血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn)

關(guān)于血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的基本原理、操作方法和結(jié)果判定方法2、了解新城疫有關(guān)背景知識(shí)

第2頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、血凝試驗(yàn)(HA)檢測(cè)新城疫抗原2、血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測(cè)新城疫抗體第3頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月三、實(shí)驗(yàn)原理1、血凝試驗(yàn)（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能選擇性地使某種動(dòng)物地紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這種凝集紅細(xì)胞的現(xiàn)象稱為血凝（HA）,也稱直接血凝反應(yīng)。病毒顆粒紅細(xì)胞第4頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月2、血凝抑制試驗(yàn)（HI）原理：當(dāng)病毒的懸液中加入特異性抗體，且這種抗體的量足以抑制病毒顆?；蚱溲貢r(shí)，則紅細(xì)胞表面的受體就不能與病毒顆?；蜓刂苯咏佑|。這時(shí)紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，稱為紅細(xì)胞凝集抑制（HI）反應(yīng)，也稱血凝抑制反應(yīng)。Iamlate！抗體抗原第5頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月四、實(shí)驗(yàn)材料1、血凝板（2人/塊）2、新城疫陽(yáng)性血清3、被檢血清（1份）4、1％紅細(xì)胞懸液5、稀釋液6、移液器（50ul,2人/把）7、槍頭第6頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定血凝試驗(yàn)（HA)1、在血凝板上第一排的1－12孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水2、在第1孔內(nèi)加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul3、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液50ul4、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘5、結(jié)果判定第7頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×紅細(xì)胞對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050棄50紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－血凝效價(jià)測(cè)定第8頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集；第9頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月第10頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月血凝價(jià)的判定以出現(xiàn)＋＋（50％凝集）的抗原最高稀釋倍數(shù)為該抗原的血凝價(jià)（1:128）。50ul1:256稀釋的病毒抗原為該抗原的一個(gè)血凝單位。稀釋倍數(shù)2×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×細(xì)胞對(duì)照結(jié)果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋————第11頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月血凝抑制試驗(yàn)1、將病毒抗原稀釋成4個(gè)血凝單位（1/128×4=1:32）2、在血凝板上1－12孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水；3、在第1孔內(nèi)加入被檢血清50ul，然后倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul；4、第1－12孔內(nèi)加入4單位抗原50ul（第12孔為病毒對(duì)照）；5、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液50ul；6、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘6、結(jié)果判定第12頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×病毒對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050血清5050505050505050505050棄504單位抗原505050505050505050505050紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－血凝抑制效價(jià)測(cè)定第13頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有下凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集。第14頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月血凝抑制價(jià)的判定以出現(xiàn)完全抑制凝集(即不凝集)的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的血凝抑制價(jià)（1:4）。稀釋倍數(shù)2×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×血清對(duì)照結(jié)果——＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋—第15頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月六、注意事項(xiàng)1、紅細(xì)胞用前請(qǐng)搖勻2、用槍加樣定要準(zhǔn)，盡量不要有氣泡3、結(jié)果判定有耐心4、HA和HI勿相混第16頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月七、新城疫背景介紹第17頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月雞新城疫

（NewcastleDiseaseND）

第18頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月1、概述ND是由ND病毒（NewcastlediseaseVirus,NDV）引起的高度接觸性和高度毀滅性的急性敗血性傳染病。1926年首先發(fā)生于印尼，同年發(fā)現(xiàn)于英國(guó)新城我國(guó)1928年有該病記載是當(dāng)今全球范圍內(nèi)最嚴(yán)重的家禽傳染病之一被國(guó)際獸疫局（OIE)列為A類傳染病

第19頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月別名：新城疫、亞洲雞溫、偽雞瘟雞瘟：

禽流感、歐洲雞溫、真性雞溫第20頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月新城疫病毒，屬副粘病毒科，副粘病毒屬。病毒顆粒表面具有血凝素蛋白，可以刺激機(jī)體產(chǎn)生血凝抑制抗體，2、病原體第21頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月第22頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月根據(jù)臨診表現(xiàn)和病程長(zhǎng)短分為：（1）最急性型：突然發(fā)病，病變不明顯，見(jiàn)于雛雞及本病流行初期。急性型：（典型新城疫）亞急性型（非典型ND)慢性型（非典型ND）3、病狀及病理變化第23頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月（2）、急性型：侵害消化系統(tǒng)為主，也稱嗜內(nèi)臟速發(fā)型。病狀特點(diǎn)：a.食欲減退，飲水增加，離群呆立，眼睛半開(kāi)半閉，翅膀下垂，冠、肉髯呈紫黑色。第24頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月b.嗉囊積液、體溫升高、呼吸困難。鼻腔內(nèi)有大量分泌物，嚴(yán)重拉稀糞便呈黃綠色或褐色，有時(shí)混有血。第25頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月c.死亡率高,非免疫雞感染后可以80-100%死亡。d.部分患雞出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，頭頸歪向一側(cè)而咀向上，母雞產(chǎn)蛋下降。第26頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月第27頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月病變特點(diǎn)：全身的粘膜和漿膜出血，突出病變?cè)谙馈.腺胃粘膜水腫，粘膜上的乳頭及其周?chē)谐鲅c(diǎn)，間有潰瘍。B.腺胃與肌胃、腺胃與食道交界處粘膜可見(jiàn)到出血點(diǎn)或出血帶。第28頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月C.小腸、直腸、泄殖腔粘膜充血、出血或有壞死，D.盲腸扁桃體出血。第29頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月第30頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月皮下脂肪出血第31頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月腦膜充血出血卵黃性腹膜炎第32頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月有的病雞表現(xiàn)眼結(jié)膜炎第33頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月

（3）、亞急性型（非典型ND，以侵害呼吸道為主）也稱肺腦炎型：其主要的特點(diǎn)：是癥狀及病變不典型。癥狀：多見(jiàn)4-35日齡雞，25日齡前后最常發(fā)病。呼吸困難，精神沉郁，繼而較早地出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，此時(shí)出現(xiàn)歪頭，扭頸，角弓反張，倒地不能起立。第34頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月病變：喉頭及氣管粘膜水腫，出血、充血、并有大量粘液，肺呈紫黑色（肺出血性炎癥）。硬腦膜下樹(shù)枝狀充血，并有出血點(diǎn)。心冠、脂肪有出血點(diǎn)。發(fā)病率高，死亡率較低。第35頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月（4）、慢性型（非典型ND）母雞：輕者只表現(xiàn)產(chǎn)蛋率下降（約10-30%），產(chǎn)軟殼蛋。重者出現(xiàn)精神沉郁，呼吸困難，黃綠色稀糞，喉頭、氣管粘膜充血、出血，個(gè)別病例出現(xiàn)消化道病變。第36頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月5、診斷

1、血凝抑制試驗(yàn)（HI）：監(jiān)測(cè)雞群中的HI抗體，評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果及雞體內(nèi)的抗體水平。

2、分離病毒：鑒別弱毒及野毒。（1）分離病毒：強(qiáng)毒：24-72小時(shí)雞胚死亡，弱毒一般不死。第37頁(yè),共41頁(yè)，星期六，2024年，5月6、免疫滅活疫苗（激發(fā)體液免疫）活疫苗（激發(fā)體液免疫、細(xì)胞免疫和局部粘膜免疫）

I系苗、II系苗、III系苗、IV系苗和V4弱毒苗

HI抗體檢測(cè)：種雞》1：