B7-H1阻斷對膀胱癌患者外周血樹突狀細(xì)胞免疫功能的影響

1/1B7-H1阻斷對膀胱癌患者外周血樹突狀細(xì)胞免疫功能的影響B(tài)7-H1阻斷對膀胱癌患者外周血樹突狀細(xì)胞免疫功能的影響摘要摘要目的：

探討膀胱癌患者外周血與正常人外周血樹突狀細(xì)胞（dendriticcells,DCs）免疫功能的差異以及B7-H1阻斷對膀胱癌患者外周血DCs免疫功能的影響。

方法：

采集膀胱癌患者及正常人的外周血，用rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-自外周血單個核細(xì)胞（peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）誘導(dǎo)分離DCs，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力。

然后于膀胱癌DCs組加入B7-H1的阻斷型抗體，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測B7-H1阻斷后DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力，ELISA法檢測阻斷后DCs分泌IL-10和IL-12的水平。

結(jié)果：

膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力低于正常人外周血DCs，而加入B7-H1阻斷型抗體阻斷B7-H1后，膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力得到明顯提高，同時其分泌IL-10水平明顯降低，而分泌IL-12水平明顯增加。

結(jié)論：

膀胱癌患者外周血DCs存在免疫功能缺陷，其機制可能與DCs表面B7-H1的誘導(dǎo)高表達有關(guān)，而B7-H1阻斷能夠增強膀胱癌患者外周血DCs的免疫功能。

碩士研究生李賢軍指導(dǎo)教師于芹超副教授關(guān)鍵詞：

膀胱腫瘤；B7-H1；樹突狀細(xì)胞；免疫逃逸青島大學(xué)碩士學(xué)位論文引言膀胱癌是泌尿系腫瘤之中最常見的其中的一種[1]。

但是，其在手術(shù)并輔以局部灌注化療后，依然有著較高的復(fù)發(fā)率。

Brausi[2]等統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，在行經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)（TUR-BT）以后，再以卡介苗（BCG）行規(guī)律膀胱灌注，仍然會有部分患者復(fù)發(fā)，甚至進展。

這已經(jīng)成為泌尿外科亟需解決的問題。

有研究表明，膀胱癌中存在著免疫逃逸現(xiàn)象，而這也是膀胱癌易復(fù)發(fā)的重要機制之一[3]。

在機體對抗腫瘤的免疫應(yīng)答機制中，T細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)起著主導(dǎo)作用。

但是，T細(xì)胞的激活、增殖均需依賴于抗原遞呈細(xì)胞遞呈相應(yīng)的抗原并提供共刺激信號。

樹突狀細(xì)胞（dendriticcells,DC）作為在當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)功能最強，同時，也是惟一能夠激活初始的T淋巴細(xì)胞的專職抗原提呈細(xì)胞，在誘導(dǎo)機體對抗腫瘤的免疫應(yīng)答過程中起著十分關(guān)鍵的作用[4-5]。

同時，樹突狀細(xì)胞還具有其他特點：

一方面，樹突狀細(xì)胞在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中，能夠有效的刺激T淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的增殖；其次，在體外分離并刺激成熟而獲得的樹突狀細(xì)胞的抗原呈遞功能與從體內(nèi)純化的成熟的樹突狀細(xì)胞沒有明顯差別[6]。

有研究表明，DC在數(shù)量上的降低、功能上的缺失或者表達某些異常分子，這些都可能會引起DC免疫功能的下降，進而導(dǎo)致其無法激活T細(xì)胞來產(chǎn)生免疫反應(yīng)，甚至造成免疫耐受，引發(fā)腫瘤的發(fā)展或轉(zhuǎn)移[7]。

除此以外，共刺激分子提供的協(xié)同刺激信號是T細(xì)胞活化的前提[8]。

最新研究發(fā)現(xiàn)，B7-H1是一種具有抑制性作用的共刺激分子，也稱之為程序性死亡配體-1（PD-L1，CD274）。

當(dāng)B7-H1與其相對應(yīng)的受體分子，即PD-1結(jié)合以后，會產(chǎn)生抑制性信號，進而引發(fā)T細(xì)胞的凋亡，并抑制T細(xì)胞的活化增殖[9-10]。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)膀胱癌患者外周血DCs表面B7-H1的表達比正常人明顯增高，并且其表達水平與膀胱癌的病理分級和臨床分期密切相關(guān)[11]。

