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PAGEPAGE6第2講微生物的培育和應(yīng)用1.(2024·湖南茶陵三中高三月考)下圖為5個(gè)不同濃度的土霉素溶液對大腸桿菌生長影響的試驗(yàn)結(jié)果。請回答下列相關(guān)問題:(1)培育基中通常加入瓊脂作為凝固劑。為檢測培育基是否被污染,應(yīng)采納的檢測方法是將未接種的培育基在相宜的溫度下放置相宜的時(shí)間,視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生。(2)該試驗(yàn)是用稀釋涂布平板法接種大腸桿菌,在接種前要對培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。依據(jù)圖中結(jié)果,對大腸桿菌抑制作用最明顯的土霉素濃度是⑤(填圖中數(shù)字),依據(jù)是透亮圈越大,抑制效果越明顯。(3)為探討相同濃度的a、b、c三種不同抗生素對大腸桿菌生長的影響,依據(jù)上述探討方法,請仿照圖繪制處理方法。[解析](1)培育基中通常加入瓊脂作為凝固劑。檢測培育基是否被污染的方法是:將未接種的培育基在相宜的溫度下放置相宜的時(shí)間,視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生。(2)該試驗(yàn)是用稀釋涂布平板法接種大腸桿菌;培育基須要用高壓蒸汽滅菌法滅菌。透亮圈越大,抑制效果越明顯,圖中⑤號圓紙片的抑菌圈最大,因此該濃度的土霉素對大腸桿菌抑制作用最明顯。(3)該方案的自變量為相同濃度的a、b、c三種不同抗生素,留意在圖中要標(biāo)記清晰,依據(jù)比照原則,結(jié)合圖中探討方法可繪制下圖。2.(2024·福建高考模擬)乳酸桿菌是人體有益的微生物之一,常用于生產(chǎn)酸奶,其發(fā)酵產(chǎn)物為乳酸,能溶解四周環(huán)境中的難溶性碳酸鈣?;卮鹣铝袉栴}:(1)為檢測某品牌酸奶中的乳酸桿菌含量是否達(dá)標(biāo),檢驗(yàn)人員進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)。①配置培育基:培育基中除含水、無機(jī)鹽、碳源、氮源和瓊脂外,還需添加維生素和CaCO3。②稀釋樣品:取1mL待測酸奶,用無菌水進(jìn)行梯度稀釋。③接種培育:用稀釋涂布平板法接種,培育時(shí)限制的氣體條件是無氧。④視察計(jì)數(shù):菌落四周出現(xiàn)的透亮圈(或溶鈣圈)就是乳酸桿菌的菌落,選擇菌落數(shù)在30~300的平板計(jì)數(shù)。每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果,目的是可以防止因培育時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。(2)生產(chǎn)上不能用含有抗生素的牛奶發(fā)酵成酸奶,緣由是抗生素會抑制乳酸菌(或細(xì)菌)的繁殖。[解析](1)①配置培育基:培育基中除含水、無機(jī)鹽、碳源、氮源和瓊脂外,還需添加維生素和CaCO3。②稀釋樣品:取1mL待測酸奶,用無菌水進(jìn)行梯度稀釋。③接種培育:用稀釋涂布平板法接種,乳酸菌是厭氧菌,培育時(shí)限制的氣體條件是無氧。④視察計(jì)數(shù):菌落四周出現(xiàn)溶鈣圈的就是乳酸桿菌的菌落,選擇菌落數(shù)在30~300的平板計(jì)數(shù)。每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果,目的是可以防止因培育時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。(2)生產(chǎn)上不能用含有抗生素的牛奶發(fā)酵成酸奶,因?yàn)榭股貢种迫樗峋姆敝场?.(2024·湖北沙市中學(xué)高考模擬)從自然界篩選嗜鹽菌的一般步驟是:采集菌樣→富集培育→純種分別→性能測定。(1)培育嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從高鹽環(huán)境采集。(2)富集培育指創(chuàng)設(shè)僅適合待分別微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件,使其在群落中的數(shù)量大大增加,從而分別出所需微生物的培育方法。對嗜鹽產(chǎn)淀粉酶微生物的富集培育應(yīng)選擇以淀粉為唯一碳源的培育基,并在高鹽條件下培育。在富集培育過程中,需將錐形瓶放在搖床上振蕩,一方面使菌株與培育液充分接觸,提高養(yǎng)分物質(zhì)的利用率;另一方面能增加培育液中的溶氧量。(3)下面兩圖是采納純化微生物培育的兩種接種方法接種后培育的效果圖解,請分析接種的詳細(xì)方法。