臨床微生物標(biāo)本處理及操作流程

臨床微生物標(biāo)本處理及操作流程臨床微生物檢驗(yàn)流程示意臨床標(biāo)本留取環(huán)節(jié)一運(yùn)送實(shí)驗(yàn)室環(huán)節(jié)二分析前分析中標(biāo)本合格？環(huán)節(jié)三接種培養(yǎng)檢測(cè)門(mén)診病房診所不合格合格環(huán)節(jié)四

環(huán)節(jié)五分析后報(bào)告環(huán)節(jié)六SOP

QCIQ培養(yǎng)基、冰箱溫箱、氣體直截了當(dāng)檢測(cè)儀器設(shè)備、試劑EQA標(biāo)本標(biāo)本合格判定SOP對(duì)每個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行控制,構(gòu)成質(zhì)量保證體系+內(nèi)容微生物鑒定標(biāo)本處理藥敏試驗(yàn)標(biāo)本處理血培養(yǎng)腦脊液培養(yǎng)呼吸道標(biāo)本(痰標(biāo)本、咽部標(biāo)本)尿培養(yǎng)生殖道標(biāo)本培養(yǎng)抽吸物和組織標(biāo)本的培養(yǎng)(需氧、厭氧培養(yǎng))糞便培養(yǎng)血培養(yǎng)

BloodCulture腦脊液

CEREBROSPINALFLUID嚴(yán)格無(wú)菌操作soap腦脊液

CEREBROSPINALFLUID無(wú)菌操作,腰椎穿刺采樣最少1mL,最好>5mL打入3個(gè)小管中,以第二根小管送檢培養(yǎng)分枝桿菌培養(yǎng)標(biāo)本需要2mL以上,置于4℃保存即時(shí)送檢絕對(duì)不能冷藏！呼吸道標(biāo)本

RespiratoryCultures上呼吸道標(biāo)本

UpperRespiratoryTractSpecimens下呼吸道標(biāo)本

LowerRespiratoryTractSpecimens

下呼吸道感染

LowerRespiratoryTractInfections

急性支氣管炎

社區(qū)獲得性肺炎

院內(nèi)獲得性肺炎

免疫妥協(xié)患者肺炎下呼吸道標(biāo)本

LowerRespiratoryTractSpecimen自然咳痰誘導(dǎo)痰

氣管內(nèi)吸取物支氣管肺泡灌洗液保護(hù)性毛刷支氣管灌洗液

肺部組織標(biāo)本質(zhì)量帶血痰唾液or誘導(dǎo)痰(?)膿痰粘液樣痰用革蘭氏染色來(lái)評(píng)估呼吸道標(biāo)本是否合格痰標(biāo)本>10鱗狀上皮細(xì)胞/每低倍視野=拒收有PMN的痰標(biāo)本,中性粒細(xì)胞多,且鱗狀上皮細(xì)胞特別少=接受,進(jìn)行培養(yǎng)粘液絲細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌胞內(nèi)細(xì)菌——提示感染柱狀纖毛上皮細(xì)胞肺泡巨噬細(xì)胞滑石顆粒淀粉樣小體見(jiàn)于遷延長(zhǎng)時(shí)間的呼吸道疾病彈性纖維庫(kù)什曼螺旋體呈鏈排列的革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陰性球桿菌。缺乏鱗狀上皮細(xì)胞提示混合厭氧菌感染您看見(jiàn)多少種形態(tài)？幾種細(xì)菌的混合形態(tài),缺乏鱗狀上皮細(xì)胞=混合厭氧菌感染。假如是呼吸道標(biāo)本估計(jì)是吸入性肺炎。報(bào)告臨床醫(yī)生“提示吸入性肺炎”