那么B7-H1在膀胱癌DCs中究竟發(fā)揮怎樣的作用，目前尚未見相關(guān)研究和報道。

為此，本研究通過檢測膀胱癌患者外周血DCs與正常人免疫功能的差異以及B7-H1阻斷對其免疫功能的影響，借以探討B(tài)7-H1在膀胱癌免疫功能缺陷和免疫逃逸機制中的作用。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文1.材料與試劑1.1臨床資料收集2013年6月-8月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科膀胱癌患者外周血10例，其中男8例，女2例，年齡30~72歲，均未接受任何抗腫瘤治療，術(shù)后病理結(jié)果均證實為膀胱癌。

另外取10例健康學(xué)生志愿者的外周血作為對照（由青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)生志愿者提供）。

2實驗方法及步驟2.1膀胱癌患者及正常人PBMC來源DCs的誘導(dǎo)1．以肝素抗凝的真空采血管采集膀胱癌患者的外周靜脈血20mL，用等體積的RPMI1640將血液稀釋。

2．將5mL淋巴細(xì)胞分離液吸取到離心管中，按照2:1（稀釋血液：

淋巴細(xì)胞分離液）的比例，將稀釋后的血液緩緩地加到淋巴細(xì)胞分離液的上面。

3．在室溫條件下，將離心管放于低速離心機中，采用密度梯度離心法（2500r/min,20min,r=15cm）分離單個核細(xì)胞（PBMC）。

離心結(jié)束以后，離心管內(nèi)液體分為四層，中間的白膜層即為PBMC。

4．將PBMC吸取并轉(zhuǎn)移到另一支離心管中，用5倍體積的PBS（含2%FBS）將其稀釋并混勻，再以1500r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，然后去掉上清。

5．重復(fù)12次上述的過程，以盡可能的洗掉血小板、淋巴細(xì)胞分離液等雜質(zhì)。

6．用含有10%FBS和1%雙抗的RPMI1640培養(yǎng)液將細(xì)胞重懸并轉(zhuǎn)移至15cm2的培養(yǎng)瓶中。

將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，在37℃、5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)2h。

7．輕搖培養(yǎng)瓶，吸取上清液及非貼壁細(xì)胞至一試管中，離心獲取的細(xì)胞即為淋巴細(xì)胞，然后以含有100g/LDMSO的RPMI1640重懸，轉(zhuǎn)移至凍存管中，梯度降溫至-80℃條件下保存?zhèn)溆?，用時復(fù)蘇。

8．培養(yǎng)瓶中剩余貼壁細(xì)胞，此時，將含有rhGM-CSF（50ng/ml）和rhIL-4（50ng/ml）的RPMI1640細(xì)胞完全培養(yǎng)基（含10%FBS）加入到培養(yǎng)瓶中，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。

9．分別于培養(yǎng)過程中的第2、第4天半量換液，同時還要補充加入新的rhGM-CSF和rhIL-4，在第6天的時候，加入rTNF-（25ng/ml），以其來誘導(dǎo)產(chǎn)生成熟的青島大學(xué)碩士學(xué)位論文DCs（mDCs）。

2.2膀胱癌DCs上B7-H1的阻斷及實驗分組膀胱癌患者外周血DCs分離培養(yǎng)后，于培養(yǎng)體系中加入10mg/L的B7-H1阻斷型抗體MIH1，然后實驗分為三組：

正常人DCs組、膀胱癌DCs組、膀胱癌DCs+B7-H1阻斷組，各組繼續(xù)培養(yǎng)24h后收獲DCs用于進一步實驗。

2.3混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測DCs誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化增殖的能力1．將前期分離并凍存的淋巴細(xì)胞復(fù)蘇，用RPMI1640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，作為反應(yīng)細(xì)胞，按2105/well加入96孔板。

2．實驗組按1：

10的比例加入各組DCs，DCs在加入之前以絲裂霉素C（25mg/L）去增殖。

空白組加入等量的RPMI1640培養(yǎng)液。

每孔設(shè)3復(fù)孔，37C，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。

3．每孔加入CCK-8約20L，混勻，繼續(xù)培養(yǎng)約4h。

4．以450nm波長的酶標(biāo)儀進行檢測。

以增殖指數(shù)（proliferationindices,PI）來比較各組DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力，PI=實驗組D值/空白組D值。

