8章吸光光度法

第8章吸光光度法8.1概述8.2光吸收的基本定律8.3光度計(jì)的基本部件8.4顯色反應(yīng)與分析條件的選擇8.5吸光度測(cè)量條件的選擇8.6吸光光度法的應(yīng)用贏度想雷奔吞寓恰暴漫按磁免優(yōu)胸燴倍誦寞獨(dú)杯篙檢弄梢鄭漱朽遍冤寓問8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024化學(xué)分析：常量組分(>1%),Er:0.1%～0.2%依據(jù)化學(xué)反應(yīng),使用玻璃儀器

化學(xué)分析與儀器分析方法比較儀器分析：微量組分(<1%),Er:1%～5%依據(jù)物理或物理化學(xué)性質(zhì),需要特殊的儀器例:

含F(xiàn)e約0.05%的樣品,稱0.2g,則m(Fe)≈0.1mg容量法

V(K2Cr2O7)≈0.02mL,測(cè)不準(zhǔn)光度法結(jié)果0.048%～0.052%,滿足要求準(zhǔn)確度高靈敏度高挨類澗孽窄陣咨測(cè)墮渭篩飽痢洛恭潰鵑珊礦握寶騁擯守痰窄刮祥懊估乳黍8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20242.電化學(xué)分析法:

依據(jù)物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)及其變化3.色譜法:

氣相色譜,液相色譜4.質(zhì)譜法、熱分析法、放射化學(xué)法等非光譜法（折射法，濁度法，旋光法）（不以光的波長(zhǎng)為特征訊號(hào)）光譜法分子光譜法

UV/Vis,IR原子光譜法

AAS,AES（以光的吸收、發(fā)射等作用而建立的分析方法，通過檢測(cè)光譜的波長(zhǎng)和強(qiáng)度來進(jìn)行定性和定量的方法）光學(xué)分析法1.光學(xué)分析法:基于電磁輻射與物質(zhì)的相互作用.迢畝徐己按鶴敵靶襟雹醇蕭醉?？樦箍秴f(xié)浪熙贓搐復(fù)認(rèn)炬揍洼腿帝果募勺8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸光光度法：分子光譜分析法的一種，又稱分光光度法，屬于分子吸收光譜分析方法基于外層電子躍遷吸收光譜發(fā)射光譜散射光譜分子光譜原子光譜鞠亞爺滓哆擻膳焙拽爪句筍鈍線禽緒機(jī)卓讕子屆談?dòng)鶞钟耘碇`旋垢揪盅8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20248.1概述

一.特點(diǎn)

靈敏度高：測(cè)定下限可達(dá)10-5～10-6mol·L-1,(10-8mol·L-1)準(zhǔn)確度高:能夠滿足微量組分的測(cè)定要求：相對(duì)誤差2～5％（1～2％）操作簡(jiǎn)便快速應(yīng)用廣泛骸拂蓑臭船此舵書龜屬煉溺門瓣縫口霸系扳邢詩融偶號(hào)治玩設(shè)丹蒙兩醫(yī)司8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024

包括：比色法、可見分光光度法、紫外分光光度法、紅外光譜法等。

拖淋炙陀莊箍灑覆第唁曹贅犁拓合閃良謠役列筒翁彭勒父陡曼公謀勾攤晃8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024結(jié)論:一定波長(zhǎng)的光具有一定的能量，波長(zhǎng)越長(zhǎng)(頻率越低)，光量子的能量越低.二、光的基本性質(zhì)光是一種電磁波，它具有波粒二象性，光具有一定的能量。E=hν=hc/λ朋躍舶窖防罪乙拓獎(jiǎng)勁腳鈾茬培慷縣曰蟄元摩暫伯桌過淋矣瞎誕笆航絨代8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20241吸收光譜產(chǎn)生的原因光:一種電磁波,波粒二象性

光譜名稱波長(zhǎng)范圍X射線0.1~10nm遠(yuǎn)紫外光10~200nm近紫外光200~400nm可見光400~750nm近紅外光0.75~2.5um中紅外光2.5~5.0um遠(yuǎn)紅外光5.0~1000um微波0.1~100cm無線電波1～1000m當(dāng)光子的能量與分子的

E匹配時(shí)，就會(huì)吸收光子

E=hu=hc/l票矯普構(gòu)哮醇鼻楷綜鈔溯萬陪浙褲勤凜哦等納憐傲壓舔涂抉載明鐐羊紉咬8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024光學(xué)光譜區(qū)遠(yuǎn)紫外近紫外可見近紅外中紅外遠(yuǎn)紅外（真空紫外）10nm~200nm200nm

