血液及血液成分的制備

關(guān)于血液及血液成分的制備㈠血液常識(shí)－血液組成正常人血液容量與體重密切相關(guān)，一般為體重的8-9%，其中血漿占55-60%；血細(xì)胞占40-45%。血漿中絕大多數(shù)為水分，占91-92%，其中固體成分只占8-9%；固體成分中，主要是蛋白質(zhì)，如白蛋白、球蛋白和各種凝血因子，其他為少量無機(jī)鹽類和有機(jī)物質(zhì)。血細(xì)胞則包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。一·血液及血液制備的概述第2頁,共96頁，星期六，2024年，5月第3頁,共96頁，星期六，2024年，5月全血占體重8％50kg：4000ml血漿55-60%血細(xì)胞40－45％第4頁,共96頁，星期六，2024年，5月

㈡血液成分制備的概述將采出來的全血，用物理方法分離成體積小、純度高、臨床療效好、不良反應(yīng)少的單一血液成分的技術(shù)稱為血液成分制備。如紅細(xì)胞、血小板、血漿等的血液成分的制備。

第5頁,共96頁，星期六，2024年，5月狹義的血液成分制備

血細(xì)胞成分、新鮮冰凍血漿、冷沉淀等廣義的血液成分制備

血漿衍生物（plasmaderivatives)血漿蛋白制品或血液制品白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子濃縮物等第6頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢成分輸血是現(xiàn)代輸血醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要里程碑第7頁,共96頁，星期六，2024年，5月二、全血的制備和保存㈠全血制備全血：將一定量的血液采集到含有保養(yǎng)液的采血袋所制成的血液制劑。即包括血細(xì)胞和血漿的所有成分。國(guó)際上一般以450毫升全血為1單位，

★我國(guó)則以200毫升為1單位第8頁,共96頁，星期六，2024年，5月全血采集采集前采集中采集后場(chǎng)所工作人員采血器材獻(xiàn)血員靜脈選擇消毒穿刺采集采集結(jié)束注意事項(xiàng)致謝

留標(biāo)本標(biāo)識(shí)熱合血液保存標(biāo)本處理及保存獻(xiàn)血現(xiàn)場(chǎng)整理第9頁,共96頁，星期六，2024年，5月

穿刺部位的選擇應(yīng)選擇無損傷、炎癥、皮疹、皮癬、疤痕的皮膚區(qū)域?yàn)榇┐滩课弧Ｉ现獠壳逦梢?、粗大、充盈飽滿、彈性好、較固定、不易滑動(dòng)的靜脈；

☆常選擇的靜脈主要有肘正中靜脈、貴要靜脈等；第10頁,共96頁，星期六，2024年，5月穿刺部位消毒用無菌棉拭蘸取適量使用濃度消毒劑，以穿刺點(diǎn)為中心，自內(nèi)向外螺旋式旋轉(zhuǎn)涂拭，消毒面積不小于6cm×8cm。作用1～3min。宜消毒2～3遍。不應(yīng)觸摸已消毒的皮膚，不應(yīng)靠近已消毒的皮膚講話。第11頁,共96頁，星期六，2024年，5月熱合⑴分段熱合血袋導(dǎo)管，以供交叉配血、血型復(fù)查和血液標(biāo)本保存使用。血袋應(yīng)保留注滿全血的導(dǎo)管至少20cm。⑵在熱合過程中不應(yīng)用力牽拉或扭轉(zhuǎn)導(dǎo)管，待焊極松開1～2秒后方可取出已封口的導(dǎo)⑶應(yīng)檢查熱合部位，如有滲漏，則重新熱合，并評(píng)估對(duì)血液無菌性的影響。⑷熱合分離針頭，將其放置在利器盒內(nèi)。第12頁,共96頁，星期六，2024年，5月

獻(xiàn)血后注意事項(xiàng)的告知

1應(yīng)當(dāng)印制獻(xiàn)血后注意事項(xiàng)，并將其發(fā)給每位獻(xiàn)血者。2獻(xiàn)血后注意事項(xiàng)主要有：

1）穿刺點(diǎn)上的敷料應(yīng)保留至少4小時(shí)；

2）多補(bǔ)充水分，食用易消化的食物和水果，避免飲酒，保證充足的睡眠；

3）獻(xiàn)血后24小時(shí)內(nèi)不劇烈運(yùn)動(dòng)、高空作業(yè)和過度疲勞；

4）工作人員的聯(lián)系方式，如果存在獻(xiàn)血前沒有如實(shí)告知的可能影響血液安全的高危行為，或者獻(xiàn)血后感覺明顯不適或異常，請(qǐng)其及時(shí)聯(lián)系工作人員。第13頁,共96頁，星期六，2024年，5月血液保存全血采集后應(yīng)盡快在合適的溫度下保存血站內(nèi)采血血液應(yīng)及時(shí)儲(chǔ)存至4±2℃在采血車或采血屋，采出的血液要按一定條件進(jìn)行儲(chǔ)存和運(yùn)輸。一般情況下，在采血后2小時(shí)內(nèi)，應(yīng)將血液快速冷卻到22±2℃，并在此條件運(yùn)輸。庫存血發(fā)往臨床用血等處。溫度應(yīng)在2~10℃最長(zhǎng)運(yùn)輸時(shí)間不應(yīng)超過24小時(shí)第14頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡全血的保存需解決的問題