2.4ELISA法檢測DCs分泌IL-10和IL-12的水平1.收集DCs細(xì)胞培養(yǎng)液，1200r/min離心10min后收集上清。

2.將ELISA試劑盒中所需試劑充分混勻，避免產(chǎn)生泡沫。

3.加樣：

將標(biāo)準(zhǔn)品以100L/well加入標(biāo)準(zhǔn)孔，IL-10、IL-12各以100L/well加入樣品孔，將稀釋液按100L/well加入空白對照孔。

4.加入檢測抗體：

將稀釋后的抗體按照50L/well的濃度加入各孔，混勻，蓋封板膜，室溫條件下孵育2h。

5.洗板：

將板反扣于濾紙上，去除孔內(nèi)液體，以300L/well加入洗板液，1min后將板反扣，去除液體。

重復(fù)3次。

6.加酶：

以100L/well加入Streptavidin-HRP。

加蓋封板膜，孵育20min（室溫）。

7.洗板：

同步驟5。

8.顯色：

加入TMB（100L/well），在避光條件下，孵育大約15min（室溫）。

9.反應(yīng)終止：

迅速以終止液100L/well終止反應(yīng)。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文10.以450nm波長的酶標(biāo)儀檢測D值。

最后樣品D值=所測得D值空白孔D值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出最后的分泌值。

2.5統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗所得到的數(shù)據(jù)以xs表示。

兩組數(shù)據(jù)之間比較采用t檢驗，以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3實驗結(jié)果3.1樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)在倒置顯微鏡下可以觀察到:于培養(yǎng)的第2天，可見單核細(xì)胞的形態(tài)開始變化，并慢慢呈現(xiàn)半懸浮生長的狀態(tài)（圖3.1a）；至第4天，我們可觀察到懸浮的細(xì)胞團逐漸增加，與此同時，細(xì)胞體積的也變大，在細(xì)胞周邊也可見有少量突起的形成（圖3.1b）。

至培養(yǎng)的第7天，細(xì)胞體略呈圓球形，突起較為明顯，此為較典型的DCs（圖3.1c）。

腫瘤患者外周血源性的DCs形態(tài)和正常人的相比較，狀態(tài)并無明顯的分別。

3.1：

樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)3.2正常人外周血DCs、膀胱癌患者外周血DCs及B7-H1阻斷后膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力膀胱癌患者外周血DCs與正常人外周血DCs相比，其刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力明顯降低，而加入B7-H1阻斷型抗體阻斷B7-H1后，膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力得到明顯提高（見圖3.2）。

圖3.2各組DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖能力的比較（*p0.05vs膀胱癌DCs組）膀胱癌DCs組）3.3B7-H1阻斷對膀胱癌患者外周血DCs分泌IL-10和IL-12水平的影響B(tài)7-H1阻斷后，膀胱癌患者外周血DCs分泌IL-10的水平明顯降低，而分泌IL-12的水平明顯增加（見圖3.3）。

圖3.3B7-H1阻斷對膀胱癌DCs分泌IL-10和IL-12水平的影響（*p0.05vs阻斷前）青島大學(xué)碩士學(xué)位論文4討論膀胱癌被認(rèn)為是一種具有免疫原性的腫瘤，其腫瘤內(nèi)存在大量腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞，這也是膀胱癌對卡介苗免疫治療敏感的原因。

然而有研究發(fā)現(xiàn)膀胱癌患者體內(nèi)存在著腫瘤獲得性免疫缺陷，特別是影響淋巴細(xì)胞的功能，而這也有可能是膀胱癌復(fù)發(fā)和惡性進展的重要原因之一[6]。

DCs作為當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)功能最強，也是惟一能激活初始T淋巴細(xì)胞的專職抗原提呈細(xì)胞，在誘導(dǎo)機體抗腫瘤免疫應(yīng)答過程當(dāng)中發(fā)揮著重要的作用[1-2]，而DCs的功能異常在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中亦起到至關(guān)重要的作用，但具體機制尚不清楚。