呼吸道標(biāo)本中未被染色的,有折射的桿菌=抗酸桿菌呈鏈排列的革蘭陽(yáng)性球菌？或革蘭陽(yáng)性分枝桿菌？肺中的結(jié)節(jié)吸出物,不規(guī)則“球菌”,分叉,無(wú)短鏈,鏈的末端的呈尖狀,都證明是分枝狀的革蘭陽(yáng)性桿菌,估計(jì)是放線(xiàn)菌或諾卡菌(通常來(lái)自腦或肺組織的標(biāo)本)肺炎-可接受的不合格標(biāo)本評(píng)述特別少的鱗狀上皮細(xì)胞<10個(gè)每低倍視野許多鱗狀上皮>10個(gè)/低倍視野能夠在玻片上看到許多鱗狀上皮細(xì)胞,說(shuō)明在采集時(shí)受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。特別多的中性粒細(xì)胞特別少有或沒(méi)有中性粒細(xì)胞免疫抑制的病人也會(huì)出現(xiàn)中性粒細(xì)胞減少中性粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞都特別少的標(biāo)本需要培養(yǎng)特別多中性粒細(xì)胞混合有形態(tài)多樣的細(xì)菌(革蘭氏陰性桿菌,紡錘形,革蘭氏陽(yáng)性球菌)吸入性肺炎標(biāo)本革蘭氏染色的典型形式,培養(yǎng)只會(huì)培養(yǎng)出正常菌群,因此革蘭氏染色是用于診斷的方法。許多或中等量的中性粒細(xì)胞,以一種形態(tài)的細(xì)菌為主酵母菌樣,酵母菌是一種特別少引起肺炎的細(xì)菌,常由口腔污染成雙革蘭氏陽(yáng)性球菌,短鏈=肺炎鏈球菌革蘭氏陽(yáng)性菌成群排列=金黃色葡萄球菌革蘭氏陰性球桿菌(小)=流感嗜血桿菌革蘭氏陰性桿菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他腸道菌革蘭氏陰性雙球菌=卡他莫拉菌許多不著色的有折射的桿狀細(xì)菌估計(jì)是肺結(jié)核,抗酸桿菌不能被革蘭氏染色所染色。呼吸道標(biāo)本的涂片評(píng)估模式尿培養(yǎng)標(biāo)本

UrineCulture尿道感染每年850萬(wàn)例尿路感染,90%為女性1/2、5個(gè)婦女在一生中會(huì)得UTI下行性感染:血流腎臟膀胱(金黃色葡萄球菌,酵母菌,結(jié)核分枝桿菌)上行性感染:尿道膀胱腎盂血流用于尿液培養(yǎng)的標(biāo)本

腎活檢或腎抽吸物(外科)

恥骨上膀胱抽吸物(孕婦,嬰兒,全膀胱)

微導(dǎo)管尿(內(nèi)部導(dǎo)管和外部導(dǎo)管)-老年人

中段尿,清潔留取——急診成年人

留置導(dǎo)尿管中采集的標(biāo)本(經(jīng)常被三種以上細(xì)菌污染)尿液標(biāo)本

采集中段尿時(shí)要先用肥皂清洗女性的外陰和男性的外生殖器包括包皮內(nèi),然后用清水沖洗

長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管的患者應(yīng)在更換新管時(shí)留取尿標(biāo)本。

做厭氧培養(yǎng)時(shí)應(yīng)恥骨上膀胱穿刺采集尿。尿液運(yùn)輸方法如不能及時(shí)送檢,需冷藏。4小時(shí)延遲送檢,須廢棄標(biāo)本。

過(guò)夜培養(yǎng)否自然排尿是接著培養(yǎng);隨后觀察;發(fā)送初步的培養(yǎng)陰性報(bào)告24小時(shí)后仍不生長(zhǎng)則發(fā)出最終的生長(zhǎng)陰性報(bào)告>105CFU/ml1organism一種以上細(xì)菌生長(zhǎng)多種腸道細(xì)菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標(biāo)本純培養(yǎng)的機(jī)會(huì)致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的注釋)ID&Suscept、鑒定&藥敏<105CFU/ml)1-2種機(jī)會(huì)致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的注釋)進(jìn)行鑒定和藥敏,若數(shù)量<105CFU/ml,仍然對(duì)估計(jì)的致病菌進(jìn)行操作三種或以上的機(jī)會(huì)致病菌包括酵母菌多種腸道細(xì)菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標(biāo)本若為腐生葡萄球菌,則處理與其他致病菌相同;其他的凝固酶陰性葡萄球菌則視為污染過(guò)夜培養(yǎng)否導(dǎo)管尿是接著培養(yǎng);隨后觀察;發(fā)送初步的培養(yǎng)陰性報(bào)告24小時(shí)后仍不生長(zhǎng)則發(fā)出最終的生長(zhǎng)陰性報(bào)告>104CFU/ml一種以上細(xì)菌生長(zhǎng)多種腸道細(xì)菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標(biāo)本