血液凝固

紅細(xì)胞溶血放氧能力下降抗凝劑紅細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)代謝抗溶血?jiǎng)└纳品叛醣４嫒萜鞯?5頁,共96頁，星期六，2024年，5月⑴血液抗凝劑

枸櫞酸鈉

肝素EDTA·2Na原理Ca抗凝血酶ⅢCa應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血液標(biāo)本的抗凝及外科體外循環(huán)手術(shù)的抗凝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血液標(biāo)本的抗凝全血及血液成分保存的抗凝劑第16頁,共96頁，星期六，2024年，5月葡萄糖的在血液中濃度應(yīng)為0.5%~l%，以0.5%為宜

葡萄糖用于維持紅細(xì)胞代謝，氧化功能，延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存時(shí)間。枸櫞酸可防止高壓滅菌葡萄糖的氧化反應(yīng)⑵提供紅細(xì)胞的能量代謝葡萄糖

枸櫞酸+

枸櫞酸鈉+

葡萄糖第17頁,共96頁，星期六，2024年，5月提高ATP水平和活性的另一辦法就是在保存液中加入少量腺嘌呤，可以促進(jìn)ATP的生物合成，有利于紅細(xì)胞活性的維持。腺嘌呤磷酸腺苷（AMP）磷酸化ATP⑶提供紅細(xì)胞的能量代謝--腺嘌呤第18頁,共96頁，星期六，2024年，5月目前國(guó)際上使用較多的是甘露醇，它的用量很小，一般在1％以下。

蔗糖山梨醇甘露醇具有緩解紅細(xì)胞溶血的功能和加固細(xì)胞膜的作用，而不影響紅細(xì)胞代謝⑷抗溶血?jiǎng)┑?9頁,共96頁，星期六，2024年，5月血液保存液

ACD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸）pH5.0321天CPD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽）pH5.6321天CPDA保養(yǎng)液(枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽-腺嘌呤)pH5.6335天加入磷酸鹽加入腺嘌呤可提高PH使2,3-DPG下降速度減慢可以促進(jìn)ATP的合成，利于紅細(xì)胞活性的維持第20頁,共96頁，星期六，2024年，5月表1各種血液保存液配方成分第21頁,共96頁，星期六，2024年，5月全血保存溫度控制在4℃±2℃保存液CPDCPDA-11.血小板4℃保存24小時(shí)喪失50%活性,保存48小時(shí)更為顯著，72小時(shí)雖形態(tài)正常但已失去止血功能;2.中性粒細(xì)胞4℃保存4--8小時(shí)喪失大部分功能,24小時(shí)喪失全部功能;3.Ⅷ因子4℃保存24小時(shí)活性喪失50%。因子Ⅴ保存3天喪失活性可達(dá)50%

全血并不全，因此國(guó)內(nèi)外把全血作為制備各種血液成分的原料。⒉全血的保存特點(diǎn)第22頁,共96頁，星期六，2024年，5月三、血液成分的分離制備㈠原理

血液成分制備的原則是采用手工或血細(xì)胞分離機(jī)方法將全血中的各種血液成分制備成體積小，濃度高，純度好的統(tǒng)一規(guī)格的有效治療成分。第23頁,共96頁，星期六，2024年，5月

人體血液經(jīng)過抗凝處理后稱為全血，全血離心后主要分為三層，自上而下依次為血漿層、白膜層和紅細(xì)胞層。血漿層主要包含血漿、水、蛋白質(zhì)、鹽類和各種離子等；白膜層主要包括富含血小板區(qū)、富含淋巴細(xì)胞區(qū)、富含單核細(xì)胞區(qū)和富含粒細(xì)胞區(qū)，這些有形細(xì)胞比重接近，因此聚集在白膜層；紅細(xì)胞層可簡(jiǎn)單分為年輕紅細(xì)胞和正常紅細(xì)胞，由于二者處于紅細(xì)胞的不同生長(zhǎng)時(shí)期，因此比重略有差別。

第24頁,共96頁，星期六，2024年，5月

根據(jù)全血離心后分層的原理，利用各種血液成分相對(duì)密度、體積等不同，通過離心、過濾的方法可以將各層中不同的血液成分分離、制備成成分血，這樣就可以合理利用血液資源，滿足患者對(duì)不同成分血的需求，提高治療效果。第25頁,共96頁，星期六，2024年，5月成分相對(duì)密度紅細(xì)胞1.090~1.111粒細(xì)胞1.080~1.095淋巴細(xì)胞1.050~1.078血小板1.030~1.060血漿1.025~1.030第26頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡手工法制備

