江蘇省蘇州新區(qū)實驗中學(xué)2025屆高三（最后沖刺）生物試卷含解析

江蘇省蘇州新區(qū)實驗中學(xué)2025屆高三（最后沖刺）生物試卷請考生注意：1．請用2B鉛筆將選擇題答案涂填在答題紙相應(yīng)位置上，請用0．5毫米及以上黑色字跡的鋼筆或簽字筆將主觀題的答案寫在答題紙相應(yīng)的答題區(qū)內(nèi)。寫在試題卷、草稿紙上均無效。2．答題前，認真閱讀答題紙上的《注意事項》，按規(guī)定答題。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．如圖為某一植物在不同實驗條件下測得的凈光合速率，下列假設(shè)條件中能使圖中結(jié)果成立的是（）A．橫坐標(biāo)是CO2濃度，甲表示較高溫度，乙表示較低溫度B．橫坐標(biāo)是溫度，甲表示較高CO2濃度，乙表示較低CO2濃度C．橫坐標(biāo)是光波長，甲表示較高溫度，乙表示較低溫度D．橫坐標(biāo)是光照強度，甲表示較高CO2濃度，乙表示較低CO2濃度2．生物學(xué)是一門實驗性科學(xué)，下面實驗中關(guān)于“綠”所述錯誤的是（）A．觀察DNA和RNA在細胞中分布的實驗中，甲基綠可使DNA著綠色B．橙色重鉻酸鉀在酸性條件下與酒精反應(yīng)出現(xiàn)灰綠色C．線粒體在健那綠作用下呈現(xiàn)藍綠色，并且具有活性D．葉綠體中含多種色素，其中葉綠素a呈現(xiàn)黃綠色3．在面包制作時，先將一定量的酵母加入和好的面團中，后經(jīng)蒸烤得到松軟可口的面包。在此過程中不會發(fā)生的變化是A．酵母菌進行了乙醇發(fā)酵B．酵母菌的細胞溶膠中有CO2產(chǎn)生C．丙酮酸產(chǎn)生酒精時伴隨ATP的生成D．酵母菌線粒體中，特殊分子所攜帶的氫和電子傳遞給氧形成水4．為減少環(huán)境污染、保護生態(tài)環(huán)境，必須走可持續(xù)發(fā)展的道路。我國作為《濕地公約》締約國，對濕地生態(tài)系統(tǒng)進行保護、開發(fā)和建設(shè)責(zé)無旁貸。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．濕地生態(tài)系統(tǒng)能調(diào)節(jié)氣候、蓄洪防旱，體現(xiàn)了生物多樣性的直接價值B．人類活動可以影響濕地生態(tài)系統(tǒng)演替的速度，但不能改變演替的方向C．少量生活污水流入人工濕地不會造成明顯影響，這說明濕地生態(tài)系統(tǒng)具有恢復(fù)力穩(wěn)定性D．濕地生態(tài)系統(tǒng)中捕食者的存在有利于提高群落的豐富度和增加營養(yǎng)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度5．下列關(guān)于酶和ATP的敘述中，錯誤的是（）A．酶的合成需要ATP提供能量，ATP的合成也需要酶的催化B．酶和ATP的合成都與基因有關(guān)C．人的成熟紅細胞不能合成酶，但可以合成ATPD．酶和ATP都具有高效性與專一性6．土壤微生物是反映土壤質(zhì)量狀況的重要指標(biāo)，常以磷脂脂肪酸總量來表示?？蒲腥藛T開展芒萁（蕨類植物）對馬尾松林植被恢復(fù)過程中土壤微生物群落影響的研究，測定結(jié)果如下圖。以下推測或結(jié)論不成立的是（）A．土壤微生物細胞中磷脂脂肪酸的含量比較穩(wěn)定B．測定中隨機設(shè)置取樣地且同一類型樣地要重復(fù)取樣C．在植被恢復(fù)初期，芒萁對土壤微生物的影響較小D．隨著植被的恢復(fù)，芒萁對土壤微生物的影響變?nèi)?．如圖為細胞吸水力隨質(zhì)壁分離程度變化曲線，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．在質(zhì)壁分離復(fù)原過程中，細胞吸水力應(yīng)逐漸升高B．細胞吸水力與質(zhì)壁分離程度呈負相關(guān)C．細胞不發(fā)生質(zhì)壁分離就沒有吸水力D．如果增大外界溶液的濃度，則細胞的質(zhì)壁分離程度可能更高8．（10分）下圖是基因型為AABb的某生物體（2N=4）正常細胞分裂示意圖（不考慮基因突變），下列敘述錯誤的是（）A．該細胞處于有絲分裂后期B．若染色體①有基因A，則④有基因A或aC．該圖所示的細胞含有4個染色體組D．該細胞產(chǎn)生的子細胞中有2對同源染色體二、非選擇題9．（10分）為研究供氮水平對某植物幼苗光合作用的影響，某研究小組采用水培方法，每天定時澆灌含不同氮素濃度的培養(yǎng)液，適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，分別測定各組植物幼苗葉片的相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果如圖所示。請回答下列問題：注：羧化酶能催化CO2的固定；氣孔導(dǎo)度指的是氣孔張開的程度。（1）該植物幼苗葉片葉綠體中色素的分離方法是_____，葉片通常呈現(xiàn)綠色的原因是_______。（2）該實驗的因變量有_________，當(dāng)培養(yǎng)液中氮素濃度在4mmol/L條件下，該植物幼苗的葉肉細胞中，葉綠體在光反應(yīng)階段產(chǎn)生的O2去路有_________________________。（3）根據(jù)實驗結(jié)果推測，當(dāng)培養(yǎng)液中氮素濃度大于8mmol/L以后，該植物幼苗葉肉細胞間CO2濃度會變大，原因是____________________________。10．（14分）轉(zhuǎn)染是指利用一定手段使外源基因進入細胞中并穩(wěn)定表達的過程。腺病毒載體常用于外源基因的轉(zhuǎn)染，這在基因治療、疫苗研發(fā)和動物細胞培養(yǎng)的可視化監(jiān)控方面有著廣闊的應(yīng)用前景?；卮鹣铝袉栴}。（l）腺病毒營____活，用作轉(zhuǎn)染的腺病毒載體上具有____識別和結(jié)合的部位，是外源基因在受體細胞中啟動表達的關(guān)鍵。（2）構(gòu)建腺病毒載體時，先用同種限制酶對腺病毒DNA和外源基因進行切割，可獲得相同的____，再用DNA連接酶恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的___。（3）通過腺病毒載體將藍色熒光基因轉(zhuǎn)染山羊耳緣成纖維細胞，利用藍色熒光直觀監(jiān)控細胞的體外培養(yǎng)過程。首先將山羊耳緣組織塊用胰蛋白酶或_______處理得到單個成纖維細胞，培養(yǎng)至貼滿瓶壁時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為________。這時，重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)進行_______培養(yǎng)。培養(yǎng)時使用的合成培養(yǎng)基，通常需加入___等一些天然成分，以滿足細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的全面需求。11．（14分）下圖是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（tetr）和氨芐青霉素抗性基因（ampr）。請回答下列問題：（1）EcoRⅤ酶切位點為，EcoRⅤ酶切出來的線性載體P1為_______末端。（2）用TaqDNA聚合酶進行PCR擴增獲得目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸，載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為_______的脫氧核苷酸，形成P2，P2和目的基因片段在_______酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。PCR技術(shù)中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點是_____________________________________。