獲得圖A效果的接種方法是稀釋涂布平板法。獲得圖B效果的接種方法是平板劃線法,該方法在其次次劃線及其后劃線總是從上次劃線的末端起先的緣由是線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少(將聚集的菌種充分稀釋)。(4)采納固體平板培育細(xì)菌時(shí)要倒置培育的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培育基上污染培育基(或避開培育基中水分的過快揮發(fā))。[解析](1)嗜鹽菌適于生活在高鹽的環(huán)境中,因此培育嗜鹽菌的菌樣,應(yīng)從高鹽環(huán)境采集。(2)分別產(chǎn)淀粉酶微生物,要從富含淀粉的環(huán)境中找尋,若該微生物同時(shí)具備嗜鹽的特性,還需從嗜鹽環(huán)境中找尋,因此對嗜鹽產(chǎn)淀粉酶微生物的富集培育應(yīng)選擇以淀粉為唯一碳源的培育基,并在高鹽條件下培育。在富集培育過程中,將錐形瓶放在搖床上振蕩,除了使菌株與培育液充分接觸、以提高養(yǎng)分物質(zhì)的利用率外,還能增加培育液中的溶氧量,以保證微生物對氧的需求。(3)圖A中的菌落分布勻稱,因此接種方法是稀釋涂布平板法;圖B中菌落明顯分區(qū)分布,且有劃痕,所以接種方法是平板劃線法。由于劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,所以在其次次劃線及其后的劃線總是從上次劃線的末端起先,以便使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減,最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。(4)采納固體平板培育細(xì)菌時(shí),為了防止平板冷凝后形成的水珠滴落在培育基上污染培育基(或避開培育基中水分的過快揮發(fā)),須要倒置培育。4.(2024·山東省桓臺第一中學(xué)高三期末)牛奶是日常生活中常常食用的乳制品,對人體健康有很大好處。環(huán)??萍紣酆眯〗M從某牛奶廠排污口獲得水樣,希望從中篩選出能高效降解蛋白質(zhì)的細(xì)菌。據(jù)有關(guān)學(xué)問回答下列問題。(1)對牛奶進(jìn)行消毒常用的方法是巴氏消毒法,其優(yōu)點(diǎn)是既能殺死牛奶中的微生物,又不會破壞牛奶的養(yǎng)分成分。(2)為實(shí)現(xiàn)篩選目的,該愛好小組運(yùn)用了如下配方的培育液。蛋白質(zhì)、K2HPO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、CaCl2、NaCl、MgSO4·7H2O、加水定容在配制培育液時(shí)不能(填“能”或“不能”)將該配方中的蛋白質(zhì)換成葡萄糖,緣由是要篩選出能高效降解蛋白質(zhì)的細(xì)菌,配制培育液時(shí)必需以蛋白質(zhì)作為唯一碳源和氮源,所以不能把蛋白質(zhì)換成葡萄糖。(3)為實(shí)現(xiàn)目的菌株的分別和計(jì)數(shù),應(yīng)在該配方中加入瓊脂,制成平板,常用的接種方法是稀釋涂布平板法。為檢測所運(yùn)用的平板滅菌是否徹底或是否被污染,操作方法是選擇未接種的平板在相宜條件下放置一段時(shí)間,視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生。[解析](1)對牛奶進(jìn)行消毒常用的方法是巴氏消毒法,其優(yōu)點(diǎn)是既能殺死牛奶中的微生物,又不會破壞牛奶的養(yǎng)分成分。(2)試驗(yàn)?zāi)康氖呛Y選出能高效降解蛋白質(zhì)的細(xì)菌,因此在配制培育液時(shí)不能將該配方中的蛋白質(zhì)換成葡萄糖,緣由是要篩選出能高效降解蛋白質(zhì)的細(xì)菌,配制培育液時(shí)必需以蛋白質(zhì)作為唯一碳源和氮源,所以不能把蛋白質(zhì)換成葡萄糖。(3)為實(shí)現(xiàn)目的菌株的分別和計(jì)數(shù),應(yīng)在該配方中加入瓊脂制成平板,常用的接種方法是稀釋涂布平板法。為檢測所運(yùn)用的平板滅菌是否徹底或是否被污染,可選擇未接種的平板在相宜條件下放置一段時(shí)間,視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生。5.(2024·山東高考模擬)生物降解法是常用的降解農(nóng)藥的方法,某探討小組為分別出能降解敵敵畏(一種有毒的有機(jī)農(nóng)藥)的細(xì)菌進(jìn)行了以下相關(guān)操作。回答下列問題:(1)分別原理:土壤中的細(xì)菌能合成(分解敵敵畏的)酶,這種物質(zhì)在把敵敵畏分解成無機(jī)物過程中發(fā)揮重要作用。(2)試驗(yàn)流程:①從富含敵敵畏的環(huán)境中釆集土樣配制成土壤菌液。