《2.2.2 動物細胞融合技術與單克隆抗體》講義案

學而優(yōu)·教有方PAGE試卷第=1頁，共=sectionpages33頁PAGE12.2.2動物細胞融合技術與單克隆抗體目標導航目標導航課程標準目標解讀動物細胞工程包括細胞培養(yǎng)、核移植、細胞融合和干細胞的應用等技術。闡明動物細胞培養(yǎng)是從動物體獲得相關組織，分散成單個細胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細胞生長和增殖的過程。動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎。闡明動物細胞核移植一般是將體細胞核移入一個去核的卵母細胞中，并使重組細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的過程。闡明動物細胞融合是指通過物理、化學或生物學等手段，使兩個或多個動物細胞結合成一個細胞的過程。概述細胞融合技術是單克隆抗體制備的重要技術。簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應用價值。闡明動物細胞培養(yǎng)的條件和過程。簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應用價值。闡明利用動物細胞融合技術制備單克隆抗體的過程，認同單克隆抗體在臨床上有重要的應用價值。闡明利用動物體細胞核移植技術克隆動物的過程和該技術的應用前景。課前預習課前預習一、動物細胞融合技術1．概念：使細胞結合形成一個細胞的技術。2．誘導原理和結果(1)誘導原理：。(2)誘導結果：形成細胞。3．誘導方法：法、電融合法和法等。4．意義：突破了的局限，使成為可能。5．動物細胞融合技術的應用(1)成為研究、、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備。教材中的隱性知識源于選擇性必修3P48“相關信息”：(1)滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去，但并不破壞病原體的。(2)滅活病毒誘導細胞融合與病毒和細胞所含的糖蛋白有關。二、單克隆抗體1．制備原理(1)B淋巴細胞特點：一種B淋巴細胞分泌一種抗體。(2)骨髓瘤細胞特點：能在體外大量。(3)雜交瘤細胞特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能又能產(chǎn)生大量。2．制備過程（如圖）3．單克隆抗體的優(yōu)點能準確地識別，與特定抗原發(fā)生特異性結合，并且可以。4．單克隆抗體的應用(1)作為，具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。(2)用于和。易錯易混辨析：(1)植物原生質體融合與動物細胞融合的原理是相同的()(2)雜交瘤細胞進行體內(nèi)培養(yǎng)，更容易控制培養(yǎng)條件()(3)制備單克隆抗體時，要選用已免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞()(4)滅活的病毒能促進動物細胞融合，但不能促進植物細胞融合()(5)相比植物體細胞雜交，動物細胞融合特有的誘導方式是用滅活的病毒處理()(6)雜交瘤細胞進行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得能產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎()(7)雜交瘤細胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體()一、動物細胞融合技術1．兩個或多個2.（1）細胞膜的流動性（2）雜交3.PEG融合滅活病毒誘導4.有性雜交遠緣雜交5.（1）細胞遺傳細胞免疫（2）單克隆抗體教材中的隱性知識感染能力抗原結構糖蛋白二、單克隆抗體1．（1）特異性(2)增殖（3）大量增殖特定抗體2.雜交瘤細胞能產(chǎn)生所需抗體3．抗原的細微差異大量制備4.（1）診斷試劑（2）治療疾病運載藥物易錯易混辨析：√√√√√×√知識講解知識講解知識點一動物細胞融合技術1．動物細胞融合技術：是使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。細胞融合的實質是核融合。2．原理：動物細胞融合的基本原理為細胞膜的流動性。3．誘導融合的方法(1)化學方法：PEG融合法。(2)物理方法：電融合法。(3)生物方法：滅活病毒誘導法。4．過程：具有不同遺傳信息的兩個或多個細胞雜交。5．結果：形成單核雜交細胞，具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息，可表現(xiàn)出兩個或多個親本的特點。6．意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。這一技術成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。如利用動物細胞融合技術而發(fā)展起來的雜交瘤技術，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。知識點二單克隆抗體及其應用1．傳統(tǒng)抗體的獲得(1)方法：向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。(2)缺陷：制備的抗體產(chǎn)量低、純度低以及特異性差。2．單克隆抗體的制備：單克隆抗體是由單一雜交瘤細胞增殖產(chǎn)生的高度專一的抗體。(1)制備原理①B淋巴細胞的特點：每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體，B淋巴細胞在體外不能無限增殖。②骨髓瘤細胞的特點：在體外能大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體。③雜交瘤細胞的特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。(2)制備過程①制備產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞：用特定的抗原對小鼠進行免疫處理，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞。②培養(yǎng)骨髓瘤細胞。③將小鼠的骨髓瘤細胞與從脾中得到的B淋巴細胞融合。④用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選：在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有雜交瘤細胞才能生長。⑤克隆化培養(yǎng)和抗體檢測：對上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。⑥將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。⑦提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。(3)比較制備單克隆抗體過程中的兩次篩選項目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導融合后得到多種雜交細胞，另外還有未融合的細胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細胞有很多種，形成的雜交瘤細胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，在每個孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群篩選目的得到雜交瘤細胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞(4)優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、可大量制備。(5)單克隆抗體的應用①作為診斷試劑：它在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮著重要的作用：具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點②用于治療疾病和運載藥物：單獨使用時可直接用于癌癥和其他疾病的治療；抗體——藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合，實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。課后拓展課后拓展拓展動物細胞融合和單克隆抗體的制備動物細胞融合動物細胞融合也稱細胞雜交，是指在一定的條件下將兩個或多個動物細胞融合為一個細胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。誘導動物細胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動，電刺激）。某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白，可介導病毒同宿主細胞融合，也可介導細胞與細胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導細胞融合?；瘜W和物理方法可造成膜脂分子排列的改變，去掉作用因素之后，質膜恢復原有的有序結構，在恢復過程中便可誘導相接觸的細胞發(fā)生融合。動物細胞融合技術最重要的用途是制備單克隆抗體。單克隆抗體的制備單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。在制備單抗過程中，要進行雜交瘤細胞的篩選。在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細胞，只有少數(shù)是分泌特異性單克隆抗體的細胞。因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，再及時進行凍存。單克隆抗體的大量制備主要采用體外培養(yǎng)法和動物體內(nèi)誘生法。克隆化的細胞在體外進行大量培養(yǎng)，離心去除細胞及其碎片，收集上清液，而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細胞具有從親代淋巴細胞得來的腫瘤細胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無胸腺的裸鼠），雜交瘤細胞就開始無限地繁殖，直至宿主死亡。約1-2周，可見產(chǎn)生腫瘤細胞的小鼠腹部膨大，用注射器抽取腹水，即可獲得大量的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體。背誦筆記背誦筆記筆記一：動物細胞融合技術1.概念：使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。2.原理：細胞膜的流動性。3.誘導融合方法：PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法。4.動物細胞融合的過程包括細胞膜融合、細胞質融合和細胞核融合。其中細胞膜融合是細胞融合的先導，在細胞膜融合中體現(xiàn)出細胞膜具有一定的流動性，細胞融合的實質是核融合。動物細胞融合完成的標志是兩個或多個細胞核融合為一個細胞核。如下圖(以滅活的病毒誘導為例)：5.意義：突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。6.應用：(1)成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備單克隆抗體。7.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較：比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞的全能性細胞膜的流動性、細胞的增殖融合前處理先除去細胞壁先使細胞分散開使用的酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶誘導手段物理法：電融合法、離心法化學法：PEG融合法除物理法和化學法外，也可用滅活的病毒誘導過程結果雜種植株雜交細胞應用培育植物新品種主要用于制備單克隆抗體意義克服了遠緣雜交不親和的障礙，打破了生殖隔離，擴展了雜交的親本組合筆記二：單克隆抗體及其應用1.傳統(tǒng)抗體的獲得：（1）方法：向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。（2）缺陷：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。2.單克隆抗體的制備原理：(1)B淋巴細胞特點：一種B淋巴細胞分泌一種特異性抗體。(2)骨髓瘤細胞特點：能在體外大量增殖。(3)雜交瘤細胞特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能無限增殖又能產(chǎn)生大量特定抗體。3.單克隆抗體的制備過程：4.單克隆抗體制備過程中的兩次篩選的比較：項目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導融合后得到多種雜交細胞，另外還有未融合的細胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細胞有很多種，形成的雜交瘤細胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細胞和同種細胞融合后形成的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群篩選目的得到雜交瘤細胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞5.單克隆抗體的優(yōu)點：（1）能準確地識別抗原的細微差異；（2）與特定抗原發(fā)生特異性結合；（3）可以大量制備。6.單克隆抗體的應用：(1)作為診斷試劑，如定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾?。唬?）運載藥物，如ADC；（3）治療疾病。課后自測課后自測1．甲型流感病毒核蛋白單克隆抗體可有效治療甲流。下列關于其制備過程的敘述，正確的是（

