2025屆廣東省肇慶市實驗中學(xué)生物高三上期末聯(lián)考試題含解析

2025屆廣東省肇慶市實驗中學(xué)生物高三上期末聯(lián)考試題注意事項1．考生要認(rèn)真填寫考場號和座位序號。2．試題所有答案必須填涂或書寫在答題卡上，在試卷上作答無效。第一部分必須用2B鉛筆作答；第二部分必須用黑色字跡的簽字筆作答。3．考試結(jié)束后，考生須將試卷和答題卡放在桌面上，待監(jiān)考員收回。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．下列關(guān)于生物變異的敘述。錯誤的是（）A．貓叫綜合征是染色體結(jié)構(gòu)變異引起的遺傳病B．人工誘變可提高基因突變的頻率，并且可獲得預(yù)期性狀C．非姐妹染色單體上的等位基因互換后可能引起基因重組D．花藥的離體培養(yǎng)有利于獲得純合基因型，從而縮短育種年限2．研究者對分布在喜馬拉雅山東側(cè)不同海拔高度的358種鳴禽進(jìn)行了研究，繪制了該地區(qū)鳴禽物種的演化圖表（部分）及其在不同海拔分布情況的示意圖（圖中數(shù)字編號代表不同鳴禽物種的種群）。下列相關(guān)敘述中錯誤的是（）A．種群①內(nèi)部個體間形態(tài)和大小方面的差異可體現(xiàn)基因的多樣性B．在②、③、④、⑤四個物種中，親緣關(guān)系最近的兩物種是②和③C．自然選擇的直接對象是種群中不同的等位基因D．在生物進(jìn)化過程中，由于地理隔離，可使⑥⑦原種群之間彼此不能接觸，失去交配機會3．某興趣小組研究放牧對某地高寒草甸植物物種豐富度的影響，結(jié)果如下圖所示。下列有關(guān)分析錯誤的是（）A．隨著放牧強度的增加，該地區(qū)植物物種豐富度呈下降趨勢B．調(diào)查物種豐富度時，需要對采集到的數(shù)據(jù)取平均值C．過度放牧?xí)?dǎo)致高寒草甸退化，草甸的生態(tài)功能下降D．即便維持牧草和放牧數(shù)量的適宜比例，高寒草甸依然發(fā)生著演替4．下列關(guān)于基因的描述，正確的是（）A．基因中蘊含著遺傳信息，且具備表達(dá)的能力 B．不同的基因控制合成的蛋白質(zhì)一定不同C．基因總是伴隨著染色體從親代傳遞給子代 D．兩條同源染色體上的基因數(shù)相同5．大麻是XY型性別決定的植物，其粗莖和細(xì)莖由一對等位基因控制，條形葉與披針葉由另一對等位基因控制。兩株粗莖條形葉植株雜交，子代中出現(xiàn)了細(xì)莖雌株，雄株中的披針葉個體占1/4。不考慮基因突變和染色體變異的情況下，下列推測合理的是（）A．兩對基因都可位于性染色體上B．親本雌株只含一種隱性基因C．子代不會出現(xiàn)細(xì)莖披針葉雌株D．兩對基因都可位于常染色體上6．關(guān)于RNA的敘述，錯誤的是()A．少數(shù)RNA具有生物催化作用B．真核細(xì)胞內(nèi)mRNA和tRNA都是在細(xì)胞質(zhì)中合成的C．mRNA上決定1個氨基酸的3個相鄰堿基稱為密碼子D．細(xì)胞中有多種tRNA，一種tRNA只能轉(zhuǎn)運一種氨基酸7．如圖是草履蟲種群增長的曲線，下列敘述正確的是（）A．草履蟲的環(huán)境容納量是800只B．當(dāng)草履蟲數(shù)量達(dá)到環(huán)境容納量后，其自然增長率一直為0C．影響草履蟲數(shù)量增長的因素是資源和空間有限D(zhuǎn)．在10年后，若草履蟲因為捕食者而發(fā)生數(shù)量變化，則這種變化是負(fù)反饋調(diào)節(jié)的結(jié)果8．（10分）某校生物研究性學(xué)習(xí)小組模擬赫爾希和蔡斯的噬菌體侵染細(xì)菌的實驗，過程如圖所示。下列有關(guān)分析錯誤的是（）A．由于噬菌體不能獨立生活，所以標(biāo)記噬菌體時應(yīng)先標(biāo)記噬菌體的宿主細(xì)胞——大腸桿菌B．實驗1的結(jié)果是只有上清液a有放射性，沉淀物b中無放射性C．如果實驗2的混合培養(yǎng)時間太長或太短，則沉淀物d的放射性會降低D．該實驗?zāi)茏C明DNA是遺傳物質(zhì)，但不能證明DNA是主要的遺傳物質(zhì)二、非選擇題9．（10分）某研究小組在水分充足、晴朗無風(fēng)的夏日，觀測海水稻得到了光合速率等生理指標(biāo)日變化趨勢，如圖所示。請回答下列相關(guān)問題：（1）8：00到10：00光合速率升高的原因有：①溫度升高，光合作用酶活性增強；②_______；③________。（2）推測導(dǎo)致12：00時光合速率出現(xiàn)低谷的環(huán)境因素主要_____（是/不是）CO2濃度，為什么？___________。（3）根據(jù)色素對不同波長的光的吸收特點，你認(rèn)為溫室或大棚種植蔬菜時，在其他條件相同的情況下，選擇_________（顏色）的補充光源能更有利于蔬菜對光能的吸收。10．（14分）某種自花傳粉植物的紅花對白花為顯性，該相對性狀受兩對等位基因（Y、y和R、r）控制?，F(xiàn)讓純合紅花和純合白花植株作親本進(jìn)行雜交，所得F1全為紅花植株，F(xiàn)1自交得F2，F(xiàn)2中紅花：白花=9：1．請回答下列問題：（1）該植物花色性狀的遺傳遵循__________定律。親本的基因型為__________。（2）理論上，在F2白花植株中，純合子占__________。假若親本白花植株與F1雜交理論上，子代花色的表現(xiàn)型及比例是__________。（3）現(xiàn)讓F2中紅花植株與隱性純合白花植株雜交，__________（填“能”或“不能”）通過次雜交實驗將F2中紅花植株的基因型全部區(qū)分開來，判斷的依據(jù)是__________。（4）若另選兩種基因型的植株作親本雜交，F(xiàn)1和F2的表現(xiàn)型及比例與題干結(jié)果完全相同，可推斷這兩株親本植株的基因型為____________________。11．（14分）蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學(xué)家欲獲得高效表達(dá)蛋白A的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關(guān)研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒，再將重組質(zhì)粒置于經(jīng)_________處理的大腸桿菌細(xì)胞懸液中，獲得轉(zhuǎn)基因大腸桿菌。（2）檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)入的蛋白A基因在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進(jìn)行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點的_________技術(shù)。②圖2所示的4次PCR應(yīng)該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進(jìn)一步將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和_________分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較_________的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點是_________。12．鳥類的性染色體組成是ZW型。某種鳥的羽色和喙長由兩對基因控制，某生物興趣小組用黃羽長喙雄鳥與黃羽短喙雌鳥交配，結(jié)果子代雌雄鳥均有黃羽和白羽，短喙全為雄鳥，長喙全為雌鳥。請回答下列問題：（1）鳥羽色和喙長中，顯性性狀分別是___________________，控制鳥羽色和喙長的基因_____（填“是”或“否”）遵循基因自由組合定律，原因是_______________________。（2）羽色基因用A/a表示，喙長基因用B/b表示，則親代基因型是__________________，子代黃羽短喙雄鳥基因型中純合子占___________。（3）若子代白羽短喙雌鳥與黃羽長喙雄鳥交配，后代黃羽短喙雄鳥出現(xiàn)的概率是______。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、B【解析】