從稀釋10倍的菌液中取1mL菌液,加入9_mL無菌水中,獲得稀釋100倍的懸液,如此操作直到稀釋1000倍。②配制以敵敵畏為唯一碳源的培育基并滅菌,滅菌后倒平板。冷卻后需將平板倒置,目的是防止皿蓋上凝聚的水珠落入培育基造成污染。③用稀釋涂布平板法接種細(xì)菌,該方法能勝利統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是選擇恰當(dāng)?shù)南♂尪?,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)通常比實(shí)際數(shù)目低的緣由是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上視察到的只是一個(gè)菌落。[解析](1)土壤中的細(xì)菌能將敵敵畏分解成無機(jī)物,說明該細(xì)菌能合成(分解敵敵畏的)酶。(2)①從稀釋10倍的菌液中取1mL菌液,加入9mL無菌水,就可以將菌液稀釋到100倍。②要將能分解敵敵畏的細(xì)菌分別出來,則試驗(yàn)中要配制以敵敵畏為唯一碳源的培育基,為防止皿蓋上凝聚的水珠落入培育基造成污染,滅菌后倒平板,冷卻后需將平板倒置。③接種該細(xì)菌采納稀釋涂布平板法,該方法能勝利統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是選擇恰當(dāng)?shù)南♂尪?。?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上視察到的只是一個(gè)菌落,故統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)通常比實(shí)際數(shù)目低。6.(2024·河北唐山一模)有人認(rèn)為鮮榨果汁比盒裝或瓶裝的果汁更簇新健康。食品監(jiān)督人員發(fā)覺鮮榨果汁若不能做到無菌生產(chǎn),更簡單滋生細(xì)菌。探討過程如下,請分析并回答下列問題:(1)純化培育細(xì)菌的方法:平板劃線法可以視察菌落特征,對混合菌進(jìn)行分別,但不能計(jì)數(shù);運(yùn)用稀釋涂布平板法,在稀釋度足夠高時(shí),一個(gè)菌落代表單個(gè)細(xì)胞。(2)對細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)往往會產(chǎn)生試驗(yàn)誤差,稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的值比實(shí)際值偏小,緣由是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí),平板上視察到的只是一個(gè)菌落;顯微計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)的結(jié)果比實(shí)際值偏大,緣由是顯微鏡下無法區(qū)分細(xì)胞的死活,計(jì)數(shù)結(jié)果包含死細(xì)胞。(3)接種結(jié)束后,將一個(gè)未接種的培育基和一個(gè)接種的培育基放在一起培育的目的是作比照,未接種的培育基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵。假如有菌落生長,說明培育基滅菌不徹底(或培育基被污染了或須要重新制備)。[解析](1)平板劃線法可以視察菌落特征,對混合菌進(jìn)行分別,但不能計(jì)數(shù);運(yùn)用稀釋涂布平板法,在稀釋度足夠高時(shí),聚集在一起的微生物將分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培育基表面形成單個(gè)的菌落,即一個(gè)菌落代表單個(gè)細(xì)胞。(2)用稀釋涂布平板法對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上視察到的只是一個(gè)菌落,所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目偏?。挥蔑@微法計(jì)數(shù)時(shí),由于顯微鏡下無法區(qū)分細(xì)胞的死活,計(jì)數(shù)結(jié)果包含死細(xì)胞,所以計(jì)數(shù)的結(jié)果會比實(shí)際值偏大。(3)接種結(jié)束后,將一個(gè)未接種的培育基和一個(gè)接種的培育基放在一起培育的目的是作比照,未接種的培育基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵。假如有菌落生長,則說明培育基滅菌不徹底(或培育基被污染了或須要重新制備)。7.(2024·蕪湖模擬)如圖是某課題小組設(shè)計(jì)的“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)”的試驗(yàn)流程示意圖。