《蛋白抗體類生物大分子試劑的質(zhì)量表征與分析技術(shù)》

北京義翹神州科技股份有限公司蛋白/抗體類生物大分子試劑質(zhì)量表征及分析技術(shù)CONTENT義翹神州123生物大分子質(zhì)量表征概述質(zhì)量表征之理化性質(zhì)分析質(zhì)量表征之結(jié)合活性及生物活性分析4生物大分子開發(fā)中的質(zhì)量表征及應(yīng)用案例01義翹神州生物大分子質(zhì)量表征概述義翹神州結(jié)構(gòu)分析理化性質(zhì)生物活性結(jié)合活性序列與修飾肽圖（LC-MS/MS）N端和C端序列分析（LC-MS/MS）二硫鍵分析（LC-MS/MS）糖型分析，等電點(diǎn)，游離巰基分析二級(jí)結(jié)構(gòu)圓二色光譜（CD）高級(jí)結(jié)構(gòu)X射線衍射法（X-ray)核磁共振波譜法(NMR)冷凍電鏡濃度：UV,BCA純度：SDS,SEC-HPLC分子量：SEC-MALS粒徑及聚集狀態(tài)：DLS酶聯(lián)免疫吸附法：ELISA流式細(xì)胞術(shù)：FACS免疫組化：IHC免疫熒光：IF免疫印跡：WB免疫共沉淀：Co-IP表面等離子共振：SPR生物膜干涉：BLI補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒（CDC）ADCC及ADCP細(xì)胞增殖試驗(yàn)殺傷活性中和試驗(yàn)細(xì)胞分泌試驗(yàn)酶活性抑制血凝活性抑制生物大分子質(zhì)量分析及檢測(cè)技術(shù)蛋白表達(dá)技術(shù)平臺(tái)抗體開發(fā)技術(shù)平臺(tái)質(zhì)量表征分析技術(shù)平臺(tái)生物大分子技術(shù)平臺(tái)義翹神州義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題理化性質(zhì)細(xì)胞/酶活性結(jié)合活性

濃度及SDS純度檢測(cè)HPLC純度及相對(duì)分子量檢測(cè)MALS絕對(duì)分子量及聚集檢測(cè)DLS粒徑及均一性檢測(cè)ADCC&ADCP檢測(cè)CDC檢測(cè)

中和活性檢測(cè)