B7-H1是近些年來新發(fā)現(xiàn)的、與腫瘤的免疫逃逸生物學(xué)行為密切相關(guān)的一種具有抑制性作用的共刺激分子。

在正常的情況下，B7-H1主要表達于活化的單核細(xì)胞和DCs表面[7]，現(xiàn)已證明其在多種腫瘤細(xì)胞表面亦存在著過度表達，其與受體結(jié)合后能夠提供抑制性信號從而抑制相關(guān)免疫細(xì)胞的活化和增殖[8]。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)膀胱癌患者外周血DCs表面B7-H1和CD8+T細(xì)胞表面PD-1表達明顯上調(diào)，并且其表達水平與膀胱癌的病理分級和臨床分期密切相關(guān)[3]。

本研究主要檢測了膀胱癌DCs與正常人DCs免疫功能的差異以及B7-H1阻斷對其免疫功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力明顯低于正常人，而阻斷B7-H1后其刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力得到明顯提高，同時其分泌IL-10水平明顯降低，而分泌IL-12水平明顯增加。

這提示膀胱癌患者外周血DCs存在免疫功能障礙，其機制可能與DCs表面B7-H1的誘導(dǎo)高表達有關(guān)，而B7-H1阻斷能夠增強膀胱癌患者外周血DCs的免疫功能。

目前對B7-H1參與腫瘤免疫逃逸機制的研究多著重于對T細(xì)胞免疫應(yīng)答效應(yīng)階段，即腫瘤局部微環(huán)境的研究，針對B7-H1進行的靶向免疫治療亦多集中在效應(yīng)T細(xì)胞上，而我們研究發(fā)現(xiàn)B7-H1在T細(xì)胞免疫應(yīng)答的初始階段也可以通過抑制DCs的免疫功能，進而抑制機體的抗腫瘤免疫，促進膀胱癌免疫逃逸的發(fā)生，阻斷DCs上B7-H1的表達則能夠逆轉(zhuǎn)上述效應(yīng)。

因此，從抗腫瘤免疫應(yīng)答的初始階段和效應(yīng)階段兩方面入手，制定策略靶向干預(yù)B7-H1將有可能發(fā)揮更大、更全面的協(xié)同抗腫青島大學(xué)碩士學(xué)位論文瘤作用，這對于尋求和完善膀胱癌免疫治療的新策略有著重要的意義。

而DCs上B7-H1表達上調(diào)的具體機制及聯(lián)合靶向干預(yù)的效果尚有待進一步的深入研究。

結(jié)論膀胱癌患者外周血DCs與正常人外周血DCs相比，其刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力明顯降低，而加入B7-H1阻斷型抗體阻斷B7-H1后，膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力得到明顯提高；同時，在B7-H1阻斷后，膀胱癌患者外周血DCs分泌IL-10的水平明顯降低，而分泌IL-12的水平明顯增加。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文參考文獻[1]SiegelR,NaishadhamD,JemalA.Cancerstatistics,2013[J].CACancaerJClin,2013,63:11-30.[2]BrausiM,ColletteL,KunhK,etal.VariabilityintherecurrencerateatfirstfollowupcystoscopyafterTURinstageTaT1transitionalcellcarcinomaofthebladder:acombinedanalysisofsevenEORTCstudies[J].EurUrol,2002,41(5):523-531.[3]王義兵,傅斌.膀胱癌免疫逃逸的研究進展[J].天津醫(yī)藥,2012,40(1):84-86.[4]BanchereauJ,BriereF,Cauxc,etal.Immunobiologyofdendriticcells[J].AnnuRevImmunol,2000,18:767-811.[5]BanchereauJ,SteinmanRM.Dendriticcellsandthecontrolofimmunity[J].Nature,1998,392:245-252.[6]MansourM,LatzEandLevitzS.CryptococcusneoformansGlycoantigensAreCapturedbyMultipleLectinReceptorsandPresentedbyDendriticCells[J].TheJournalofImmunology,2006,176:3053-3061.[7]PirtskhalaishviliG,ShurinGV,GambottoS,etal.TransductionofdendriticcellwithBcl-xlincreasetheirresistancetoprostatecancerinducedapoptosisandantitumoreffectinmice[J].JImmunol,2000,165(4):1956-1964.[8]A.Folkl,D.Bienzle.Structureandfunctionofprogrammeddeath(PD)molecules[J].VeterinaryImmunologyandImmunopathology,2010,134:33-38.[9]SeoSK,SeoHM,JeongHY,etal.Co-inhibitoryroleoftcellassociatedB7-H1andB7-DCintheT-cellimmuneresponse[J].ImmunolLett,2006,102(2):222-228.[10]HaidongDong,LiepingChen.B7-H1pathwayanditsroleintheevasionoftumorimmunity[J].JMolMed,2003,81:281287.[11]紀(jì)傳彪,王永華,于芹超,等。