）A．用動物細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)甲型流感病毒，以獲得充足的抗原B．制備過程需要用到動物細胞培養(yǎng)技術和動物細胞融合技術C．用特定的選擇培養(yǎng)基篩選的雜交瘤細胞可生產(chǎn)所需單克隆抗體D．體外培養(yǎng)雜交瘤細胞需定期使用胰蛋白酶處理，使其分散開來2．下列關于動物細胞融合技術及意義的敘述，不正確的是（

）A．可以利用動物細胞融合技術生產(chǎn)細胞因子B．動物細胞融合可打破生殖隔離獲得新物種C．細胞融合過程與細胞膜的結構特點直接相關D．動物細胞融合為制備單克隆抗體開辟了新途徑3．動物克隆的技術基礎是（）A．細胞和組織培養(yǎng)B．細胞融合C．單克隆抗體D．核移植4．使用高效的細胞毒素類藥物進行化療可以有效殺死腫瘤細胞，但細胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害。構建抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）能對腫瘤細胞進行選擇性殺傷，ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細胞毒素）三部分組成，它的作用機制如圖所示。下列敘述錯誤的是（

）A．構建抗體—藥物偶聯(lián)物的抗體是特異性強、靈敏性高的單克隆抗體B．制備該抗體需要利用動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)等技術手段C．ADC通過胞吞進入細胞，該過程不需要細胞膜上載體蛋白的協(xié)助，也不消耗能量D．藥物在癌細胞內(nèi)釋放并起作用，同時誘導溶酶體破裂，加速了癌細胞的凋亡5．抗PD-L1單克隆抗體能與癌細胞表面的PD-L1特異性結合，因而具有治療某些癌癥的作用。如圖是制備抗PD-L1單克隆抗體的示意圖，圖中有兩次篩選。下列相關敘述錯誤的是（

）

A．圖中第一次篩選所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基B．圖中第二次篩選的目的是獲得產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞C．圖中細胞集落b～d，既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗PD-L1抗體D．圖中加入的H物質，應該是取自癌細胞表面的PD-L1抗原6．如圖是抗HCG（人絨毛膜促性腺激素）單克隆抗體制備流程圖，下列敘述錯誤的是（

）

A．①過程中常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒和電激等B．②過程中篩選出的雜交瘤細胞不一定能產(chǎn)生抗HCG抗體C．③過程中利用了DNA分子雜交的原理D．④過程培養(yǎng)液中所需氣體主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH7．科研工作者常常將單克隆抗體與細胞毒素類藥物偶聯(lián)起來，制成的“生物導彈”，來定向治療癌癥并降低藥物的副作用，其過程如圖所示。下列有關敘述不正確的是（

