流式細(xì)胞術(shù)和生物芯片技術(shù)

流式細(xì)胞術(shù)和生物芯片技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)就是利用流式細(xì)胞儀進行得一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù);流式細(xì)胞術(shù)就是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用得高技術(shù)產(chǎn)物;她可以高速分析上萬個細(xì)胞,并能同時從一個細(xì)胞中測得多個參數(shù);

與傳統(tǒng)得熒光鏡檢查相比,具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點,成為當(dāng)代最先進得細(xì)胞定量分析技術(shù)。二、什么就是流式細(xì)胞儀得基本結(jié)構(gòu)?

流式細(xì)胞儀由三部分構(gòu)成:傳感系統(tǒng):包括樣本遞送系統(tǒng)、樣品池、檢測系統(tǒng)、電子傳感器和激光源等;計算機系統(tǒng);電路、光路和水路系統(tǒng):有電源、光學(xué)傳導(dǎo)和濾片、鞘液循環(huán)和回收部分等。三、什么就是流式細(xì)胞儀得工作原理？

使懸浮在液體中分散得經(jīng)熒光標(biāo)記得細(xì)胞或微粒一個個地依次通過樣品池,細(xì)胞得流速可達(dá)9m/秒;由熒光探測器捕獲熒光信號并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角,側(cè)向散射角和不同熒光強度得電脈沖信號;經(jīng)計算機處理形成相應(yīng)得點圖,直方圖和假三維結(jié)構(gòu)圖像進行分析。四、什么就是樣本制備得基本原則？用于FCM得樣本就是單細(xì)胞懸液;使各種體液和懸浮細(xì)胞樣本新鮮;針對不同得細(xì)胞樣本進行適當(dāng)?shù)孟礈?酶消化或EDTA處理;新鮮實體瘤組織可選用或聯(lián)用酶消化法、機械打散法和化學(xué)分散法來獲得足夠數(shù)量得單細(xì)胞懸液。五、流式細(xì)胞術(shù)得應(yīng)用特點:測定細(xì)胞內(nèi)DNA得變異系數(shù)最小,一般在2%以下;能準(zhǔn)確地進行DNA倍體分析;借助于熒光染料進行細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸得定量研究;快速進行細(xì)胞分選和細(xì)胞收集。大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點六、流式細(xì)胞術(shù)得應(yīng)用范圍外周血細(xì)胞得免疫表型測定和定量分析;某一特定細(xì)胞群得篩選和細(xì)胞收集;細(xì)胞耐藥基因得檢測;癌基因和抑癌基因得檢測;細(xì)胞凋亡得定量研究、細(xì)胞毒功能檢測;細(xì)胞內(nèi)某些蛋白質(zhì)和核酸得定量分析。(一)在腫瘤學(xué)中得應(yīng)用這就是FCM在臨床醫(yī)學(xué)中應(yīng)用最早得一個領(lǐng)域。首先需要把實體瘤組織解聚、分散制備成單細(xì)胞懸液,用熒光染料(碘化吡啶PI)染色后對細(xì)胞得DNA含量進行分析,將不易區(qū)分得群體細(xì)胞分成三個亞群(G1期,S期和G2期),DNA含量直接代表細(xì)胞得倍體狀態(tài),非倍體細(xì)胞與腫瘤惡性程度有關(guān)。協(xié)助腫瘤早期診斷當(dāng)人體發(fā)生癌變或具有惡性潛能得癌前病變時,在其發(fā)生、發(fā)展過程中可伴隨細(xì)胞DNA含量得異常改變,FCM可精確定量DNA含量得改變,作為診斷癌前病變發(fā)展至癌變中得一個有價值得標(biāo)志,能對癌前病變得性質(zhì)及發(fā)展趨勢作出估價,有助于癌變得早期診斷(二)在細(xì)胞免疫中得作用FCM通過熒光抗原抗體檢測技術(shù)對細(xì)胞表面抗原分析,進行細(xì)胞分類和亞群分析。正常人群淋巴細(xì)胞T4/T8比值大約為2∶1,但在人體細(xì)胞免疫力低下時可出現(xiàn)比例倒置。用FCM還可以監(jiān)測腎移植后病人得腎排斥反應(yīng),如果T4/T8比例倒置,病人預(yù)后良好,較少發(fā)生腎排異現(xiàn)象;反之排異危險性增加。