手工法制備血液成分主要是用單袋或多聯(lián)袋采集血液，置于大容量冷凍離心機(jī)內(nèi)離心，在無菌條件下進(jìn)行分漿，獲得不同的成分。

第27頁,共96頁，星期六，2024年，5月

不同的血液成分離心時(shí)，要通過相對(duì)離心力（g)和離心機(jī)半徑（cm）（從離心機(jī)中軸點(diǎn)到離心筒內(nèi)底部的距離）換算出每分鐘離心轉(zhuǎn)數(shù)。離心機(jī)的每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)，離心時(shí)間直接影響各種成分的分離效果，必須定期給與校正。第28頁,共96頁，星期六，2024年，5月第29頁,共96頁，星期六，2024年，5月第30頁,共96頁，星期六，2024年，5月1.應(yīng)用塑料聯(lián)袋采集血液，使血液成分可以在密閉無菌的條件下進(jìn)行分離。血袋依照用途不同，可分為單聯(lián)袋、二聯(lián)袋、三聯(lián)袋、四聯(lián)袋以及雙二聯(lián)袋等。這些是用三通管并聯(lián)起來，其規(guī)格分為采血200-400ml不等。另一種是上下串聯(lián)起來的多聯(lián)袋，稱為底-頂式血袋。在我國(guó)很少使用。第31頁,共96頁，星期六，2024年，5月2.根據(jù)血液成分的不同比重，選擇不同的相對(duì)離心力進(jìn)行離心，分離出不同的成分

最早的持續(xù)性離心裝置是在1877年瑞典醫(yī)生Carl研究的手柄式乳烙分離器，1881年在美國(guó)獲得專利。后來，運(yùn)用這種原理制造的離心機(jī)用于石油工業(yè)清除不純的潤(rùn)滑油中的顆粒；在核燃料工業(yè)中處理鈾同位素中的固體和液體廢物。1950年美國(guó)科學(xué)家Cohn在哈佛大學(xué)首先發(fā)明了持續(xù)性血液分離機(jī)分離血液成分。這些裝置都是根據(jù)不同成分的密度來設(shè)置的。第32頁,共96頁，星期六，2024年，5月3.血液成分手工制備的注意事項(xiàng)

★制備新鮮冰凍血漿時(shí)，保養(yǎng)液為CPDCP2DCPDA-1的血液應(yīng)該在8小時(shí)之內(nèi)分離并速凍

★保養(yǎng)液為ACD的血液應(yīng)在6小時(shí)之內(nèi)分離并速凍第33頁,共96頁，星期六，2024年，5月第二節(jié)紅細(xì)胞的制備和保存

紅細(xì)胞制劑是由全血去除部分血漿制備而成。

從200ML全血制備的各種紅細(xì)胞制品為1U第34頁,共96頁，星期六，2024年，5月一、濃縮紅細(xì)胞㈠概念

濃縮紅細(xì)胞也稱為壓積紅細(xì)胞或少漿血，是將采集的全血大部分的血漿在全封閉的條件下分離后剩余的部分所制成的紅細(xì)胞成分血?？梢栽谌行П４嫫趦?nèi)任何時(shí)間分離出部分血漿制備而成，一般用二聯(lián)袋采集的全血制備濃縮紅細(xì)胞第35頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡制備（1）用二聯(lián)袋采集1單位或2單位全血于主袋內(nèi)；（2）將全血在4℃±2℃離心，離心3400×g,離心7分鐘，沉淀紅細(xì)胞；（3）取出離心后全血，將部分血漿分入空的轉(zhuǎn)移袋內(nèi)；（4）用熱合機(jī)切斷塑料袋間的連接管，制備成濃縮紅細(xì)胞。第36頁,共96頁，星期六，2024年，5月第37頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢濃縮紅細(xì)胞的保存保存在4℃±2℃保存液CPDACD-B保存期21天CPDA-1保存液為35天第38頁,共96頁，星期六，2024年，5月二、懸浮紅細(xì)胞㈠概念懸浮紅細(xì)胞又稱添加劑紅細(xì)胞，將全血中的大部分（90%）血漿在全封閉的條件下分離后并向剩余物中加入紅細(xì)胞添加液制成的紅細(xì)胞成分第39頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡制備⒈單袋制備法

用單個(gè)塑料袋采集血液，離心后在無菌條件下與空塑料袋相連接，把上層血漿分離移入空袋，將等量的保存液加入紅細(xì)胞內(nèi)充分混勻。單袋制備方法要求嚴(yán)格的制備環(huán)境，整體環(huán)境達(dá)萬級(jí)凈化，局部操作空間達(dá)百級(jí)凈化。第40頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒉聯(lián)袋制備法

