中藥指紋圖譜課件

第五章中藥指紋圖譜

FingerprintsofChineseMateriaMedica2024/7/2415-中藥指紋圖譜同一個(gè)成藥，療效一致嗎？中藥材不同品種、產(chǎn)地、加工：不同廠家：不同工藝：不同輔料：2024/7/2425-中藥指紋圖譜2024/7/2435-中藥指紋圖譜2024/7/2445-中藥指紋圖譜含量一致，療效一致？不同廠家銀杏提取物的色譜指紋圖譜2024/7/2455-中藥指紋圖譜Rb1+Re+Rg1:(A)0.94%;(B)0.52%;(C)0.24%;(D)0.03%DAContent:-Rb10.03%;-Re0%;-Rg10%Total:0.03%Content:-Rb10.5%;-Re0.16%;-Rg10.28%Total:0.94%有效成分含量懸殊的人參

GreatdisparityamongindividualGinsengroots5-中藥指紋圖譜白芷原藥材與硫熏后的藥材質(zhì)量比較

SeriouslossofmajorbioactivecomponentsinBaizhibysulfur-fumigationProcess

AngelicaeFormosanaeRadix(白芷)A:Typicalsampleof‘BaiZhi’B:Sulfurfumedsampleof‘Baizhi’(currentpopularpractice)Thesulfur-fumigatedsampleshowedthemajorcoumarincontentshavebeendestroyedseriously(lost60%-80%).ImporatorinIsoimporatorin

11

Oxypeucedanin

1013

cnidilin12791234568

ABAB2024/7/2475-中藥指紋圖譜SharpcontrastofcrudedrugandslicesfordecoctionofPaeoniaeRadix(白芍)withdifferentcontentsofactiveglycosidesrespectively.有害的飲片加工–硫熏干燥的白芍飲片活性成分大減

Active

ingredientsdeclinedBaishaoslicesfordecoctioncomparedwiththenaturaldriedcrudedrugPaeoniflorin-sulphitepaeoniflorinB-07-3B-07-14B-07-3B-07-142024/7/2485-中藥指紋圖譜質(zhì)量相差懸殊的‘連翹’藥材

Greatdisparityofingredientsindifferent‘Lianqiao’crudedrugs青翹→老翹→無(wú)籽老翹所含有效成分遞減ForsythiasideAForsythin123ⅠⅡⅢ青翹ImmatureLianqiao老翹matureLianqiao老翹（無(wú)種子）MatureLianqiao（withoutseeds)2024/7/2495-中藥指紋圖譜2010版藥典丹參提取物指紋圖譜原兒茶醛迷迭香酸丹酚酸B2024/7/24105-中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜的含義（掌握）

中藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示該中藥特征的共有峰的圖譜。2024/7/24115-中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜的特性（掌握）穩(wěn)定性（重現(xiàn)性）整體性（模糊性）特征性在規(guī)定的方法與條件下，不同的操作者和不同的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能重復(fù)能反映中藥有效部位所含大部分成分的種類，或指標(biāo)成分的全部能特征地區(qū)分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣2024/7/24125-中藥指紋圖譜指紋圖譜研究的主要目的對(duì)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充和提高?？刂圃?、中間體、成品的一致性，控制工藝，減少批間差異。2024/7/24135-中藥指紋圖譜相同處方，不同工藝，療效？2024/7/24145-中藥指紋圖譜指紋圖譜中應(yīng)包含的信息對(duì)于中藥材和中藥飲片：種的共性，用藥部位的共性，產(chǎn)地的個(gè)性，采收期、炮制方法的個(gè)性信息。對(duì)于半成品和中藥制劑：原藥材（甚至輔料）的信息；工藝信息等。藥效信息：藥效信息。2024/7/24155-中藥指紋圖譜二、指紋圖譜研究手段色譜技術(shù)光譜技術(shù)UV

IR波譜技術(shù)MSNMRX-射線衍射法分子生物學(xué)技術(shù)TLCHPLC,LC/MSGC,GC/MSHPCE,CE/MS色譜指紋圖譜2024/7/24165-中藥指紋圖譜薄層色譜薄層色譜ThinLayerChromatography(TLC)●可在同板同時(shí)分析多達(dá)18個(gè)樣品，時(shí)效高●所用的是正相展開(kāi)劑，其組成變化靈活，可適應(yīng)多種成分的分離●離線操作，即可直觀比較圖譜，又可掃描得到輪廓圖和處理數(shù)據(jù)●占機(jī)時(shí)間短●具有色彩參數(shù)，可獲得色彩豐富的色譜圖像，直觀性強(qiáng)；同時(shí)輔以功能團(tuán)顯色劑還可提示成分的類別，提高鑒別的專屬性?！裾咕嗑窒拊?0cm~20cm