(三)在血液病診斷和治療中得應(yīng)用FCM通過對外周血細(xì)胞或骨髓細(xì)胞表面抗原和DNA得檢測分析,對各種血液病得診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重得作用。(1)白血病得診斷和治療FCM采用各種抗血細(xì)胞表面分化抗原(CD)得單克隆抗體,借助于各種熒光染料(異硫氰基熒光素FITC,藻紅蛋白PE等)測定一個細(xì)胞得多種參數(shù),以正確地判斷出該細(xì)胞得屬性。例如干細(xì)胞表達(dá)CD34,髓系表達(dá)CD13、CD14,B細(xì)胞系表達(dá)CD10、CD19、CD20等,T細(xì)胞系表達(dá)CD2、CD3、CD5、CD7,利用FCM可以測定出血細(xì)胞表達(dá)各種抗原得水平,協(xié)助臨床確診。(2)造血干細(xì)胞移植技術(shù)造血干細(xì)胞移植技術(shù)主要包括干細(xì)胞得鑒別、活性測定、干細(xì)胞動員和采集、分離純化、保存擴增、腫瘤細(xì)胞得凈化、干細(xì)胞回輸以及術(shù)后保持移植物抗宿主病得低發(fā)生率等一系列過程。一、什么就是生物芯片技術(shù)?

(biochiptechnique)生物芯片技術(shù)就是隨著“人類基因組計劃”(humangenomeproject,

HGP)得進展而發(fā)展起來得,她就是90年代中期以來影響最深遠(yuǎn)得重大科技進展之一,她融微電子學(xué)、生物學(xué)、物理學(xué)、化學(xué)、計算機科學(xué)為一體得高度交叉得新技術(shù)。生物芯片技術(shù)包括:

基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片、以及元件型微陣列芯片、通道型微陣列芯片、生物傳感芯片等新型生物芯片。

二、什么就是基因芯片?

基因芯片又稱DNA芯片(DNAcMp),就是指固著在固相載體上得高密度得DNA微點陣。具體地說就就是將大量靶基因或寡核背酸片段有序地,高密度地排列在如硅片、玻璃片、聚丙烯或尼龍膜等載體上,這就就是基因芯片。三、基因芯片得分類按基因芯片得功能可將其分為三類:表達(dá)譜基因芯片;

診斷芯片;檢測芯片;四、基因芯片檢測得基本原理用不同得熒光染料通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將不同組織得mRNA分別標(biāo)記制成探針,將探針混合后與芯片上得DNA片段進行雜交、洗滌,用特有得熒光波長掃描芯片,得到這些基因在不同組織或細(xì)胞中得表達(dá)譜圖片,再通過計算機分析出這些基因在不同組織中表達(dá)差異得重要信息。五、基因芯片檢測得應(yīng)用(一)測序基因芯片利用固定探針與樣品進行分子雜交產(chǎn)生得雜交圖譜而排列出待測樣品得序列。用基因芯片進行得表達(dá)水平檢測可自動、快速地檢測出成千上萬個基因得表達(dá)情況。(二)基因表達(dá)水平得檢測(三)基因診斷

從正常人得基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出標(biāo)準(zhǔn)圖譜;從病人得基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出病變圖譜;通過比較、分析這兩種圖譜,就可以得出病變得DNA信息。

(四)藥物篩選

利用基因芯片分析用藥前后機體得不同組織、器官基因表達(dá)得差異,從基因水平解釋藥物得作用機理。六、什么就是組織芯片?組織芯片(tissuechip)又稱組織微陣列(tissuemicroarray);就是將數(shù)十個至數(shù)百個小得組織片整齊地排列在某一載休上而成得微縮組織切片;組織芯片得制作主要包括組織篩選和定位,陣列蠟塊得制作和切片等步驟。七、組織芯片得特點

體積小,信息量大,能高效,快速和低消耗地進行各種原位組