全血采集于多聯(lián)袋的主袋內(nèi)，與抗凝劑充分混勻后，在6～8小時(shí)內(nèi)制備。1）采血后的多聯(lián)袋在大容量冷凍離心機(jī)內(nèi)離心，離心力一般為3400×g，溫度控制在4℃±2℃，離心7分鐘；2）輕輕取出離心后的血袋懸掛于分離支架上或放于分漿夾內(nèi)，將上層不含血細(xì)胞的血漿分入空的轉(zhuǎn)移袋內(nèi)。注意不可把血細(xì)胞分入血漿中；3）把多聯(lián)袋末袋中的保存液加入主袋濃縮紅細(xì)胞內(nèi)，使紅細(xì)胞與保養(yǎng)液充分混勻，血細(xì)胞比容為0.50-0.65；4）用高頻熱合機(jī)切斷塑料袋間的連接管，封閉紅細(xì)胞袋上的所有管道，制成懸浮紅細(xì)胞。第41頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢保存⒈保存在4℃±2℃保存液⒉紅細(xì)胞添加液SAG(生理鹽水-腺嘌呤-葡萄糖)SAGM(生理鹽水-腺嘌呤-葡萄糖-甘露醇）

MAP(甘露醇-腺嘌呤-磷酸鹽)可保存35天AS-1AS-3AS-5可保存42天第42頁,共96頁，星期六，2024年，5月三、少白細(xì)胞的紅細(xì)胞㈠概念濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)胞懸浮少白細(xì)胞紅細(xì)胞第43頁,共96頁，星期六，2024年，5月

白細(xì)胞與輸血反應(yīng)的相關(guān)性經(jīng)研究證實(shí)，大多數(shù)患者，因輸血或受孕，體內(nèi)產(chǎn)生白細(xì)胞抗體，這些抗體大部分屬于人類白細(xì)胞抗原（HLA)系統(tǒng)的同種抗體，當(dāng)再度輸入含有白細(xì)胞的全血或其他血液成分時(shí)，有可能產(chǎn)生免疫性發(fā)熱反應(yīng)等輸血副作用第44頁,共96頁，星期六，2024年，5月血制品中白細(xì)胞數(shù)量與輸血副作用的相關(guān)性第45頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡制備方法

從全血和濃縮紅細(xì)胞內(nèi)去除白細(xì)胞的方法很多，其效果依據(jù)方法不同而異第46頁,共96頁，星期六，2024年，5月表4去除紅細(xì)胞中白細(xì)胞的方法第47頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒈離心白膜法

簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)，易于操作。

將全血采集于三聯(lián)袋主袋內(nèi)，分離出上層血漿至末袋內(nèi)，然后擠白膜層和白膜層下1-1.5cm的紅細(xì)胞至空轉(zhuǎn)移袋內(nèi)，白膜層及白膜層下含有大部分白細(xì)胞、血小板和部分紅細(xì)胞。為了提高白細(xì)胞去除率，可將末袋的血漿注入主袋，重復(fù)離心，最后可制成少白細(xì)胞的紅細(xì)胞第48頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒉濾器過濾法

由于高分子工業(yè)的發(fā)展，促進(jìn)了輸血器材的改革，各種不同功能的濾器相繼問世。主要包括兩大類：第一代是用纖維或泡沫制成的柱狀過濾器。第二代為聚酯或塑料為材料孔徑20-40微米的網(wǎng)狀過濾器；第三代過濾器以聚酯纖維無紡布作高效濾芯材料，不僅具有高效的白細(xì)胞去除率還有選擇性作用，既有去除濃縮紅細(xì)胞中白細(xì)胞和血小板作用，還能從濃縮血小板中去除白細(xì)胞。第49頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢保存

第三代白細(xì)胞濾器減除白細(xì)胞可達(dá)99%，一般可使白細(xì)胞降至1.0×106～

1.0×105／袋，紅細(xì)胞的回收率大于90%，血小板大于85%⒈保存在4℃±2℃保存液⒉紅細(xì)胞添加液SAG(生理鹽水-腺嘌呤-葡萄糖)SAGM(生理鹽水-腺嘌呤-葡萄糖-甘露醇）

MAP(甘露醇-腺嘌呤-磷酸鹽)可保存35天AS-1AS-3AS-5可保存42天第50頁,共96頁，星期六，2024年，5月四、洗滌紅細(xì)胞㈠概念

洗滌紅細(xì)胞是采用物理方式在無菌條件小，將保存期內(nèi)濃縮紅細(xì)胞或懸浮紅細(xì)胞等制劑用生理鹽水洗滌，去除絕大部分非紅細(xì)胞成分，并將紅細(xì)胞懸浮在生理鹽水中即為洗滌紅細(xì)胞。

洗滌紅細(xì)胞血漿清除率為≥98%，白細(xì)胞清除率≥80%，紅細(xì)胞的回收率≥70%第51頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒈封閉式三聯(lián)鹽水袋洗滌法

