生化實驗血糖的測定專家講座

血糖及血糖水平概念：血糖：指血液中單糖：葡萄糖血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖總維持在恒定水平：3.9~6.7mmol/L生化實驗血糖的測定專家講座第1頁調整血糖水平激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質激素和腎上腺素。血糖水平異常：⑴高血糖及糖尿??；⑵低血糖生化實驗血糖的測定專家講座第2頁臨床：血糖檢測是當前診療糖代謝異常相關疾病主要依據。科研：在代謝疾病研究中，常測定血糖。在一些藥品研究中，也包括血糖測定。測定血糖意義生化實驗血糖的測定專家講座第3頁體液糖測定項目：①血糖濃度測定②口服糖耐量試驗③糖化血紅蛋白試驗④糖化血清白蛋白測定⑤胰島素測定⑥C-肽測定等生化實驗血糖的測定專家講座第4頁測定方法無機化學法：Folin-Wu法有機化學法：鄰甲苯胺法酶法：葡萄糖氧化酶法血糖測定慣用方法生化實驗血糖的測定專家講座第5頁葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋紅色醌式物質過氧化物酶（POD）Trinder反應505nm光吸收法測定相對血糖濃度生化實驗血糖的測定專家講座第6頁分光光度計原理分光光度技術電泳技術層析技術離心技術生物化學四大研究技術：光波粒二象性物質光吸收性分光光度計原理生化實驗血糖的測定專家講座第7頁分光光度計工作原理生化實驗血糖的測定專家講座第8頁朗伯-比爾定律朗伯定律：A=k1L比爾定律：A=k2C朗伯-比爾定律：如同時考慮液層厚度和溶液濃度對吸光度影響，則吸光度與溶質濃度和溶液厚度乘積成正比。A=KLC生化實驗血糖的測定專家講座第9頁朗伯-比爾定律應用A標=KC標LA樣=KC樣L

標準品法測定未知樣品含量C樣=A樣A標×C標生化實驗血糖的測定專家講座第10頁1.接通電源，調整波長。2.比色杯中加入空白及待測樣品，并放入分光光度計中，注意：加入樣品量不超出比色杯體積2/3。3.調模式為“透射比”，對空白對照進行調“0”（開蓋）和調“100”（閉蓋）。4.調模式為“吸光度”，將空白對照調“0”，測定待測樣品吸光度值。分光光度計使用生化實驗血糖的測定專家講座第11頁生化實驗血糖的測定專家講座第12頁生化實驗血糖的測定專家講座第13頁

葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測激素對血糖濃度影響方法生化實驗血糖的測定專家講座第14頁（1）取4支試管，按下表加入試劑:試劑標準管(ml)測定管1(ml)測定管2(ml)空白管(ml)血清樣品–0.020.02–葡萄糖標準液0.02–––蒸餾水–––0.02酶酚混合試劑3.003.003.003.00試驗步驟：充分混勻，37℃水浴中保溫20min；冷卻至室溫后，505nm處比色比色方法：以空白管調零，讀取標準管及測定管光密度值。生化實驗血糖的測定專家講座第15頁（2）計算：依據朗伯-比爾定律：A=KLC標準管葡萄糖濃度：5mmol/L

測定管葡萄糖含量（mmol/L）＝測定管光密度

標準管光密度×5生化實驗血糖的測定專家講座第16頁正確使用比色器皿：手拿比色皿毛面；比色液應占比色皿2/3。血糖測定應在取血后2小時內完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液普通現用現配。

注意事項生化實驗血糖的測定專家講座第17頁補充試驗測2-3名同學早餐后和空腹血糖水平，并比較二者之間區(qū)分。使用怡成JPS-5型血糖儀。生化實驗血糖的測定專家講座第18頁小結1、葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法測定血糖原理。2、分光光度計正確使用。3、試驗操作中存在問題。生化實驗血糖的測定專家講座第19頁其它慣用血糖測定方法介紹葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法生化實驗血糖的測定專家講座第20頁原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使Cu2+還原成Cu+，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍色鉬藍。經過比色法測定藍色化合物，計算出血糖含量。評價穩(wěn)定、準確、但對葡萄糖無特異性，受血中非糖還原物質影響?？崭拐Ｑ菂⒖贾?/p>

4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dLFolin-Wu法生化實驗血糖的測定專家講座第21頁其它慣用血糖測定方法介紹葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法生化實驗血糖的測定專家講座第22頁原理

葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰-甲苯胺縮合產生藍綠色席弗(Schiff)堿，顏色深淺與葡萄糖含量成正比，可經過比色法測得血糖含量。評價

結果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性。空腹正常血糖參考值

3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL鄰-甲苯胺法生化實驗血糖的測定專家講座第23頁葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應條件溫和，能反應血中葡萄糖真實含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應用與臨床。Folin-Wu法：該法對葡萄糖無特異性，一切還原物質均可產生一樣反應。雖血液中葡萄糖為主要還原物質，但仍存在其它非糖還原物質，故該法其參考值較其它方法略高。鄰-甲苯胺法：該法包括強酸、加熱等反應條件，不便于大規(guī)模檢測，且使用試劑含有毒性，臨床和科研上已極少采取。生化實驗血糖的測定專家講座第24頁思索題1、為何不一樣檢測方法所提供空腹正常血糖參考值存在差異？葡萄糖氧化酶法：3.9~6.1mmol/L