2024LX-CITS002《食品中有機化合物高分辨質(zhì)譜篩查方法確認指南》征求意見稿

SC××××—××××SC××××—××××食品中有機化合物高分辨質(zhì)譜篩查方法確認指南1范圍本文件規(guī)定了食品中有機化合物高分辨質(zhì)譜篩查方法確認指南。本文件適用于采用色譜和高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的食品中農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、污染物、生物毒素、食品添加劑及非法添加物等有機化合物篩查方法的確認以及檢測質(zhì)量控制。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。。GB5009.295-2023食品安全國家標準化學(xué)分析方法驗證通則GB/T6041-2020質(zhì)譜分析方法通則GB/T27417-2017合格評定化學(xué)分析方法確認和驗證指南SN/T2775-2023商品化食品檢測試劑盒評價方法3術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.2高分辨質(zhì)譜儀high-resolutionmassspectrometer，HRMS分辨率大于10000（10%峰谷處）或20000（半峰寬處），且質(zhì)量準確性相對偏差不大于5ppm的質(zhì)譜儀。3.3質(zhì)荷比Masstochargeratio，m/z離子的質(zhì)量（以相對原子質(zhì)量單位計）與其所帶電荷（以電子電量為單位計）的比值，簡寫為m/z。[來源：GB/T6041-2020，定義2.3]3.4質(zhì)量準確性massaccuracy某種離子的測量質(zhì)荷比與實際（理論）質(zhì)荷比的偏離程度。[來源：GB/T6041-2020，定義2.7]3.5方法確認methodvalidation實驗室通過試驗，提供客觀有效證據(jù)證明特定檢測方法滿足預(yù)期的用途。注：方法確認應(yīng)當建立方法的性能特性和使用的限制條件，并識別影響方法性能的因素及影響程度，確定方法所適用的基質(zhì)，以及方法的正確度和精密度。[來源：GB/T27417-2017，定義3.1]3.6實驗室內(nèi)方法確認intralaboratorymethodvalidation 在一個實驗室內(nèi)，在合理的時間間隔內(nèi)，用一種方法在預(yù)定條件下對相同或不同測試樣品進行的分析實驗，以證明特定檢測方法滿足預(yù)期的用途。[來源：GB/T27417-2017，定義3.3]3.7實驗室間方法確認interlaboratorymethodvalidation在兩個或多個實驗室之間實施的方法確認。實驗室依照預(yù)定條件用相同方法對相同樣品的測定，以證明特定檢測方法滿足預(yù)期的用途。[來源：GB/T27417-2017，定義3.4]3.8關(guān)注濃度水平levelofinterest，LOI對判斷樣品中物質(zhì)或分析物是否符合法規(guī)規(guī)定和要求的有決定性意義的濃度。[來源：GB/T27417-2017，定義3.10]3.9靶向篩查方法targetedscreeningmethod針對特定目標化合物的篩查方法。3.10非靶向篩查方法untargetedscreeningmethod不局限于特定目標化合物的篩查方法。3.11方法篩查限methodscreeninglimit，MSL篩查方法的靈敏度指標，在一定置信度水平下可以明確地區(qū)分為“篩查陽性結(jié)果”并觸發(fā)確證試驗的濃度水平。3.12陽性結(jié)果positiveresults在95%的置信度水平和一定的樣本數(shù)量下，樣品中檢出目標化合物的濃度大于等于方法篩查限時的檢測結(jié)果。3.13陰性結(jié)果negativeresults在95%的置信度水平和一定的樣本數(shù)量下，樣品中未檢出目標化合物或目標化合物的濃度低于方法篩查限時的檢測結(jié)果。