（3）PCR技術(shù)可以臨床用于診斷感染性疾病、腫瘤及遺傳病等，它是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其標(biāo)準(zhǔn)步驟為_______、退火、__________。（4）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了___________________。若該目的基因是從cDNA文庫中分離獲取的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體中，然后在_______為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。12．果蠅是遺傳學(xué)的良好材料?，F(xiàn)有某性狀的野生型和突變型雌、雄果蠅（突變型僅有雄蠅），某研究小組從中選取親本進行雜交實驗，結(jié)果如下：第1組第2組第3組雜交實驗野生型雌蠅×突變型雄蠅↓野生型雄蠅野生型雌蠅×突變型雄蠅↓突變型雄蠅：野生型雄蠅1：1野生型雌蠅×野生型雄蠅↓野生型雌蠅：突變型雄蠅：野生型雄蠅2：1：1該性狀僅受一對基因控制，根據(jù)實驗回答下列問題：（l）從實驗結(jié)果還可推斷突變型對野生型為____（填“顯性”或“隱性”）性狀。決定該性狀的基因___位于（填“?！被颉癤”）染色體上。若用A、a表示該基因，第1組和第2組雜交實驗中母本的基因型依次是____。（2）第1組和第2組雜交實驗的子代都沒有雌蠅出現(xiàn)，請對此現(xiàn)象做出合理的推測____。（3）第3組實驗，F(xiàn)1果蠅群體中控制突變性狀的基因頻率為____，F(xiàn)1雌雄果蠅隨機交配，F(xiàn)2的表現(xiàn)型及比例____。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、D【解析】