細(xì)胞增殖、分泌酶、激酶活性ELISA檢測(cè)WB/IP檢測(cè)IHC/IF檢測(cè)FACS檢測(cè)SPR/BLI親和力檢測(cè)02義翹神州質(zhì)量表征之理化性質(zhì)分析義翹神州添加標(biāo)題0103050204定量：UV/BCA電泳純度、分子量：SDS尺寸排阻高效液相色譜純度、分子量：SEC-HPLC分子量、聚集態(tài)/碎片：SEC-MALS粒徑與粒徑分布：DLS穩(wěn)定性：凍融、加速、實(shí)時(shí)、模擬運(yùn)輸穩(wěn)定性06義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步蛋白質(zhì)的定量方法原理紫外分光光度法（UV280）蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的氨基酸，其吸收高峰在280nm波長處，且在此波長內(nèi)吸收峰的光密度值與其濃度成正比關(guān)系BCA比色法在堿性溶液中，蛋白質(zhì)將二價(jià)銅還原為一價(jià)銅，再與BCA產(chǎn)生紫色復(fù)合物福林-酚試劑法在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅產(chǎn)生復(fù)合物，還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑產(chǎn)生藍(lán)色化合物考馬斯亮藍(lán)法考馬斯亮藍(lán)G-250能與蛋白質(zhì)通過范德華相互作用形成蛋白質(zhì)-考馬斯亮藍(lán)藍(lán)色復(fù)合物雙縮脲法在堿性條件下，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵與銅可產(chǎn)生紫色絡(luò)合物義翹神州純度/分子量聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS尺寸排阻色譜法SEC-HPLC制備凝膠處理樣品樣品點(diǎn)樣電泳染色，脫色凝膠成像分析尺寸排阻色譜(SEC)常用于進(jìn)行基于分子量的生物分子分離。通過比較待測(cè)蛋白和標(biāo)準(zhǔn)蛋白的洗脫保留時(shí)間計(jì)算相對(duì)分子量義翹神州蛋白絕對(duì)分子量聚集態(tài)和純度抗體/抗原結(jié)合比蛋白復(fù)合物分析多角度靜態(tài)光散射MALSMALS（fromwyatt)多角度靜態(tài)光散射應(yīng)用技術(shù)原理：散射光強(qiáng)度與摩爾質(zhì)量、濃度、折光指數(shù)增量（dn/dc）的二次方成正比：義翹神州SEC-MALS測(cè)定蛋白分子量、聚集態(tài)67.4kDa137.4kDa單體二聚體峰MW(kDa)質(zhì)量（μg）百分比%167.484.1297.22137.42.442.8Peak1Peak2MassesInjectedMass(μg)0.000.00CalculatedMass(μg)84.122.44MassRecovery(%)n/an/aMassFraction(%)97.22.8Molarmassmoments(g/mol)6.746×1041.374×105Mn(±0.154%)(±1.057%)6.756×1041.370×105Mp(±0.044%)(±1.012%)Mvn/an/a6.746×1041.374×105Mw(±0.153%)(±1.057%)6.746×1041.374×105Mz(±0.343%)(±2.363%)PolydispersityMw/Mn1.000(±0.217%)1.000(±1.494%)Mz/Mn1.000(±0.376%)1.000(±2.588%)rmsradiusmoments(nm)rn2.9(±66.6%)4.2(±215.6%)rw2.9(±66.5%)4.2(±214.6%)rz2.9(±66.4%)4.3(±213.6%)UVpeakstatisticsPeakArea%(channel1)(%)97.2352.765義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題DLS動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)應(yīng)用動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)

DLS干涉增強(qiáng)現(xiàn)象干涉減弱現(xiàn)象摘自懷雅特培訓(xùn)資料技術(shù)原理：圖譜解析：粒徑與粒徑分布（均一性、純度、聚集體識(shí)別）濃度依耐性（蛋白分子自聚、臨界膠束濃度）分子間膠體相互作用義翹神州添加標(biāo)題DLS測(cè)定蛋白粒徑及均一性Peak%Pd%Intensity%MassDiameter(nm)Peak1(True)11.910010059.3HPV35蛋白DLS結(jié)果X重組蛋白DLS結(jié)果分散度大，同一樣品兩次檢測(cè)差異大，樣品均一性差窄分布，樣品均一性較好義翹神州添加標(biāo)題穩(wěn)定性穩(wěn)定性的研究為產(chǎn)品的生產(chǎn)、工藝、制劑處方、包裝材料、貯存、運(yùn)輸條件等方面提供依據(jù)。凍融穩(wěn)定性加速穩(wěn)定性實(shí)時(shí)穩(wěn)定性模擬運(yùn)輸穩(wěn)定性評(píng)價(jià)方式：外觀濃度、純度生物活性雜質(zhì)、產(chǎn)物評(píng)價(jià)指標(biāo)：凍融試驗(yàn)25℃加速試驗(yàn)37℃加速試驗(yàn)實(shí)時(shí)1年及模擬運(yùn)輸試驗(yàn)IL-1beta（Cat：GMP-10139-HNAE）蛋白穩(wěn)定性數(shù)據(jù)03義翹神州質(zhì)量表征之結(jié)合活性及生物活性分析義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步

酶聯(lián)免疫（ELISA）檢測(cè)

免疫印記（Westernblot）檢測(cè)

免疫共沉淀（Co-IP)檢測(cè)

免疫組化（IHC）檢測(cè)

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)親和力檢測(cè)（SPR/BLI）檢測(cè)

抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性/吞噬作用ADCC&ADCP檢測(cè)

補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用CDC檢測(cè)

中和活性檢測(cè)