3.14假陰性率falsenegativerate將陽性結(jié)果判斷為陰性的比率（以百分比表示）。[來源：SN/T2775-2023，定義3.7]3.15假陽性率falsepositiverate將陰性結(jié)果判斷為陽性的比率（以百分比表示）。[來源：SN/T2775-2023，定義3.8]3.16定性方法qualitativemethod根據(jù)目標化合物特定性質(zhì)鑒定其在樣品中是否存在的分析方法。[來源：GB5009.295-2023，定義2.2]3.17半定量方法semi-quantitativemethod能夠快速得到目標物的濃度，但精密度和正確度不滿足定量方法要求的分析方法。3.18定量方法quantitativemethod在滿足規(guī)定的精密度和正確度的條件下，測定目標目標化合物分析物的濃度或量的分析方法。[來源：GB5009.295-2023，定義2.3]3.19定量限limitofquantitation在滿足規(guī)定的正確度和精密度的條件下，樣品中目標化合物能被測定的最低濃度或量。[來源：GB5009.295-2023，定義2.17]3.20檢出概率probabilityofdetection,POD在規(guī)定的濃度和置信水平下，分析方法檢出目標化合物的概率.[來源：GB5009.295-2023，定義2.16]3.21測定范圍measurementrange在規(guī)定的正確度和精密度的條件下，方法定量測定樣品中目標化合物最低和最高濃度或量的區(qū)間。[來源：GB5009.295-2023，定義2.8]3.22特異性specificity分析方法區(qū)分目標化合物和干擾物質(zhì)的能力。[來源：GB5009.295-2023，定義2.5]3.23正確度trueness在規(guī)定試驗條件下多次測定的平均值與參考量值間的一致程度。[來源：GB5009.295-2023，定義2.9]3.24重復(fù)性repeatability在同一實驗室由同一人操作使用相同的設(shè)備用同樣方法檢測同一樣品獲得獨立測量結(jié)果的精密度。[來源：GB5009.295-2023，定義2.10]3.25法規(guī)限量regulatorylimit在食品或農(nóng)產(chǎn)品中法規(guī)允許的有機化合物的最大濃度。3.26確證方法confirmatorymethod能提供目標化合物全部或者部分信息，依據(jù)這些信息可以明確定性或者定量的方法。[來源：GB/T27417-2017，定義3.7]4總則4.1方法確認參數(shù)的選擇定性和半定量方法確認參數(shù)的選擇可參考表1執(zhí)行，定量方法的確認參數(shù)可參考GB5009.295執(zhí)行。表1方法確認參數(shù)的選擇方法類型確認方式特異性篩查限定量限測定范圍正確度重復(fù)性再現(xiàn)性假陽性率假陰性率定性方法實驗室內(nèi)√√————/√√實驗室間√√———/—√√半定量方法實驗室內(nèi)√√√√√√/——實驗室間—√√√√/√——注：“√”表示必選參數(shù)，“—”表示可選參數(shù)，“/”表示不適用。4.2代表性樣品的選擇選擇代表性樣品時，建議優(yōu)先考慮檢測目標化合物的性質(zhì)和食品樣品的特性，再考慮法規(guī)限量要求涉及的食品種類或高風(fēng)險的食品種類。代表性食品的選擇可參考附錄A。實驗室內(nèi)方法確認時，建議按照方法適用范圍驗證代表性食品種類，每個食品種類至少選擇一種食品子類，每個食品子類至少選擇一種代表性食品。實驗室間方法確認時，對于方法適用食品種類不超過3個的，建議驗證全部食品種類；對于方法適用食品種類超過3個的，至少驗證3個食品種類，每個食品種類至少選擇一種食品子類，每個食品子類至少選擇一種代表性食品。4.3代表性目標化合物的選擇實驗室內(nèi)方法確認時，建議對方法適用的所有化合物進行確認。實驗室間方法確認時，如果篩查的目標化合物數(shù)量較多（例如超過100種目標化合物），可按化合物類別選取一定數(shù)量的代表性化合物（每個類別至少1個）進行確認。