據(jù)圖分析，圖示縱坐標(biāo)的含義是凈光合速率，是光合速率與呼吸速率的差值，在橫坐標(biāo)以下表示光合速率小于呼吸速率，在橫坐標(biāo)以上表示光合速率大于呼吸速率，與橫坐標(biāo)相交的點表示光合速率與呼吸速率相等。【詳解】A、若橫坐標(biāo)是CO2濃度，縱坐標(biāo)表示凈光合速率，則根據(jù)題中信息無法判斷出較高溫度下和較低溫度下呼吸速率的大小，同理，也無法判斷出較低和較高溫度下光合速率的大小，所以無法判斷甲和乙的關(guān)系，A錯誤；B、若橫坐標(biāo)是溫度，則隨著溫度的升高光合速率與呼吸速率都會表現(xiàn)為先升高后降低的趨勢，B錯誤；C、若橫坐標(biāo)是光波長，則凈光合曲線的變化趨勢為先升高后降低，與圖中甲乙曲線變化不符，C錯誤；D、若橫坐標(biāo)是光照強度，較高濃度的二氧化碳有利于光合作用的進行，因此甲表示較高CO2濃度，乙表示較低CO2濃度，D正確。故選D?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是掌握光合作用與呼吸作用的過程，明確縱坐標(biāo)的含義，確定圖中曲線不同段的生理意義，結(jié)合橫坐標(biāo)的不同含義進行分析答題。2、D【解析】

1、觀察DNA和RNA在細胞中分布實驗的原理：甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠可使DNA呈綠色，吡羅紅可使RNA呈紅色，利用甲基綠和吡羅紅混合染色劑對細胞染色，同時顯示DNA和RNA在細胞中的分布。2、胡蘿卜素為橙黃色、葉黃素為黃色、葉綠素a為藍綠色、葉綠素b為黃綠色。【詳解】A、根據(jù)上述分析可知，觀察DNA和RNA在細胞中分布的實驗中，甲基綠可使DNA著綠色，A正確；B、酒精與酸性條件下的重鉻酸鉀發(fā)生顏色反應(yīng)，從橙色變成灰綠色，B正確；C、健那綠染液是專一性染線粒體的活細胞染料，可以使活細胞中線粒體呈現(xiàn)藍綠色，C正確；D、葉綠體中的葉綠素a呈現(xiàn)藍綠色，D錯誤。故選D。【點睛】本題考查生物實驗中的顏色變化，將幾種與“綠”有關(guān)的實驗放在一起比較，需要考生在平時的學(xué)習(xí)過程中注意比較、積累并準(zhǔn)確識記。3、C【解析】

酵母菌是兼性厭氧性微生物，在有氧的條件下進行有氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳和水，在無氧條件下進行無氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳和酒精?！驹斀狻吭撨^程中，酵母菌可以進行無氧呼吸產(chǎn)生酒精，稱為乙醇發(fā)酵，A正確；酵母菌無氧呼吸發(fā)生的場所是細胞溶膠，B正確；無氧呼吸第二階段，丙酮酸和[H]反應(yīng)生成酒精和二氧化碳，該過程沒有ATP的生成，C錯誤；在酵母菌的線粒體內(nèi)膜上，特殊分子所攜帶的氫和電子傳遞給氧形成水，D正確。4、D【解析】