三聯(lián)鹽水袋為三個(gè)容積350-400ml單袋用塑料管道相連的密閉無菌、無熱源系統(tǒng)。每袋內(nèi)裝有200ml注射用生理鹽水，主袋連接穿刺針頭一個(gè)。三個(gè)袋子之間用塑料夾子夾住，彼此不相連。㈡制備第52頁,共96頁，星期六，2024年，5月1）保存期內(nèi)懸浮紅細(xì)胞、濃縮紅細(xì)胞或全血均可以用作洗滌紅細(xì)胞的原料細(xì)胞，如已在4℃冰箱保存，洗滌前從冰箱內(nèi)取出置室溫30-60分鐘；2）將三聯(lián)袋鹽水袋主袋上的針頭插入紅細(xì)胞袋的進(jìn)針座內(nèi)，把主袋內(nèi)200ml鹽水加入紅細(xì)胞袋內(nèi)，充分混勻后，倒流入三聯(lián)袋主袋內(nèi)；3）4個(gè)袋子分別裝于2個(gè)離心套筒中（一側(cè)為血袋與空袋，另一側(cè)為兩個(gè)鹽水袋）平衡后，對(duì)稱放入離心機(jī)內(nèi)，在22℃±2℃以4500×g的離心力離心3分鐘；4）離心后將裝有血液的血袋懸掛于支架上，把上清和白膜分入空袋內(nèi)。熱合切斷與廢液相連的塑料管，棄去廢液袋5）重復(fù)2）、3）、4）步驟，依次洗滌紅細(xì)胞3次；6）洗滌紅細(xì)胞制品在三聯(lián)袋的末袋內(nèi)，將與末袋相連的塑料管內(nèi)充滿紅細(xì)胞，分段熱合留樣本，用以臨床鑒定血型和交叉配血第53頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒉開放式洗滌法

如無三聯(lián)鹽水袋裝置，可以用普通醫(yī)用生理鹽水，在百級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)連接洗滌或用無菌連接裝置在普通工作間連接洗滌第54頁,共96頁，星期六，2024年，5月1）同封閉式洗滌法中1）的要求；2）在超凈臺(tái)上用無菌操作將生理鹽水加入被洗滌的紅細(xì)胞袋內(nèi)，混勻；3）在22℃±2℃以1160×g的離心力離心8分鐘；4）在超凈臺(tái)上將上清液及白膜分入廢液袋中，再加入生理鹽水并混勻；5）在4℃±2℃以5000×g的離心力離心6分鐘；6）如此重復(fù)4）、5）步驟，反復(fù)洗滌3次，最后一次分出上清與白膜后，在洗滌的紅細(xì)胞制品中加入紅細(xì)胞量的一半生理鹽水，配制成70%比積的紅細(xì)胞懸液。第55頁,共96頁，星期六，2024年，5月3）機(jī)器洗滌法

洗滌紅細(xì)胞的機(jī)型較多。國(guó)內(nèi)較常見于洗滌冷凍紅細(xì)胞。第56頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢保存洗滌紅細(xì)胞保存溫度4℃±2℃自制備后盡快輸注，最好在6小時(shí)之內(nèi)輸用，保存不超過24小時(shí)第57頁,共96頁，星期六，2024年，5月五、冰凍紅細(xì)胞㈠概念

冰凍紅細(xì)胞又稱為冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，是采用甘油作為冰凍保護(hù)劑深低溫保存，根據(jù)臨床需要再進(jìn)行解凍洗滌去甘油處理的特殊紅細(xì)胞制劑第58頁,共96頁，星期六，2024年，5月

紅細(xì)胞低溫保存法為英國(guó)學(xué)Smith首先發(fā)明。后來，人們反復(fù)研究逐步認(rèn)識(shí)到，冰凍紅細(xì)胞是長(zhǎng)期保存紅細(xì)胞的一種理想方法。紅細(xì)胞的代謝速度取決于保存溫度，如把保存溫度降到使紅細(xì)胞代謝率幾乎停止時(shí)，紅細(xì)胞代謝耗能最少。達(dá)到延期保存紅細(xì)胞的目的。但血液在零度以下會(huì)結(jié)冰，在細(xì)胞內(nèi)外形成冰晶，破壞細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞外液滲透壓升高，促進(jìn)細(xì)胞脫水，最終引起細(xì)胞的解體死亡，所以必須加入防凍液。第59頁,共96頁，星期六，2024年，5月一是細(xì)胞內(nèi)防凍劑，具有高溶解度及低細(xì)胞毒性，降低冰點(diǎn)，增加不凍水量如甘油，二甲亞砜細(xì)胞外防凍劑，降低冰點(diǎn)，增加不凍水量。如羥乙基淀粉，乳糖。冰凍紅細(xì)胞最常用的防凍劑為甘油第60頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡制備

