。4.工作計劃：4.1實驗室現(xiàn)有上崗證5人，計劃培養(yǎng)2人。4.2待培訓(xùn)人員在分子實驗室負(fù)責(zé)人輔導(dǎo)下，先完成分子生物學(xué)基礎(chǔ)理論、檢驗技術(shù)的理論學(xué)習(xí)。（自學(xué)或有機(jī)會參加繼續(xù)教育項目）4.3新培訓(xùn)的人員需本科或研究生畢業(yè)。4.4教材為《臨床基因擴(kuò)增檢驗技術(shù)》，李金明主編。4.5有理論基礎(chǔ)后，在分子實驗室負(fù)責(zé)人輔導(dǎo)下，參加分子實驗室輪轉(zhuǎn)。4.6嚴(yán)格遵守實驗室管理文件的規(guī)定。4.7嚴(yán)格按分子實驗室SOP規(guī)定正規(guī)操作，不得更改。4.8爭取參加上級部門專業(yè)培訓(xùn)，取得上崗證。4.9經(jīng)過學(xué)習(xí)的人員有責(zé)任指導(dǎo)實習(xí)生的理論