純培養(yǎng)的機(jī)會(huì)致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的注釋)鑒定&藥敏<104CFU/ml1-2種機(jī)會(huì)致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的以上相同注釋進(jìn)行鑒定和藥敏,若數(shù)量<104CFU/ml,仍然對(duì)估計(jì)的致病菌進(jìn)行操作檢出三種或以上的機(jī)會(huì)致病菌包括酵母菌(病人的首份尿標(biāo)本顯示如此的培養(yǎng)結(jié)果,若重復(fù)的尿標(biāo)本仍然培養(yǎng)出相同的細(xì)菌,則需要對(duì)菌株進(jìn)行操作)多種腸道細(xì)菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標(biāo)本、若為腐生葡萄球菌,則處理與其他致病菌相同;其他的凝固酶陰性葡萄球菌則視為污染評(píng)價(jià)尿培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)病人標(biāo)本特征有意義菌落形成單位/ml(非皮膚污染)無(wú)癥狀者清潔留取100,000有癥狀者,不固定的清潔留取10,0001-2種機(jī)會(huì)致病菌。若多于2種則認(rèn)為尿液被污染有癥狀,性活躍女性清潔留取100個(gè)純菌落腸桿菌科菌男性清潔留取1000個(gè),機(jī)會(huì)致病菌任何人內(nèi)置導(dǎo)尿管100,000任意數(shù)量機(jī)會(huì)致病菌任何人通過(guò)直截了當(dāng)導(dǎo)管獲得100任意數(shù)量機(jī)會(huì)致病菌任何人外科手術(shù)從腎臟獲得任意數(shù)量(肉湯增菌,厭氧菌)任何人經(jīng)皮穿刺膀胱吸取任意數(shù)量(肉湯增菌,厭氧菌)任何人任意標(biāo)本任何數(shù)量金黃色葡萄球菌不同人有爭(zhēng)議任何數(shù)量的酵母菌出現(xiàn)如下情況時(shí),如何判斷？尿常規(guī)結(jié)果尿培養(yǎng)結(jié)果估計(jì)原因WBC－PRO－計(jì)數(shù)<105無(wú)泌尿系統(tǒng)感染W(wǎng)BC>+PRO>+計(jì)數(shù)<105重復(fù)送檢,檢查取樣和保存條件是否符合要求,通知實(shí)驗(yàn)室為重復(fù)檢查。WBC>+PRO>+計(jì)數(shù)>105培養(yǎng)出一種致病菌預(yù)示患者泌尿系統(tǒng)感染。按藥敏結(jié)果選擇性用藥。WBC>+PRO>+計(jì)數(shù)>105培養(yǎng)出大于兩種致病菌患者泌尿系統(tǒng)估計(jì)感染,但標(biāo)本估計(jì)被污染,應(yīng)重復(fù)送檢。WBC<++*/－PRO－計(jì)數(shù)>105培養(yǎng)出大于兩種致病菌標(biāo)本污染生殖道標(biāo)本

LowerGenitalTractSpecimens女性生殖道標(biāo)本送檢宮頸或?qū)m頸內(nèi)部:淋病奈瑟菌,沙眼衣原體,人乳頭瘤病毒陰道高位拭子:酵母菌,陰道毛滴蟲(chóng),細(xì)菌性陰道感染肛門(mén)或直腸拭子:淋病奈瑟菌,B群鏈球菌(+陰道拭子)女性下生殖道標(biāo)本采集早發(fā)B群鏈球菌病

1%的新生兒因母親定植(10-30%的孕婦)發(fā)展為EOD50%病死率

25%的美國(guó)女性在L&D期間得到IV預(yù)防長(zhǎng)期病癥包括:在30%以上的新生兒中產(chǎn)生嚴(yán)重精神運(yùn)動(dòng)發(fā)展障礙Adriaanseetal、NeonatalearlyonsetgroupBstreptococcalinfection:anine-yearretrospectivestudyinatertiarycarehospital、JPerinatMed、1996;24:531–538在孕期35～37周時(shí)的普查培養(yǎng)陰道和直腸拭子肉湯過(guò)夜增菌接種于血平板上再孵育過(guò)夜和鑒定可疑菌落任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好預(yù)防分娩時(shí)快速檢測(cè)敏感性不夠男性生殖道標(biāo)本送檢