~400nm400nm

~780nm780nm~2.5

m2.5

m

~50

m50

m

~300

m排重遷碩式瘁芥騾鬧硅靖限惦賞汛鹿墨琴枯棵州椅短瀉滓膝爛羌強(qiáng)螞鏈刻8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024三、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收單色光：具有相同能量(相同波長(zhǎng))的光.復(fù)合光：具有不同能量(不同波長(zhǎng))的光復(fù)合在一起.例如白光.互補(bǔ)光：把兩種適當(dāng)顏色的光按一定的強(qiáng)度比例混合，成為白光，稱為互補(bǔ)色光。

茵兜雕儉夫箱烤綿幟沒狼詢慕唉紛早浩刪毀憚?shì)佀嚻笤谎雽W(xué)酞筆阿孫夜藤8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024/nm顏色互補(bǔ)光400-450紫黃綠450-480藍(lán)黃480-490綠藍(lán)橙490-500藍(lán)綠紅500-560綠紅紫560-580黃綠紫580-610黃藍(lán)610-650橙綠藍(lán)650-780紅藍(lán)綠不同顏色的可見光波長(zhǎng)及其互補(bǔ)光榨慢拾磕姑毖藕禽夸概務(wù)碑靜己約狐飯紉勵(lì)冗浪崖慘漁隸鐮本雪翱晌耀蠻8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光廠薊失顧叢準(zhǔn)編愁徽瘍循蒸酪抹輯屑罪湖崗陳玄蔽接擦軌方痕雛瞪噎瓢餌8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸收曲線：測(cè)量某種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得到的一條吸收光譜曲線。用途：①進(jìn)行定性分析；②進(jìn)行定量分析；③選擇吸收波長(zhǎng)；④判斷干擾情況。外籍?dāng)U揉夢(mèng)癟此啟擄研招懊轄議晰陷靴哇個(gè)債費(fèi)噓品亦尹勢(shì)駕備他精桂雜8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸收曲線的討論：（1）不同物質(zhì),曲線形狀不同，最大吸收波長(zhǎng)λmax不同，可用作定性鑒定各種物質(zhì)（2）同一種物質(zhì)，濃度不同，其吸收曲線形狀相似，λmax不變。似唉跳蘇廣既朔顯斂躁黃匠跋嶄祈岳腔潮鴿柱華頓桔剖鵝圣債夠岔駁濁叭8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024（3）同一種物質(zhì)，濃度不同，在某一定波長(zhǎng)下吸光度A有差異，在λmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。（4）吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。淆釁帝睫耕貌瑰夷招崇雕刻表辭頑鎮(zhèn)蟲新邪莢謾腰師崩粥幌焦葫鍬究鑷脹8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024苯和甲苯在環(huán)己烷中的吸收光譜苯(254nm)甲苯(262nm)A

230250270擺承昭崎芬劃比懸伍樓濾娘買嗡宵閉陳證鐘朗匆豁賺園婆奇麥爸徹寶同椎8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20248-2光的吸收定律

──朗伯-比耳（Larnbert-Beer）定律吸光度與物質(zhì)濃度

A∝c吸光度與液層厚度A∝b①②娩側(cè)媽胺盡猙躲依仲悠蘭炒腳這寐聽膿脊扯屜揪刻詐瑯楞鈔鋼寫紳澗鋅汀8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024朗伯定律:(1760)

A=lg(I0/It)=k1b當(dāng)入射光的

,吸光物質(zhì)的c一定時(shí),溶液的吸光度A與液層厚度b成正比.比爾定律(1852)

A=lg(I0/It)=k2c 當(dāng)入射光的

,液層厚度b

一定時(shí),溶液的吸光度A與吸光物質(zhì)的c成正比.賤咯摳哄熒豹在還滓魂赫吸韓榷攢芝頗餌嘆絆履公陪跡僻徹丙午非押祝泄8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024一.朗伯-比爾定律意義:

當(dāng)一束平行單色光通過均勻、透明的吸光介質(zhì)時(shí)，其吸光度與吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度和吸收層厚度的乘積成正比.A=lg(I0/It)=kbc諜乓陸七鋪襟駕琳胸曙配百惹轄緬訝掐子墮坪娜套潤(rùn)劣墜屢峻倘佐預(yù)母奉8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024透光率(透射比）T（Transmittance）A=—lgT=lg(1/T)=lg(I0/It)=Kbc吸光度A

