TCSBM 0050.3-2024 創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評價 第3部分：刺激因子屏蔽評價方法

T/CSBMT/CSBM0050.3—2024創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評價第3部分：刺激因子屏蔽評價方法EffectivenessevaluationofwoundrepairmaterialsPart3:Invitroirritantsbarrierevaluationmethod中國生物材料學(xué)會發(fā)布I 3 5 7本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起本文件起草單位：杭州英健生物科技有限公司、中國食品藥品檢定驗在有保護材料存在時顯示細(xì)胞遷移作用。本文件采用Transwell細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)評價創(chuàng)面修復(fù)再生材料12規(guī)范性引用文件GB/T16886.5—2017醫(yī)療器械生物學(xué)評價第5部分：體外細(xì)胞毒性T/CSBM0050.1創(chuàng)面修復(fù)材料有效性評價第1部分：水溶性材料體外評價T/CSBM0050.1界定的術(shù)語和定義適用于本文4刺激物濃度確定試驗4.2.1器具24.2.2試劑和耗材b)二甲基亞砜（DMSO）；4.2.3細(xì)胞系對于用于不同部位的修復(fù)材料選擇合適的細(xì)胞系，如用于皮膚的修復(fù)材料可用皮膚細(xì)胞，用4.2.4刺激物4.3.1刺激物梯度溶液4.3.2陰性對照3觀察時間細(xì)胞系陰性對照組陽性對照組10%DMSO含10%FBSDMEM低糖培養(yǎng)基R——細(xì)胞相對存活率，%;45觀察時間細(xì)胞系R——細(xì)胞存活率，%;6f)恒溫水浴鍋；g)恒溫水浴搖床；h)酶標(biāo)儀；i)電子天平；j)液氮罐；k)24孔板；l)Transwell孔板；m)細(xì)胞培養(yǎng)瓶；n)ImageJ圖像處理軟件。6.2.2試劑和耗材含10%新生胎牛血清DMEM低糖培養(yǎng)基(含10%FBSDMEM低糖培養(yǎng)基)。6.2.3細(xì)胞系同4.2.3。6.3刺激物溶液制備同5.3。6.4試驗方法按照表3規(guī)定將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞按照1×10?個/mL的細(xì)胞密度鋪于24孔板內(nèi)，每孔加入1mL,3個復(fù)孔，24h后將一滅菌直尺放置于孔板孔上方，用1mL槍垂直于孔板和直尺間劃一道橫線，在10×顯微鏡下觀察。樣品組的Transwell孔板中加入0.2mL的保護膠使其厚度為1.0mm～1.5mm,空白對照組不做處理，分別在每組中加入3個不同濃度的刺激物。拍攝0h、以及培養(yǎng)12h、24h時的細(xì)胞圖片，應(yīng)用ImageJ按式(3)計算不同時間的細(xì)胞遷移率，評估生物材料作用后的對細(xì)胞遷移的影響。表3物理屏蔽細(xì)胞遷移試驗觀察時間細(xì)胞系顯微鏡觀察并拍攝圖片P——細(xì)胞遷移率，%;S?——細(xì)胞劃痕后0h細(xì)胞未覆蓋的區(qū)域面積；Si?——細(xì)胞劃痕后12h細(xì)胞未覆蓋的區(qū)域面積；S??——細(xì)胞劃痕后24h細(xì)胞未覆蓋的區(qū)域面積。6.5結(jié)果分析采用統(tǒng)計學(xué)方法評價試驗結(jié)果，并對空白對照組、試驗組結(jié)果進行綜合分析評估。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析試驗組和空白對照組比較p<0.05則認(rèn)為該材料具有屏蔽保護促進細(xì)胞遷移的作用，否則材料沒有屏蔽保護促進細(xì)胞遷移的作用。7究[J].北京生物醫(yī)學(xué)工程,2022,41(ofAlginate-BasedGastric