T-LNSI 009-2024 人自然殺傷細胞

CCSC05T/LNSI009-2024 II 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14符號和縮略語 25技術(shù)要求 26檢驗方法 37檢驗規(guī)則 48使用說明 59標簽 10包裝、儲存及運輸 611廢棄物處理 6附錄A（規(guī)范性）細胞標志性蛋白和純度檢測流式細胞測定法 T/LNSI009-2024本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化的文件結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由沈陽艾米奧生物工程技術(shù)研發(fā)中心有限公司、沈陽市再生生物醫(yī)學重點實驗室提出。本文件由遼寧省免疫學會歸口。本文件起草單位：沈陽艾米奧生物工程技術(shù)研發(fā)中心有限公司、沈陽市再生生物醫(yī)學重點實驗室、中國醫(yī)科大學干細胞與再生醫(yī)學研究室、沈陽干細胞與再生醫(yī)學重點實驗室、遼寧艾米奧干細胞與再生醫(yī)學研究院有限公司、遼寧省細胞生物學學會、遼寧省生物技術(shù)協(xié)會、沈陽市干細胞與再生醫(yī)學產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟、沈陽藥科大學、中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院、中國醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院、中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院、艾米奧國際干細胞醫(yī)院有限公司。本文件主要起草人：龐希寧、龐然、施萍、赫甡、高航、姜雯宇、宋揚、郭然、單風平、王竟、孟濤、劉純燕、李曉航、王莉莎、徐東芬、荊晶、謝光麟、邵錫柱、張美玲、聶宏光、郎宏鑫、劉曉玉、王喜良、張濤、趙峰、張殿寶、王瑞、李彩虹、李宏圖、潘長偉、孔娟、王哲、王蔚、殷軍、張寧、李津陽、王靜、王嬌。1T/LNSI009-2024人自然殺傷細胞本文件規(guī)定了人自然殺傷細胞的技術(shù)要求、檢驗方法、檢驗規(guī)則、使用說明、標簽、包裝、儲存、運輸和廢棄物處理要求。本文件適用于人體組織分離的活干細胞分化或轉(zhuǎn)分化獲得的人自然殺傷細胞的質(zhì)量控制。本文件適用于抗體誘導的純因子培養(yǎng)法培養(yǎng)的人自然殺傷細胞。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。WS213丙型肝炎診斷WS273梅毒診斷WS293-2019《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》T/CSCB0001-2022《人干細胞研究倫理審查技術(shù)規(guī)范》T/CSCB0002-2022《人自然殺傷細胞》中華人民共和國藥典（2020年版）全國臨床檢驗操作規(guī)程3術(shù)語和定義3.1人自然殺傷細胞humannaturalkillercells人體組織分離的或干細胞分化或轉(zhuǎn)分化獲得的，具有非特異性殺傷、抗體依賴性細胞毒性、免疫調(diào)節(jié)功能的固有淋巴細胞。2T/LNSI009-20244符號和縮略語下列符號和縮略語適用于本文件。ADCC——抗體依賴細胞毒性（Antibody-DependentCellularCytotoxicity）NK——自然殺傷細胞（NaturalKillerCells）CD——自然殺傷細胞膜表面分化抗原簇（ClusterofDifferentiation）STR——短串聯(lián)重復序列（ShortTandemRepeat）Calein-AM——鈣黃綠素乙酰氧基甲酯（CalceinAcetoxymethylEsterr）5技術(shù)要求5.1細胞形態(tài)體外培養(yǎng)呈懸浮狀，活化后體積變大或形狀變?yōu)椴灰?guī)則，周圍可見一個或多個偽足樣突起。5.2染色體核型正常核型應(yīng)為46,XX或46,XY。5.3細胞標志蛋白CD3陰性CD56陽性率≥70%。5.4細胞純度具有CD56標志蛋白陽性表達細胞含量≥80%。5.5細胞存活率新鮮制備未凍存細胞≥90%；凍存細胞復蘇后應(yīng)用前≥70%5.6微生物真菌、細菌、支原體、衣原體、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP等均應(yīng)為陰性。5.7內(nèi)毒素內(nèi)毒素應(yīng)≤0.5EU/mL。5.8細胞STR鑒定3T/LNSI009-2024人體組織分離的或干細胞分化或轉(zhuǎn)分化獲得的人自然殺傷細胞，應(yīng)進行STR檢測及分型鑒定，無樣品間的交叉污染。