可遺傳的變異包括基因突變、基因重組和染色體變異：（1）基因突變是指基因中堿基對的增添、缺失或替換，這會導(dǎo)致基因結(jié)構(gòu)的改變，進(jìn)而產(chǎn)生新基因；（2）基因重組是指在生物體進(jìn)行有性生殖的過程中，控制不同性狀的非等位基因重新組合，包括兩種類型：①自由組合型：減數(shù)第一次分裂后期，隨著非同源染色體自由組合，非同源染色體上的非等位基因也自由組合。②交叉互換型：減數(shù)第一次分裂前期（四分體），基因隨著同源染色體的非等位基因的交叉互換而發(fā)生重組。此外，某些細(xì)菌（如肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實驗）和在人為作用（基因工程）下也能產(chǎn)生基因重組。（3）染色體變異包括染色體結(jié)構(gòu)變異（重復(fù)、缺失、易位、倒位）和染色體數(shù)目變異?！驹斀狻緼、“貓叫綜合癥”是人的第5號染色體部分缺失引起的，屬于染色體結(jié)構(gòu)異常，A正確；B、人工誘變的原理是基因突變，基因突變是不定向，所以不能獲得預(yù)期性狀，B錯誤；C、減數(shù)第一次分裂前期（四分體），同源染色體上非姐妹染色單體上的等位基因互換屬于交叉互換，可能引起基因重組，C正確；D、花藥的離體培養(yǎng)實質(zhì)是培養(yǎng)精子，獲得單倍體植株，再利用秋水仙素加倍后獲得純合基因型，從而縮短育種年限，D正確。故選B。【點睛】本題考查生物變異的相關(guān)知識，要求考生識記基因重組的類型；識記基因突變的概念及意義，明確只有基因突變才能產(chǎn)生新基因；識記染色體變異的類型，能正確區(qū)分交叉互換型基因重組和染色體結(jié)構(gòu)變異中的易位，識記單倍體育種的步驟。2、C【解析】

