TZNZ 235-2023 水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

CCSB50T/ZNZchromatography-tandemmassspectrometri浙江省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全學(xué)會(huì)發(fā)布IT/ZNZ235—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由浙江省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站（浙江省漁業(yè)檢驗(yàn)檢測與疫病防控中心）。本文件主要起草人：王鼎南、周欽、王揚(yáng)、李詩言、柯慶青、周凡、吳洪喜、吳平谷。1T/ZNZ235—2023水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定方法。本文件適用于水體和底泥等水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中地西泮殘留量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法SC/T9102.1漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第1部分：總則SC/T9102.2漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第2部分：海洋SC/T9102.3漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第3部分：淡水3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理在弱堿性環(huán)境下，將水體樣品或底泥樣品中的地西泮用乙酸乙酯萃取，經(jīng)濃縮和PSA凈化材料凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測和確證，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑和材料5.1試劑5.1.1乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。5.1.2乙腈（C2H3N）：色譜純。5.1.3甲醇（CH4O）：色譜純。5.1.4甲酸（CH2O2）：色譜純。5.1.5無水硫酸鈉（Na2SO4）：使用前需550℃高溫灼燒4h。5.1.6無水磷酸氫二鉀（K2HPO4）。5.2溶液配制5.2.180%乙腈水溶液：準(zhǔn)確量取800mL乙腈（5.1.2），用水定容至1L，混合均勻后備用。2T/ZNZ235—20235.2.20.1%甲酸水溶液：準(zhǔn)確量取1mL甲酸（5.1.4），用水定容至1L，混合均勻后備用。5.2.31mol/L磷酸氫二鉀溶液：準(zhǔn)確稱取174g磷酸氫二鉀（5.1.6），用適量水溶解后，定容至1L容量瓶中，混合均勻后備用。5.3標(biāo)準(zhǔn)品5.3.1地西泮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：CAS號：439-14-5，純度≥95%。5.3.2地西泮-D5內(nèi)標(biāo)物：CAS號：65854-76-4，純度≥95%。5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.1地西泮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL）：準(zhǔn)確稱取10mg（精確至0.1mg）地西泮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙腈（5.1.2）溶解并定容至100mL，-20℃避光保存，有效期6個(gè)月。5.4.2地西泮標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0μg/mL）：準(zhǔn)確移取1mL地西泮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.1）于10mL容量瓶中，用乙腈（5.1.2）稀釋定容，配制成濃度為10.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液，-20℃避光保存，有效期6個(gè)5.4.3地西泮標(biāo)準(zhǔn)工作液（100ng/mL）：準(zhǔn)確移取1mL地西泮標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.4.2）于100mL容量瓶中，用乙腈（5.1.2）稀釋定容，配制成濃度為100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，-20℃避光保存，有效期6個(gè)5.4.4地西泮-D5內(nèi)標(biāo)工作液（500ng/mL）：將地西泮-D5內(nèi)標(biāo)物（5.3.2）用乙腈（5.1.2）逐級稀釋至500ng/mL，-20℃避光保存，有效期6個(gè)月。5.5材料5.5.1凈化材料：N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）。5.5.2微孔濾膜：0.2μm，有機(jī)型或親水親脂兩用型。5.5.3載氣：氮?dú)饧兌取?9.99%。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源。6.2分析天平：感量0.01g和0.1mg。6.3渦旋振蕩儀。6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4500r/min。6.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。6.6氮吹濃縮儀。6.7機(jī)械真空泵。6.8微量移液器。6.9冷凍干燥機(jī)：冷凍溫度≤-50℃,真空度＜20Pa。6.10采泥器。6.11篩網(wǎng)：100目。7樣品采集、制備及保存按照SC/T9102.1、SC/T9102.2和SC/T9102.3規(guī)定的方法采集樣品。3T/ZNZ235—2023a）水體樣品：500mL棕色玻璃瓶采集，采樣時(shí)注滿容器，避光室溫保存，7d內(nèi)完成萃取。b）底泥樣品：剔除石塊和植物體后用冷凍干燥機(jī)冷凍干燥，用研缽研磨后過100目篩網(wǎng)，-20℃以下冷凍保存，1個(gè)月內(nèi)完成分析。