1、初生演替：是指一個從來沒有被植物覆蓋的地面，或者是原來存在過植被，但是被徹底消滅了的地方發(fā)生的演替；次生演替：原來有的植被雖然已經(jīng)不存在，但是原來有的土壤基本保留，甚至還保留有植物的種子和其他繁殖體的地方發(fā)生的演替；人類活動往往會使群落演替按照不同于自然演替的速度和方向進行。2、生物多樣性的價值：包括直接價值、間接價值、潛在價值。（1）直接價值：是指能為人類提供形式多樣的食物、纖維、燃料和建材等；（2）間接價值：是指對生態(tài)平衡、生物圈穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)功能；（3）潛在價值：指目前人類尚不清楚的價值?！驹斀狻緼、濕地生態(tài)系統(tǒng)能調(diào)節(jié)氣候、蓄洪防旱，體現(xiàn)了生物多樣性的間接價值，A錯誤；B、人類活動可以影響濕地生態(tài)系統(tǒng)演替的速度和演替的方向，B錯誤；C、少量生活污水流入人工濕地不會造成明顯影響，這說明濕地生態(tài)系統(tǒng)具有抵抗力穩(wěn)定性，C錯誤；D、濕地生態(tài)系統(tǒng)中捕食者的存在有利于提高群落的豐富度和增加營養(yǎng)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度，D正確。故選D。5、D【解析】

1、酶是由活細胞產(chǎn)生的具有催化作用的有機物，絕大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)，極少數(shù)酶是RNA。2、酶的特性：高效性、專一性和作用條件溫和的特性。3、酶促反應(yīng)的原理：酶能降低化學(xué)反應(yīng)的活化能。4、ATP是細胞進行生命活動的直接能源物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)簡式是A-P～P～P，其中A代表腺苷，T是三的意思，P代表磷酸基團，～代表高能磷酸鍵。5、ATP和ADP的轉(zhuǎn)化過程中：①能量來源不同：ATP水解釋放的能量來自高能磷酸鍵的化學(xué)能、并用于生命活動，合成ATP的能量來自呼吸作用或光合作用；②場所不同：ATP水解在細胞的各處，ATP合成在線粒體、葉綠體或細胞質(zhì)基質(zhì)?！驹斀狻緼、酶在細胞內(nèi)合成是耗能過程，需要ATP水解提供能量，ATP的合成與ATP的水解反應(yīng)都是酶促反應(yīng)，離不開酶的催化，A正確；B、由酶的本質(zhì)來看，蛋白質(zhì)是基因表達的產(chǎn)物，RNA的合成也與基因相關(guān)；ATP的合成是相關(guān)酶促反應(yīng)過程，離不開酶的催化，因此與基因有關(guān)，B正確；C、人的成熟紅細胞內(nèi)無DNA和細胞器，不能合成酶，但其可進行無氧呼吸合成ATP，C正確；D、ATP不具高效性和專一性，D錯誤。故選D。6、C【解析】

分析圖示：自變量是恢復(fù)年限，因變量是磷脂脂肪酸總量，隨著恢復(fù)年限增長，磷脂脂肪酸總量含量增加，在植被恢復(fù)的初期芒萁對土壤微生物活體總量的影響較大，而隨著生態(tài)系統(tǒng)逐漸成熟，芒萁覆蓋對土壤微山物總量的影響減弱，有無芒萁覆蓋的差距變小?！驹斀狻緼、土壤微生物細胞中磷脂脂肪酸的含量比較穩(wěn)定，故土壤微生物總量常以磷脂脂肪酸總量來表示，A正確；B、為排除偶然性影響，測定中隨機設(shè)置取樣地且同一類型樣地要重復(fù)取樣，B正確；C、在植被恢復(fù)初期，芒萁對土壤微生物的影響較大，C錯誤；D、隨著植被的恢復(fù)，芒萁覆蓋對土壤微山物總量的影響減弱，有無芒萁覆蓋的差距變小，D正確。故選C。7、D【解析】