A、基因的多樣性直接體現(xiàn)在性狀多樣性，A正確；B、②和③為同一屬，與其他都是非同一屬，故②和③最接近，B正確；C、自然選擇的直接對象是種群中不同性狀，C錯誤；D、地理隔離，可使⑥⑦原種群之間彼此不能接觸，失去交配機會不能進(jìn)行基因交流，最終形成生殖隔離形成不同物種，D正確。故選C。3、B【解析】

識圖分析可知，該圖是研究放牧對某地高寒草甸植物物種豐富度的影響，因此自變量是放牧強度，因變量是物種豐富度。根據(jù)柱狀圖可知，從2010年到2012年，隨著放牧強度的增加，該地區(qū)植物物種豐富度呈下降趨勢?！驹斀狻緼、根據(jù)以上分析可知，從2010年到2012年，隨著放牧強度的增加，該地區(qū)植物物種豐富度呈下降趨勢，A正確；B、調(diào)查物種豐富度時，是對物種數(shù)目的調(diào)查，應(yīng)該全部統(tǒng)計，不能對采集到的數(shù)據(jù)取平均值，B錯誤；C、過度放牧導(dǎo)致物種豐富度降低，因此會導(dǎo)致高寒草甸退化，草甸的生態(tài)功能下降，C正確；D、維持牧草和放牧數(shù)量的適宜比例，能保證高寒草甸健康發(fā)展，更好地利用高寒草甸，但該地區(qū)群落會發(fā)生演替，D正確。故選B。4、A【解析】

基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段，是控制生物性狀的遺傳物質(zhì)的功能單位和結(jié)構(gòu)單位，DNA和基因的基本組成單位都是脫氧核苷酸。【詳解】A、遺傳信息就蘊含在基因的堿基排列順序之中，基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段，故具備表達(dá)的能力，只是不一定能表達(dá)，A正確；B、因為密碼子具有簡并性，不同的密碼子可能決定同一種氨基酸，故不同的基因控制合成的蛋白質(zhì)可能相同，B錯誤；C、細(xì)胞核中的基因基因可以伴隨著染色體從親代傳遞給子代，但細(xì)胞質(zhì)中的基因并不是伴隨著染色體從親代傳遞給子代的，C錯誤；D、兩條同源染色體上的基因數(shù)不一定相同，如X與Y染色體上的基因數(shù)就不同，D錯誤。故選A。【點睛】解答此題要求考生識記基因的概念，明確基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段，并結(jié)合基因的選擇性表達(dá)分析作答。5、D【解析】

根據(jù)“兩株粗莖條形葉植株雜交，子代中出現(xiàn)了細(xì)莖雌株，雄株中的披針葉個體占1/4”的信息，可推測出細(xì)莖和披針葉都為隱性性狀，且決定葉形的基因位于常染色體上，而決定莖的基因的準(zhǔn)確位置，位于常染色體或者位于XY染色體的同源區(qū)段上都可以得到細(xì)莖雌株。【詳解】A、由分析可知，控制葉形的基因位于常染色體上，因此兩對基因都可位于性染色體上的說法是錯誤的，A錯誤；B、由分析可知親本雌株中一定含有控制葉形的隱性基因，由于后代中出現(xiàn)了細(xì)莖雌株，因此無論控制莖粗細(xì)的基因位于哪種染色體上親代雌性個體中一定含有控制莖的隱性基因，因此親本雌株應(yīng)該含兩種隱性基因，B錯誤；C、由決定葉形的基因位于常染色體上的推測可知，子代雄株中的披針葉個體占1/4，子代雌株中的披針葉個體也占1/4，因此子代中會出現(xiàn)細(xì)莖披針葉雌株，C錯誤；D、由分析可知，兩對基因都可位于常染色體上，D正確。故選D。6、B【解析】

A、所有的RNA均是由轉(zhuǎn)錄形成的，有極少數(shù)RNA充當(dāng)酶，A正確；

B、真核細(xì)胞內(nèi)的RNA絕大多數(shù)是在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄的，所以B選項錯誤，

