《微生物基礎(chǔ)》課件-沙門氏菌

沙門氏菌微生物基礎(chǔ)DANIELELMERSALMON,(1850-1914)

美國獸醫(yī)微生物和病理學(xué)家。是美國授予的第一位獸醫(yī)學(xué)博士。1884年任美國農(nóng)業(yè)部畜牧局首任局長。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門氏菌。在醫(yī)學(xué)微生物中通用的沙門菌一詞，就是為紀(jì)念他而以他的名字命名的。沙門菌（Salmonella）沙門菌（Salmonella）DANIELELMERSALMON,(1850-1914)

美國獸醫(yī)微生物和病理學(xué)家。是美國授予的第一位獸醫(yī)學(xué)博士。1884年任美國農(nóng)業(yè)部畜牧局首任局長。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門氏菌。在醫(yī)學(xué)微生物中通用的沙門菌一詞，就是為紀(jì)念他而以他的名字命名的。沙門菌（Salmonella）沙門菌屬（Salmonella）是一大群寄生于人類和動(dòng)物腸道內(nèi)生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌統(tǒng)稱為沙門桿菌。是腸桿菌科中最重要的一個(gè)屬。沙門菌（Salmonella）沙門菌屬（Salmonella）是一大群寄生于人類和動(dòng)物腸道內(nèi)生化反應(yīng)和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性桿菌統(tǒng)稱為沙門桿菌。腸桿菌科中最重要的一個(gè)屬。沙門菌（Salmonella）

目前至少有67種O抗原和2000個(gè)以上血清型，所致疾病稱沙門菌病。包括引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、敗血癥、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。除可感染人外，還可感染很多動(dòng)物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。沙門菌（Salmonella）目前至少有67種O抗原和2000個(gè)以上血清型，所致疾病稱沙門菌病。包括引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、敗血癥、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。除可感染人外，還可感染很多動(dòng)物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。世界各地的食物中毒中，沙門菌中毒居前列，常作為進(jìn)出口食品和其它食品的致病菌指標(biāo)。肉的污染蛋的污染環(huán)境污染傳播問題

恢復(fù)期患者和無癥狀的帶菌者也是常見的傳染源。傳播途徑傳播途徑肉的污染蛋的污染環(huán)境污染傳播問題

恢復(fù)期患者和無癥狀的帶菌者也是常見的傳染源。一、沙門氏菌檢驗(yàn)檢樣36℃±1℃，8h～18hTSI，賴氨酸，NA，靛基質(zhì)，尿素(pH7.2)，KCN挑取可疑菌落BSXLD（或HE、科瑪嘉顯色培養(yǎng)基）1mL+TTB10mL1mL+SC10mL25g（mL）樣品+225mLBPWH2S+靛基質(zhì)-尿素-KCN-賴氨酸+H2S+靛基質(zhì)+尿素-KCN-賴氨酸+H2S-靛基質(zhì)-尿素-KCN-賴氨酸+/-反應(yīng)結(jié)果與左側(cè)描述不符商品化生化鑒定系統(tǒng)42℃±1℃，18h～24h36℃±1℃，18h～24h36℃±1℃，40h～48h36℃±1℃，18h～24h甘露醇+、山梨醇+ONPG-報(bào)告非沙門氏菌沙門氏菌，血清學(xué)試驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)程序問：沙門氏菌檢驗(yàn)基本步驟（程序）？前增菌選擇性增菌平板分離沙門氏菌生化試驗(yàn)鑒定到屬血清學(xué)分型鑒定問：沙門氏菌檢驗(yàn)基本步驟（程序）？前增菌選擇性增菌平板分離沙門氏菌生化試驗(yàn)鑒定到屬血清學(xué)分型鑒定⑴前增菌：