B7-H1及其受體PD-1在膀胱癌患者外周血免疫細(xì)胞中的表達及其臨床意義[J].臨床泌尿外科雜志,2013,28(3):196-198.青島大學(xué)碩士學(xué)位論文青島大學(xué)碩士學(xué)位論文綜述：

B7-H1與腫瘤免疫逃逸的研究現(xiàn)狀及展望綜述：

李賢軍審校：

于芹超副教授腫瘤，尤其是惡性腫瘤，已成為當(dāng)前對人類生命威脅最嚴(yán)重的疾病之一。

正常情況下，人體的免疫系統(tǒng)具有免疫監(jiān)視功能，能正確辨別出自己和非己物質(zhì)，并能對非己物質(zhì)作出相對應(yīng)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，對人體起到保護作用。

同樣，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等生物學(xué)行為中，也會伴隨出現(xiàn)一些非己新抗原，這些非己物質(zhì)，在機體免疫功能正常時，能被免疫系統(tǒng)辨識出來，從而抑制腫瘤的進一步發(fā)展，甚至將其清除。

然而，現(xiàn)實情況并非完全如此。

腫瘤在機體的免疫監(jiān)視下，仍然能發(fā)展，甚至發(fā)生轉(zhuǎn)移，也就是說，腫瘤發(fā)生了免疫逃逸，這往往與腫瘤細(xì)胞異常表達或者缺失某些免疫分子并逃避人體的免疫監(jiān)視有一定的關(guān)系[1]。

在機體在對抗腫瘤的免疫應(yīng)答機制中，T細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)起著主導(dǎo)作用。

但是，T細(xì)胞的激活、增殖均需依賴于抗原遞呈細(xì)胞遞呈相應(yīng)的抗原并提供共刺激信號。

目前研究所提出的雙信號理論也表明，淋巴細(xì)胞的激活，不僅需要抗原的刺激，還需要其他信號[2]。

其中，B7-H1（PD-L1,程序性死亡因子配體-1)，作為B7家族最新發(fā)現(xiàn)的共刺激分子，是近些年發(fā)現(xiàn)的、與腫瘤的免疫逃逸相關(guān)的一個重要的分子，當(dāng)與其相對應(yīng)的受體(PD-1)結(jié)合之后，可產(chǎn)生抑制性信號，從而誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Cytotoxiclymphocyte，CTL）發(fā)生凋亡，抑制T細(xì)胞的活化、增殖[3-4],目前認(rèn)為，這也是B7-H1誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生免疫逃逸的主要機制。

有動物實驗表明[3]，B7-H1與其受體的作用可誘導(dǎo)T細(xì)胞發(fā)生凋亡，進而實現(xiàn)腫瘤免疫逃逸或自身免疫耐受。

現(xiàn)已證實，人的B7-H1基因位于9號染色體上的p24區(qū)域，所編碼的跨膜糖蛋白屬于免疫球蛋白超家族。

B7H1在腫瘤免疫、免疫耐受等免疫應(yīng)答過程中，通過調(diào)控T細(xì)胞的激活、增殖和凋亡等過程而發(fā)揮作用。

B7H1在淋巴組織的細(xì)胞，如激活的T/B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等以及非淋巴組織細(xì)胞上廣泛表達。