C、mRNA上決定1個氨基酸的3個相鄰堿基成為密碼子，C正確；

D、細(xì)胞中有多種tRNA，一種tRNA只能轉(zhuǎn)運一種氨基酸。D正確；

故選B

7、D【解析】

在資源無限、空間無限和不受其他生物制約的理想條件下，種群就會呈指數(shù)增長，指數(shù)增長（“J”形增長）的特點是起始增長很慢，但隨著種群基數(shù)的加大，增長會越來越快。每單位時間都按種群的一定百分?jǐn)?shù)或倍數(shù)增長，其增長勢頭強大。邏輯斯蒂增長是指在資源有限、空間有限和受到其他生物制約條件下的種群增長方式，其增長曲線很像字母S，又稱“S”形增長曲線。種群的邏輯斯蒂增長總是受到環(huán)境容納量（K）的限制，環(huán)境容納量是指在長時間內(nèi)環(huán)境所能維持的種群最大數(shù)量。負(fù)反饋調(diào)節(jié)：使生態(tài)系統(tǒng)達(dá)到或保持平衡或穩(wěn)態(tài)，結(jié)果是抑制和減弱最初發(fā)生變化的那種成分的變化?！驹斀狻緼、環(huán)境容納量是指在長時間內(nèi)環(huán)境所能維持的種群最大數(shù)量，從圖中可看出，草履蟲的環(huán)境容納量小于800只，A錯誤；B、當(dāng)草履蟲數(shù)量達(dá)到環(huán)境容納量后，數(shù)量在K值上下波動，其自然增長率有時大于0，有時小于0，B錯誤；C、影響草履蟲數(shù)量增長的因素是資源和空間有限、捕食者的限制等，C錯誤；D、在10年后，若草履蟲因為捕食者而發(fā)生數(shù)量變化，捕食者的增多會造成草履蟲的減少，草履蟲的減少反過來會造成捕食者的減少，這種變化是負(fù)反饋調(diào)節(jié)的結(jié)果，D正確。故選D。8、B【解析】

根據(jù)題意和圖示分析可知：圖示為噬菌體侵染大腸桿菌的部分實驗：用35S標(biāo)記噬菌體→噬菌體與大腸桿菌混合培養(yǎng)→噬菌體侵染未被標(biāo)記的細(xì)菌→在攪拌器中攪拌（目的是將蛋白質(zhì)外殼和細(xì)菌分開），然后離心，檢測上清液和沉淀物中的放射性物質(zhì)，上清液a中放射性較強，沉淀物b中含有少量的放射性。用32P標(biāo)記噬菌體→噬菌體與大腸桿菌混合培養(yǎng)→噬菌體侵染未被標(biāo)記的細(xì)菌→在攪拌器中攪拌（目的是將蛋白質(zhì)外殼和細(xì)菌分開），然后離心，檢測上清液和沉淀物中的放射性物質(zhì)，上清液c中放射性較低，沉淀物d中放射性較高。該實驗證明了噬菌體的遺傳物質(zhì)是DNA?！驹斀狻緼、噬菌體屬于細(xì)菌病毒，不能獨立生活，所以標(biāo)記噬菌體時需要先標(biāo)記噬菌體的宿主細(xì)胞，即大腸桿菌，A正確；B、由于35S標(biāo)記的是噬菌體的蛋白質(zhì)外殼，故實驗1的結(jié)果是放射性主要存在于上清液中，沉淀物中也會有少量放射性，B錯誤；C、實驗2中的噬菌體被標(biāo)記的是DNA，如果混合培養(yǎng)時間太短，則一些被標(biāo)記的DNA沒有侵入細(xì)菌，如果保溫時間太長，則一些子代含放射性的噬菌體因大腸桿菌裂解而釋放出來，都會導(dǎo)致沉淀物d的放射性降低，C正確；D、本實驗證明了DNA是遺傳物質(zhì)，但不能證明DNA是主要的遺傳物質(zhì)，D正確。故選B?！军c睛】本題結(jié)合噬菌體侵染大腸桿菌的部分實驗過程圖，考查噬菌體侵染細(xì)菌的實驗，要求考生識記噬菌體侵染細(xì)菌的過程，明確噬菌體侵染細(xì)菌時只有DNA注入細(xì)菌中。二、非選擇題9、光照強度增大，光反應(yīng)速率加快氣孔導(dǎo)度增加，二氧化碳吸收量增加，暗反應(yīng)速率加快不是因為此時氣孔導(dǎo)度大，CO2供應(yīng)充足藍(lán)紫色（或藍(lán)色）【解析】