）

A．經(jīng)①形成的細胞都能無限增殖并產(chǎn)生相應抗體B．②過程需要篩選并克隆單個雜交瘤細胞C．未與單克隆抗體偶聯(lián)的細胞毒素等藥物沒有選擇殺傷癌細胞的功能D．抗癌細胞的單克隆抗體的靶向作用使③過程具有高度特異性8．阿霉素是一種抗腫瘤藥物，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對機體其他細胞造成傷害，將阿霉素與能特異性識別腫瘤抗原的抗體利用接頭連接制成抗體——藥物偶聯(lián)物（ADC）。下列有關敘述錯誤的是（

）A．阿霉素有副作用，正常情況下不能大量、長期使用B．ADC中的特異性抗體是殺死腫瘤細胞的有效成分C．接頭既要保持穩(wěn)定，又不能影響抗體與阿霉素的功能D．利用同位素標記的特異性抗體，可用于定位診斷腫瘤9．下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質和A細胞的名稱分別為（

）A．抗體、T淋巴細胞 B．抗原、T淋巴細胞C．抗體、B淋巴細胞 D．抗原、B淋巴細胞10．下列有關細胞工程的敘述正確的是（）A．在植物細胞工程中通常用Ca2＋處理植物細胞，以增大細胞壁的通透性B．用以治療癌癥的“生物導彈”就是以單克隆抗體作抗癌藥物定向殺死癌細胞C．誘導兩種植物細胞的原生質體融合，所獲得的融合細胞都具有雙親的遺傳特性D．單克隆抗體雖特異性強，但也不能與位于靶細胞內(nèi)的相應抗原發(fā)生特異性結合11．細胞膜的結構特點是具有一定的流動性，下列實例不能反映該特點的是（）A．人的B淋巴細胞與小鼠的骨髓瘤細胞的融合B．吞噬細胞吞噬病菌C．核糖體合成的蛋白質進入細胞核D．變形蟲伸出偽足12．某同學在學習“細胞工程”時，列表比較了動植物細胞工程的有關內(nèi)容，你認為有幾處是不正確的（）

植物細胞工程動物細胞工程技術手段植物組織培養(yǎng)和植物體細胞雜交動物細胞培養(yǎng)和單克隆抗體的制備特殊處理機械法去除細胞壁胰蛋白酶處理，制成細胞懸液融合方法物理方法、化學方法物理方法、化學方法、生物方法典型應用人工種子、雜種植株單克隆抗體的制備培養(yǎng)液區(qū)別生長素和細胞分裂素影響脫分化和再分化動物血清（血漿）不可缺少A．1 B．2 C．3 D．413．制備單克隆抗體時需要經(jīng)過兩次篩選，第一次篩選需要用HAT培養(yǎng)基，已知哺乳動物細胞可通過D途徑和S途徑合成DNA，而小鼠的骨髓瘤細胞只能通過D途徑合成DNA．其中進行D途徑合成時葉酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑。第二次篩選需要用96孔培養(yǎng)板進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。下列相關敘述正確的是（）A．HAT培養(yǎng)基中要加入葉酸從而把雜交瘤細胞篩選出來B．在HAT培養(yǎng)基中雜交瘤細胞可通過D途徑和S途徑合成DNA因此可以大量增殖C．用96孔培養(yǎng)板克隆化培養(yǎng)時要用培養(yǎng)液對第一次篩選所得的雜交瘤細胞進行充分稀釋以保證分配到每個孔中的細胞數(shù)不超過1個D．克隆化培養(yǎng)后需要向每個孔中加入相應抗體從而進行抗體檢測，呈陽性反應的孔中的細胞即為能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞14．除雜交瘤單克隆技術之外，制備單克隆抗體的常用方法還包括單個B細胞抗體技術，可通過下圖所示的技術流程制備抗體用于治療人類疾病。下列說法錯誤的是（

）

A．上述技術可一定程度避免機體對傳統(tǒng)鼠源單克隆抗體的免疫反應B．選用單個B淋巴細胞是為了最終獲得純度較高的抗體C．應在95%空氣加5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中對受體細胞進行培養(yǎng)D．將基因表達載體導入受體細胞前需要用鈣離子處理受體細胞15．精準爆破腫瘤細胞的“生物導彈”——ADC（抗體偶聯(lián)藥物）能對腫瘤細胞進行選擇性殺傷，該物質由抗體（導彈體）、藥物（核彈頭）和接頭三部分組成，ADC的作用機制如圖。下列相關敘述錯誤的是（

）

A．ADC的制備過程運用了細胞培養(yǎng)和細胞融合技術B．制備ADC中的抗體需要經(jīng)過兩次篩選C．ADC能精準地識別腫瘤細胞，進入癌細胞需要消耗ATPD．癌細胞的凋亡是由于溶酶體中水解酶的水解作用16．動物細胞融合技術就是。17．用作診斷試劑的原理：。18．動物細胞融合技術就是使或動物細胞結合形成細胞的技術。融合后形成的具有原來或細胞的。19．動物細胞融合技術的應用（1）細胞融合技術成為研究、、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。（2）利用動物細胞融合技術發(fā)展起來的，為制備開辟了新途徑。20．單克隆抗體制備過程中，第二次篩選的目的是，方法是。