除此以外，B7-H1也在如卵巢癌、黑色素瘤、食管癌、乳腺癌和胃癌等多種腫瘤組織中有異常表達。

[5]在實體腫瘤中，Konishi等[6]首先證實了B7-H1在肺癌中表達；Wu[7]等在2006年發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的腫瘤組織中有B7-H1的表達；青島大學(xué)碩士學(xué)位論文2009年，Gao[8]等在204例肝細(xì)胞癌的石蠟切片中證實了有B7-H1的表達存在；Ye[9]等在31例肝內(nèi)膽管癌患者的石蠟切片中均發(fā)現(xiàn)了B7-H1的表達存在；Dong[3]等用免疫組化的方法分析了19例結(jié)腸癌患者的樣本，從中發(fā)現(xiàn)10例患者存在B7-H1的表達；胰腺癌患者中B7-H1的表達是Nomi[10]等人在2007年第一次報道的；Hamanishi[11]等發(fā)現(xiàn)，卵巢癌中B7-H1的高表達與其不良預(yù)后相關(guān)；乳腺癌[12]、宮頸癌[13]、鼻咽癌[14]、尿道上皮癌[15]、腎癌[16]、腎母細(xì)胞瘤[17]、黑色素瘤[18]、腦瘤[19]、胸腺瘤[20]中都有B7-H1的高表達。

此外，血液系統(tǒng)的惡性腫瘤中，也存在B7-H1的高表達，如淋巴瘤[21]等。

而在正常對照組織中不表達或僅微量表達，提示B7H1可能參與腫瘤的免疫逃逸。

同時，B7H1還是一個存在于腫瘤細(xì)胞的抗凋亡受體。

該研究發(fā)現(xiàn)，B7H1胞內(nèi)段可以接受抗凋亡信號介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞形成分子屏障，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，并且使其對CTL、化療藥物等誘導(dǎo)的凋亡耐受，這種逆向信號的傳遞形成了腫瘤細(xì)胞表面的分子保護機制。

B7H1信號一方面可以向腫瘤細(xì)胞傳遞抗凋亡信號并調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化等，另一方面可以降低CTL對腫瘤細(xì)胞殺傷的敏感性，從而介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸。

此外，B7-H1也表達于腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，并且能在腫瘤微環(huán)境的作用下表達上調(diào)[22]。

腫瘤細(xì)胞還可以釋放免疫抑制性的細(xì)胞因子，如TGF-、IFN-、FasL等上調(diào)B7-H1的表達，進一步幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫反應(yīng)。

[23]進一步的研究發(fā)現(xiàn)，以單克隆抗體阻斷B7-H1或者其對應(yīng)的受體PD-1均可以觸發(fā)抗腫瘤的免疫應(yīng)答，也能增強抗腫瘤的免疫治療的療效。

[24]以B7-H1作為靶點，可以采用多種方法來治療腫瘤。

首先，可以應(yīng)用B7-H1單克隆抗體阻斷B7-H1來達到此目的。

自B7-H1分子發(fā)現(xiàn)以來，B7-H1分子在腫瘤組織中的表達已受到了腫瘤研究的普遍關(guān)注。

其如何參與介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸是研究其功能的熱點。

B7-H1在多種腫瘤組織的表達顯示其參與腫瘤發(fā)生和進展的作用。

現(xiàn)在已經(jīng)認(rèn)識到B7-H1/PD-1通路不僅參與了許多疾病的發(fā)生發(fā)展，如外周耐受、自身免疫病、慢性感染等，而且在腫瘤逃避機體殺傷中起了重要作用。

已有研究證實B7-H1與未知的非PD-1受體結(jié)合后誘導(dǎo)CTL凋亡，但是非PD-1受體的功能還沒有完全清楚。

應(yīng)用特異性B7H1單抗阻斷其與PD-1受體的結(jié)合有望成為治療腫瘤的新途徑。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文綜上所述，膀胱腫瘤的可通過多種機制逃避機體的免疫監(jiān)督，研究探明這些機制對我們尋找治療和預(yù)防膀胱癌的新策略有重要意義。

任何腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等過程都是多因素、多因子參與的復(fù)雜過程，這使我們的研究變得繁瑣而困難重重，但是我相信經(jīng)過我們共同的努力，一定可以找到突破的途徑。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文綜述參考文獻[1]NagarajS,GuptaK,PisarevV,eta1.AlteredrecognitionofantigenisamechanismofCD8+Tcelltoleranceincancer[J].NatMed,2007,13,828-835.[2]陳政良,朱錫華.淋巴細(xì)胞識別與激活的雙信號學(xué)說[J].免疫學(xué)雜志,2003,19(3):236-241.[3]DongH,StromeSE，SalomaoDR,etal.Tumor-associatedB7-H1promotesT-cellapoptosis:apotentialmechanismofimmuneevasion[J].NatMed,2002，8(8)：