用無選擇性的培養(yǎng)基使處于瀕臨死亡狀態(tài)的沙門氏菌恢復(fù)活力。培養(yǎng)基為緩沖蛋白胨水（BPW)⑴前增菌用無選擇性的培養(yǎng)基使處于瀕臨死亡狀態(tài)的沙門氏菌恢復(fù)活力。培養(yǎng)基為緩沖蛋白胨水（BPW)⑵選擇性增菌沙門氏菌增殖，其它細(xì)菌受抑制培養(yǎng)基：SCTTCSC更適合傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌增菌，最適增菌溫度為36度;TTB更適合其他沙門氏菌增菌，最適增菌溫度為42度;沙門氏菌有2000多個(gè)菌型，一種增菌液不可能適合所有的沙門氏菌生長。沙門氏菌增菌要同時(shí)用兩種培養(yǎng)基增菌。國標(biāo)中沙門氏菌增菌要求這兩個(gè)增菌液同時(shí)做，可是沒有說明原理，為什么要同時(shí)做？國標(biāo)中沙門氏菌增菌要求這兩個(gè)增菌液同時(shí)做，可是沒有說明原理，為什么要同時(shí)做？SC更適合傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌增菌，最適增菌溫度為36度;TTB更適合其他沙門氏菌增菌，最適增菌溫度為42度;沙門氏菌有2000多個(gè)菌型，一種增菌液不可能適合所有的沙門氏菌生長。沙門氏菌增菌要同時(shí)用兩種培養(yǎng)基增菌。1.使用單一增菌液或選擇性培養(yǎng)基，會(huì)出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象。

由于傷寒沙門氏菌和副傷寒沙門氏菌生態(tài)學(xué)的特殊性，原則上應(yīng)使用兩種增菌液和兩種選擇性培養(yǎng)基。不同抑制劑對(duì)不同沙門氏菌影響各異。

使用兩種增菌液和兩種選擇性培養(yǎng)基的原因？2.一種選擇劑不能抑制某種競爭優(yōu)勢(shì)菌時(shí)另一種選擇劑可能能夠抑制。

使用兩種增菌液和兩種選擇性培養(yǎng)基的原因？1.使用單一增菌液或選擇性培養(yǎng)基，會(huì)出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象。由于傷寒沙門氏菌和副傷寒沙門氏菌生態(tài)學(xué)的特殊性，原則上應(yīng)使用兩種增菌液和兩種選擇性培養(yǎng)基。不同抑制劑對(duì)不同沙門氏菌影響各異。2.一種選擇劑不能抑制某種競爭優(yōu)勢(shì)菌時(shí)另一種選擇劑可能能夠抑制。（3）回答問題：平板分離所用的選擇性培養(yǎng)基有哪些？平板分離的培養(yǎng)基為什么選擇兩個(gè)？培養(yǎng)時(shí)間怎樣？

BS、XLD、HE、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基（3）回答問題平板分離所用的選擇性培養(yǎng)基有哪些？BS、XLD、HE、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板分離的培養(yǎng)基為什么選擇兩個(gè)？培養(yǎng)時(shí)間怎樣？

增菌和選擇性培養(yǎng)前增菌增菌液增菌液平板分離平板分離（4）生化反應(yīng)鑒定到屬在選擇性平板上符合沙門氏菌特征的菌落，只能說可能是沙門氏菌，也可能是其它雜菌。初步的生化試驗(yàn)：三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)賴氨酸脫羧酶（NA)試驗(yàn)（4）生化反應(yīng)鑒定到屬在選擇性平板上符合沙門氏菌特征的菌落，只能說可能是沙門氏菌，也可能是其它雜菌。初步的生化試驗(yàn)：三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)賴氨酸脫羧酶（NA)試驗(yàn)根據(jù)上表中可理解為只有在斜面和底層產(chǎn)堿、不產(chǎn)H2S、不產(chǎn)氣的情況下可不進(jìn)行生化鑒定，直接判定為非沙門氏菌，其余任何情況均需進(jìn)行生化鑒定。TSI鑒定TSI鑒定根據(jù)上表中可理解為只有在斜面和底層產(chǎn)堿、不產(chǎn)H2S、不產(chǎn)氣的情況下可不進(jìn)行生化鑒定，直接判定為非沙門氏菌，其余任何情況均需進(jìn)行生化鑒定。三糖鐵生化試驗(yàn)底層產(chǎn)H2S底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿斜面底層產(chǎn)酸產(chǎn)堿底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿底層產(chǎn)H2S產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)H2S只在TSI產(chǎn)堿的情況下可判定無沙門氏菌，其余任何情況均需進(jìn)行生化鑒定三糖鐵生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)準(zhǔn)備色氨酸肉湯賴氨酸脫羧酶肉湯氨基酸脫羧酶肉湯尿素酶氰化鉀培養(yǎng)基

