《DNA的粗提取和鑒定》教案

1/4課題1DNA的粗提取與鑒定【學習目標】1．通過閱讀教材，能準確說出DNA的理化特性及提取和鑒定的原理；2．通過觀看實驗視頻，初步學會DNA粗提取和鑒定方法，知道相關(guān)溶液的作用機理?！窘虒W重點】提取DNA的相關(guān)原理和步驟【教學難點】提取DNA的相關(guān)原理和步驟【教學過程】一、開門見山：講解本實驗的目的是提取DNA和DNA的鑒定，其中提取DNA是本實驗的重點和難點。提出問題：“DNA主要存在于什么結(jié)構(gòu)上？”“如何提取DNA？”“選什么材料好？”二、達成共識：1、選適宜材料：選取動物細胞，易打破細胞結(jié)構(gòu)2、破壞細胞膜、核膜結(jié)構(gòu)，取核物質(zhì)。3、將DNA與蛋白質(zhì)等物質(zhì)分開，得DNA4、去掉DNA中雜質(zhì)，提純DNA。三、探究實驗原理：屏幕展示表格1NaCl2mo1/LNaCl0.14mo1/LNaCl0.015mo1/LDNA蛋白質(zhì)表格2DNA蛋白質(zhì)雜質(zhì)95%酒精不同濃度的NaC1溶液可溶解或析出DNA。95%酒精可提取DNA。填表1：NaCl2mo1/LNaC10.4mo1/LNaC10.015mo1/LDNA最大最小變大蛋白質(zhì)解聚最大變小填表2：DNA蛋白質(zhì)雜質(zhì)95%酒精不溶可溶可溶通過對實驗原理的預習，表格的比較，使學生明確了各溶液的用途，保證理解實驗。請學生代表簡述DNA提取實驗步驟[實驗設(shè)計一]投影展示實驗設(shè)計思路：雞血細胞液①aDNA釋放②bDNA與蛋白質(zhì)的分離③cDNA析出④dDNA濃縮（提純）獲得雞血細胞核物質(zhì)：提核物質(zhì)→溶解→析出→溶解→析出四、實驗步驟：引導學生討論、回憶并回答目的①~⑨。①防止血凝。②加速血細胞破裂。③溶解DNA。④使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L，促DNA最大限度地析出。⑤使含DNA的黏稠物被留在紗布上。⑥使含DNA的黏稠物盡可能多地溶于溶液中。⑦除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)。⑧提取DNA。⑨A：出現(xiàn)藍色。B：無變化五、討論與結(jié)論：投影給出如下討論提綱，供學生討論。（1）DNA粗提取過程中的關(guān)鍵是哪幾步？（2）提取雞血中的DNA時，為什么要除去血液中的上清液？（3）DNA的直徑約為2nm，實驗中出現(xiàn)的絲狀物的粗細是否表示一個DNA分子直徑的大??？學生分組進行討論并發(fā)表討論結(jié)果。教師對討論進行全程指導，并與學生一起歸納總結(jié)。（1）a.提取雞血細胞的核物質(zhì)。應(yīng)用低滲原理和機械攪拌，可得到最大量的DNA。b.析出DNA黏稠物。加蒸餾水要慢，攪拌要輕。c.沉淀DNA時，必須用冷酒精。（2）提取DNA，去除雜質(zhì)是關(guān)鍵。由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以要除去（含蛋白質(zhì)）。（3）實驗中出現(xiàn)的絲狀物是肉眼可以觀察到的，這種絲狀物的直徑要比DNA分子的直徑2nm大許多倍，所以實驗中出現(xiàn)的絲狀物并不表示一個DNA分子的直徑。六、實驗結(jié)論：細胞中有DNA，DNA遇二苯胺試劑在沸水浴中變藍色。七、補充知識：1、鑒定DNA的其他方法用紫外燈照射法鑒定DNA效果很好。具體鑒定方法如下。1.配制染色劑。用蒸餾水配制萬分之五的溴化乙錠（EB）溶液。2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上，再滴一滴EB溶液染色。3.將蠟紙放在紫外燈（260nm）下照射（暗室中），可見橙紅色的熒光（DNA的紫外吸收高峰在280nm處）。2、DNA粗提取與鑒定的另一種方法1.材料用具新鮮菜花（或蒜黃、菠菜）。塑料燒杯，量筒，玻璃棒，尼龍紗布，陶瓷研缽，試管，試管架，試管夾，漏斗，酒精燈，石棉網(wǎng)，三角架，火柴，刀片，天平。研磨液，體積分數(shù)為95%的酒精溶液，二苯胺試劑，蒸餾水。2.方法步驟A.DNA的粗提?。?）準備材料：將新鮮菜花和體積分數(shù)為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室，至少24小時。（2）取材：稱取30g菜花，去梗取花，切碎。（3）研磨：將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。（4）過濾：在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾入燒杯中（有條件的學?？蓪V液倒入塑料離心管中進行離心，用1000r/min的旋轉(zhuǎn)頻率，離心2~5min；取上清液放入燒杯中）。在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。（5）加冷酒精：將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數(shù)為95%的酒精溶液中，并且玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液（玻璃棒不要直插燒杯底部）。沉淀3~5min后，可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，絮狀物會纏在玻璃棒上。B.DNA的鑒定（1）配制二苯胺試劑：取0.1mLB液；滴入到10mLA液中，混勻。（2）鑒定：取4mLDNA提取液放入試管中，加入4mL二苯胺試劑，混勻后觀察溶液顏色（不變藍）。用沸水?。?00℃）加熱10min。在加熱過程中，隨時注意試管中溶液顏色的變化（逐漸出現(xiàn)淺藍色）。八、結(jié)課：這節(jié)課咱們驗證了細胞是