回答下列問題:(1)微生物接種的方法有許多,該圖所示為稀釋涂布平板法,這一方法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌(填“活菌”“死菌”或“活菌和死菌”)的數(shù)目。為了保證結(jié)果精確,一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)試驗(yàn)過程中,需對培育基進(jìn)行滅菌,常用的方法是高壓蒸汽滅菌法。接種操作都應(yīng)在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行,目的是防止雜菌污染。(3)對分別得到的分解尿素的細(xì)菌做進(jìn)一步鑒定時(shí),可在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑進(jìn)行細(xì)菌培育。其鑒定原理是分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨,氨會使培育基的堿性增加,pH上升,指示劑變紅。[解析](1)微生物接種的方法有許多,最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法,該圖所示為稀釋涂布平板法,這一方法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。為了保證結(jié)果精確,一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)常見的滅菌方法有:灼燒滅菌法、干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法,試驗(yàn)過程中,需對培育基進(jìn)行滅菌,常用的方法是高壓蒸汽滅菌法。接種操作都應(yīng)在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行,目的是防止雜菌污染。(3)對分別得到的分解尿素的細(xì)菌作進(jìn)一步鑒定時(shí),可在以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑進(jìn)行細(xì)菌培育。其鑒定原理是分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨,氨會使培育基的堿性增加,pH上升,指示劑變紅。8.(2024·遼寧省沈陽市郊聯(lián)高三上學(xué)期期末)由南京農(nóng)業(yè)高校的李順鵬教授領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)經(jīng)過多年探討,首創(chuàng)了農(nóng)藥殘留微生物降解技術(shù),其原理是通過篩選高效農(nóng)藥殘留降解菌株,來清除土壤、水體、農(nóng)產(chǎn)品中的有機(jī)污染物,解決了物理、化學(xué)處理修復(fù)難度大,成本高及二次污染的問題,其中有機(jī)磷降解菌專一降解甲基對硫磷(一種含氮有機(jī)農(nóng)藥),并依靠降解產(chǎn)物生存,且降解效果達(dá)100%,目前運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)生產(chǎn)的無公害大米經(jīng)中國綠色食品測試中心檢測,無農(nóng)藥殘留達(dá)到出口標(biāo)準(zhǔn),獲得綠色食品證書。下圖是探討人員篩選有機(jī)磷降解菌的主要步驟,請分析回答問題:(1)培育過程中需振蕩培育,由此推想該“目的菌”的細(xì)胞進(jìn)行的細(xì)胞呼吸方式為有氧呼吸型。在篩選過程中,應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以甲基對硫磷為氮源的固體培育基上。(2)對培育基選用的滅菌方法一般是高壓蒸汽滅菌。(3)篩選出的純凈的有機(jī)磷降解菌菌種,須要長期保存,最好采納甘油管藏的方法。(4)假如該種細(xì)菌在蛋白質(zhì)合成過程中,攜帶天冬氨酸的RNA為CUG,則轉(zhuǎn)錄成該天冬氨酸密碼子的基因的堿基組成為。(5)探討人員在篩選有機(jī)磷降解菌時(shí),發(fā)酵液不慎發(fā)生污染,菌群幾乎全部死亡,但卻僥幸的從中獲得了少數(shù)可反抗污染的新菌種,細(xì)菌這種新性狀的產(chǎn)生來自基因突變。(6)為了得到單個(gè)菌落,比較簡便的接種方法是平板劃線法,但該方法不宜對菌落計(jì)數(shù),而利于對菌落計(jì)數(shù)的方法是稀釋涂布平板法。[解析](1)由培育過程中需振蕩培育
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