氰化鉀培養(yǎng)基對(duì)照甘露醇山梨醇β︱半乳糖苷色氨酸肉湯經(jīng)36℃，18～24h培養(yǎng)后滴加靛基質(zhì)試劑，片刻觀察結(jié)果陽性為玫瑰紅色。色氨酸脫羧酶及對(duì)照和氰化鉀及對(duì)照轉(zhuǎn)種結(jié)束后需滴加液體石蠟覆蓋試驗(yàn)管方可進(jìn)行培養(yǎng)。靛基質(zhì)試驗(yàn)+時(shí)補(bǔ)做甘露醇山梨醇試驗(yàn)，試驗(yàn)陽性后進(jìn)行血清學(xué)鑒定TSI-時(shí)，進(jìn)行ONPG試驗(yàn)，ONPG陰性時(shí)進(jìn)行血清學(xué)鑒定。H2S+、靛基質(zhì)-、尿素-、KCN-、賴氨酸+后進(jìn)行血清學(xué)鑒定。生化試驗(yàn)色氨酸吲哚試驗(yàn)陰性符合賴氨酸陽性對(duì)照陰性0NPG陰性尿素酶陰性KCN及對(duì)照陰性甘露醇山梨醇陽性符合符合符合符合符合血清學(xué)鑒定(5)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)作為鑒定的一部分，必須完成實(shí)驗(yàn)室必須配備沙門氏菌的多價(jià)菌體(0)和多價(jià)鞭毛(H)診斷血清其中血清學(xué)分型為選作試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)必須基于生化試驗(yàn)的結(jié)果，不能單純以血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來報(bào)告最終結(jié)果。(5)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)作為鑒定的一部分，必須完成實(shí)驗(yàn)室必須配備沙門氏菌的多價(jià)菌體(0)和多價(jià)鞭毛(H)診斷血清其中血清學(xué)分型為選作試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)必須基于生化試驗(yàn)的結(jié)果，不能單純以血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來報(bào)告最終結(jié)果。綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定結(jié)果，報(bào)告25g檢或25ml樣品中檢出或未檢出沙門氏菌檢驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)：報(bào)告結(jié)果檢驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)：報(bào)告結(jié)果綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定結(jié)果，報(bào)告25g檢或25ml樣品中檢出或未檢出沙門氏菌二、沙門氏菌檢驗(yàn)過程中的常見問題答：仍然需要。我們不能以肉湯變紅作為沙門氏菌生長的判定標(biāo)準(zhǔn)。肉湯變紅是因?yàn)橐恍┘?xì)菌(比如：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等)能夠?qū)單猁}轉(zhuǎn)化為紅色單質(zhì)硒。但并不是所有的細(xì)菌都有轉(zhuǎn)化亞硒酸鹽的能力，或者轉(zhuǎn)化時(shí)間比較長。沙門氏菌檢驗(yàn)過程中的常見問題1、SC增菌液經(jīng)過18-24h培養(yǎng)后，肉湯沒有變紅，是否還需要轉(zhuǎn)接分離平板?1、SC增菌液經(jīng)過18-24h培養(yǎng)后，肉湯沒有變紅，是否還需要轉(zhuǎn)接分離平板?答：仍然需要。我們不能以肉湯變紅作為沙門氏菌生長的判定標(biāo)準(zhǔn)。肉湯變紅是因?yàn)橐恍┘?xì)菌(比如：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等)能夠?qū)單猁}轉(zhuǎn)化為紅色單質(zhì)硒。但并不是所有的細(xì)菌都有轉(zhuǎn)化亞硒酸鹽的能力，或者轉(zhuǎn)化時(shí)間比較長。答：三糖鐵底層全部變黑是因?yàn)楫a(chǎn)硫化氫過多，會(huì)將產(chǎn)酸的黃色掩蓋。