DB12∕T 841-2018 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分定量檢測(cè)技術(shù)規(guī)范微流滴數(shù)字PCR法

DB12DB12天轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分定量檢測(cè)技術(shù)規(guī)derivedproducts—Drople201811-07發(fā)布20181201實(shí)施天津市市場(chǎng)和質(zhì)量監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布DBDB12/T841—2018本標(biāo)準(zhǔn)由天津市農(nóng)村工作委員會(huì)提出并歸口。市東麗區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：蘭青闊、蘭璞、李亮、趙新、沈曉玲、王成、宛煜嵩、陳銳、黃鳳軍、李文、李益歌。I轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分定量檢轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分定量檢測(cè)技術(shù)規(guī)范微流滴數(shù)字PCR法DB12/T841—2018微流滴數(shù)字PCRdropletdigitalPCR滴進(jìn)行熒光信號(hào)采集，通過(guò)陽(yáng)性率和泊松分布計(jì)算獲得樣品中靶序列拷貝數(shù)或拷貝數(shù)濃度。下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。正確度trueness多次測(cè)試的均值與采納的標(biāo)準(zhǔn)值之間的接近程度。定量限limitofquantification(LOQ)特異性specificity1的轉(zhuǎn)基因植物定量測(cè)量能力驗(yàn)證或計(jì)量比對(duì)，并且測(cè)量結(jié)果在可控范圍內(nèi)；一一具備承擔(dān)轉(zhuǎn)基因生物安全檢測(cè)工作所需的儀器設(shè)備和環(huán)境設(shè)施；一一轉(zhuǎn)基因植物數(shù)字PCR檢測(cè)方法研制人員應(yīng)具備轉(zhuǎn)基因生物安全檢測(cè)工作相關(guān)業(yè)務(wù)知識(shí)。方法確認(rèn)validationofmethod通過(guò)提供明確的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，證明所使用的檢測(cè)方法能夠充分滿足測(cè)試目標(biāo)的需求。對(duì)靶序列具有嚴(yán)格的特異性和符合要求的檢測(cè)靈敏度。4.1.2PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序優(yōu)化對(duì)比結(jié)果。通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證檢測(cè)方法的特異性；特異性測(cè)試樣品至少應(yīng)包括三類：一一含有靶序列的轉(zhuǎn)基因植物材料；一一不含有靶序列的轉(zhuǎn)基因植物材料；一一不含靶序列的非轉(zhuǎn)基因植物材料。度測(cè)試濃度點(diǎn)數(shù)不少于5個(gè)，至少3次重復(fù)，每次試驗(yàn)至少設(shè)置3個(gè)平行。選擇合適的加工品類型，測(cè)試方法的適用性。DB12/T841—2018225%。線性動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)，符合精密度條件的最低拷貝數(shù)濃度。微流滴數(shù)字PCR方法的線性度以線性回歸曲線的決定系數(shù)R2表示，均值應(yīng)>0由兩個(gè)不同操作人員，在兩個(gè)不同時(shí)間段，對(duì)包含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的同批樣品（至由兩個(gè)不同操作人員，在兩個(gè)不同時(shí)間段，對(duì)包含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的同批樣品（至則，重新進(jìn)行相關(guān)測(cè)試。實(shí)驗(yàn)室間確認(rèn)。品。一一含有靶序列的轉(zhuǎn)基因植物材料；一一不含有靶序列的轉(zhuǎn)基因植物材料；一一不含靶序列的非轉(zhuǎn)基因植物材料。4.3.5至少重復(fù)3次試驗(yàn)，每次試驗(yàn)至少設(shè)置3個(gè)平行。3個(gè)平行。一一定量限分析：根據(jù)驗(yàn)證單位的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，確定方法的