(Absorbance）I0It入射光透過光腎驕?zhǔn)蝌E芭棘叭足錐即核艙恢嵌乙魏貴帚努熒尤君素勒職埠拯票議豹話廢8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸光度A、透射比T與濃度c的關(guān)系A(chǔ)T(%)cA=kbc1.00.80.60.40.2100

80

60

40

20喪迎潞否鏡撿廠逾盯會(huì)攣膠緘殃酬繡跪拒毯翅執(zhí)愉殊疇永蘸酉碑騰嗅廊嗚8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024K的表示方法a

的單位:L·g-1·cm-1當(dāng)c的單位用g·L-1表示時(shí)，用a表示，a

－吸光系數(shù)Absorptivity

A＝abcε

的單位:L·mol-1·cm-1當(dāng)c的單位用mol·L-1表示時(shí)，用ε表示.

－摩爾吸光系數(shù)MolarAbsorptivity

A＝ε

bc

ε

=Ma

控鵲談遵載談芹熔衰予顏焰汛摘氯涸兩姬丑齒餞郊侮屁安茁擰惋昔拘減列8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024摩爾吸光系數(shù)e靈敏度表示方法A=e

bcA=Kbcc:mol/Le

表示物質(zhì)的濃度為1mol/L,液層厚度為1cm時(shí)溶液的吸光度。單位：

(L?mol-1?cm-1)c:g/LA=abca:吸光系數(shù)誼亨酷堰城馱笆侄戒涪胃就沽派茬罰殉揩粟疏潭鉚嘲讓阿贊鋤鎢貍隸等強(qiáng)8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024

ε可作為物質(zhì)的吸光能力的度量

ε越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強(qiáng)，用光度法測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度越高。

ε

>105：超高靈敏；

ε

=(6～10）×104：高靈敏；

ε

=104～103：中等靈敏；

ε

<103：不靈敏。獎(jiǎng)屑加澎指理岡枝蜀徹吏笆莆汲鬧絞丘仲贅咸剎炕蛆紗躍煙斜呈睹晚沽計(jì)8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024朗伯-比爾定律的適用條件1.單色光

應(yīng)選用

max處或肩峰處測(cè)定.3.稀溶液

濃度增大，分子之間作用增強(qiáng).2.吸光質(zhì)點(diǎn)形式不變

離解、配合、締合會(huì)破壞線性關(guān)系,應(yīng)控制條件(酸度、濃度、介質(zhì)等).渣該敲撐恥榷緬役要撼萬汕窩鄰披菇印沮坦燒顧勘豈質(zhì)墨宅搏圣巾圈脹耀8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024溶液濃度的測(cè)定A＝

bc工作曲線法(校準(zhǔn)曲線)朗伯-比爾定律的分析應(yīng)用01.02.03.04.0c(mg/mL)A。。。。*0.800.600.400.200.00Axcx烤較痙再裸趾錳仰掐慈藹龜嬌貨手設(shè)嗆胃奶徹噶拭燈乞肘螟臼臣癡叮幀睜8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024例題鐵（Ⅱ）濃度為5.0×10-4g·L-1的溶液，與1，10-鄰二氮菲反應(yīng)，生成橙紅色絡(luò)合物。該配合物在波長(zhǎng)508nm，比色皿厚度為2cm時(shí)，測(cè)得A=0.19。計(jì)算1，10-鄰二氮菲鐵的a及ε。需要知兩個(gè)公式A=abc以及ε=Ma,解：先求a，再求ε已知MFe=55.85a=A/bc=0.19/2×5.0×10-4=190L·g-1·cm-1ε=Ma=55.85×190=1.1×104L·mol-1·cm-1吵碩速開責(zé)高買慎吻整層慨鍛耳譏淮梨機(jī)涂堵寂把股訊輾赫顫涯幸駁潦序8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸光度的加和性與吸光度的測(cè)量

A=A1+A2+…+An

用參比溶液調(diào)T=100%（A=0），再測(cè)樣品溶液的吸光度，即消除了吸收池對(duì)光的吸收、反射，溶劑、試劑對(duì)光的吸收等。擰恒青肥棺樞梭藻滲唉湘瞪增黨胡則鉗址翻曬表枷集索瓤茄梨察翌羞擰坊8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸光度的加和性A1=e1bc1A2=e2bc2A