，‘柱效’相對(duì)較低，對(duì)復(fù)雜組分不提高分離度則難以提取指紋特征的藥材受到限制?！耖_(kāi)放系統(tǒng)，對(duì)環(huán)境溫度、相對(duì)濕度要求較高5-中藥指紋圖譜TLC舉例：區(qū)分不同品種2024/7/24185-中藥指紋圖譜TLC舉例：監(jiān)控工藝2024/7/24195-中藥指紋圖譜高效液相色譜反相高效液相色譜(RP-HPLC)ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography●適用范圍廣●分離性能好●分析速度快●流動(dòng)相選擇范圍寬●靈敏度高●色譜柱可多次重復(fù)使用●流出組分可以收集●采用多種檢測(cè)器，可同時(shí)獲取保留值信息和化合物的光譜、質(zhì)譜信息

對(duì)較為復(fù)雜的色譜實(shí)驗(yàn)條件要求比較苛刻，由此帶來(lái)不同實(shí)驗(yàn)室之間重現(xiàn)性的難度增大5-中藥指紋圖譜2024/7/24215-中藥指紋圖譜IIIIII訶子小訶子大訶子絨毛訶子訶子指紋圖譜2024/7/24225-中藥指紋圖譜GCHPCE氣相色譜GasChromatography(GC)●分離效能高●分析速度快●適用于植物的揮發(fā)油成分及其它易揮發(fā)性成分或可轉(zhuǎn)化為可揮發(fā)的成分測(cè)定●可提供保留值信息，與質(zhì)譜聯(lián)用，還可提供更豐富的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息

分辨率高，得到的色譜組份非常復(fù)雜，尤其是含揮發(fā)油藥材，單萜類成分組成很不穩(wěn)定，樣品間差異可能很大，處理數(shù)據(jù)和判別相似度時(shí)一定程度的取舍毛細(xì)管電泳CapillaryElectrophoresis●分離效能高●分析速度快●高分辨率●可與紫外、熒光、電化學(xué)、質(zhì)譜、拉曼光譜等聯(lián)用，可提供更豐富的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息5-中藥指紋圖譜肉桂油的氣相色譜指紋圖譜2024/7/24245-中藥指紋圖譜2024/7/24255-中藥指紋圖譜2024/7/24265-中藥指紋圖譜獨(dú)活GC指紋圖譜羌活GC指紋圖譜2024/7/24275-中藥指紋圖譜HPCE指紋圖譜2024/7/24285-中藥指紋圖譜高效液相色譜紅外光譜(IR)InfraredSpectra●幾乎所有的物質(zhì)都有特征的紅外光譜?！耠m然植物中藥提取物還是一個(gè)混合物，但是由于不同物質(zhì)的紅外光譜具有加合性，因此，植物中藥提取物的紅外光譜能反映出所有成分的綜合信息因而具有全息光譜的特點(diǎn)。操作簡(jiǎn)便（不需要復(fù)雜的提取儀器）、快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、溶劑低毒、重復(fù)性高、實(shí)用性強(qiáng)。5-中藥指紋圖譜紅外光譜圖中國(guó)藥典規(guī)定：小薊在開(kāi)花時(shí)采。根據(jù)1384cm-1處吸收峰的有無(wú)，可以鑒別其采集時(shí)間是否正確。小薊丁酮提取物的紅外指紋圖譜2024/7/24305-中藥指紋圖譜三、指紋圖譜構(gòu)建程序中藥指紋圖譜供試品溶液10批以上中藥圖譜信息固定產(chǎn)地、采收期和加工炮制的中藥中藥未知檢品預(yù)處理不同產(chǎn)地、采收期和加工炮制的中藥評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)藥效學(xué)試驗(yàn)代表性均一性選擇測(cè)試條件方法建立考察測(cè)定圖譜參數(shù)圖譜分析相關(guān)性圖譜評(píng)價(jià)圖譜測(cè)試、相似度評(píng)價(jià)方法檢驗(yàn)2024/7/24315-中藥指紋圖譜一、樣品收集最關(guān)鍵的步驟真實(shí)性代表性10批以上原藥材：不同產(chǎn)地、不同采收季節(jié)等2024/7/24325-中藥指紋圖譜Referencefingerprint2024/7/24335-中藥指紋圖譜二、供試品溶液制備原則1.確保中藥中的主要化學(xué)成分或有效成分在圖譜中得以體現(xiàn)2.所含成分的理化性質(zhì)和檢測(cè)方法2024/7/24345-中藥指紋圖譜二、供試品溶液制備1.原藥材、飲片供試品溶液的制備盡可能與生產(chǎn)工藝的提取溶劑接近或一致定量操作進(jìn)行2024/7/24355-中藥指紋圖譜二、供試品溶液制備2.半成品/中間體供試品溶液的制備參考制劑和產(chǎn)品制備工藝2024/7/24365-中藥指紋圖譜二、供試品溶液制備2.中藥制劑供試品溶液的制備直接使用、稀釋或溶劑提取的方式2024/7/24375-中藥指紋圖譜三、對(duì)照品（參照物）溶液制備1.參照物的選擇道地藥材/飲片半成品制劑主要活性成分或指標(biāo)成分內(nèi)標(biāo)物

