GB∕T 39104.2-2020 紡織品 抗真菌性能的測(cè)定 第2部分：平皿計(jì)數(shù)法

紡織品抗真菌性能的測(cè)定第2部分：平皿計(jì)數(shù)法Textiles—Determinationofantifung國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I●刪除了ISO105-F02和ISO7218;●增加引用了GB/T20944.2—2007(見第2章);Ⅱ1GB/T39104的本部分規(guī)定了采用平皿計(jì)數(shù)GB/T20944.2—2007紡織品抗菌性能的評(píng)價(jià)第2部分：吸收法237.23槳式攪拌器(三角型):速度為6擊/s～8擊/s,具有相應(yīng)的一次性容器。7.25冰箱：溫度能保持在2℃~8℃,允差為±2℃。7.30水浴鍋：一個(gè)溫度可保持(46±2)℃,另一個(gè)溫度可保持70℃~90℃。鍋在121℃條件下滅菌20min,形成50mg/L的含陰離子表面活性劑的無(wú)菌水。使用按以下步驟制備的培養(yǎng)基。經(jīng)驗(yàn)證后可用商業(yè)培養(yǎng)基代替。對(duì)于制備后不立即使用的培養(yǎng)基，應(yīng)在5℃~10℃環(huán)境中儲(chǔ)存，保質(zhì)期1個(gè)月。8.4.1沙氏葡萄糖肉湯(SDB)滅菌后pH8.4.2馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)滅菌后pH5.6±0.24滅菌后pH8.4.4.1將10mL完全溶解并預(yù)熱后的PDA(8.4.2)倒入滅菌后的試管中。8.4.5中和液SCDLP培養(yǎng)基吐溫8030g滅菌后pH7.2±0.2如果不能充分中和，可調(diào)節(jié)吐溫80或卵磷脂的用量，或加入其他中和劑。商業(yè)中和液經(jīng)試驗(yàn)與9.4每次對(duì)不同類型的真菌進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，使用經(jīng)火焰滅菌后的鉑接種環(huán)(7.4)或L型鉑接種鉤9.5將傳代培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基在(25±2)℃條件下的培養(yǎng)箱(7.6)中放置至少8d,并確認(rèn)在5℃~10℃9.6在3個(gè)月內(nèi)，將傳代培養(yǎng)的真菌轉(zhuǎn)移到新斜面培養(yǎng)基中，以便進(jìn)一步培養(yǎng)和保存。每3個(gè)月傳代一次。傳代培養(yǎng)的真菌傳代次數(shù)最多應(yīng)不超過(guò)5次。不要使用超過(guò)3個(gè)月的真菌做進(jìn)一步傳代培養(yǎng)。5圖1斜面培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)示意圖10孢子懸液孢子懸液的制備和調(diào)節(jié)過(guò)程見圖2。圖2孢子懸液的調(diào)節(jié)步驟10.2在培養(yǎng)基中懸浮孢子10.2.1用短巴斯德吸管(7.10)或等效裝置吸取0.5mL含陰離子表面活性劑的無(wú)菌水(8.3)(步驟1)。10.2.2分5次將其分散到PDA瓊脂平板中心的孢子中，緩慢清洗表面(步驟2)。10.3從培養(yǎng)基中收集和分散孢子懸液10.3.1用短巴斯德吸管(7.10)或類似裝置吸取10.2中孢子懸液。610.3.3吸吹100次或用振蕩器(7.22)攪拌3次共20s,或用低超聲波清洗5min,使孢子充分分散。10.5.3在10.5.2中加入5mL含陰離子表面活性劑的無(wú)菌水(8.3)。10.5.4充分吸吹使孢子分散或使用振蕩器(7.22)攪拌3次共20s,或用低超聲波清洗約5min,使孢子充分?jǐn)U散(步驟5)。10.6.2確保孢子數(shù)量為1×10?CFU/mL～3×10?CFU/mL,且90%以上為無(wú)菌絲單孢子。至1×10?CFU/mL～3×10?CFU/mL,并重新檢查孢子數(shù)量。