細(xì)胞增殖、分泌、遷移酶、激酶活性結(jié)合活性生物活性義翹神州一、結(jié)合活性檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附法ELISAB.競(jìng)爭(zhēng)ELISAB酶標(biāo)二抗抗體藥靶點(diǎn)蛋白/biotin待測(cè)抗體C.夾心ELISACaptureantibodyDetectionantibody靶點(diǎn)蛋白SubstrateantibodyConjugatedenzymeSignalantigenA.間接ELISA服務(wù)內(nèi)容：蛋白受體、配體結(jié)合活性檢測(cè)抗原抗體結(jié)合活性檢測(cè)PK及ADA方法開發(fā)及方法學(xué)驗(yàn)證試劑盒定制開發(fā)義翹神州免疫印記法WesternblotOdysseyFluorChemE化學(xué)發(fā)光(FlourChemE)Odyssey普通顯色二抗HRP標(biāo)記紅外染料標(biāo)記HRP標(biāo)記封閉液milk

or

BSAmilkmilk

or

BSA開機(jī)需降溫，時(shí)間長圖掃描時(shí)間長無圖片黑白彩色（綠色，紅色）黑白顯色液需要不需要需要顯色需底物，自動(dòng)曝光，靈敏度高無需底物，直接上機(jī)，條帶直觀可見需底物，暗室曝光，不易操作，易黑成一片信號(hào)信號(hào)不持久，膜不易長時(shí)間保存信號(hào)持久，膜可保存半年以上信號(hào)不持久，膜不易長時(shí)間保存半定量可以半定量半定量更準(zhǔn)確不可電泳濕法轉(zhuǎn)膜結(jié)果抗體孵育分析流程：kDaAB3510055402515顯色ActinHNRNPK40——100——70——55——kDaABCD義翹神州裂解液（細(xì)胞、動(dòng)物組織）proteinXproteinYmagneticbeads免疫共沉淀法Co-IP自主偶聯(lián)磁珠產(chǎn)品，讓您檢測(cè)快速省時(shí)免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，Co-IP)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。1.偶聯(lián)蛋白的磁珠：ProA、ProG、ProA/G、ProL及其他蛋白2.偶聯(lián)抗體的磁珠——可定制磁珠試劑盒自主研發(fā)磁力架產(chǎn)品，吸力強(qiáng)，耗時(shí)短MAGS001MAGS003義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步免疫組化法IHC生物組織自動(dòng)脫水機(jī)（Leica-TP1020）石蠟包埋機(jī)（TaiVa-TB-718）石蠟切片機(jī)（Leica-RM2235）冰凍切片機(jī)（Thermo-NX50）共聚焦熒光顯微鏡（Nikon-A1）全片掃描成像系統(tǒng)（KF-PRO-400）樣本處理脫水石蠟包埋冰凍切片石蠟切片切片成像義翹神州添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步IHC單染檢測(cè)：利用免疫學(xué)中抗原抗體特異性結(jié)合的原理，來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。HE染色檢測(cè)：HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。免疫組化多重染色檢測(cè)：在同一組織切片樣本上對(duì)多個(gè)靶標(biāo)進(jìn)行區(qū)別標(biāo)記。特殊染色檢測(cè)：包括:膠原纖維染色、肌肉組織染色、脂肪染色、糖原染色(PAS)等。細(xì)胞固定組織石蠟切片白片石蠟包埋塊細(xì)胞可爬片制備細(xì)胞蠟塊足量的10%中性福爾馬林固定24*75mm尺寸大小的常規(guī)切片，厚度4μm通用型常規(guī)大小的石蠟包埋塊樣本類型染色方式義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步流式細(xì)胞術(shù)FCM細(xì)胞表面抗原檢測(cè)細(xì)胞增殖檢測(cè)細(xì)胞凋亡檢測(cè)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry）利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)特異標(biāo)記的熒光信號(hào)，從而測(cè)定細(xì)胞的多種生化物質(zhì)（如膜表面受體、抗原、離子或DNA/RNA表達(dá)等）特性的方法，同時(shí)也是一項(xiàng)可以把具有相同熒光信號(hào)特性的某些細(xì)胞亞群從多細(xì)胞群體中分離和富集出來的細(xì)胞分析技術(shù)。細(xì)胞表面抗原檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原、細(xì)胞因子檢測(cè)細(xì)胞活性檢測(cè)細(xì)胞凋亡檢測(cè)細(xì)胞增殖檢測(cè)服務(wù)項(xiàng)目ADCP效率檢測(cè)抗體篩選多因子檢測(cè)流式分選……義翹神州添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步表面等離子共振技術(shù)-SPR

