人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA試劑盒操作步驟

第第頁人抗內(nèi)因子抗體（IFA）ELISA試劑盒操作步驟本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：48T25ng/L800ng/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：48T25ng/L800ng/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本抗內(nèi)因子抗體（IFA）含量。試驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人抗內(nèi)因子抗體（IFA）水平。用純化的人抗內(nèi)因子抗體（IFA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抗內(nèi)因子抗體（IFA），再與HRP標(biāo)記的抗內(nèi)因子抗體（IFA）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗內(nèi)因子抗體（IFA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人抗內(nèi)因子抗體（IFA）濃度。試劑盒構(gòu)成1.30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶；2.酶標(biāo)試劑6ml×1瓶3.酶標(biāo)包被板12孔×8條；4.樣品稀釋液6ml×1瓶5.顯色劑A液6ml×1瓶；6.顯色劑B液6ml×1/瓶7.停止液6ml×1瓶；8.標(biāo)準(zhǔn)品（48ng/ml）0.5ml×1瓶9.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶；10.說明書1份11.封板膜2張；12.密封袋1個(gè)150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3.8.洗滌：操作同5.9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.停止：每孔加停止液50μl，停止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。Elisa試劑盒組織結(jié)構(gòu)：1、血清：操作過程中躲避任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞快速小心地分別。2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。5、保管：假如樣品不趕忙使用，應(yīng)將其分成小部分70℃保管，躲避反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。假如血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。注意事項(xiàng)：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保管。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以躲避試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間掌控在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，介紹使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋確定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最終乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以躲避交叉污染。6．底物請(qǐng)避光保管。7．嚴(yán)格依照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必需以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．全部樣品