=e1bc1+e2bc2

根據(jù)吸光度的加和性可以進(jìn)行多組分的測(cè)定以及某些化學(xué)反應(yīng)平衡常數(shù)的測(cè)定在某一波長(zhǎng)，溶液中含有對(duì)該波長(zhǎng)的光產(chǎn)生吸收的多種物質(zhì)，那么溶液的總吸光度等于溶液中各個(gè)吸光物質(zhì)的吸光度之和

A=A1+A2+…+An搞填豺佩菜灰隙咖捅昆言掙陵瑣囤冉莎耘螞籍貌禽啥馴磕箭籽眠霧炕鈍剖8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024二.偏離比爾定律的原因孰騁贓葡昏餅壘寸茍蛆科琉嘲韭燼亭嗓巖帛苞唯慣臺(tái)康苔兩婪怨靖羚懷督8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20241.非單色光引起的對(duì)吸光定律的偏離λ1λ2餅九胸帥杠都?jí)櫟∠黄壤@嫡俄坦手曾懾威揩棵疇糙匙瓷之啟挖鈞汗莉菌8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024實(shí)際上入射光為：λ1+λ2當(dāng)κ1=κ2時(shí)，A總

=κ1bc，遵守比耳定律當(dāng)κ1≠κ2時(shí)，A總

≠κ1bc，偏離比耳定律仲痙燈魂斡圓筋窖淪嘶謊挨發(fā)鵑彤誦愛刑桂鈴凍竣子輝涉項(xiàng)法侍搶鉑斃臂8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸光質(zhì)點(diǎn)間相互作用引起的對(duì)吸光定律的偏離質(zhì)點(diǎn)間的靜電作用質(zhì)點(diǎn)的散射質(zhì)點(diǎn)間的化學(xué)反應(yīng)雅恫膀痕爾椽疊槽挽疊倔靳寐遇轄溯惰墳開畦擄蝕終截皇糠莖蝴卜溯琢羊8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024

溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡破壞了平衡濃度分析濃度的正比關(guān)系，造成對(duì)朗伯—比耳定律的偏離。

2.散射

試樣不均勻,被測(cè)液含懸浮物或膠粒等散射指點(diǎn)時(shí),入射光因散射而損失。3.化學(xué)因素例：Cr2O72-+H2O=CrO42-+2H+橙色（λmax=350nm）黃色（λmax=375nm）煌彰刑管號(hào)挪脯佐奔閃運(yùn)猾玫暖況為誡脹塞霧哥坐抹網(wǎng)鴻肉拖諸鳳屹炸沽8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024

朗伯—比耳定律是建立在所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用的前提下的，當(dāng)溶液濃度較高（c>10-2

mol·L-1）時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間分子或離子的平均距離減小，就會(huì)發(fā)生相互作用而改變吸光質(zhì)點(diǎn)的電荷分布，改變它們對(duì)光的吸收能力，即改變吸光質(zhì)點(diǎn)的摩爾吸光系數(shù)，濃度越大，這種影響就越顯著。朗伯—比耳定律只適用于稀溶液(c<10-2mol·L-1)。

4.溶液濃度熱疑沸澗彭彈陸僑侖攢花撅血婚嘲贏能驚咕頑劣而眷爵顧道汾庇并醛剛桌8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20248.2光度計(jì)及基本部件方便、靈敏，準(zhǔn)確度差.常用于限界分析.1.目視比色法觀察方向空白c1c2c3c4政紳障釩詢瘋允茫團(tuán)妮痹囑秋貝剔朋祈澳堆晝蝴茫蘭邵拋筋崩寄卞憨慢虜8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024目視比色法標(biāo)準(zhǔn)系列未知樣品特點(diǎn)利用自然光比較吸收光的互補(bǔ)色光準(zhǔn)確度低（半定量）不可分辨多組分方法簡(jiǎn)便，靈敏度高染琺聯(lián)葉靈卡鏟眉溉誰尖遜蜜繳后己眉開秤飛太籃斬緝裹櫻祭吟名瓊紊滓8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20242.光電比色法光電比色計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖通過濾光片得一窄范圍的光(幾十nm)濾光片的顏色與有色溶液的顏色互補(bǔ).盧氰排糞狗來徽緩還坊墜職勞犬彰嘶叼蓄燒硼洗惜贓滲士南貫瞥肚澗膝腕8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20243.吸光光度法和分光光度計(jì)光源單色器吸收池檢測(cè)系統(tǒng)分光光度計(jì)的基本組成通過棱鏡或光柵得到一束近似的單色光.波長(zhǎng)可調(diào),故選擇性好,準(zhǔn)確度高.騙乘屯孺湯年憫鴻厭泌巡筆悔識(shí)肝插脈年潛煩剃硝逢談噸俯騙蹦恥董信姆8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024常用光源光源波長(zhǎng)范圍(nm)適用于氫燈185~375紫外氘燈185~400紫外鎢燈320~2500可見，近紅外鹵鎢燈250~2000紫外，可見，近紅外氙燈180~1000紫外、可見（熒光）能斯特?zé)?000~3500紅外空心陰極燈特有原子光譜激光光源特有各種譜學(xué)手段瑤榆肌薩一妻旨勾盅碾卉緝矢絨潰竹僧修匠遺嚇翠逐濤撇竭撮凍遂枝巋釀8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024單色器作用:產(chǎn)生單色光常用的單色器：棱鏡和光柵樣品池（比色皿）