生物膜層光學(xué)干涉-BLI

Biacore動(dòng)態(tài)、實(shí)時(shí)傳感圖OctetRed檢測(cè)過程大分子相互作用分析義翹神州濃度定量抗體篩選、表征Fc受體蛋白與抗體親和力測(cè)定表位分析大分子/小分子相互作用技術(shù)優(yōu)勢(shì)：無須標(biāo)記靈敏度高實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)精確的動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)檢測(cè)類型：樣品要求：01樣品充分水溶，處于均一的、不聚集的狀態(tài)02純度（>90%），蛋白濃度>0.2mg/mL；明確等電點(diǎn)/分子量03告知抗體亞型及蛋白標(biāo)簽類型04分析物樣品中不能含有甘油、蔗糖、咪唑等高折光的成分；氨基偶聯(lián)的配體溶液中不能含有Tris、NaN3、甘氨酸等成分義翹神州二、基于細(xì)胞的生物活性檢測(cè)添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步細(xì)胞增殖細(xì)胞分泌補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性/吞噬ADCC&ADCPCDC義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步ADCC/ADCPCDCJToxicolPathol.2015Jul;28(3):133–139.抗體介導(dǎo)的免疫效應(yīng)義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題ADCP，抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用（Antibody-DependentCellularPhagocytosis）ADCC，抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（Antibody-DependentCell-mediatedCytotoxicity）1、ADCC&ADCPPBMC或NK細(xì)胞接近真實(shí)情況細(xì)胞來源有限、制備過程繁瑣、實(shí)驗(yàn)變異性大，背景讀值高等傳統(tǒng)方法穩(wěn)定表達(dá)FcγRIIIa、FcγRIIa細(xì)胞系均質(zhì)檢測(cè)，簡(jiǎn)單方便，減少實(shí)驗(yàn)組間變異性生物發(fā)光法，靈敏，信噪比高報(bào)告基因法義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步抗ErBb2抗體ADCC(靶細(xì)胞：BT474)抗CD38抗體ADCP(靶細(xì)胞：Daudi)義翹神州從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步2、CDC檢測(cè)抗體是否能夠介導(dǎo)CDC，分析抗體介導(dǎo)CDC活性的強(qiáng)弱，已成為抗體藥物研發(fā)及其質(zhì)量控制過程中至關(guān)重要的一步。CDC，補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用（ComplementDependentCytotoxicity）義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步Anti-EGFR靶細(xì)胞：A431細(xì)胞Anti-CD20靶細(xì)胞：Daudi細(xì)胞義翹神州蛋白生物活性細(xì)胞因子酶、激酶催化中心結(jié)合中心義翹神州細(xì)胞因子本質(zhì)低分子質(zhì)量蛋白或多肽產(chǎn)生作用由免疫原、絲裂原或其它刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞合成并分泌途徑自分泌旁分泌內(nèi)分泌用于細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)和相互作用分類白細(xì)胞介素（IL）干擾素（IFN）腫瘤壞死因子（TNF）集落刺激因子（CSF）趨化因子生長因子參與免疫細(xì)胞的分化與激活類胰島素生長因子(IGF)表皮生長因子(EGF)轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)有胰島素樣功能，促進(jìn)細(xì)胞分化和增殖粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)刺激造血祖細(xì)胞增殖、分化TNF-αTNF-β促炎性細(xì)胞因子Ⅰ型Ⅱ型IFN-γIFN-αIFN-β巨噬細(xì)胞、DC、骨髓單核細(xì)胞NK、Th1、T、B1、細(xì)胞因子類義翹神州添加標(biāo)題IL4R增殖抑制實(shí)驗(yàn)IL1β促因子分泌C5a因子促酶釋放IL4細(xì)胞增殖活性義翹神州添加標(biāo)題2、酶、激酶SEActivesiteESP1P2E＋＋MMP2酶活性，workConc:0.2μg/mL備注：E4，F(xiàn)4是復(fù)孔；G4是空白對(duì)照義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題PrincipleoftheADP-Glo?KinaseAssay（Promega）GSK3β激酶活性04義翹神州生物大分子開發(fā)中的質(zhì)量表征及應(yīng)用案例義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步案例01：針對(duì)新冠SpikeS1蛋白中和抗體的開發(fā)123抗體質(zhì)量分析及鑒定免疫原SARS-CoV-2SpikeS1的理化性質(zhì)分析