2.合適溶劑

2024/7/24385-中藥指紋圖譜四、指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究原則：專屬性、整體性、重現(xiàn)性試驗(yàn)方法試驗(yàn)條件2024/7/24395-中藥指紋圖譜?

液相色譜

●

色譜柱：比較試驗(yàn)加以選擇2024/7/24405-中藥指紋圖譜流動(dòng)相1流動(dòng)相2流動(dòng)相3流動(dòng)相：至少用三種不同組成比較2024/7/24415-中藥指紋圖譜適宜的柱溫和檢測(cè)波長(zhǎng)15202530352032102362543652024/7/24425-中藥指紋圖譜五、方法學(xué)驗(yàn)證1.穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液的穩(wěn)定性2024/7/24435-中藥指紋圖譜表3川芎指紋圖譜穩(wěn)定性試驗(yàn)相似度計(jì)算結(jié)果（n=5）S1S2S3S4S5對(duì)照指紋圖譜S11.0000.9970.9950.9950.9970.998S20.9971.0000.9980.9970.9960.999S30.9950.9981.0000.9980.9910.999S40.9950.9970.9981.0000.9900.999S50.9970.9960.9910.9901.0000.994對(duì)照指紋圖譜0.9980.9990.9990.9990.9941.0002024/7/24445-中藥指紋圖譜五、方法學(xué)驗(yàn)證3.重復(fù)性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性n=5

峰面積比值RSD不大于3％保留時(shí)間：平均相對(duì)保留時(shí)間±1min±±2024/7/24455-中藥指紋圖譜注意事項(xiàng)HPLC和GC指紋圖譜：記錄時(shí)間一般為1小時(shí)；TLC指紋圖譜：須提供從原點(diǎn)至溶劑前沿的圖譜；光譜方法制定指紋圖譜：必須按各種光譜的相應(yīng)規(guī)定提供全譜。對(duì)于化學(xué)成分類型復(fù)雜品種，必要時(shí)可建立多張指紋圖譜。2024/7/24465-中藥指紋圖譜四、指紋圖譜分析步驟標(biāo)定共有指紋峰，確定參照峰非共有峰總面積不得大于總峰面積的10％計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、峰面積比給出標(biāo)準(zhǔn)（對(duì)照）指紋圖譜及數(shù)據(jù)2024/7/24475-中藥指紋圖譜五、指紋圖譜的評(píng)價(jià)要求“準(zhǔn)確的辨認(rèn)”而不是“精密的測(cè)量”；比較供試品與對(duì)照品的色譜指紋圖譜要求“相似”而不是“相同”。評(píng)價(jià)色譜比較的結(jié)果，是根據(jù)其模糊屬性，著眼于宏觀的規(guī)律性的特征分析，即著重辨認(rèn)完整色譜的“圖貌”，而不是求索細(xì)枝末節(jié)。2024/7/24485-中藥指紋圖譜

指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)直觀分析比較：看一看量化數(shù)據(jù)比較：算一算（重疊率，相似率等）計(jì)算機(jī)輔助相似度評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比2024/7/24495-中藥指紋圖譜重疊率和相似