2.2.2動物細胞融合技術與單克隆抗體目標導航目標導航課程標準目標解讀動物細胞工程包括細胞培養(yǎng)、核移植、細胞融合和干細胞的應用等技術。闡明動物細胞培養(yǎng)是從動物體獲得相關組織，分散成單個細胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細胞生長和增殖的過程。動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎。闡明動物細胞核移植一般是將體細胞核移入一個去核的卵母細胞中，并使重組細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的過程。闡明動物細胞融合是指通過物理、化學或生物學等手段，使兩個或多個動物細胞結合成一個細胞的過程。概述細胞融合技術是單克隆抗體制備的重要技術。簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應用價值。闡明動物細胞培養(yǎng)的條件和過程。簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應用價值。闡明利用動物細胞融合技術制備單克隆抗體的過程，認同單克隆抗體在臨床上有重要的應用價值。闡明利用動物體細胞核移植技術克隆動物的過程和該技術的應用前景。課前預習課前預習一、動物細胞融合技術1．概念：使細胞結合形成一個細胞的技術。2．誘導原理和結果(1)誘導原理：。(2)誘導結果：形成細胞。3．誘導方法：法、電融合法和法等。4．意義：突破了的局限，使成為可能。5．動物細胞融合技術的應用(1)成為研究、、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備。教材中的隱性知識源于選擇性必修3P48“相關信息”：(1)滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去，但并不破壞病原體的。(2)滅活病毒誘導細胞融合與病毒和細胞所含的糖蛋白有關。二、單克隆抗體1．制備原理(1)B淋巴細胞特點：一種B淋巴細胞分泌一種抗體。(2)骨髓瘤細胞特點：能在體外大量。(3)雜交瘤細胞特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能又能產(chǎn)生大量。2．制備過程（如圖）3．單克隆抗體的優(yōu)點能準確地識別，與特定抗原發(fā)生特異性結合，并且可以。4．單克隆抗體的應用(1)作為，具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。(2)用于和。易錯易混辨析：(1)植物原生質體融合與動物細胞融合的原理是相同的()(2)雜交瘤細胞進行體內(nèi)培養(yǎng)，更容易控制培養(yǎng)條件()(3)制備單克隆抗體時，要選用已免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞()(4)滅活的病毒能促進動物細胞融合，但不能促進植物細胞融合()(5)相比植物體細胞雜交，動物細胞融合特有的誘導方式是用滅活的病毒處理()(6)雜交瘤細胞進行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得能產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎()(7)雜交瘤細胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體()一、動物細胞融合技術1．兩個或多個2.（1）細胞膜的流動性（2）雜交3.PEG融合滅活病毒誘導4.有性雜交遠緣雜交5.（1）細胞遺傳細胞免疫（2）單克隆抗體教材中的隱性知識感染能力抗原結構糖蛋白二、單克隆抗體1．（1）特異性(2)增殖（3）大量增殖特定抗體2.雜交瘤細胞能產(chǎn)生所需抗體3．抗原的細微差異大量制備4.（1）診斷試劑（2）治療疾病運載藥物易錯易混辨析：√√√√√×√知識講解知識講解知識點一動物細胞融合技術1．動物細胞融合技術：是使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。細胞融合的實質是核融合。2．原理：動物細胞融合的基本原理為細胞膜的流動性。3．誘導融合的方法(1)化學方法：PEG融合法。(2)物理方法：電融合法。(3)生物方法：滅活病毒誘導法。4．過程：具有不同遺傳信息的兩個或多個細胞雜交。5．結果：形成單核雜交細胞，具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息，可表現(xiàn)出兩個或多個親本的特點。6．意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。這一技術成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。如利用動物細胞融合技術而發(fā)展起來的雜交瘤技術，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。知識點二單克隆抗體及其應用1．傳統(tǒng)抗體的獲得(1)方法：向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。(2)缺陷：制備的抗體產(chǎn)量低、純度低以及特異性差。2．單克隆抗體的制備：單克隆抗體是由單一雜交瘤細胞增殖產(chǎn)生的高度專一的抗體。(1)制備原理①B淋巴細胞的特點：每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體，B淋巴細胞在體外不能無限增殖。②骨髓瘤細胞的特點：在體外能大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體。③雜交瘤細胞的特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。(2)制備過程①制備產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞：用特定的抗原對小鼠進行免疫處理，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞。②培養(yǎng)骨髓瘤細胞。③將小鼠的骨髓瘤細胞與從脾中得到的B淋巴細胞融合。④用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選：在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有雜交瘤細胞才能生長。⑤克隆化培養(yǎng)和抗體檢測：對上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。⑥將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。⑦提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體。(3)比較制備單克隆抗體過程中的兩次篩選項目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導融合后得到多種雜交細胞，另外還有未融合的細胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細胞有很多種，形成的雜交瘤細胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長用多孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，在每個孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群篩選目的得到雜交瘤細胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞(4)優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、可大量制備。(5)單克隆抗體的應用①作為診斷試劑：它在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮著重要的作用：具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點②用于治療疾病和運載藥物：單獨使用時可直接用于癌癥和其他疾病的治療；抗體——藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合，實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。課后拓展課后拓展拓展動物細胞融合和單克隆抗體的制備動物細胞融合動物細胞融合也稱細胞雜交，是指在一定的條件下將兩個或多個動物細胞融合為一個細胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。誘導動物細胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動，電刺激）。某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白，可介導病毒同宿主細胞融合，也可介導細胞與細胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導細胞融合?；瘜W和物理方法可造成膜脂分子排列的改變，去掉作用因素之后，質膜恢復原有的有序結構，在恢復過程中便可誘導相接觸的細胞發(fā)生融合。動物細胞融合技術最重要的用途是制備單克隆抗體。單克隆抗體的制備單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。在制備單抗過程中，要進行雜交瘤細胞的篩選。在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細胞，只有少數(shù)是分泌特異性單克隆抗體的細胞。因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，再及時進行凍存。單克隆抗體的大量制備主要采用體外培養(yǎng)法和動物體內(nèi)誘生法?？寺』募毎隗w外進行大量培養(yǎng)，離心去除細胞及其碎片，收集上清液，而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。背誦筆記而體內(nèi)雜交瘤細胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細胞具有從親代淋巴細胞得來的腫瘤細胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無胸腺的裸鼠），雜交瘤細胞就開始無限地繁殖，直至宿主死亡。約1-2周，可見產(chǎn)生腫瘤細胞的小鼠腹部膨大，用注射器抽取腹水，即可獲得大量的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體。背誦筆記筆記一：動物細胞融合技術1.概念：使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。2.原理：細胞膜的流動性。3.誘導融合方法：PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法。4.動物細胞融合的過程包括細胞膜融合、細胞質融合和細胞核融合。其中細胞膜融合是細胞融合的先導，在細胞膜融合中體現(xiàn)出細胞膜具有一定的流動性，細胞融合的實質是核融合。動物細胞融合完成的標志是兩個或多個細胞核融合為一個細胞核。如下圖(以滅活的病毒誘導為例)：5.意義：突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。6.應用：(1)成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)用于制備單克隆抗體。7.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較：比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞的全能性細胞膜的流動性、細胞的增殖融合前處理先除去細胞壁先使細胞分散開使用的酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶誘導手段物理法：電融合法、離心法化學法：PEG融合法除物理法和化學法外，也可用滅活的病毒誘導過程結果雜種植株雜交細胞應用培育植物新品種主要用于制備單克隆抗體意義克服了遠緣雜交不親和的障礙，打破了生殖隔離，擴展了雜交的親本組合筆記二：單克隆抗體及其應用1.傳統(tǒng)抗體的獲得：（1）方法：向動物體內(nèi)反復注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。（2）缺陷：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。2.單克隆抗體的制備原理：(1)B淋巴細胞特點：一種B淋巴細胞分泌一種特異性抗體。(2)骨髓瘤細胞特點：能在體外大量增殖。(3)雜交瘤細胞特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能無限增殖又能產(chǎn)生大量特定抗體。3.單克隆抗體的制備過程：4.單克隆抗體制備過程中的兩次篩選的比較：項目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導融合后得到多種雜交細胞，另外還有未融合的細胞從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細胞有很多種，形成的雜交瘤細胞也有很多種篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細胞和同種細胞融合后形成的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群篩選目的得到雜交瘤細胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞5.單克隆抗體的優(yōu)點：（1）能準確地識別抗原的細微差異；（2）與特定抗原發(fā)生特異性結合；（3）可以大量制備。6.單克隆抗體的應用：(1)作為診斷試劑，如定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病；（2）運載藥物，如ADC；（3）治療疾病。課后自測課后自測1．甲型流感病毒核蛋白單克隆抗體可有效治療甲流。下列關于其制備過程的敘述，正確的是（

