乳腺癌治療的明日之星：AKT抑制劑

乳腺癌治療的明日之星：AKT抑制劑前言AKT激活是多種生命活動及疾病的信號中樞，而AKTSer473位的磷酸化是AKT完全激活的必要步驟。AKT抑制劑藥物三期臨床實驗結果表明其能有效延長荷爾蒙受體陽性乳腺癌患者的無進展生存期。在AKT相關研究中，磷酸化抗體是最重要的工具之一，義翹神州為了助力研究現(xiàn)向大家免費提供磷酸化抗體試用裝。01AKT分子機制AKT的蛋白名為RAC-alphaserine/threonine-proteinkinase或ProteinkinaseB(PKB)。AKT在所有人源細胞類型中皆有表達，人源AKT激酶有三種：AKT1、AKT2、AKT3，三種AKT同源性較高，結構域類似。AKTN端有pleckstrinhomology(PH)結構域，能夠和PIP3結合，C端包含激酶結構域（KD）和C末端結構域（CTD）。AKT蛋白結構（圖片源自/10.1186/s13045-021-01137-8）靜息狀態(tài)下，AKT的PH結構域和C端激酶結構域靠近（PH-in構象），抑制AKT激活。當細胞接受PDGFa、IGF1等多種細胞因子刺激后，通過信號轉導，PI3K將PI4,5P2轉變?yōu)镻IP3。AKT的PH結構域與PIP3結合，釋放C端激酶結構域（PH-out構象）。其后，PDK1磷酸化AKT1的308位蘇氨酸，初步激活AKT，然后mTORC2磷酸化AKT1的473位絲氨酸（對應AKT2Ser474，AKT3Ser472）。AKT1Ser473位的磷酸化對于T308位磷酸化的維持有重要作用，是AKT完全激活的標志。AKT激活過程（圖片源自/10.1016/j.cell.2017.04.001）AKT能夠激活包括mTORC1、GSK3β、FOXO在內的100多種底物，是信號通路的中央樞紐之一，調控了細胞及機體的代謝、生存、增殖。在多種腫瘤中，AKT的正向調控原件PI3K往往產生突變，異常激活，而負向調控原件PTEN突變失活，這最終導致了AKT的過度激活，增強了腫瘤細胞的生存遷移能力。因此，以AKT為靶點的治療藥物是研發(fā)熱點。02AKT抑制劑研究進展在乳腺癌等多種腫瘤中，由于上游調控原件PI3K異常激活或PTEN的突變失活，AKT會持續(xù)激活，開啟下游一系列信號通路，進而增強腫瘤細胞的增殖、遷移能力。Capivasertib是一種吡咯嘧啶衍生的化合物，能夠和AKT的ATP結合位點結合，導致AKT無法磷酸化底物，抑制下游信號通路。Capivasertib能夠在10nM級別抑制所有AKT激酶（AKT1IC50=3nM，AKT2IC50=7nM，AKT3IC50=7nM）。2023年6月1日，英國癌癥研究院等在新英格蘭醫(yī)學雜志上發(fā)表了Capivasertib的三期臨床試驗結果。該試驗募集了708例荷爾蒙受體陽性、表皮生長因子2型受體陰性的進展期乳腺癌患者，與僅接受fulvestrant治療的患者（無進展生存期PFS=3.6Months）相比，接受Capivasertib-fulvestrant聯(lián)合治療的患者無進展生存期（7.2Months）顯著增強（HR=0.6,95%CI:0.51-0.71,P<0.001）。該結果為Capivasertib-fulvestrant療法以及其他AKT靶點藥物開發(fā)提供了光明前景。03AKTser473磷酸化抗體無論是生理研究，還是病理研究中，AKTSer473的磷酸化都是AKT是否激活的關鍵指標，是相關信號通路研究中必不可少的檢測靶點。相比于普通抗體，磷酸化抗體不僅需要識別特定的蛋白，還需要識別是否在蛋白的特定氨基酸上發(fā)生磷酸化。AKTSer47磷酸化抗體能夠特異性的檢測AKT是否在第473位的絲氨酸發(fā)生磷酸化。義翹神州現(xiàn)在推出AKTSer473磷酸化抗體（Cat:110591-R0113）。通過自有的兔單B流式分選技術制備的兔單克隆抗體具有高特異性（內源性驗證、競爭驗證）、高靈敏度（1:200000）等特點。?義翹神州磷酸化抗體驗證數(shù)據(jù)內源性驗證Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedNIH-3T3,untreated(-);treatedwithPDGFA(Cat:13081-H07Y)(5μg/mL,5min;+),usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:2000dilution(upper)oranti-Aktantibody(lower).Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedA431,untreated(-);treatedwithEGF(Cat:GMP-10605-HNAE)(200ng/mL,15min;+),usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:2000dilution(upper)oranti-Aktantibody(lower).特異性驗證Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedNIH-3T3,untreated(lineA);treatedwithPDGFA(Cat:13081-H07Y)(5μg/mL,5min),withoutpeptide(lineB)orantigen-specificphosphopeptide(lineC)orantigen-specificpeptide(lineD)usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:2000dilution.超高稀釋度Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedNIH-3T3treatedwithPDGFA(Cat:13081-H07Y)(5μg/mL,5min;+),usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:1000,1:50000,1:200000dilution.磷酸化抗體相關產品貨號產品名稱13081-H07YPDGFAProtein,Human,Recombinant(HisTag)GMP-10605-HNAEEGFProtein,Human,Recombinant(ECD),HPLC-verified110396-R0001RecombinantPhospho-p70S6Kinase1(Thr389)Antibody,RabbitMonoclonal10099-T38Anti-S6K1/RPS6KB1Antibody,RabbitPolyclonal【參考文獻】1.Andrikopoulou,A.,etal.Theemergingroleofcapivasertibinbreastcancer.Breast,2022./10.1016/j.breast.2022.03.0182.Davies,B.R.,etal.PreclinicalpharmacologyofAZD5363,aninhibitorofAKT:pharmacodynamics,antitumoractivity,andcorrelationofmonotherapyactivitywithgeneticbackground.MolCancerTher,2012./10.1158/1535-7163.Mct-11-0824-t3.Hua,H.,etal.TargetingAktincancerforprecisiontherapy.JHematolOncol,2021,/10.1186/s13045-021-01137-84.Manning,B.D.,&Toker,A.AKT/PKBSignaling:Navigatingthe