檢驗(yàn)科淀粉酶測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號(hào)：JYK-3-SH-034版本/修訂號(hào)：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)生效日期：20110701第1頁(yè)共4頁(yè)編寫(xiě)制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01淀粉酶測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：血清淀粉酶測(cè)定(縮寫(xiě)AMY)，尿液淀粉酶測(cè)定；組合項(xiàng)目申請(qǐng)：血生化胰腺炎項(xiàng)目測(cè)定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。尿液收集5-10ml放于干燥試管中送檢。2.1.2檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫(xiě)標(biāo)本采集時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定12h，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定5天。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對(duì)保存時(shí)間超過(guò)1天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動(dòng)，24h不飲酒和12h以上禁食空腹?fàn)顟B(tài)。2.3.2注意有無(wú)應(yīng)用影響測(cè)試項(xiàng)目的藥物。2.3.3不建議使用抗凝的血液標(biāo)本，常用的抗凝劑對(duì)AMY有抑制作用。3方法原理以Gal-G2-α-CNP為底物的酶連續(xù)監(jiān)測(cè)法。淀粉酶催化Gal-G2-α-CNP成CNP，CNP在410nm處有特異吸收峰，其生成的速度與血清中AMY的活性成正比。在410nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)CNP的生成速率，推算出AMY活性。4試劑及其他用品4.1試劑盒名稱：淀粉酶連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定試劑盒，由上海申能生化試劑廠出品。4.2試劑盒保存：未開(kāi)瓶的試劑儲(chǔ)存在2～8℃可穩(wěn)定至有效期。試劑開(kāi)瓶后，在儀器冰箱試劑倉(cāng)中可保存28天。開(kāi)蓋后避免污染。當(dāng)試劑變混濁，或者未開(kāi)蓋的液體有沉淀，或起始吸光率>0.5時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型，即開(kāi)即用，無(wú)特殊準(zhǔn)備。4.4試劑盒主要成分：Gal-G2-α-CNP4.5mmol/L，醋酸鈣5.0mmol/L，氯化鈉51mmol/L，疊氮鈉152mmol/L，MES緩沖液（pH6.0）50mmol/L。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式校準(zhǔn)品：不使用校準(zhǔn)品，以CNP的雙波長(zhǎng)（410/480nm）摩爾吸光系數(shù)計(jì)算AMY活性。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個(gè)不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開(kāi)即用，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測(cè)定：在每一批標(biāo)本中測(cè)定兩個(gè)水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動(dòng)生化分析儀器全自動(dòng)生化分析儀器。8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測(cè)定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。9主要分析參數(shù)參見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。10結(jié)果計(jì)算計(jì)算公式：AMY(U/L)＝公式中ΔA/min即單位時(shí)間中吸光度降低的值，VT為總反應(yīng)體積ml（試劑總量＋標(biāo)本量），Vs為標(biāo)本體積ml，l為比色皿光徑cm，ε為CNP的410/480nm測(cè)定的毫摩爾消光系數(shù)。K值即因子，儀器根據(jù)此公式自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果。 11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：5～1500U/L，超過(guò)此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說(shuō)明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV<3.0%，批間CV<5.0%。12.2線性范圍：5～1500U/L。12.3方法的有限性及干擾因素：內(nèi)源性干擾物脂血4.5mmol/L、黃疸513μmol/L、抗壞血酸17mmol/L對(duì)測(cè)試結(jié)果無(wú)明顯影響。12.4靈敏度：淀粉酶濃度為158U/L時(shí)，吸光度變化率ΔA340nm/min為0.065～0.069。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考值：血清15-220U/L尿液80-1000U/L14臨床意義14.1淀粉酶包括兩種同工酶即胰淀粉酶和唾液淀粉酶，血清或尿液的總淀粉酶活性是診斷急性胰腺炎的重要指標(biāo)。14.2在急性胰腺炎發(fā)作期淀粉酶活性顯著增高。尿淀粉酶在發(fā)病后12～24h也會(huì)升高。某些慢性胰腺疾病，如慢性胰腺炎、胰腺腫瘤以及流行腮腺炎、唾液腺化膿或腺管堵塞時(shí)，血清淀粉酶也會(huì)有所升高，而對(duì)于各種肝臟疾病，如肝炎、肝硬化、肝膿腫、肝癌及膽囊炎等，則淀粉酶活力下降。14.3淀粉酶由于其對(duì)底物的要求不同于一般的酶，所以測(cè)定方法繁多，結(jié)果的表示極不統(tǒng)一，各種結(jié)果不能相互對(duì)比。本法以符合參考方法要求的原理測(cè)定，結(jié)果以國(guó)際單位表示。14.4急性胰腺炎時(shí)，淀粉酶在血中和尿中的升高有時(shí)間規(guī)律，臨床應(yīng)注意采標(biāo)本的時(shí)間并在判斷結(jié)果時(shí)將這一因素結(jié)合考慮。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，審核者對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：分析血清與尿液淀粉酶水平的關(guān)系。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16無(wú)威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott自動(dòng)生化分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。17.2生化檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。17.3檢驗(yàn)結(jié)果審核程序。17.4標(biāo)本送檢和接收程序。18參考文獻(xiàn)18.1陸永綏，張偉民主編.臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)