8試驗(yàn)步驟8.1樣品萃取及凈化8.1.1水體樣品取100mL水體樣品于250mL分液漏斗中，加入內(nèi)標(biāo)100μL（5.4.4），再加入10mL磷酸氫二鉀溶液（5.2.3），50mL乙酸乙酯（5.1.1），經(jīng)過振蕩提取后，棄去大部分的下層水相，將上層乙酸乙酯和少量水體樣品轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，3000r/min離心5min，移取上層清液于150mL雞心瓶中，38℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，在雞心瓶加入80%乙腈水溶液（5.2.1）1mL和PSA（5.5.1）100mg，旋渦1min，過0.2μm濾膜（5.5.2）供測定。8.1.2底泥樣品取試樣，常溫自然解凍后，稱取2g（準(zhǔn)確至0.01g）底泥樣品于50mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)100μL（5.4.4）靜置30min，再加入10mL磷酸氫二鉀溶液（5.2.3）和10mL乙酸乙酯（5.1.1），適當(dāng)渦旋后加入5g無水硫酸鈉（5.1.5），充分振蕩后4500r/min離心5min，移取上層清液至10mL玻璃離心管中，氮吹吹干后，加入80%乙腈水溶液（5.2.1）1mL和PSA（5.5.1）100mg，旋渦1min，過0.2μm濾膜（5.5.2）供測定。8.2儀器參考條件8.2.1液相色譜參考條件液相色譜參數(shù)參考條件：a)色譜柱：C18柱，1.8μm，3.0mm×100mm，或性能相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：甲醇（5.1.3），0.1%甲酸水溶液（5.2.2），梯度洗脫條件見表1；c)流速：300μL/min；d)柱溫：40°C；e)進(jìn)樣量：5μL。表1液相色譜的梯度洗脫條件8.2.2質(zhì)譜參考條件4T/ZNZ235—2023質(zhì)譜參靠條件：a）離子源：電噴霧離子源；b）掃描模式：正離子掃描（ESI+）；c）監(jiān)測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；d）電噴霧電壓（IS）：5500V；e）離子源溫度（TEM）：550℃;f）氣簾氣壓力（CUR）：35psi；g）霧化氣壓力（GS1）：55psi；h）輔助氣壓力（GS2）：60psi；i）碰撞氣流速（CAD）：Medium。j）質(zhì)譜參數(shù)見表2。表2地西泮及地西泮-D5的定性離子、定量離子、去簇電壓及碰撞能量8.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.4.3）和內(nèi)標(biāo)工作液（5.4.4）適量，經(jīng)氮?dú)獯蹈珊?，?0%乙腈水溶液配制成地西泮濃度分別為0.1ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液（地西泮-D5內(nèi)標(biāo)濃度為50ng/mL）。分別以地西泮濃度為橫坐標(biāo)（x），地西泮的峰面積和內(nèi)標(biāo)地西泮-D5峰面積比值為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。8.4測定8.4.1定性測定在相同實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中待測物質(zhì)的保留時(shí)間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間的偏差在±2.5%之內(nèi)，且樣品中各組分定性離子的相對豐度與濃度接近的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中對應(yīng)的定性離子的相對豐度進(jìn)行比較，偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差>50±20±25±308.4.2定量測定5T/ZNZ235—2023取試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作液，作多點(diǎn)校準(zhǔn)，地西泮以地西泮-D5為內(nèi)標(biāo)，以色譜峰峰面積定量，內(nèi)標(biāo) 法計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中目標(biāo)藥物的特征離子質(zhì)量色譜峰峰面積均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見附錄A。8.5空白實(shí)驗(yàn)除不加試樣外，按8.1~8.4的規(guī)定執(zhí)行試劑空白結(jié)果。9結(jié)果計(jì)算和表述9.1水體樣品結(jié)果計(jì)算按式（1）計(jì)算水體樣品中地西泮殘留量。1=（1）式中：X1—水體樣品中地西泮殘留量，單位為納克每升（ng/Lc0—試劑空白結(jié)果，單位為納克每毫升（ng/mL）；c1—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的樣液中地西泮的含量，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1—樣品的最終定容體積，單位為毫升（mLV2—水體樣品的取樣體積，單位為毫升（mL）。9.2底泥樣品結(jié)果計(jì)算按式（2）計(jì)算底泥樣品中地西泮殘留量。2=（2）式中：X2—底泥樣品中地西泮殘留量，單位為微克每千克(μg/kgc0—試劑空白結(jié)果，單位為納克每毫升（ng/mL）；c2—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的樣液中地西泮的含量，單位為納克每毫升（ng/mL）；V3—樣品的最終定容體積，單位為毫升（mLm—底泥樣品取樣質(zhì)量，單位為克（g）。9.3結(jié)果表述測定結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位。10檢測方法靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度10.1檢出限和定量限本方法水體樣品中地西泮的檢出限為0.3ng/L，定量限為1.0ng/L；底泥樣品中地西泮的檢出限為0.3μg/kg，定量限為1.0μg/kg