4.4篩查限篩查方法應(yīng)能夠在設(shè)定的方法篩查限濃度水平可靠地檢測到目標化合物并且避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果。方法篩查限的設(shè)定建議如下：（1）對于有法規(guī)限量要求的物質(zhì)，方法篩查限不高于法規(guī)限量，最好不高于法規(guī)限量的1/2。（2）對于沒有法規(guī)限量要求的物質(zhì)，方法篩查限不高于該物質(zhì)確證方法的檢出限，或者方法篩查限加上3倍標準偏差小于該物質(zhì)的關(guān)注濃度。4.5靶向篩查中化合物的定性標準靶向篩查中目標化合物的定性標準如表2所示，當判別項符合判定標準時，可判為陽性。表2靶向篩查中化合物的定性標準判別項判定標準保留時間在相同的檢測條件下，目標化合物與參考標準品的保留時間相對偏差不超過±2.5%；對于保留時間小于2min的快速色譜，保留時間的相對偏差小于5%。響應(yīng)信號強度當信噪比（S/N）適用時，S/N≥3；當S/N不適用時，響應(yīng)信號強度應(yīng)保證目標化合物的檢出概率大于等于95%。質(zhì)量準確性一級質(zhì)譜離子和的m/z相對偏差≤5pmm；二級質(zhì)譜子離子的m/z相對偏差≤5ppm；當m/z<200時，其絕對偏差<1mDa。定性離子1個一級質(zhì)譜離子+1個二級質(zhì)譜子離子；或者3個一級質(zhì)譜離子。相對離子豐度比最大相對偏差同級質(zhì)譜離子中存在2個或2個以上符合質(zhì)量準確性要求時，相同檢測條件下，目標化合物與標準品的相對離子豐度比最大偏差≤40%。注1：定性離子應(yīng)包含目標化合物的全部或部分結(jié)構(gòu)；注2：一級質(zhì)譜離子及其加和離子或者同位素離子不能重復(fù)計算；注3：當分子離子大于等于基峰強度的10%時，應(yīng)作為定性離子之一。4.6非靶向篩查中化合物的定性標準非靶向篩查中化合物的定性標準如表3所示，當判別項符合判定標準時，可判為陽性。表3非靶向篩查中化合物的定性標準判別項判定標準響應(yīng)信號強度當信噪比（S/N）適用時，S/N≥3；當S/N不適用時，響應(yīng)信號強度應(yīng)保證待定性化合物的檢出概率大于等于95%。質(zhì)量準確性一級質(zhì)譜離子的m/z與理論值的相對偏差≤5pmm；二級質(zhì)譜子離子的m/z與理論值的相對偏差≤5ppm；當m/z<200時，其與理論值的絕對偏差<1mDa。同位素峰同位素峰的m/z與理論值相比，應(yīng)符合質(zhì)量準確性要求；同位素離子的離子比率與化合物的理論比率一致。定性離子1個一級質(zhì)譜離子+2個二級質(zhì)譜子離子；或者4個一級質(zhì)譜離子；或者二級質(zhì)譜全掃描質(zhì)譜圖。相對離子豐度比最大相對偏差同級質(zhì)譜離子中存在2個或2個以上符合質(zhì)量準確性要求時，待定性化合物的相對離子豐度比與理論值相比，最大偏差≤50%；或者二級質(zhì)譜全掃描質(zhì)譜圖與質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫中的理論質(zhì)譜圖匹配度大于等于80%。5定性方法的確認5.1確認參數(shù)定性方法的確認的典型參數(shù)包括特異性、方法篩查限、假陰性率和假陽性率。5.2參數(shù)性能定性方法的參數(shù)性能建議如下：特異性：樣品基質(zhì)和結(jié)構(gòu)類似物不影響定性結(jié)果；篩查限：見4.4；假陰性率≤5%；假陽性率≤15%。5.3實驗室內(nèi)方法確認5.3.1特異性在代表性樣品中添加一定濃度的有可能干擾目標化合物定性的物質(zhì)，然后進行分析，檢查是否能有效識別這些干擾物質(zhì)。樣品基質(zhì)或結(jié)構(gòu)類似物的響應(yīng)信號在可能干擾目標化合物定性或定量的情況下，不高于目標化合物在方法篩查限濃度水平響應(yīng)信號的30%。