體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）

2 3 6 9 9 隨著基因遞送載體和基因編輯等生物技術(shù)的快速發(fā)展，提供了新的治療方案?；蛑委煯a(chǎn)品一般通過將外源基因體外（exvivo）基因?qū)雰煞N方式。體內(nèi)基因治療產(chǎn)品將外揮治療作用，而體外基因治療產(chǎn)品一般在體外將外源基因的控制、生產(chǎn)模式和質(zhì)量風(fēng)險等方面存在一定差異，因此，行分類規(guī)范。為了規(guī)范和指導(dǎo)體內(nèi)基因治療產(chǎn)品按照藥品的研發(fā)規(guī)本指導(dǎo)原則主要針對產(chǎn)品申報(bào)上市階段的藥學(xué)研究制體內(nèi)通過對人體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)進(jìn)行修飾、表達(dá)外源基因、操縱細(xì)胞基因表達(dá)或調(diào)控細(xì)胞生物學(xué)特性等方式以達(dá)到治病毒產(chǎn)品在設(shè)計(jì)和作用機(jī)制上也可能具有基因治療產(chǎn)品的合相應(yīng)的技術(shù)要求。例如，基于酶的基因編輯技術(shù)（如布的重組蛋白質(zhì)類生物制品相關(guān)指導(dǎo)原則中的藥學(xué)研究要體內(nèi)基因治療產(chǎn)品的藥學(xué)研究需考慮各類產(chǎn)品的特殊病毒載體復(fù)制特性的變化可能會引起病毒的非特異性感染物學(xué)特性發(fā)生不可逆的改變，因此，需嚴(yán)格論證產(chǎn)品設(shè)計(jì)、與臨床試驗(yàn)用樣品在生產(chǎn)工藝和質(zhì)量方面的對比或橋接分的實(shí)施需建立在與研發(fā)階段相適應(yīng)的可比性研究的基礎(chǔ)上，改造方法，載體的復(fù)制特性，基因組整合能力和整合傾向，相容性相關(guān)風(fēng)險（如產(chǎn)品的吸附、包裝材料的滲出等）差異，本部分主要針對當(dāng)前主要的體內(nèi)基因治療產(chǎn)品類型本指導(dǎo)原則中的病毒載體類產(chǎn)品是指通過病毒載體將體是指經(jīng)改造用于介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)移和/或表達(dá)的病毒顆粒，的選擇、設(shè)計(jì)應(yīng)根據(jù)載體特性、作用機(jī)制、人群抗體水平、臨床適應(yīng)癥、給藥途徑和給藥頻率（即再治療的潛在需要）目的基因是指產(chǎn)品中主要發(fā)揮治療或調(diào)控作用的基因和安全性等。由天然序列經(jīng)密碼子優(yōu)化、基因突變、重組、并在開發(fā)過程中對序列的靶向特異性和上靶/脫靶風(fēng)險進(jìn)行目的基因表達(dá)調(diào)控元件的選擇和設(shè)計(jì)需根據(jù)目標(biāo)細(xì)胞元件的致瘤/促瘤性進(jìn)行評估，避免使用具有潛在致瘤/促瘤的調(diào)控元件，需對元件相應(yīng)的調(diào)控特性進(jìn)行確認(rèn)。病毒載體的選擇和設(shè)計(jì)一般以有效遞送和表達(dá)目的基（1）研究野毒株或載體病毒在人群中的基礎(chǔ)感染率和（4）最少化病毒載體與人體易感病毒或內(nèi)源性病毒的（5）病毒載體的感染特異性/嗜性和基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率對產(chǎn)整合型病毒載體相比非整合型病毒載體可能具有更長術(shù)方法對載體進(jìn)行安全性篩選和/或設(shè)計(jì)改造以降低插入風(fēng)/或確認(rèn)載體的非整合特點(diǎn)。