）A．用動物細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)甲型流感病毒，以獲得充足的抗原B．制備過程需要用到動物細胞培養(yǎng)技術和動物細胞融合技術C．用特定的選擇培養(yǎng)基篩選的雜交瘤細胞可生產(chǎn)所需單克隆抗體D．體外培養(yǎng)雜交瘤細胞需定期使用胰蛋白酶處理，使其分散開來【答案】B【分析】單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細胞；利用動物細胞融合技術將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選，得到雜交瘤細胞；再進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，多次篩選后得到足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞；最后將所需的雜交瘤細胞在體外或小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取單克隆抗體?！驹斀狻緼、甲型H1N1流感病毒無細胞結構，必須寄生在活細胞內(nèi)才能生存，在動物細胞培養(yǎng)液中無法培養(yǎng)，A錯誤；B、單克隆抗體的制備過程包括動物細胞培養(yǎng)和動物融合技術，B正確；C、用特定的選擇培養(yǎng)基篩選得到雜交瘤細胞后，還要進行克隆化培養(yǎng)才能生產(chǎn)所需的單克隆抗體，C錯誤；D、雜交瘤細胞是一種癌細胞，無接觸抑制現(xiàn)象，不需要用胰蛋白酶處理，D錯誤。故選B。2．下列關于動物細胞融合技術及意義的敘述，不正確的是（

）A．可以利用動物細胞融合技術生產(chǎn)細胞因子B．動物細胞融合可打破生殖隔離獲得新物種C．細胞融合過程與細胞膜的結構特點直接相關D．動物細胞融合為制備單克隆抗體開辟了新途徑【答案】B【分析】動物細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞合并成為一個細胞的過程。動物細胞融合的原理是細胞膜的流動性。動物細胞融合的方法：物理法（離心、振動、電刺激等）、化學法（聚乙二醇（PEG））以及生物法（滅活病毒等）?！驹斀狻緼、細胞因子由T細胞產(chǎn)生，可以利用T細胞與骨髓瘤細胞融合產(chǎn)生的雜交瘤細胞生產(chǎn)細胞因子，A正確；B、動物細胞融合可以突破有性雜交的局限，實現(xiàn)遠緣雜交，但無法獲得新物種，B錯誤；C、細胞膜的結構特點是細胞膜具有流動性，動物細胞融合過程與細胞膜的流動性直接相關，C正確；D、動物細胞融合技術為制備單克隆抗體提供了新思路，開辟了新途徑，D正確。故選B。3．動物克隆的技術基礎是（）A．細胞和組織培養(yǎng)B．細胞融合C．單克隆抗體D．核移植【答案】A【分析】1、動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。2、細胞融合是兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程，也稱細胞雜交。3、單克隆抗體制備過程：用抗原刺激小鼠使之產(chǎn)生特異性免疫反應，從小鼠體內(nèi)提取B淋巴細胞，B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合成雜交瘤細胞，再篩選合適的雜交瘤細胞,進行相應的克隆,對單克隆抗體進行大量的制備。4、動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。5、動物細胞工程常用的技術手段有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、核移植等，其中動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎?！驹斀狻緼、細胞和組織培養(yǎng)是動物克隆的技術基礎，A正確；B、動物細胞融合是動物細胞工程常用的技術手段，但不是動物克隆的技術基礎，B錯誤；C、單克隆抗體是動物細胞工程常用的技術手段，但不是動物克隆的技術基礎，C錯誤；D、核移植是動物細胞工程常用的技術手段，但不是動物克隆的技術基礎，D錯誤。故選A。4．使用高效的細胞毒素類藥物進行化療可以有效殺死腫瘤細胞，但細胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害。構建抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）能對腫瘤細胞進行選擇性殺傷，ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細胞毒素）三部分組成，它的作用機制如圖所示。下列敘述錯誤的是（