為防止此現(xiàn)象的發(fā)生，操作時(shí)應(yīng)該注意：先在斜面進(jìn)行劃線，留少量的菌進(jìn)行穿刺。穿刺時(shí)不要穿到底部，留一部分用于產(chǎn)酸的觀察。培養(yǎng)時(shí)間18h時(shí)可以先觀察一次結(jié)果，記錄產(chǎn)酸。三糖鐵在培養(yǎng)過程中，試管塞不宜過緊，要保證氣體交換暢通2、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)后底層全部變黑，怎樣判斷底層產(chǎn)堿還是產(chǎn)酸?2、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)后底層全部變黑，怎樣判斷底層產(chǎn)堿還是產(chǎn)酸?答：三糖鐵底層全部變黑是因?yàn)楫a(chǎn)硫化氫過多，會(huì)將產(chǎn)酸的黃色掩蓋。為防止此現(xiàn)象的發(fā)生，操作時(shí)應(yīng)該注意：先在斜面進(jìn)行劃線，留少量的菌進(jìn)行穿刺。穿刺時(shí)不要穿到底部，留一部分用于產(chǎn)酸的觀察。培養(yǎng)時(shí)間18h時(shí)可以先觀察一次結(jié)果，記錄產(chǎn)酸。三糖鐵在培養(yǎng)過程中，試管塞不宜過緊，要保證氣體交換暢通答：1、氨基酸脫羧酶對(duì)照管的作用主要是判斷待檢菌是否生長，且是否利用葡萄糖。細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，就會(huì)使溴甲酚紫指示劑變黃。如果肉湯沒有變黃，但有明顯生長跡象，說明待檢菌可能不發(fā)酵葡萄糖。遇到這種情況，我們可以結(jié)合三糖鐵的結(jié)果，并補(bǔ)做氧化酶試驗(yàn)，以此排除假單胞菌屬。2、生化管是微量鑒定系統(tǒng)，接菌量的多少影響較大，可以相應(yīng)根據(jù)接菌量調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間。16-18h先觀察一次結(jié)果。3、在賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)中，氨基酸脫羧酶對(duì)照管沒有變黃是何原因?3、在賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)中，氨基酸脫羧酶對(duì)照管沒有變黃是何原因?答：1、氨基酸脫羧酶對(duì)照管的作用主要是判斷待檢菌是否生長，且是否利用葡萄糖。細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，就會(huì)使溴甲酚紫指示劑變黃。如果肉湯沒有變黃，但有明顯生長跡象，說明待檢菌可能不發(fā)酵葡萄糖。遇到這種情況，我們可以結(jié)合三糖鐵的結(jié)果，并補(bǔ)做氧化酶試驗(yàn)，以此排除假單胞菌屬。2、生化管是微量鑒定系統(tǒng)，接菌量的多少影響較大，可以相應(yīng)根據(jù)接菌量調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間。16-18h先觀察一次結(jié)果。4、o多價(jià)抗血清和對(duì)照的生理鹽水都不凝集，應(yīng)怎樣處理?答：應(yīng)考慮待檢菌是否存在莢膜抗原?？蓪饩涸?00℃條件下加熱處理15-60min,破壞莢膜抗原，然后再做0多價(jià)鑒定。4、o多價(jià)抗血清和對(duì)照的生理鹽水都不凝集，應(yīng)怎樣處理?答：應(yīng)考慮待檢菌是否存在莢膜抗原?？蓪饩涸?00℃條件下加熱處理15-60min,破壞莢膜抗原，然后再做0多價(jià)鑒定。三、實(shí)驗(yàn)中的部分培養(yǎng)基緩沖蛋白胨水(BPW)反應(yīng)原理：蛋白胨在培養(yǎng)基中作為基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)提供菌體生長所需的碳源、氮源等營養(yǎng)元素；氯化鈉維持體系滲透壓平衡；磷酸鹽作為緩沖劑。