5.3.2篩查限篩查限的設(shè)置見4.4，假陽性率和假陰性率均符合5.2則表明篩查限適用。5.3.3假陽性率選擇代表性樣品，分別制備陰性樣品（不含有待測目標化合物）20份、陽性添加樣品20份（按方法篩查限添加），按照方法要求進行分析。假陽性率計算見式（1）：FP=（1-NT/N）×100%`````````````````````````````（1）式中：FP-假陽性率；NT-篩查測試結(jié)果為陰性的樣品數(shù)；N-陰性樣品數(shù)；5.3.4假陰性率樣品的制備同5.3.3，假陰性率計算見式（2）：FN=（1-PT/P）×100%`````````````````````````````（2）式中：FN-假陰性率；PT-篩查測試結(jié)果為陽性的樣品數(shù)；P-陽性樣品數(shù)。5.4實驗室間方法確認至少選擇3個實驗室進行協(xié)同試驗，每種樣品基質(zhì)制備陰性樣品和陽性樣品（按方法篩查限添加）各20-30個，平均分配給參與協(xié)同試驗的實驗室按照5.3進行試驗和數(shù)據(jù)統(tǒng)計，性能參數(shù)需滿足5.2。6半定量方法的確認6.1確認參數(shù)半定量方法的典型確認參數(shù)包括方法的特異性、篩查限、定量限、測定范圍、正確度、重復(fù)性精密度、再現(xiàn)性精密度。6.2參數(shù)性能半定量方法的參數(shù)性能建議如下：（1）特異性：樣品基質(zhì)和結(jié)構(gòu)類似物不影響定性結(jié)果；（2）篩查限：見4.4；（3）定量限：定量限加上樣品關(guān)注濃度偏差的3倍應(yīng)小于關(guān)注濃度，對于有法規(guī)限量的目標化合物，定量限應(yīng)小于1/2法規(guī)限量。（4）測定范圍：測定范圍應(yīng)覆蓋目標化合物的定量限和關(guān)注濃度。（5）正確度（以回收率表示）：20%~200%。（6）重復(fù)性精密度≤20%。（7）再現(xiàn)性精密度≤30%。6.3實驗室內(nèi)方法確認6.3.1特異性樣品基質(zhì)或結(jié)構(gòu)類似物的響應(yīng)信號在可能干擾目標化合物或定量的情況下，應(yīng)不高于目標化合物在方法篩查限濃度水平響應(yīng)信號的10%。6.3.2篩查限、正確度和重復(fù)性精密度選擇代表性樣品，分別制備陰性樣品（不含有待測目標化合物）10份、陽性添加樣品20~30份（按方法篩查限添加），按照方法要求進行分析。性能參數(shù)計算方法見式（3）和式（4）：r=（r1+r2+……..+rn）/n```````````````````````````（3）RSDr=SD/r×100%`````````````````````````````（4）式中：r-實驗室內(nèi)正確度（以回收率表示）；r1、r2、……….rn-第1、第2、………第n個陽性添加樣品的回收率；n-陽性添加樣品的總數(shù)。RSDr-重復(fù)性精密度；SD-陽性添加樣品的篩查測試濃度的標準偏差；r-陽性添加樣品的篩查測試平均濃度。6.3.3定量限對于每種代表性樣品基質(zhì)，采用定量限濃度水平的有證標準物質(zhì)/標準樣品、質(zhì)控樣品或標準添加樣品進行獨立檢測，至少檢測6個平行樣品，并進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，若在該濃度的測定結(jié)果的正確度和精密度均滿足6.2，則可將該濃度作為方法的定量限。定量限的估算方法包括:向空白樣品基質(zhì)中添加目標化合物，以信噪比為10時的添加濃度作為估算定量限；以3倍篩查限作為估算定量限；以樣品空白響應(yīng)值的平均值加上10倍的標準偏差所對應(yīng)的濃度作為估算定量限。6.3.4測定范圍至少需要確認方法測定范圍的最低濃度和最高濃度的正確度和精密度；對于有法規(guī)限量或者關(guān)注濃度的目標化合物，還需驗證法規(guī)限量或者關(guān)注濃度的正確度和精密度，正確度和精密度需滿足6.2。