10.7.1對(duì)于吸收法，用含5%SDB培養(yǎng)基的陰離子表面活性劑溶液將孢子懸液濃度調(diào)至1×10510.7.2對(duì)于轉(zhuǎn)移法，僅在含陰離子表面活性劑的無(wú)菌水(8.3)中制備接種液(不需要5%的SDB)。10.7.4在3℃~4℃條件下冷藏孢子懸液，并在4h內(nèi)使用。11.2.4中給出了用陰離子表面活性劑稀釋稀釋度為10-2~10-3的計(jì)數(shù)示例。7從樣品上裁取代表性試樣，并裁剪為合適尺寸，稱取(0.40±0.05)g作為1個(gè)試樣。分別取6個(gè)對(duì)照樣和6個(gè)試樣。d)將瓶蓋和裝有試樣的螺口玻璃瓶(7.7)放入高壓滅菌鍋(7.3),于121℃(103kPa)滅菌11.1.2.4.2分別準(zhǔn)確移取0.2mL10.7中制備的1×10?CFU/mL8911.2.3培養(yǎng)48h后洗脫對(duì)于吸收法，在培養(yǎng)后的各小瓶中分別加入20mLSCDLP培養(yǎng)基，蓋緊瓶蓋，按11.2.1洗脫。對(duì)于轉(zhuǎn)移法，培養(yǎng)結(jié)束后，將各試樣裝入裝有20mLSCDLP培養(yǎng)基的無(wú)菌袋或無(wú)菌螺口玻璃小11.2.4平皿計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)11.2.4.1.1制備11.2.1或11.2.3懸液作為稀釋度為10°的稀釋懸液。11.2.4.1.2用移液管(7.9)移取1mL11.2.1或11.2.3洗脫液，將其加入裝有(9.0±0.1)mL含陰離子表面活性劑的無(wú)菌水(8.3)的試管中并混勻，作為稀釋度為10-1的稀釋懸液。11.2.4.1.3依次重復(fù)以上步驟，分別制備稀釋度為10°和10-1的稀釋系列用于“0”接觸時(shí)間和稀釋度為10°至10-?的稀釋系列用于培養(yǎng)48h后測(cè)試。在直徑為90mm裝有SDA(8.4.3)的培養(yǎng)皿(7.2)中計(jì)數(shù)。11.2.4.2.1在SDA培養(yǎng)基表面進(jìn)行計(jì)數(shù)。用塑料或熱滅菌移液管將0.1mL洗脫液和0.1mL稀釋系列擴(kuò)散到SDA培養(yǎng)基表面(每個(gè)培養(yǎng)皿單獨(dú)計(jì)數(shù))。11.2.4.2.2在SDA培養(yǎng)基內(nèi)部計(jì)數(shù)。分別用新的移液管從稀釋系列中各取1mL分別注入2個(gè)培養(yǎng)皿(7.2)中。用水浴鍋(7.30)將約15mLSDA加熱到45℃~46℃,并加入培養(yǎng)皿中混勻。在室溫中靜置使之凝固。11.2.4.2.3將培養(yǎng)皿倒置，并在(28±2)℃條件下培養(yǎng)24h～48h,觀察真菌菌落生長(zhǎng)。11.2.4.3.1培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)出現(xiàn)1CFU～300CFU個(gè)菌落的稀釋系列培養(yǎng)皿(7.2)上的菌落數(shù)。11.2.4.3.2按式(1)計(jì)算液體中的真菌濃度：N——真菌濃度，單位為個(gè)菌落數(shù)每毫升(CFU/mL);ZC———兩個(gè)連續(xù)稀釋度培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)之和，至少有一個(gè)不小于5CFU;當(dāng)所有培養(yǎng)皿中真菌濃度均未達(dá)到5CFU時(shí)，試驗(yàn)無(wú)效。第二個(gè)稀釋度(10-3):14CFUA.1總則表A.1真菌菌株由世界菌種保藏聯(lián)合會(huì)(WFCC)成員提供。表A.1試驗(yàn)用真菌菌株菌株類型菌株編號(hào)菌株保藏機(jī)構(gòu)美國(guó)模式培養(yǎng)物研究所(美國(guó))巴斯德研究所(法國(guó))德國(guó)培養(yǎng)物及細(xì)胞保藏聯(lián)盟(德國(guó))國(guó)家技術(shù)與評(píng)估研究所，生物資源中心(日本)Evaluation,Biologic