793-800．[4]BlankC,GajewskiTF,MackensenA.InteractionofPD-L1ontumorcellswithPD-1ontumor-specificTcellsasamechanismofimmuneevasion:implicationsfortumorimmunotherapy.CancerImmunolImmunother2005;54(4):30714.[5]吳清松，黃東勝.B7H1及其受體病理作用的研究進展.國際外科學(xué)雜志，2010,37（3）：

187-190.[6]KonishiJ,YamazakiK,AzumaM,KinoshitaI,Dosaka-AkitaH,NishimuraM.B7-H1expressiononnon-smallcelllungcancercellsanditsrelationshipwithtumor-infiltratinglymphocytesandtheirPD-1expression.ClinCancerRes2004;10(15):50945100.[7]WuC,ZhuY,JiangJ,ZhaoJ,ZhangXG,XuN.Immunohistochemicallocalizationofprogrammeddeath-1ligand-1(PD-L1)ingastriccarcinomaanditsclinicalsignificance.ActaHistochem2006;108(1):1924.[8]GaoQ,WangXY,QiuSJ,YamatoI,ShoM,NakajimaY,etal..OverexpressionofPD-L1significantlyassociateswithtumoraggressivenessandpostoperativerecurrenceinhumanhepatocellularcarcinoma.ClinCancerRes2009;15(3):971979.[9]YeY,ZhouL,XieX,JiangG,XieH,ZhengS.InteractionofB7-H1onintrahepaticcholangiocarcinomacellswithPD-1ontumor-infiltratingTcellsasamechanismofimmuneevasion.JSurgOncol2009;100(6):500504.[10]NomiT,ShoM,AkahoriT,HamadaK,KuboA,KanehiroH,etal..Clinicalsignificanceandtherapeuticpotentialoftheprogrammeddeath-1ligandprogrammeddeath-1pathwayinhumanpancreaticcancer.ClinCancerRes2007;13(7):21512157.[11]HamanishiJ,MandaiM,IwasakiM,OkazakiT,TanakaY,YamaguchiK,etal..青島大學(xué)碩士學(xué)位論文Programmedcelldeath1ligand1andtumor-infiltratingCD8+Tlymphocytesareprognosticfactorsofhumanovariancancer.ProcNatlAcadSciUSA,2007;104(9):33603365.[12]GhebehH,MohammedS,Al-OmairA,QattanA,LeheC,Al-QudaihiG,etal..TheB7-H1(PD-L1)Tlymphocyte-inhibitorymoleculeisexpressedinbreastcancerpatientswithinfiltratingductalcarcinoma:correlationwithimportanthigh-riskprognosticfactors.Neoplasia2006;8(3):190198.[13]KarimR,JordanovaES,PiersmaSJ,KenterGG,ChenL,BoerJM,etal.Tumor-expressedB7-H1andB7-DCinrelationtoPD-1+T-cellinfiltrationandsurvivalofpatientswithcervicalcarcinoma.ClinCancerRes2009;15(20):63416347.[14]ZhangF,LiuZ,CuiY,WangG,CaoP.TheclinicalsignificanceoftheexpressionofcostimulatorymoleculePD-L1innasopharyngealcarcinoma.LinChungErBiYanHouTouJingWaiKeZaZhi2008;22(9):408410.[15]InmanBA,SeboTJ,FrigolaX,DongH,BergstralhEJ,FrankI,etal..PD-L1(B7-H1)expressionbyurothelialcarcinomaofthebladderandBCGinducedgranulomata:associationswithlocalizedstageprogression.Cancer,2007;109(8):14991505.[16]ThompsonRH,GillettMD,ChevilleJC,LohseCM,DongH,WebsterWS,etal..CostimulatoryB7-H1inrenalcellcarcinomapatients:indicatoroftumoraggressivenessandpotentialtherapeutictarget.ProcNatlAcadSciUSA,2004;101(49):1717417179.[17]RouthJC,AshleyRA,SeboTJ,LohseCM,HusmannDA,KramerSA,etal..B7-H1expressionin