A、在質(zhì)壁分離復(fù)原的過程中，細胞液的濃度逐漸減小，細胞吸水力逐漸降低，A錯誤；B、細胞質(zhì)壁分離程度越大，細胞液濃度越大，吸水力越強，細胞吸水力與質(zhì)壁分離程度呈正相關(guān)，B錯誤；C、細胞不發(fā)生質(zhì)壁分離說明細胞液的濃度等于或大于外界溶液的濃度，說明細胞仍有吸水力，C錯誤；D、如果增大外界溶液的濃度，則細胞液和外界溶液的濃度差越大，可能導(dǎo)致細胞失水越多，細胞的質(zhì)壁分離程度可能更高，D正確。故選D?！军c睛】1、原生質(zhì)層：細胞膜和液泡膜以及兩層膜之間的細胞質(zhì)。2、植物細胞的質(zhì)壁分離原理：當(dāng)細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細胞就會通過滲透作用而失水，細胞液中的水分就透過原生質(zhì)層進入到溶液中，使細胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定程度的收縮，由于原生質(zhì)層比細胞壁的收縮性大，當(dāng)細胞不斷失水時，原生質(zhì)層就會與細胞壁分離。2、質(zhì)壁分離復(fù)原的原理：當(dāng)細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時，細胞就會通過滲透作用而吸水，外界溶液中的水分就通過原生質(zhì)層進入到細胞液中，整個原生質(zhì)層就會慢慢地恢復(fù)成原來的狀態(tài)，緊貼細胞壁，使植物細胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。8、B【解析】

有絲分裂不同時期的特點：間期，進行DNA的復(fù)制和有關(guān)蛋白質(zhì)的合成；前期，核膜，核仁消失，出現(xiàn)紡錘體和染色體；中期，染色體形態(tài)固定，數(shù)目清晰；后期，著絲點分裂，姐妹染色單體分開成為染色體病均勻的移向兩級；末期，核膜核仁重建，紡錘體和染色體消失。【詳解】A、題意顯示某生物體正常細胞2N=4，而該細胞中含有8條染色體，故可知該細胞處于有絲分裂后期，A正確；B、若染色體①有基因A，由于①與④為同源染色體，結(jié)合該生物體的基因型可知④染色體相應(yīng)的位置上有基因A，不會有a（不考慮基因突變），B錯誤；C、該圖所示的細胞處于有絲分裂后期，故含有4個染色體組，C正確；D、該細胞產(chǎn)生的子細胞為體細胞，與親代細胞一樣含有2對同源染色體，D正確。故選B。二、非選擇題9、紙層析法葉綠素對綠光吸收最少，綠光被反射出來凈光合速率、葉綠素含量、氣孔導(dǎo)度、羧化酶含量等進入線粒體和釋放到外界環(huán)境氣孔導(dǎo)度不變，但羧化酶含量減少，CO2消耗速率降低【解析】

分析圖中的曲線可知，隨著培養(yǎng)液中氮素濃度的增加，葉綠素含量不斷增多，氣孔導(dǎo)度先增加后不變，羧化酶含量先增加后減少，凈光合速率先增加后降低?！驹斀狻浚?）葉綠體中色素的分離方法是紙層析法，葉綠素對綠光吸收最少，綠光被反射出來，故葉片通常呈現(xiàn)綠色。（2）由圖可知，本實驗的自變量為不同氮素濃度的培養(yǎng)液，因變量為凈光合速率、葉綠素含量、氣孔導(dǎo)度、羧化酶含量等，當(dāng)培養(yǎng)液中氮素濃度在4mmol/L條件下，該植物幼苗凈光合速率大于0，故葉綠體在光反應(yīng)階段產(chǎn)生的O2的去路有進入線粒體用于細胞呼吸和釋放到外界環(huán)境。（3）根據(jù)實驗結(jié)果推測，培養(yǎng)液中氮素濃度大于8mmol/L以后，幼苗的氣孔導(dǎo)度基本不變，但羧化酶含量明顯降低，CO2的消耗速率降低，故細胞間隙中CO2濃度會增大。【點睛】本題著重考查了光合作用過程中的物質(zhì)變化和能量變化等方面的知識，意在考查考生能識記并理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成一定知識網(wǎng)絡(luò)的能力，并且具有一定的分析能力和理解能力。10、寄生RNA聚合酶黏性末端或平末端磷酸二酯鍵膠原蛋白酶細胞的接觸抑制傳代血清、血漿【解析】

