miR-374a的發(fā)現(xiàn)及其靶基因在MERS-CoV感染致病過程中的作用探索的開題報告

miR-374a的發(fā)現(xiàn)及其靶基因在MERS-CoV感染致病過程中的作用探索的開題報告開題報告：miR-374a的發(fā)現(xiàn)及其靶基因在MERS-CoV感染致病過程中的作用探索一、研究背景冠狀病毒（Coronavirus，CoV）是一類RNA病毒，包括α、β、γ、δ四大屬，其中β屬病毒（如SARS-CoV、MERS-CoV、COVID-19等）具有高度病原性和傳染性，引起全球公共衛(wèi)生事件。MERS-CoV是一種β屬病毒，證實對人類具有致死性感染，于2012年在沙特阿拉伯首次傳播，造成全球超過2500例感染和850多例死亡。MERS-CoV的傳染性與致病機制至今仍未完全清楚，因此研究MERS-CoV的致病機理和抗病毒免疫應(yīng)答機制具有重要意義。miRNA是一類具有調(diào)控功能的非編碼RNA分子，調(diào)節(jié)著基因表達水平和新陳代謝過程，被證明在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。miR-374a是一種miRNA，已被證明在某些人類疾?。ㄈ缧叵倭龊妥訉m內(nèi)膜癌）中發(fā)揮關(guān)鍵作用。然而，在MERS-CoV感染過程中miR-374a的作用及其靶基因仍不清楚。二、研究目的本研究旨在探究：miR-374a在MERS-CoV感染過程中的調(diào)節(jié)作用，以及其靶基因在病毒致病性和免疫反應(yīng)中的作用。三、研究內(nèi)容1.miR-374a的發(fā)現(xiàn)和表達模式分析通過文獻檢索和實驗驗證，確定miR-374a的表達模式，并分析其在MERS-CoV感染過程中的變化。2.miR-374a的調(diào)節(jié)作用和機制分析通過miR-374a高表達及低表達模型的建立，研究miR-374a在MERS-CoV感染中的調(diào)節(jié)作用、機制和對免疫反應(yīng)的影響。3.miR-374a的靶基因篩選和驗證運用生物信息學工具篩選miR-374a的可能靶基因，以及通過實驗驗證確定其中與MERS-CoV感染有關(guān)的靶基因。四、重要意義本研究的成果將為深入了解MERS-CoV感染致病機制和抗病毒免疫應(yīng)答提供理論基礎(chǔ)，并為開發(fā)針對miR-374a及其靶基因的治療策略提供依據(jù)。五、研究方法1.細胞培養(yǎng)：使用人類細胞系Huh7和Calu3等進行實驗。2.病毒感染：將上清液中的MERS-CoV添加至培養(yǎng)細胞中，實現(xiàn)病毒感染。3.RNA提?。菏褂肨rizol試劑提取細胞中miRNA和mRNA。4.qPCR檢測：使用實時熒光定量PCR儀對miRNA和mRNA表達水平進行檢測和分析。5.向量構(gòu)建與轉(zhuǎn)染：構(gòu)建miR-374a過表達和下調(diào)表達的質(zhì)粒，添加至細胞中進行轉(zhuǎn)染。6.蛋白質(zhì)檢測：使用Westernblot等方法檢測miR-374a調(diào)控靶基因表達的蛋白質(zhì)表達水平。七、預期結(jié)果1.miR-374a在MERS-CoV感染過程中的表達模式及其變化。2.miR-374a調(diào)節(jié)感染過程的機制和對免疫反應(yīng)的影響。3.miR-374a作為調(diào)節(jié)因子通過靶向多個mRNA，改變病毒的感染性和致病性。八、參考文獻1.Zumla惡性中間體冠狀病毒的現(xiàn)狀與未來（MERS-CoV）：“致命的游戲”，2020.2.LiuC,etal.MicroRNA-374apromotescellproliferationbyreducingGAD45Aexpression,AmericanJournalofCancerResearch,2015.3.RazaviSM,etal.OverexpressionofmiR-374aPromotesGrowthandI