）A．構建抗體—藥物偶聯(lián)物的抗體是特異性強、靈敏性高的單克隆抗體B．制備該抗體需要利用動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)等技術手段C．ADC通過胞吞進入細胞，該過程不需要細胞膜上載體蛋白的協(xié)助，也不消耗能量D．藥物在癌細胞內(nèi)釋放并起作用，同時誘導溶酶體破裂，加速了癌細胞的凋亡【答案】C【分析】1、單克隆抗體是由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的漿細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為雜交瘤細胞，雜交瘤細胞既能產(chǎn)生抗體，又能無限增殖。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群，可制備針對一種抗原的特異性抗體即單克隆抗體。2、題圖分析：ADC可以被癌細胞識別并被吞噬進入細胞，進入細胞后ADC被水解釋放藥物，藥物起作用，同時誘導溶酶體破裂，加速癌細胞死亡?！驹斀狻緼、構建抗體—藥物偶聯(lián)物的抗體目的是讓藥物只對腫瘤細胞起作用，因此使用的抗體要是特異性強、靈敏性高的單克隆抗體，A正確；B、制備該抗體需要把骨髓瘤細胞與能合成抗體的細胞融合，再對融合后的細胞進行擴大培養(yǎng)，所以制備該抗體要利用動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)等技術手段，B正確；C、ADC通過胞吞進入細胞，需要消耗細胞的能量，C錯誤；D、據(jù)圖所示，藥物在癌細胞內(nèi)釋放并起作用，同時誘導溶酶體破裂，加速了癌細胞的凋亡，D正確。故選C。5．抗PD-L1單克隆抗體能與癌細胞表面的PD-L1特異性結合，因而具有治療某些癌癥的作用。如圖是制備抗PD-L1單克隆抗體的示意圖，圖中有兩次篩選。下列相關敘述錯誤的是（

）

A．圖中第一次篩選所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基B．圖中第二次篩選的目的是獲得產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞C．圖中細胞集落b～d，既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗PD-L1抗體D．圖中加入的H物質，應該是取自癌細胞表面的PD-L1抗原【答案】C【分析】題圖分析：用PEG將B淋巴細胞和癌細胞融合，放在多孔玻璃板上進行培養(yǎng)，在選擇培養(yǎng)基中篩選，篩選出的abcd細胞集落為雜交瘤細胞，再加入PD-L1抗原，只有a細胞集落呈現(xiàn)陽性?！驹斀狻緼、圖中第一次篩選所用培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，其目的是篩選出雜交瘤細胞，A正確；B、圖中第二次篩選的目的是獲得產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，進而通過培養(yǎng)獲得單克隆抗體，B正確；C、圖中a-d是經(jīng)過篩選的雜交瘤細胞，所以既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體，但只有a能產(chǎn)生抗PD-L1單克隆抗體，C錯誤；D、題目中的目的是制備抗PD-L1單克隆抗體的過程，為了篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞，因而圖中加入的H物質，應該是取自癌細胞表面的PD-L1抗原，D正確。故選C。6．如圖是抗HCG（人絨毛膜促性腺激素）單克隆抗體制備流程圖，下列敘述錯誤的是（

）

A．①過程中常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒和電激等B．②過程中篩選出的雜交瘤細胞不一定能產(chǎn)生抗HCG抗體C．③過程中利用了DNA分子雜交的原理D．④過程培養(yǎng)液中所需氣體主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH【答案】C【分析】單克隆抗體制備的基本步驟：對小鼠進行免疫→提取B淋巴細胞→將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合→通過篩選、克隆化培養(yǎng)和擴大化培養(yǎng)→最終注入小鼠體內(nèi)→從腹腔腹水中提取單克隆抗體?！驹斀狻緼、動物細胞的融合原理是細胞膜具有一定的流動性，誘導細胞融合的方法有三種：生物方法-病毒、化學方法-聚乙二醇(PEG)、物理方法-離心、震動、電刺激，據(jù)圖可知，①過程表示B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒和電激等，A正確；B、②過程中篩選出的雜交瘤細胞不一定都能產(chǎn)生抗HCG抗體，還需要進行抗體專一性檢測，B正確；C、③過程表示篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細胞群，利用的時抗原-抗體雜交原理，C錯誤；D、④過程表示體外大規(guī)模培養(yǎng)，培養(yǎng)液中所需氣體主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，O2是細胞代謝必需的，D正確。故選C。7．科研工作者常常將單克隆抗體與細胞毒素類藥物偶聯(lián)起來，制成的“生物導彈”，來定向治療癌癥并降低藥物的副作用，其過程如圖所示。下列有關敘述不正確的是（