6檢驗方法6.1細胞形態(tài)使用倒置顯微鏡×400倍觀察細胞，體外二維懸浮培養(yǎng)條件中，靜息狀態(tài)下呈圓形或不規(guī)則形懸浮生長，激活后形態(tài)變大變長。6.2染色體核型按照《中華人民共和國藥典(2020年版)》中“生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”項檢驗。注：根據(jù)目的樣本特性確定應(yīng)有的核型結(jié)果。正常核型應(yīng)為46,XX或46,XY。6.3細胞標志性蛋白按照附錄A的方法檢驗。6.4細胞純度按照附錄A的方法檢驗。6.5細胞存活率按照T/CSCB0002—2020檢驗。6.6微生物真菌、細菌、支原體和衣原體按照《中華人民共和國藥典(2020年版)》檢驗。人類免疫缺陷病毒按照WS293-2019檢驗。乙型肝炎病毒、人類嗜T細胞病毒、人類皰疹病毒、人巨細胞病毒按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》檢驗。丙型肝炎病毒按照WS213檢驗。梅毒螺旋體按照WS273檢驗。6.7內(nèi)毒素內(nèi)毒素按照《中華人民共和國藥典(2020年版)》檢驗。6.8細胞STR鑒定4T/LNSI009-2024按照T/CSCB0002—2020檢驗。7檢驗規(guī)則7.1批在一個生產(chǎn)周期在中，同一生產(chǎn)線、同一來源、同一代次、同一方法制備出來的產(chǎn)品為一批。7.2抽樣在同一批的產(chǎn)品中隨機抽取3個最小包裝單位。7.3出廠檢驗7.3.1每批產(chǎn)品應(yīng)進行出廠檢驗，并附檢驗報告。7.3.2出廠檢驗項目應(yīng)包括第5章規(guī)定的所有項目。7.4復核檢驗若客戶需要，應(yīng)由第三方專業(yè)細胞檢驗機構(gòu)或?qū)嶒炇疫M行復核檢驗，檢驗項目應(yīng)包括第5章規(guī)定的所有項目。7.5判定規(guī)則7.5.1出廠檢驗項目全部符合第5章規(guī)定，判為合格品；有1項及以上不符合本標準規(guī)定，則判為不合格品。7.5.2復核檢驗項目全部符合第5章規(guī)定，判為合格品；有1項及以上不符合本標準規(guī)定，則判為不合格品。8產(chǎn)品使用說明書至少包括以下內(nèi)容：a）產(chǎn)品名稱；b）細胞代次；c）細胞數(shù)量；d）生產(chǎn)日期；5T/LNSI009-2024e）生產(chǎn)批號；f）生產(chǎn)組織；g）儲存條件；h）運輸條件；i）使用方法；j）執(zhí)行標準號；k）生產(chǎn)地址；l）聯(lián)系方式；m）郵政編碼；n）注意事項。注：根據(jù)用戶需求，可標注內(nèi)毒素含量。9產(chǎn)品標簽至少包括以下內(nèi)容：a）產(chǎn)品名稱；b）細胞代次；c）細胞數(shù)量；d）生產(chǎn)批號；e）生產(chǎn)組織；f）生產(chǎn)日期。10包裝、儲存及運輸10.1包裝應(yīng)選擇對人自然殺傷細胞關(guān)鍵質(zhì)量屬性無影響的袋或瓶中，應(yīng)選用100毫升0.9%生理鹽水袋或瓶。10.2儲存10.2.1應(yīng)符合T/CSCB0001—2020要求。10.2.2應(yīng)在低于-130℃環(huán)境下儲存。10.3運輸6T/LNSI009-202410.3.1應(yīng)符合T/CSCB0001—2020要求。10.3.2凍存的細胞應(yīng)在干冰或低于-130℃條件下運輸，非凍存細胞建議在2℃~8℃下運輸。11廢棄物處理11.1建立廢棄細胞管理文檔人自然殺傷細胞生產(chǎn)和檢查過程中產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)建立廢棄細胞管理文檔，嚴格執(zhí)行管理規(guī)范并詳細記錄。11.2不合格的細胞、剩余廢棄的細胞或捐贈物處理辦法人自然殺傷細胞研究和生產(chǎn)中不合格的細胞、剩余廢棄的細胞或捐贈物，應(yīng)進行合法、妥善并符合倫理的處理。T/LNSI009-2024細胞標志性蛋白和純度檢測流式細胞測定法A.1儀器和設(shè)備A.1.1流式細胞儀。A.1.2離心機。A.2試劑A.2.1PBS溶液。A.2.22%胎牛血清液（2%FBS）。A.2.3CD3、CD56抗體。A.2.4按照相應(yīng)要求配制流式檢驗所需的液體：洗滌液、抗體稀釋液。A.3樣品保存洗滌液和染色后的樣品于2℃~8℃保存。相關(guān)抗體按說明書保存。A.4檢測步驟A.4.1樣品準備和抗體孵育收集單細胞，250g離心3min。棄上清，加入適量稀釋后的抗體進行孵育（按照抗體說明書進行稀釋使用）。A.4.2流式細胞術(shù)分析用洗滌液重懸細胞，然后通過40μm濾網(wǎng)轉(zhuǎn)移到流式管中，按流式細胞儀