⒈高濃度甘油慢凍法1）鹽水洗滌法：

甘油化：向一單位全血分離后的濃縮紅細(xì)胞內(nèi)加入57.1%甘油溶液160ml，加甘油的速度要先慢后快，在15-20分鐘內(nèi)加完，同時(shí)不斷震蕩，在室溫平衡半小時(shí)后，放入-80℃低溫冰箱保存。第61頁,共96頁，星期六，2024年，5月解凍：于輸注前將貯存的冰凍紅細(xì)胞從低溫冰箱取出，放入37℃恒溫水浴箱中緩慢搖動(dòng)，融化到全部解凍。洗滌脫甘油：先加入9%NaCl40ml（5分鐘內(nèi)加完），以每分鐘60-70ml的速度加入0.9%NaCl250ml，離心去上清液；再以每分鐘60-70ml的速度加入0.9%NaCl400ml,離心去上清液；另加0.9%NaCl100ml，離心去上清液；最后加入0.9%NaCl100ml制成紅細(xì)胞懸液供臨床輸注第62頁,共96頁，星期六，2024年，5月2）糖液洗滌法甘油化：向一單位全血分離后余下100-120ml紅細(xì)胞中緩慢加入等容積的甘油化試劑，大約10分鐘，并不斷攪拌，室溫平衡半小時(shí)后放入-80℃低溫冰箱保存；第63頁,共96頁，星期六，2024年，5月解凍：同鹽水洗滌法；洗滌脫甘油：邊攪拌邊加入與甘油化紅細(xì)胞等體積的50%的葡萄糖液，再加入蔗糖溶液，等待紅細(xì)胞聚集沉淀后去除上清液。再用10%蔗糖溶液500ml反復(fù)洗滌兩次，除去上清液。加入生理鹽水混勻，離心除去上清液。再加入生理鹽水100ml制成紅細(xì)胞懸液。第64頁,共96頁，星期六，2024年，5月(2)低濃度甘油超速冷凍法

甘油濃度在20%左右，將紅細(xì)胞快速（1.5-2.0分鐘）冰凍并保存在-196℃液氮中，輸注前從液氮中取出，立即在45℃水浴中震蕩快速解凍并進(jìn)行洗滌第65頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢保存冰凍紅細(xì)胞最大的有點(diǎn)可長(zhǎng)期保存，高濃度甘油的紅細(xì)胞可以保存3年，低濃度甘油超速冷凍的紅細(xì)胞可以保存10年。高濃度甘油冷凍的紅細(xì)胞在-80保存，超低溫冰箱即可保存。解凍后的紅細(xì)胞保存在溫度4℃±2℃自制備后盡快輸注，最好在6小時(shí)之內(nèi)輸用，保存不超過24小時(shí)第66頁,共96頁，星期六，2024年，5月六、年輕紅細(xì)胞㈠概念

年輕紅細(xì)胞是一種具有較多的網(wǎng)織紅細(xì)胞、酶活性相對(duì)增高、平均細(xì)胞年齡較小的紅細(xì)胞成分。大多用血液細(xì)胞分離機(jī)制備。年輕紅細(xì)胞存活期明顯長(zhǎng)于成熟紅細(xì)胞，半存活期為44.9天，而成熟紅細(xì)胞僅為29天第67頁,共96頁，星期六，2024年，5月保存

輸入體內(nèi)可相對(duì)延長(zhǎng)存活期，所以對(duì)長(zhǎng)期依賴輸血的貧血患者，重型珠蛋白生成障礙性貧血患者療效較好。保存同其他紅細(xì)胞成分第68頁,共96頁，星期六，2024年，5月七、輻照紅細(xì)胞

用射線照射滅活活性淋巴細(xì)胞的紅細(xì)胞制劑，用來預(yù)防TA-GVHD的發(fā)生，血液制劑的最佳輻照量是完全消除供血者淋巴細(xì)胞的有絲分裂能力而不破壞其他血液細(xì)胞功能。我國(guó)要求的照射劑量為25Gy.第69頁,共96頁，星期六，2024年，5月保存

美國(guó)FDA規(guī)定紅細(xì)胞輻照后保存不超過28天，最好盡快輸注，輸后體內(nèi)回復(fù)率應(yīng)﹥75%。歐洲會(huì)議推薦紅細(xì)胞的輻照應(yīng)在采血后14天內(nèi)進(jìn)行，并且輻照后紅細(xì)胞的保存時(shí)間應(yīng)在輻照后14天內(nèi)第70頁,共96頁，星期六，2024年，5月第三節(jié)血小板的制備和保存手工法

制備出的血小板為濃縮血小板并可進(jìn)行多人分匯集保存和輸注，一般從獻(xiàn)血員采集200ml或400ml全血采用離心分離后手工擠壓分離出血小板制劑。目前我國(guó)規(guī)定手工法由200ml全血制備濃縮血小板為1u,所含血小板數(shù)≥2.0×1010

機(jī)器單采法

用血細(xì)胞分離機(jī)從單一獻(xiàn)血者體內(nèi)進(jìn)行直接采集，制備的血小板為單采血小板，可從單一獻(xiàn)血者體內(nèi)采集1或2個(gè)成人治療劑量的血小板。我國(guó)規(guī)定一個(gè)治療單位（劑量）為≥2.5×1011