）

A．經(jīng)①形成的細胞都能無限增殖并產(chǎn)生相應抗體B．②過程需要篩選并克隆單個雜交瘤細胞C．未與單克隆抗體偶聯(lián)的細胞毒素等藥物沒有選擇殺傷癌細胞的功能D．抗癌細胞的單克隆抗體的靶向作用使③過程具有高度特異性【答案】A【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！驹斀狻緼、經(jīng)①誘導融合過程形成的細胞不都能無限增殖并產(chǎn)生相應抗體的細胞，還需要經(jīng)過兩次篩選才能獲得無限增殖并產(chǎn)生相應抗體的雜交瘤細胞，A錯誤；B、②過程需要篩選出既能無限增殖又能分泌特異性抗體的雜交瘤細胞并克隆單個雜交瘤細胞，獲得單克隆抗體，B正確；C、用以治療癌癥的“生物導彈”就是以單克隆抗體的定位導向作用將藥物定向帶到癌細胞，在原位殺死癌細胞，其中，構成“彈頭”的化學藥物、細胞毒素等物質沒有選擇殺傷癌細胞的功能，而單克隆抗體能將這種殺傷功能定位，C正確；D、過程③中由于單克隆抗體具有高度特異性，使其靶向作用非常準確，D正確。故選A。8．阿霉素是一種抗腫瘤藥物，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對機體其他細胞造成傷害，將阿霉素與能特異性識別腫瘤抗原的抗體利用接頭連接制成抗體——藥物偶聯(lián)物（ADC）。下列有關敘述錯誤的是（

）A．阿霉素有副作用，正常情況下不能大量、長期使用B．ADC中的特異性抗體是殺死腫瘤細胞的有效成分C．接頭既要保持穩(wěn)定，又不能影響抗體與阿霉素的功能D．利用同位素標記的特異性抗體，可用于定位診斷腫瘤【答案】B【分析】分析題干信息可知：阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對機體其它細胞造成傷害，即具有較大的副作用。為了解決這一問題，可將阿霉素與能特異性識別腫瘤抗原的抗體結合制成抗體–藥物偶聯(lián)物（ADC）?！驹斀狻緼、阿霉素在殺傷腫瘤細胞的同時還會對機體其它細胞造成傷害，說明阿霉素有副作用，正常情況下不能大量、長期使用，A正確；B、特異性抗體能和腫瘤抗原結合形成復合物，但是不能殺死腫瘤細胞，B錯誤；C、接頭既要保持穩(wěn)定，避免阿霉素從抗體中脫落，同時也不能影響抗體與阿霉素的功能，C正確；D、抗體和抗原的結合具有特異性，故利用同位素標記的特異性抗體在特定組織中的成像技術，可定位診斷腫瘤，D正確。故選B。9．下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質和A細胞的名稱分別為（

）A．抗體、T淋巴細胞 B．抗原、T淋巴細胞C．抗體、B淋巴細胞 D．抗原、B淋巴細胞【答案】D【分析】題圖分析，A細胞表示B淋巴細胞，B細胞表示骨髓瘤細胞，C細胞表示雜交瘤細胞，D表示產(chǎn)生的單克隆抗體。1表示給小鼠注射抗原，2表示提取B細胞，3表示動物細胞融合，4表示篩選出能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細胞，56表示提取單克隆抗體?！驹斀狻坑捎谥苽鋯慰寺】贵w的細胞來源是B淋巴細胞（已經(jīng)免疫的）和骨髓瘤細胞；由分析可知，1表示給小鼠注射抗原，使得小鼠產(chǎn)生免疫反應，形成能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，故A細胞為B淋巴細胞，即D正確。故選D。10．下列有關細胞工程的敘述正確的是（）A．在植物細胞工程中通常用Ca2＋處理植物細胞，以增大細胞壁的通透性B．用以治療癌癥的“生物導彈”就是以單克隆抗體作抗癌藥物定向殺死癌細胞C．誘導兩種植物細胞的原生質體融合，所獲得的融合細胞都具有雙親的遺傳特性D．單克隆抗體雖特異性強，但也不能與位于靶細胞內(nèi)的相應抗原發(fā)生特異性結合【答案】D【分析】1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。2、生物導彈：單克隆抗體+放射性同位素、化學藥物或細胞毒素（借助單克隆抗體的定位導向作用將藥物定向帶到癌細胞，在原位殺死癌細胞。療效高，副作用小，位置準確。）【詳解】A、在基因工程中通常用CaCl2處理微生物細胞，以增大細胞壁通透性，A錯誤；B、用以治療癌癥的“生物導彈”=單克隆抗體+放射性同位素、化學藥物或細胞毒素，其借助單克隆抗體的定位導向作用將藥物定向帶到癌細胞，在原位殺死癌細胞，C錯誤；C、誘導兩種植物細胞的原生質體融合，所獲得的兩兩融合細胞有AA型、BB型、AB型，不都具有雙親的遺傳特性，C錯誤；D、某一種漿細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合后培養(yǎng)，獲得特異性強的單克隆抗體，但當相應抗原位于靶細胞內(nèi)時，該抗體不能與之發(fā)生特異性結合，D正確。故選D。11．細胞膜的結構特點是具有一定的流動性，下列實例不能反映該特點的是（）A．人的B淋巴細胞與小鼠的骨髓瘤細胞的融合B．吞噬細胞吞噬病菌C．核糖體合成的蛋白質進入細胞核D．變形蟲伸出偽足【答案】C【分析】細胞膜的結構特點：具有流動性（膜的結構成分不是靜止的，而是動態(tài)的）；細胞膜具有一定的流動性，常出現(xiàn)的流動性的實例：草履蟲取食過程中食物泡的形成、變形蟲捕食和運動時偽足的形成、白細胞吞噬細菌、動物細胞分裂時細胞膜的縊裂過程、細胞雜交時的細胞融合等?！驹斀狻緼、人的B淋巴細胞與小鼠的骨髓瘤細胞的融合，體現(xiàn)了細胞膜的流動性，A不符合題意；B、吞噬細胞通過胞吞作用吞噬病菌，體現(xiàn)了細胞膜的流動性，B不符合題意；C、核糖體中合成的蛋白質通過核孔進入細胞核，沒有通過膜結構，所以不能反映細胞膜具有一定的流動性，C符合題意；D、變形蟲伸出偽足，通過變形運動來攝食和運動，體現(xiàn)細胞膜的結構特點具有一定的流動性，D不符合題意。故選C。12．某同學在學習“細胞工程”時，列表比較了動植物細胞工程的有關內(nèi)容，你認為有幾處是不正確的（）