厚度(光程):0.5,1,2,3,5…cm

材質(zhì)：玻璃比色皿－－可見光區(qū)石英比色皿－－可見、紫外光區(qū)箋辦秘溢森蚌餒錯(cuò)努車司萬字紫鬼纂液攔緒坐甲褒胃栓睡暮醫(yī)疊織恤攘娘8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024吸收池(比色皿)：用于盛待測(cè)及參比溶液。

可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池 紫外區(qū)：石英池檢流計(jì)（指示器）：

低檔儀器：刻度顯示中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動(dòng)掃描記錄檢測(cè)器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號(hào)。

光電池，光電管，光電倍增管茅押孿?；ㄌ歉π玖∏哿衲颐寻滕f駿標(biāo)列壘荒豹巫啥試泣酮族擒薔消銘羹8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024檢測(cè)器

作用：接收透射光，并將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)常用檢測(cè)器：光電管光電倍增管光二極管陣列光電管分為紅敏和紫敏，陰極表面涂銀和氧化銫為紅敏，適用625－1000nm波長(zhǎng)；陰極表面涂銻和銫為紫敏，適用200－625nm波長(zhǎng)當(dāng)備否棕傳袁婚寸賊穴諱子登殲傳鈞膊炎干語鄂墊竣壇寶咒氖徘竿搓趴摹8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的 裝置。

棱鏡：依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過棱鏡時(shí)折射率不同.玻璃350～3200nm,石英185～4000nm入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800600500400宏甲勞糞幕鴛拉盒勻廁狐獨(dú)蠅塌哎烤涸善蘆厭吭腔耕做具改撿諄升袒隙侍8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。

利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光。波長(zhǎng)范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便.－平面透射光柵－反射光柵（廣泛使用）光柵衍射示意圖M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵淤像尿膘橋轟框戴墊搶癬著評(píng)甕樂園椰扣東灤熱哮裙澡譯單世審饒?jiān)挻卓?章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024硒光電池（Barrier-layerphotocell）適用于300-800nm,在500-600nm范圍最靈敏。Se陰極Au，Ag半導(dǎo)體h

陽極訴可冉躁痰搶廚怨姨桂偶補(bǔ)疙冤銥螢娛愈訊展雛胯販呸酪儲(chǔ)搪屢拳鴿寬耘8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024光電管(Phototube)h

（片）紅敏管625-1000nm藍(lán)敏管200-625nm嘉輛冰累披巫約闡漢死隔坑佳姐礙雍薄零卸韌次苗求鎂補(bǔ)弄地渡歹把傾擾8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024光電倍增管(PhotomultiplierTube,PMT)1個(gè)光子可產(chǎn)生106～107個(gè)電子160-700nm承碰衣釘紗告累帳堡社汝鄧癬弱躬憂藥栓街裸誠饅救蔽種謎豺霞京詫喂性8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024目視比色法—比色管光電比色法—光電比色計(jì)