無論哪種血小板均可進(jìn)行進(jìn)一步處理，已獲得更為高質(zhì)量和安全的血小板制劑，如去除白細(xì)胞，病毒滅活，輻照等處理，可得到相應(yīng)的血小板制劑第71頁,共96頁，星期六，2024年，5月一濃縮血小板（PC)㈠概念濃縮血小板（PC)制劑

是將室溫保存的多聯(lián)袋內(nèi)的全血，于采血后在一定時(shí)間內(nèi)（通常6小時(shí)內(nèi)）在20～24℃的全封閉條件下將血小板分離出來并懸浮在血漿內(nèi)制成的成分血，已有研究表明，全血采集后室溫（20～24℃）放置后再制備血小板，可得到更高產(chǎn)率。第72頁,共96頁，星期六，2024年，5月濃縮血小板（PC)制劑有三種模式：一種為富血小板血漿法（PRP)，新鮮采集的全血于4～6小時(shí)內(nèi)分離PRP，再進(jìn)一步分離為濃縮血小板（PC）另一種為白膜法，從白膜中經(jīng)第二次離心后提取血小板，將5～6袋同型白膜和血漿用無菌接駁機(jī)串聯(lián)起來，并過濾后匯集成一單位濃縮血小板。

㈡制備方法第73頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒈多聯(lián)袋制備濃縮血小板Ⅰ(PRP法)1）全血采集于三聯(lián)袋或四聯(lián)袋主袋內(nèi)；2）采后4-6小時(shí)內(nèi)，于22℃±2℃存放或輕度離心，以離心力1100×g離心57分鐘或700×g離心10分鐘，使紅細(xì)胞下沉，大部分血小板保留于血漿中為PRP層；3）將上層PRP分入第二轉(zhuǎn)移袋內(nèi)4）把第三袋內(nèi)的紅細(xì)胞保存液加入主袋壓積紅細(xì)胞內(nèi)，用熱合機(jī)熱合切斷主袋與第3轉(zhuǎn)移袋之間的連接塑料管。在主袋與第2血袋間塑料管內(nèi)留取紅細(xì)胞與血漿為血樣品管；5）把第2PRP袋協(xié)同第三轉(zhuǎn)移袋重度離心，溫度22℃±2℃，以離心力4650×g，離心6分鐘，或3400×g，離心10分鐘，使血小板下沉于底部形成沉淀；6）分離上層少血小板血漿進(jìn)入第3轉(zhuǎn)移袋內(nèi)，留下20-30ml(1單位全血所分出的血小板）或50-70ml（2單位全血所分血小板）血漿于第二血小板袋內(nèi)；7）在22℃±2℃靜置1～2小時(shí)，使血小板自然解聚重新懸浮形成懸液，制備的血小板應(yīng)放入22℃±2℃血小板振動(dòng)器保存。第74頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒉多聯(lián)袋制備濃縮血小板Ⅱ（白膜法）1）全血采集于四聯(lián)袋主袋內(nèi)2）將采血后的四聯(lián)袋，置22℃±2℃溫度離心，離心力為3100×g，離心10分鐘3）把離心后的主袋置于分漿夾內(nèi)，先將大部分血漿分入第二袋，然后將白膜層（血小板、白細(xì)胞和少量紅細(xì)胞層）擠入第三袋，再從第二袋分出適量血漿至第三袋，夾住第2、3袋間的塑料管；4）將第四袋內(nèi)紅細(xì)胞保養(yǎng)液加入主袋內(nèi)，使之與紅細(xì)胞混勻，熱合主袋與第4袋間的塑料管；5）將第3、4袋置22℃±2℃輕度離心280×g，6分鐘；6）第三袋上層懸液分入第4袋即得濃縮血小板。第75頁,共96頁，星期六，2024年，5月第76頁,共96頁，星期六，2024年，5月第77頁,共96頁，星期六，2024年，5月⒊機(jī)分法⑴全血采集于四聯(lián)袋主袋內(nèi)⑵將采血后的四聯(lián)袋，置22℃±2℃溫度離心，離心力為2100×g，離心14分鐘⑶開啟血細(xì)胞分離機(jī)的電腦，啟動(dòng)分離血小板的程序，按儀器操作說明進(jìn)行。⑷分離結(jié)束后，取下分離好的懸浮紅細(xì)胞和血漿袋熱合，同時(shí)取下富有血小板層擠入2號(hào)轉(zhuǎn)移袋進(jìn)行第二次離心，離心速度280×g，10分鐘。溫度控制22℃±2℃⑸將第二次離心后的血袋置于懸掛架上，進(jìn)行分離，取下分離好的血小板，熱合稱重，一般約80～90ml第78頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢保存PC均可在22℃±2℃震蕩保存數(shù)天，依據(jù)所使用的血小板專用保存袋而定，國(guó)外一般保存血小板5天，國(guó)內(nèi)可保存24小時(shí)。國(guó)外常采用多人份匯集濃縮血小板進(jìn)行白細(xì)胞過濾的方式，匯集后濃縮血小板制劑的保存期在美國(guó)規(guī)定為4小時(shí)，歐洲為6小時(shí)。我國(guó)雖未有明確規(guī)定，但匯集的多人份濃縮血小板制劑仍應(yīng)盡早使用，保存不得超過24小時(shí)。第79頁,共96頁，星期六，2024年，5月二單采血小板㈠概念