1、基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。構(gòu)建基因表達載體時需要用同種限制酶切割目的基因和載體，以產(chǎn)生相同的末端，然后用DNA連接酶連接，恢復(fù)被切開的核苷酸之間的磷酸二酯鍵，RNA聚合酶能夠與啟動子識別并結(jié)合催化轉(zhuǎn)錄的進行，這是是外源基因在受體細胞中啟動表達的關(guān)鍵。2、動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)?！驹斀狻浚?）腺病毒屬于動物病毒，其無細胞結(jié)構(gòu)，營寄生生活，必須寄生于宿主的活細胞中才能繁殖；用作轉(zhuǎn)染的腺病毒載體上應(yīng)具有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位啟動子，這樣才能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄形成mRNA，最終合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。（2）構(gòu)建腺病毒載體時，先用同種限制酶對腺病毒DNA和外源基因進行切割，可以獲得相同的黏性末端或平末端，再用DNA連接酶恢復(fù)被限制酶切開的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）對山羊耳緣組織塊用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理得到單個成纖維細胞，便于細胞與培養(yǎng)液充分接觸；培養(yǎng)至貼滿瓶壁時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制；這時重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)進行傳代培養(yǎng)；由于人們對動物細胞培養(yǎng)所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此培養(yǎng)時使用的合成培養(yǎng)基，通常需加入血漿、血清等一些天然成分，以滿足細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的全面要求?！军c睛】本題考查基因工程和細胞工程的知識點，要求學(xué)生掌握基因表達載體的構(gòu)建過程以及啟動子的作用，把握操作工具限制酶和DNA連接酶的應(yīng)用及其作用結(jié)果，理解動物細胞培養(yǎng)的過程和特點，把握動物細胞培養(yǎng)過程中的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的概念，識記動物細胞培養(yǎng)的條件，這是解決問題的關(guān)鍵。11、平胸腺嘧啶（T）DNA連接酶耐高溫變性延伸鑒別和篩選含目的基因的細胞蔗糖【解析】

1、基因表達載體的基本結(jié)構(gòu)包括復(fù)制原點、目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子等。其中標(biāo)記基因的作用是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細胞篩選出來，常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。根據(jù)題干信息和圖形分析，P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標(biāo)記基因，可以用檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后悔破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr）。2、PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈?！驹斀狻浚?）根據(jù)題意分析，EcoRV酶識別的序列是-GATATC-，并且兩條鏈都在識別序列的堿基的中軸線T與A之間進行切割，因此其切出來的線性載體P1為平末端。（2）據(jù)圖分析，目的基因兩側(cè)為粘性末端，且漏出的堿基為A，則在載體P1的兩端需要個加一個胸腺嘧啶堿基T形成具有粘性末端的載體P2，再用DNA連接酶將P2與目的基因連接起來形成重組質(zhì)粒P3。由于在PCR擴增技術(shù)中采用高溫使其變形解旋，因此需要使用的DNA聚合酶具有耐高溫的特點。（3）根據(jù)以上分析可知，PCR技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)步驟包括變性、退火、延伸。（4）根據(jù)以上分析可知，重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，其作用是鑒別和篩選含目的基因的細胞。根據(jù)題意可知，該目的基因是從cDNA文庫中分離獲取的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體中，在個體水平上鑒定目的基因是否表達，可以在以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌，如果大腸桿菌細胞內(nèi)目的基因表達出了蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白，該大腸桿菌能夠進行正常的生長和繁殖，則說明目的基因完成了表達過程?！军c睛】本題考查基因工程的知識點，要求學(xué)生掌握限制酶的特點和