動(dòng)物免疫及抗體制備篩選流程義翹神州添加標(biāo)題免疫原SARS-CoV-2SpikeS1的理化性質(zhì)分析

SARS-CoV-2S1protein,HisTagonSDSunderreducing(R)condition.Thepurityoftheproteinisgreaterthan90%PeakRadius(nm)%Pd%Intensity%Mass%NumberPeak1(True)5.310.89099.8100Peak2(True)324.413.3100.20#RT(min)峰面積(mAU·s)峰面積%峰高(mAU)對(duì)稱性峰寬(min)信號(hào)114.49720127.15100305.0061.27939.483DAD1AMakerSARS-CoV-2S1

SDS純度結(jié)果HPLC-SEC純度結(jié)果DLS粒徑檢測(cè)結(jié)果義翹神州添加標(biāo)題SEC-MALS檢測(cè)結(jié)果ELISA結(jié)合活性檢測(cè)結(jié)果SARS-CoV-2S1protein,HistagELISAImmobilizedHumanACE2,FcTag(Cat:10108-H05H)at2μg/mL(100μL/well)canbindSARS-CoV-2S1protein,HisTag(Cat:40591-V08H),theEC50is330ng/mL.Molarmassmoments(g/mol)1.075×105Mn(±0.277%)1.080×105Mp(±0.276%)Mvn/aMw1.076×105(±0.276%)Mz1.076×105(±0.616%)PolydispersityMw/Mn1.000(±0.391%)Mz/Mn1.001(±0.676%)rmsradiusmoments(nm)rn6.3(±24.9%)1.076×105rw6.3(±24.8%)rz6.3(±24.7%)義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步BLI表征抗體親和力：

SARS-CoV-2S1vsAntibodyAb-01KD(M)=

5.15E-11Ab-02KD(M)=6.54E-11LoadedBiotinylatedRecombinantSARS-CoV-2S1

protein,HisTag(Cat:40591-V08H-B)onSABiosensor,canbindAb-01

withanaffinityconstantof51.5pMasdeterminedinaBLIassay(SartoriusOctetRed384).LoadedBiotinylatedRecombinantSARS-CoV-2S1

protein,HisTag(Cat:40591-V08H-B)onSABiosensor,canbindAb-02

withanaffinityconstantof65.4pMasdeterminedinaBLIassay(SartoriusOctetRed384).抗體質(zhì)量分析及鑒定義翹神州Ab-01,withnegativecontrolAb-02,withnegativecontrolFlowcytometricanalysisof