若方法在測定范圍內(nèi)呈線性，并采用標準曲線法定量，則半定量方法標準曲線的線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于或等于0.99，并具有5個或5個以上數(shù)據(jù)點（不包括0點）。6.4實驗室間方法確認6.4.1特異性同6.3.16.4.2篩查限、正確度和再現(xiàn)性精密度選擇代表性樣品，分別制備陰性樣品（不含有待測目標化合物）10份、陽性添加樣品20~30份（按方法篩查限添加），平均分配給3個以上實驗室，按照方法要求進行分析。性能參數(shù)計算法見式（5）和式（6）：R=（R1+R2+……..+Rn）/n```````````````````````````（5）RSDR=SD/r×100%`````````````````````````````````（6）式中：R-實驗室間正確度（以回收率表示）；R1、R2、……….Rn-第1、第2、………第n個陽性添加樣品的回收率；n-陽性添加樣品的總數(shù)。RSDR-重復(fù)性精密度；SD-陽性添加樣品的篩查測試濃度的標準偏差；r-陽性添加樣品的篩查測試平均濃度。6.4.3定量限同6.3.3。6.4.4測定范圍同6.3.4。7定量方法的確認高分辨質(zhì)譜篩查方法也可用于食品中有機化合物的定量分析，定量方法的確認可參考GB5009.295。8日常檢測內(nèi)部質(zhì)量控制8.1定性方法質(zhì)量控制定性方法日常檢測質(zhì)量控制建議如下：每批次檢測需要至少檢測1個陰性質(zhì)控樣，而且其檢測結(jié)果為陰性；每批次檢測需要至少核查具有10個代表性化合物篩查限濃度水平的陽性質(zhì)控樣2個，而且其檢測結(jié)果為陽性。8.2半定量和定量方法質(zhì)量控制半定量和定量方法日常檢測質(zhì)量控制建議如下：（1）每批次檢測需要至少檢測1個陰性質(zhì)控樣，而且其檢測結(jié)果為陰性；（2）代表性化合物：每批檢測至少核查每種代表性樣品基質(zhì)10%代表性化合物（至少5個）關(guān)注濃度水平的回收率，在一個監(jiān)測周期結(jié)束時覆蓋所有代表性樣品基質(zhì)和所有代表性化合物；（3）其他化合物：每12個月（最好6個月），或在一個監(jiān)測周期內(nèi)檢查所有其他化合物的回收率。9日常檢測外部質(zhì)量控制只要存在可獲得的篩查方法能力驗證，實驗室宜定期參加相關(guān)的能力驗證活動。鼓勵實驗室組織或者參加實驗室間方法確認活動，具體參見5.4和6.4。

附錄A（資料性附錄）代表性樣品表A.1動物源食品代表性樣品樣品主類樣品子類樣品基質(zhì)注1動物組織紅肉豬肉、羊肉、牛肉、兔肉白肉雞肉、鴨肉水產(chǎn)品魚肉、蝦肉、蟹肉、貝類內(nèi)臟肝、腎脂肪脂肪乳乳牛奶蛋蛋雞蛋蜂產(chǎn)品蜂蜜蜂蜜蜂王漿蜂王漿蜂膠蜂膠腸衣腸衣羊腸衣、豬腸衣特殊樣品干制動物源性食品注1：測試部位應(yīng)符合相應(yīng)項目限量要求的規(guī)定。表A.2植物源食品代表性樣品樣品主類樣品子類樣品基質(zhì)注2高含水量仁果類水果蘋果、梨核果杏、櫻桃、桃子鱗莖類蔬菜洋蔥、大蔥果菜類/瓜類西紅柿、西椒、黃瓜、甜瓜甘藍類蔬菜卷心菜、西蘭花、花椰菜葉菜類生菜、菠菜莖桿類蔬菜韭菜、芹菜、蘆筍新鮮豆類蔬菜新鮮豌豆莢、四季豆、荷蘭豆、蠶豆、菜豆根和塊莖類蔬菜甜菜和飼料甜菜根、胡蘿卜、白蘿卜、土豆、紅薯鮮菇類雞油菌菇、香菇飼料/飼料作物新鮮苜蓿、飼料野豌豆、新鮮甜菜高含油量堅果類核桃、榛子、松子油籽類油菜、葵花籽、棉籽、大豆、花生、芝麻油果類橄欖、牛油果低水分、低脂肪、高淀粉或高蛋白干豆類蔬菜/豆類種子干蠶豆、干扁豆谷物小麥、玉米、大米高酸、高含水量柑橘類水果檸檬、柑、橙、橘小水果和漿果草莓、葡萄其它獼猴桃、菠蘿高糖、低含水量干制水果葡萄干、杏干、梅干特殊樣品啤酒花、可可豆、咖啡、茶注2：農(nóng)藥殘留測試部位應(yīng)符合GB2763的要求。A.3加工食品

樣品主類樣品子類樣品基質(zhì)水、飲料及冷凍飲品水包裝飲用水飲料果蔬汁類飲料、茶類飲料、咖啡類飲料、蛋白