例如，對于AAV（Adeno-非復(fù)制型病毒載體理論上在體內(nèi)引起病毒擴(kuò)散或感染復(fù)制型病毒載體的設(shè)計(jì)和生產(chǎn)病毒包裝系統(tǒng)的選擇應(yīng)充分考慮生產(chǎn)和使用過程中通過同源或非同源重組產(chǎn)生復(fù)制型本指導(dǎo)原則中的核酸類產(chǎn)品是指具有特定功能的核酸見的活性成分為RNA或DNA。根據(jù)作用機(jī)制的不同，核酸的兩種或兩種以上成分組合形成功能系統(tǒng)發(fā)揮作用，如CRISPR-Cas系統(tǒng)。核酸類產(chǎn)品進(jìn)入人體細(xì)胞往往需要借助也可協(xié)助核酸的轉(zhuǎn)運(yùn)?；蚪M缺口或雙鏈斷裂引起的基因錯誤修復(fù)和基因組結(jié)構(gòu)（5）核酸類型和結(jié)構(gòu)與其體內(nèi)的表達(dá)持續(xù)時間是否相本指導(dǎo)原則中的細(xì)菌載體類產(chǎn)品是指經(jīng)基因修飾后作本指導(dǎo)原則中的生產(chǎn)用物料是指生產(chǎn)過程中所使用的所有生物材料和化學(xué)材料，包括起始原材料（如細(xì)胞基質(zhì)、以及生產(chǎn)用耗材（如培養(yǎng)袋、儲液袋、移液管路、濾膜等）等。生產(chǎn)用物料與產(chǎn)品的質(zhì)量、安全性和有效性密切相關(guān)，質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄單元中，并盡可能降低Rep/Cap基因品總論”的要求，種子批的檢定一般包括菌落形態(tài)、鑒別、染色鏡檢、生長特性、生化反應(yīng)特征、活率、抗生素抗性、活性分析（如適用）等，細(xì)菌種子批應(yīng)無其他細(xì)菌、真菌、體內(nèi)基因治療產(chǎn)品開發(fā)中可能適用的生產(chǎn)/包裝細(xì)胞類型較風(fēng)險相對較高，建議謹(jǐn)慎選用。如使用具有成瘤性的細(xì)胞，病毒載體應(yīng)使用不含同源序列或同源序列較少的細(xì)胞系用為了確認(rèn)限定代次內(nèi)的生產(chǎn)/包裝細(xì)胞能生產(chǎn)出質(zhì)量穩(wěn)病毒載體種子和包裝用病毒等可建庫的病毒種子應(yīng)建目應(yīng)根據(jù)種子批的特征、培養(yǎng)歷史、建庫過程等具體確定，病毒種子批的傳代穩(wěn)定性研究應(yīng)能代表或模擬實(shí)際生材與直接接觸的溶液、生產(chǎn)中間產(chǎn)物等應(yīng)有良好的相容性。起始于細(xì)菌種子批發(fā)酵或生產(chǎn)/包裝細(xì)胞培養(yǎng)的生產(chǎn)工收獲時間等進(jìn)行充分的研究，制定適合生產(chǎn)的條件和參數(shù)。和包裝準(zhǔn)確性，減少空載體、錯誤包裝載體、無活性載體、液的外源因子檢查因產(chǎn)品病毒不能被充分中和而受到干擾或降低工藝和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。培養(yǎng)階段若使用了輔助病毒、體系等，其選擇、用量和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)基于制劑的處方開發(fā)確定。輔料質(zhì)量應(yīng)滿足其預(yù)期功能，并符合《中國藥典》通則“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制”的相關(guān)要求，優(yōu)先選用符合藥用標(biāo)準(zhǔn)的輔料。如使用多種來源（如動物、植物與合成來源）或多個供應(yīng)商的輔料，尤其是脂質(zhì)體等復(fù)雜的輔料，應(yīng)按照來源和輔料變更風(fēng)險分別開展相應(yīng)的產(chǎn)品特性檢定和可比性研究，以證明采用不同來源輔料所生產(chǎn)的產(chǎn)品具有等效性。