男性的生殖道致病菌與女性絕大部分一致;

尿道炎通常由淋病奈瑟氏菌或非淋病奈瑟氏菌引起;

估計(jì)并發(fā)于生殖器潰瘍;淋病奈瑟氏菌感染

擠壓尿道或直截了當(dāng)獲取尿道口分泌物;

直截了當(dāng)涂片

假如培養(yǎng),須直截了當(dāng)接種溫暖的篩選性平板,保溫并即刻送微生物室培養(yǎng)。任何不能及時(shí)送檢的生殖道標(biāo)本,都應(yīng)采納運(yùn)送培養(yǎng)基采樣保存。禁止冷藏傷口、皮膚、組織

Wound、Skin、Tissue標(biāo)本采樣和送檢

臨床常常送檢膿液和滲出液的拭子給實(shí)驗(yàn)室做檢查。風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)本不足量拭子干燥拭子吸附細(xì)菌,難于釋放到平板培養(yǎng)

盡估計(jì)抽吸或?qū)⑹米由钊雮?緊貼傷口前沿取樣深部傷口和特別原因造成的傷口,如動(dòng)物咬傷,應(yīng)考慮厭氧培養(yǎng);

發(fā)現(xiàn)評(píng)述出現(xiàn)鱗狀上皮細(xì)胞提示標(biāo)本采集技術(shù)只是關(guān);培養(yǎng)出來(lái)的估計(jì)是皮膚正常菌群大量的中性粒細(xì)胞假如查見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌,則更有意義。大量的中性粒細(xì)胞染色多樣染色陽(yáng)性和陰性,小的細(xì)菌混合有厭氧或兼性厭氧菌感染出現(xiàn)少量破碎的中性粒細(xì)胞和比較大的面包車(chē)樣的染色不定的桿菌估計(jì)是梭菌引起的組織壞死,緊急外科手術(shù),產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的氣性壞疽特別少有中性粒細(xì)胞,然而有其他體細(xì)胞患者不能產(chǎn)生足夠的免疫反應(yīng)或微生物不能趨化中性粒細(xì)胞(如球菌)。仍然高度懷疑細(xì)菌病因。細(xì)胞內(nèi)微生物細(xì)菌感染成塊的小的灰白的染色不規(guī)則的陽(yáng)性成鏈的球菌假如分離自膿腫,提示咽峽炎鏈球菌(米勒鏈球菌)感染。特別細(xì)小的革蘭氏陰性桿菌特別是從淋巴結(jié)或組織中分離的,估計(jì)是生物恐怖試劑(布魯氏桿菌,耶爾森,弗朗西斯)要在風(fēng)廚中操作。平板用膠條密封在生物安全柜中操作,不能夠嗅標(biāo)本。組織和抽吸物涂片檢查胃腸道標(biāo)本(略)微生物鑒定微生物鑒定(1)血平皿上的菌落形態(tài)革蘭陽(yáng)性細(xì)菌所有的鏈球菌β-溶血鏈球菌α-溶血鏈球菌與肺炎鏈球菌葡萄球菌屬腸道革蘭陰性桿菌沙門(mén)菌屬,志賀菌屬假單胞菌屬嗜血桿菌屬微生物鑒定(2)奈瑟菌屬、莫拉菌屬不動(dòng)桿菌屬布氏桿菌屬、巴斯德菌屬芽胞桿菌屬產(chǎn)單核李斯特菌酵母菌屬藥敏試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)特別藥敏試驗(yàn)

MRSA

克林霉素耐藥的葡萄球菌

VISA或VRSA

青霉素耐藥的葡萄球菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶

紙片擴(kuò)散法-測(cè)量抑菌圈(1)使用透射光觀察

:

Staphylococcusspp、葡萄球菌屬

linezolid利奈唑烷

oxacillin苯唑西林

vanycin萬(wàn)古