植物細胞工程動物細胞工程技術手段植物組織培養(yǎng)和植物體細胞雜交動物細胞培養(yǎng)和單克隆抗體的制備特殊處理機械法去除細胞壁胰蛋白酶處理，制成細胞懸液融合方法物理方法、化學方法物理方法、化學方法、生物方法典型應用人工種子、雜種植株單克隆抗體的制備培養(yǎng)液區(qū)別生長素和細胞分裂素影響脫分化和再分化動物血清（血漿）不可缺少A．1 B．2 C．3 D．4【答案】B【分析】植物細胞工程的技術手段主要有植物組織培養(yǎng)和植物體細胞雜交，其中植物組織培養(yǎng)是植物細胞工程的基礎；動物細胞工程的技術手段主要有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體的制備、胚胎移植和核移植，其中動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎。動、植物細胞工程的原理和技術手段有相似之點，但也存在不同之處，需要考生在平時的學習過程中注意列表比較?！驹斀狻竣偌夹g手段：植物細胞工程的技術手段有植物組織培養(yǎng)和植物體細胞雜交；動物細胞工程技術有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、動物細胞核移植等技術，單克隆抗體的制備是動物細胞融合的應用，①錯誤；②特殊處理：植物體細胞雜交時，需要用酶解法（纖維素酶和果膠酶）去除細胞壁，動物細胞培養(yǎng)時需要用胰蛋白酶處理制備細胞懸浮液，②錯誤；③融合方法：誘導植物細胞融合的方法有物理（離心、振動和電激等）和化學方法（聚乙二醇）；誘導動物細胞融合的方法有物理、化學和生物方法（滅活的病毒），③正確；④應用：植物細胞工程技術可應用于制備人工種子、培育雜種植株；動物細胞工程中的動物細胞融合技術可以用于制備單克隆抗體，④正確；⑤培養(yǎng)液：植物細胞工程中的培養(yǎng)基中需要用生長素和細胞分裂素以影響愈傷組織的生長和分化；動物細胞工程的培養(yǎng)液中需要加入動物血清、血漿等天然成分，⑤正確。故選B。13．制備單克隆抗體時需要經(jīng)過兩次篩選，第一次篩選需要用HAT培養(yǎng)基，已知哺乳動物細胞可通過D途徑和S途徑合成DNA，而小鼠的骨髓瘤細胞只能通過D途徑合成DNA．其中進行D途徑合成時葉酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑。第二次篩選需要用96孔培養(yǎng)板進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。下列相關敘述正確的是（）A．HAT培養(yǎng)基中要加入葉酸從而把雜交瘤細胞篩選出來B．在HAT培養(yǎng)基中雜交瘤細胞可通過D途徑和S途徑合成DNA因此可以大量增殖C．用96孔培養(yǎng)板克隆化培養(yǎng)時要用培養(yǎng)液對第一次篩選所得的雜交瘤細胞進行充分稀釋以保證分配到每個孔中的細胞數(shù)不超過1個D．克隆化培養(yǎng)后需要向每個孔中加入相應抗體從而進行抗體檢測，呈陽性反應的孔中的細胞即為能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞【答案】C【分析】1、單克隆抗體的制備：（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應的B淋巴細胞。（2）獲得雜交瘤細胞：①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，該雜種細胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。（4）將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。（5）提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。2、單克隆抗體的作用：①作為診斷試劑：（最廣泛的用途）具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。②用于治療疾病和運載藥物：主要用于治療癌癥，可制成“生物導彈”。由于單克隆抗體的特異性強，能特異性識別抗原，因此可以把抗癌細胞的單克隆抗體跟放射性同位素、藥物等相結合，制成“生物導彈”，借助單克隆抗體的定位導向作用將藥物定向帶到癌細胞，在原位殺死癌細胞，療效高，副作用小，位置準確?！驹斀狻緼B、進行D途徑合成時葉酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑，所以在HAT培養(yǎng)基中需要添加氨基蝶呤以阻斷D途徑。在HAT培養(yǎng)基上瘤-瘤雜交細細胞由于不能合成DNA而無法增殖，B-B雜交細胞雖然可通過S途徑合成DNA但本身無法增殖，只有雜交瘤細胞能通過S途徑合成DNA且具有骨髓瘤細胞的增殖特性而能大量增殖，AB錯誤：C、第二次篩選前先要用培養(yǎng)液對第一次篩選所得的雜交瘤細胞進行充分稀釋以保證分配到每個孔中的細胞數(shù)不超過1個，C正確：D、克隆化培養(yǎng)后應向每個孔中加入相應抗原從而進行抗體檢測，D錯誤。故選C。14．除雜交瘤單克隆技術之外，制備單克隆抗體的常用方法還包括單個B細胞抗體技術，可通過下圖所示的技術流程制備抗體用于治療人類疾病。下列說法錯誤的是（

）

A．上述技術可一定程度避免機體對傳統(tǒng)鼠源單克隆抗體的免疫反應B．選用單個B淋巴細胞是為了最終獲得純度較高的抗體C．應在95%空氣加5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中對受體細胞進行培養(yǎng)D．將基因表達載體導入受體細胞前需要用鈣離子處理受體細胞【答案】D【分析】1、基因工程技術的基本步驟：(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成。(2)基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。(3)將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化