單采血小板是使用血細(xì)胞分離機(jī)采集獻(xiàn)血者的血小板所制成的血小板制劑。由于單采血小板是從單一個(gè)體用全自動(dòng)血細(xì)胞分離機(jī)采集而來，通常又稱為機(jī)采血小板。單采血小板制劑應(yīng)用廣泛，具有純度高、質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)，可以從單個(gè)獻(xiàn)血者體內(nèi)采集1～2個(gè)成人劑量的血小板(≥3.0×1011,且要白細(xì)胞的求去除白細(xì)胞，歐洲規(guī)定每單采血小板制劑中白細(xì)胞的殘留量必須≤5.0×106，美國(guó)單采血小板白細(xì)胞殘留量幾乎能達(dá)到≤1.0×106.第80頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡單采血小板對(duì)獻(xiàn)血者的要求獻(xiàn)血者除符合捐獻(xiàn)全血的全部體檢要求外，還需符合以下要求：⒈采前血小板計(jì)數(shù)≥150×109／L,血細(xì)胞比容＞38%。血小板計(jì)數(shù)≥300×109／L，可以進(jìn)行采集2個(gè)血小板治療量（≥6.0×1011血小板）⒉單采血小板的采集過程需要持續(xù)1～1.5小時(shí)，要求獻(xiàn)血者靜脈必須充盈良好。⒊獻(xiàn)血前1天最好多飲水，當(dāng)日必須吃早餐，宜清淡飲食，如稀飯、饅頭。⒋要求獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血前1周不得服用阿司匹林、吲哚美辛、保泰松、布洛芬、維生素E,雙密達(dá)莫，氨茶堿、青霉素及抗過敏藥物。⒌單采血小板獻(xiàn)血間隔為1個(gè)月。第81頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢制備⒈連續(xù)單采和非連續(xù)單采⒉美國(guó)規(guī)定每單位（1治療劑量）單采血小板計(jì)數(shù)為≥3.0×1011。

我國(guó)規(guī)定單采血小板計(jì)數(shù)應(yīng)達(dá)到≥2.5×1011／袋，白細(xì)胞混入量≤5.0×108／袋，紅細(xì)胞混入量≤8.0×109／袋。第82頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈣單采血小板的保存⒈保養(yǎng)液為ACD-A及開放和采用普通血袋的單采血小板（125～200ml)保存在22℃±2℃震蕩保存保存期為24小時(shí)。⒉未經(jīng)開放處理并采用血小板專用保存袋的單采血小板保存在22℃±2℃震蕩保存保存期可保存5天。第83頁,共96頁，星期六，2024年，5月第四節(jié)血漿的制備和保存

血漿是指抗凝全血經(jīng)離心去除紅細(xì)胞有形成分后的淡黃色液體，含有水，電解質(zhì)和蛋白質(zhì)，主要是白蛋白，免疫球蛋白和各種凝血因子。血漿可由單采或經(jīng)全血制備其他成分分離而來目前國(guó)內(nèi)常用的血漿制劑根據(jù)制備方法及來源的不同分為2類：

新鮮冰凍血漿和普通冰凍血漿根據(jù)采集和方式不同還有單采血漿和病毒滅活血漿第84頁,共96頁，星期六，2024年，5月一、新鮮冰凍血漿㈠概念新鮮冰凍血漿在全血采集后6小時(shí)（全血保養(yǎng)液為ACD）或8小時(shí)（全血保養(yǎng)液為CPD、CPDA-A)內(nèi)，在全封閉的條件下，將分離出的新鮮液體血漿速凍后并保存于-20以下冰箱即為新鮮冰凍血漿。第85頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈡制備可用二聯(lián)袋、三聯(lián)袋、四聯(lián)袋來制備

1）用三聯(lián)袋采集全血，于采后6小時(shí)內(nèi)經(jīng)第一次5000×g的離心力離心7分鐘，分出上層血漿。再將血漿第二次以5000×g的離心力離心5分鐘，分出清除紅細(xì)胞成分的血漿即為新鮮液體血漿；新鮮液體血漿立即放入-50℃的速凍箱，在最短的時(shí)間內(nèi)迅速冷凍血漿，經(jīng)完成速凍的血漿再放入-20℃以下的冰箱保存。

2）制備濃縮血小板后所得到的少血小板血漿和制備血小板、白膜后剩余的少血小板血漿可用作新鮮液體血漿，立即速凍并冷貯。第86頁,共96頁，星期六，2024年，5月第87頁,共96頁，星期六，2024年，5月㈢保存

新鮮冰凍血漿含有全部凝血因子，包括不穩(wěn)定的第ⅴ因子和第Ⅷ因子。新鮮冰