蛋白胨在培養(yǎng)基中作為基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)提供菌體生長所需的碳源、氮源等營養(yǎng)元素氯化鈉維持體系滲透壓平衡磷酸鹽作為緩沖劑緩沖蛋白胨水(BPW)反應(yīng)原理：反應(yīng)原理：蛋白胨、牛肉粉在培養(yǎng)基中作為營養(yǎng)物質(zhì)提供菌體細(xì)胞生長所需要的氮源、碳源及其他營養(yǎng)元素；氯化鈉維持培養(yǎng)基體系滲透壓；CaCO?吸收有毒性的代謝物質(zhì)(主要是培養(yǎng)基酸堿度的變化對(duì)菌生長的影響);膽鹽抑制革蘭氏陽性菌的生長；硫代硫酸鈉經(jīng)碘氧化生成四硫磺酸鈉對(duì)大腸菌群有抑制作用；沙門氏菌具有產(chǎn)四硫磺酸酶的特性能分解四硫磺酸，因而能在該培養(yǎng)基中生長繁殖。四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB）四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB）反應(yīng)原理蛋白胨、牛肉粉在培養(yǎng)基中作為營養(yǎng)物質(zhì)提供菌體細(xì)胞生長所需要的氮源、碳源及其他營養(yǎng)元素；氯化鈉維持培養(yǎng)基體系滲透壓；CaCO?吸收有毒性的代謝物質(zhì)(主要是培養(yǎng)基酸堿度的變化對(duì)菌生長的影響);膽鹽抑制革蘭氏陽性菌的生長；硫代硫酸鈉經(jīng)碘氧化生成四硫磺酸鈉對(duì)大腸菌群有抑制作用；沙門氏菌具有產(chǎn)四硫磺酸酶的特性能分解四硫磺酸，因而能在該培養(yǎng)基中生長繁殖。亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)反應(yīng)原理：蛋白胨作為基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)提供碳源、氮源，維生素及礦物質(zhì)元素；乳糖作為碳水化合物，通過代謝提供能量；亞硒酸鹽抑制革蘭氏陽性菌及除沙門氏菌以外的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌；L-半胱氨酸在培養(yǎng)基中作為還原劑。亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)反應(yīng)原理蛋白胨作為基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)提供碳源、氮源，維生素及礦物質(zhì)元素；乳糖作為碳水化合物，通過代謝提供能量；亞硒酸鹽抑制革蘭氏陽性菌及除沙門氏菌以外的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌；L-半胱氨酸在培養(yǎng)基中作為還原劑。亞硫酸鉍瓊脂(BS)反應(yīng)原理：蛋白胨、牛肉粉為細(xì)菌生長提供好所需的氮源、碳源、維生素及礦物質(zhì)等營養(yǎng)元素；葡萄糖：提供細(xì)菌代謝所需的能量；亞硫酸鈉和檸檬酸鉍銨反應(yīng)生成亞硫酸鉍，煌綠和亞硫酸鉍能抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽性菌的生長，但是對(duì)傷寒、副傷寒等沙門氏菌的生長沒有影響；傷寒沙門氏菌及其他沙門氏菌能夠利用葡萄糖，將亞硫酸鹽還原成硫化物并與硫酸鹽鐵反應(yīng)使菌落呈黑色；此外還可以將鉍離子還原成金屬鉍，使菌落呈現(xiàn)金屬光澤，從而使沙門氏菌得到分離。亞硫酸鉍瓊脂(BS)反應(yīng)原理蛋白胨、牛肉粉為細(xì)菌生長提供好所需的氮源、碳源、維生素及礦物質(zhì)等營養(yǎng)元素；葡萄糖：提供細(xì)菌代謝所需的能量；亞硫酸鈉和檸檬酸鉍銨反應(yīng)生成亞硫酸鉍，煌綠和亞硫酸鉍能抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽性菌的生長，但是對(duì)傷寒、副傷寒等沙門氏菌的生長沒有影響；傷寒沙門氏菌及其他沙門氏菌能夠利用葡萄糖，將亞硫酸鹽還原成硫化物并與硫酸鹽鐵反應(yīng)使菌落呈黑色；此外還可以將鉍離子還原成金屬鉍，使菌落呈現(xiàn)金屬光澤，從而使沙門氏菌得到分離。木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂反應(yīng)原理：酵母粉為細(xì)菌生長提供維生素和輔助因子；木糖、乳糖和蔗糖作為可發(fā)酵的碳源；除志賀氏菌外，其他大多數(shù)腸桿菌均能發(fā)酵