據(jù)圖分析，從圖中光合速率的曲線可以看出，在10：00左右時，光合速率相對量最大；但是在12：00時出現(xiàn)低谷，正常情況下這可能是由于氣孔關(guān)閉導(dǎo)致的，但是此時的氣孔導(dǎo)度最大，因此可排除二氧化碳的影響?！驹斀狻浚?）從圖中看出在8：00到10：00，植物氣孔導(dǎo)度增加，所以提高了二氧化碳吸收量，暗反應(yīng)速率加快；同時光照強度增加，光反應(yīng)速率加快；溫度升高，光合作用酶活性增強，所以光合作用速率升高。（2）12：00時光合速率出現(xiàn)了低谷，而此時氣孔導(dǎo)度最大，二氧化碳供應(yīng)充足，說明不是二氧化碳限制了光合作用的進(jìn)行。（3）葉肉細(xì)胞中的葉綠素主要吸收紅光和藍(lán)紫光，類胡蘿卜素主要吸收藍(lán)紫光，所以補充藍(lán)紫色（或藍(lán)色）更有利于蔬菜對光能的吸收?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是分析題圖、獲取有效信息，能夠根據(jù)氣孔導(dǎo)度和光合速率的關(guān)系判斷12：00時影響光合速率的主要環(huán)境因素。10、基因的自由組合定律YYRR和yyrr3/1紅花：白花=1：3不能F2中的紅花植株的基因型為YYRR、YYRr、YyRR和YyRr，其中基因型為YYRr和基因型為YyRR的紅花植株與隱性純合白花植株雜交，后代花色的表現(xiàn)型及比例都是紅花：白花=1:1，不能區(qū)分開來YYrr和yyRR【解析】

由題意可知，植物的紅花和白花這對性狀的遺傳涉及Y、y和R、r兩對等位基因，F(xiàn)2中分離比為9：1，是9：3：3：1的變式，說明兩對等位基因遵循基因自由組合規(guī)律，且F1的基因型為YyRr，Y_R_表現(xiàn)為紅花，其他基因型都是白花，因此親本的基因型為YYRR和yyrr?！驹斀狻浚?）根據(jù)以上分析已知，該植物花色性狀的遺傳遵循基因的自由組合定律；親本的基因型為YYRR和yyrr。（2）F1基因型為YyRr，F(xiàn)1自交得F2，F(xiàn)2白花植株基因型及其比例為Y_rr：yyR_：yyrr=3：3：1，其中純合子占3/1；親本白花（yyrr）與F1（YyRr）雜交，子代基因型及比例為YyRr：Yyrr、yyRr：yyrr=1:1:1:1，表現(xiàn)型及比例為紅花：白花=1:3。（3）現(xiàn)讓F2中紅花植株（Y_R_）與隱性純合子白花植株（yyrr）雜交，由于F2中的紅花植株的基因型有YYRR、YYRr、YyRR、YyRr四種基因型，其中基因型為YYRr和基因型為YyRR的紅花植株與白花植株雜交，后代花色的表現(xiàn)型及比例都是紅花：白花=1:1，因此不能通過一次雜交實驗將F2中紅花植株的基因型全部區(qū)分開來。（4）當(dāng)兩親本的基因型為YYrr和yyRR時，F(xiàn)1和F2的表現(xiàn)型及比例與題干結(jié)果完全相同?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是掌握基因的自由組合定律及其實質(zhì)，能夠根據(jù)9：1是9：3：3：1的變式判斷兩對等位基因遵循基因的自由組合定律以及不同的表型型對應(yīng)的可能基因型，進(jìn)而結(jié)合題干要求分析答題。11、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。②區(qū)別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨立于細(xì)菌擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。3、PCR技術(shù)擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建1、目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因（1）啟動子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。（2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來．常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1、轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2、常用的轉(zhuǎn)化方法：將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)．此方法的受體細(xì)胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少，最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌，其轉(zhuǎn)化方法是：先用Ca2+處理細(xì)胞，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。3、重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后，篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步：目的基因的檢測和表達(dá)1、首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。2、其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交。3、最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原——抗體雜交。4、有時還需進(jìn)行個體生物學(xué)水平的鑒定，如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。【詳解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA連接酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒；大腸桿菌作為受體細(xì)胞，需要用氯化鈣處理，以便重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。（2）①根據(jù)題意和圖示分析，經(jīng)過4次PCR技術(shù)后獲得了新的基因，這是一種定點的基因突變技術(shù)。②與研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），因此4次PCR應(yīng)該分別選擇如圖所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√（3）