SARS-COV-2SpikeoverexpressedHEK293Cells

andnegativecontrolwerestainedwithpurified

anti-SARS-COV-2SpikeNeutralizingMAb,thenaFITC-conjugatedsecondstepantibody.Thefluorescencehistogramswerederivedfromgatedeventswiththeforwardandsidelight-scattercharacteristicsofintactcells.FACS檢測(cè)抗體與過表達(dá)SARS-CoV-2Spike細(xì)胞的結(jié)合Negative

controlSARS-COV-2SpikeoverexpressedHEK293CellsNegative

controlSARS-COV-2SpikeoverexpressedHEK293CellsAb-01:Ab-02:ImmunochemicalanalysisofSpikeoverexpresssedHEK293Cellsandnegativecontrolwerestainedwithpurifiedanti-SARS-CoV-2SpikeMab,thenaHRP-conjugatedsecondstepantibody.IHC檢測(cè)抗體與過表達(dá)SARS-CoV-2Spike細(xì)胞的結(jié)合義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題非競(jìng)爭(zhēng)競(jìng)爭(zhēng)待測(cè)抗體Anti-His/HRPS1待測(cè)抗體Anti-His/HRPACE2HisACE2HisS1ELISA方法檢測(cè)抗體中和活性SerialdilutionsofAnti-SARS-CoV-2antibodywasaddedACE2/S1

bindingreactions.Thesignalwasneutralizedbyincreasingconcentrationsofantibody.Thehalfmaximalinhibitoryconcentration(IC50)wasdetected.義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步新冠假病毒的包裝使用HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎(chǔ)載體轉(zhuǎn)染293細(xì)胞后，包裝成新冠Spike假病毒（Cat:

PSV001），表面表達(dá)新冠Spike蛋白，并攜帶有熒光素酶報(bào)告基因。

Transfection&PackagingHarvestPseudovirus

Preparationstagepackagingplasmids293cellsTransferandPackagingplasmidsHarvestPseudovirus假病毒方法檢測(cè)抗體中和活性義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步新冠Spike假病毒與待檢樣品孵育后侵染293T-ACE2細(xì)胞，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)Luciferase發(fā)光值RLU，根據(jù)Luciferase發(fā)光值計(jì)算待檢樣品的假病毒中和抑制率，評(píng)價(jià)待檢樣品的中和效果。中和檢測(cè)原理示意圖義翹神州案例02：上市藥物IL-1RAP:IL-1R1:IL-1α

信號(hào)通路功能驗(yàn)證添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步TIRD1D2D3IL-1R1IL-1αIL-1RAPActiveIL-1Rcomplex＋signallingTIRTIRTIRTIR義翹神州添加標(biāo)題SDS蛋白純度IL-1RAP蛋白純度及活性驗(yàn)證#RT(min)Area%Height(mAU)Width(min)111.1344.06712.9861.941211.7285.17412.0411.08313.26890.759235.0713.651IL-1RAP

protein,FcTagonSDSunderreducing(R)condition.Thepurityoftheproteinisgreaterthan90%.SEC-HPLC蛋白純度義翹神州添加標(biāo)題MeasuredbyitsbindingabilityinafunctionalELISA.WhenrecombinanthumanIL-1RAP/IL-1R3Fc(Cat:10121-H02H)isimmobilizedat30nM(100μL/well),inthepresenceofrecombinanthumanIL-1α(Cat:10128-HNCH),itbindstorecombinanthumanIL-1R1histag(Cat:10126-H08H)withanEC50

of17.1nM.IL-1RAP細(xì)胞活性IL-1RAP:IL-1R1:IL-1α

ELISA活性Measured

by

its

ability

to

inhibit

IL-1α-induced

IL-8

secretion

in

HepG2

human

hepatocellular

carcinoma

cells

in

the

presence

of

1

μg/mL

of

recombinant

human

IL-1

R2

(Cat:10111-H08H)

and

50

pg/mL

rhIL-1α(Cat:10128-HNCE).義翹神州添加標(biāo)題添加標(biāo)題從研發(fā)到生產(chǎn)、質(zhì)控，貫穿生物試劑及醫(yī)藥研發(fā)的每一步兩款上市藥物與IL-1RAP蛋白親和力驗(yàn)證Drug-AvsIL-1RAPDrug-BvsIL-1RAPImmobilized

humanIL-1RAP/IL-1R3Fc(Cat:10121-H02H)on

CM5

chip,

can

bind

drug-A

with

an

affinity

constant

of

0.48

nM

as

determined

in

SPRassay

(BiacoreT200)

.Imm