處方中若含有在人體內(nèi)首次使用或在擬定給藥途徑中核酸類產(chǎn)品常需配合使用一定的化學(xué)遞送材料/介質(zhì)以擇需要有合理的依據(jù)，對材料/介質(zhì)本身一般應(yīng)考慮材料/介響的工藝參數(shù)，關(guān)注復(fù)合/包封過程和純化步驟對復(fù)合/包封完整性和穩(wěn)定性等的影響，合理設(shè)定過程中的控制項(xiàng)據(jù)進(jìn)行可比性研究，但應(yīng)關(guān)注安全性、純度、雜質(zhì)、結(jié)構(gòu)、般不建議在確證性臨床試驗(yàn)開展階段或結(jié)束后對生產(chǎn)工藝各步工藝的可控性、中間產(chǎn)物的質(zhì)量和工藝性能的穩(wěn)定性，果制定糾正方案。此外，驗(yàn)證研究可能還包括（但不限于）究一般應(yīng)至少包含代表性臨床樣品批次和商業(yè)化工藝驗(yàn)證毒載體的遺傳穩(wěn)定性特點(diǎn)評估突變對產(chǎn)品安全性和有效性胞后的基因序列分析等，綜合進(jìn)行病毒的鑒別和結(jié)構(gòu)分析。生物學(xué)活性是反映產(chǎn)品質(zhì)量和臨床有效性的重要指標(biāo)。的轉(zhuǎn)染/感染活性與產(chǎn)品在細(xì)胞內(nèi)的基因替代、補(bǔ)償、阻斷、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是指生產(chǎn)或儲存過程中產(chǎn)生的非預(yù)期的、為控制產(chǎn)品質(zhì)量，建議對各類產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行分離和要時可能需要結(jié)合多種原理的檢測方法對產(chǎn)品的組分進(jìn)行產(chǎn)品在生產(chǎn)和儲存過程中可能會產(chǎn)生多種非預(yù)期的變異體，考慮將變異體作為產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)或產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行控制。毒相關(guān)的基因治療產(chǎn)品，一般建議將可復(fù)制型腺病毒量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)，DNA殘留片段的大小Papillomavirus）E6/E7基因等，應(yīng)分別進(jìn)行殘留控制。對于污染物一般是指生產(chǎn)過程中引入的微生物或相關(guān)組分，病毒載體類產(chǎn)品可通過諸如總顆粒數(shù)、基因組拷貝數(shù)、需對遞送系統(tǒng)各組分等特殊輔料含量（如適用）進(jìn)行研究。其他特性分析可能還包括如外觀、澄清度、重要輔料含的忠實(shí)性（fidelity）和編輯效率，編輯系統(tǒng)的生產(chǎn)和質(zhì)量控基因編輯工具的脫靶風(fēng)險和脫靶位點(diǎn)的分析需要結(jié)合多方度測序等方法對潛在的脫靶位點(diǎn)和基因組重排的情況進(jìn)行分安全性和含量檢測相關(guān)的質(zhì)量控制方法需在臨床試驗(yàn)開品或理化對照品，并對其進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量研究和放行檢測。括長期穩(wěn)定性、加速穩(wěn)定性、影響因素研究、運(yùn)輸穩(wěn)定性、研究期限通常應(yīng)覆蓋產(chǎn)品/樣品的實(shí)際貯存或使核酸及復(fù)合物的理化特性和生物學(xué)活性的變化，如包封率、細(xì)菌載體類產(chǎn)品在適當(dāng)?shù)膬龃嬉汉蛢龃鏈囟认沦A存一影響，應(yīng)對容器和密封系統(tǒng)進(jìn)行相容性研究和密封性研究。研究條件的設(shè)定應(yīng)考慮容器和密封系統(tǒng)在特殊條件下的相噴裝置、無針注射器等，需考慮相關(guān)醫(yī)療器械的研發(fā)要求，clinic