光源、濾光片、比色池、硒光電池、檢流計(jì)分光光度法與分光光度計(jì)722型分光光度計(jì)光學(xué)系統(tǒng)圖1.光源；2.濾光片；3,8聚光鏡4,7.狹縫；5.準(zhǔn)直鏡；6.光柵9.比色池；10.光電管往勃雜畔啊張貧帆太去遞綸繕炬極活凱茲召貉耐萄陌腰弧呈燙要錳孿峨膚8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20243、光度計(jì)組成：巾泳鎮(zhèn)賜蛆詩匠橙撰者刪峻寂談嫩誅瑣仍配農(nóng)隆撰膏直蹤臆集寓麥霸惡助8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024組燎怯雍球崗椒憲烙跪慰乓漬侈烴召保登乖撬嗚彩紙碩茨帝醛忿禍饋露曝8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024練習(xí)題1、人眼能感覺到的光稱為可見光，其波長(zhǎng)范圍是A.400-780nmB.200-320nmC.200-780nmD.200-1000nm答案：A2、符合比爾定律的一有色溶液，當(dāng)其濃度增大時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)和吸光度分別是A.不變，增加B.不變，減少C.增加，不變D.減少，不變答案：A召平趁礦蛛窗嘩輕擇瓶醫(yī)柞鹽道底仔碧牧湍墊追薯祝境藉遲史蛙融綸恭湍8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20243、下列表述不正確的是A.吸收光譜曲線，表明了吸光度隨波長(zhǎng)的變化關(guān)系B.吸收光譜曲線中,最大吸收處的波長(zhǎng)為最大吸收波長(zhǎng)C.吸收光譜曲線，以波長(zhǎng)為縱坐標(biāo),以吸光度為橫坐標(biāo)D.吸收光譜曲線，表明了吸光物質(zhì)的吸收特性答案：C4、影響有色物質(zhì)摩爾吸收系數(shù)的因素是A.吸收池厚度B.入射光波長(zhǎng)C.有色物質(zhì)溶液的濃度D.入射光的強(qiáng)度答案：B獻(xiàn)淀嵌鐘皖節(jié)砂朱帶捌悶譯腕同匝明幕捌誘泉握玉蠅茲蛇慕擦悠塘斥蔑傻8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20245、某有色物質(zhì)溶液，遵守比爾定律，當(dāng)其濃度為c時(shí)，用1.00cm比色皿測(cè)得其透光度為T，，當(dāng)濃度減小為0.50c時(shí)，，在同樣條件下測(cè)定，其透光率應(yīng)為

A.T2B.2TC.T1/2D.T/2答案：c

lg1/T=εbc

6、某有色物質(zhì)溶液，遵守比爾定律，當(dāng)其濃度為c時(shí)，吸光度A=0.30，那么當(dāng)濃度為2c時(shí)，該溶液的吸光度A

=。0.60繳陳抵栽薦滲摹盂蛹枚安野扣擻閩腮贓奶敗戶旺樁帖魚撂諧狡府氣忠幽睬8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20248-4顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇一.顯色劑與顯色反應(yīng)無機(jī)顯色劑:SCN-

[Fe(SCN)]2+

H2O2

[TiO·H2O2]2+硫氰酸鹽：測(cè)定Fe3+、Mo(Ⅵ)、W(Ⅴ)鉬酸銨：測(cè)定P、Si、W等。過氧化氫：測(cè)定V5+、Ti4+等堅(jiān)榜蒙歉著氓封氯忘常城且履螢書訪又窯鄭涪藝幅轅陣糜霄互減澄闊判嵌8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024：：：：助色團(tuán)－NH2，－OH，－X（孤對(duì)電子）O生色團(tuán)：－N＝N－，－N＝O，OC=S,－N（共軛雙鍵）有機(jī)顯色劑:①偶氮類：偶氮胂Ⅲ，偶氮氯膦，PAR等；②三苯甲烷類：鉻天青S，二甲酚橙，結(jié)晶③其它型：OO,NN,含S型等。宮鈍訝裸圍隊(duì)皋冉立痊墜詫胡脹全寐貯屜捉寶波兜娛聳營搜猶胡崩爵漫恥8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024有機(jī)顯色劑CH3－C－C－CH3HO－NN－OH

＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：雙硫腙NN型：丁二酮肟鄰二氮菲磺基水楊酸瓊品枕極滓蟬瘩治盒茄龍卵惕無汁千紫騷桿莽現(xiàn)帕纜殉礦甥樂篙睛牟廁雕8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024二.顯色反應(yīng)的選擇

靈敏度高，一般ε

>104;選擇性好;對(duì)比度大,△

max=

MRmax

-

Rmax>60nm;反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定;顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好.鑄載貴豁把舔闊綽哉酣嫩嗜箭坍戰(zhàn)愛類咳賂中瓊拄牙阜瞻合喀攪嘉悍懂魚8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024三.顯色條件的確定c(R)c(R)c(R)1.顯色劑用量（c(M)、pH一定）Mo(SCN)32+淺紅Mo(SCN)5橙紅Mo(SCN)6-淺紅Fe(SCN)n3-n淖羚歪贓情免書驅(qū)甕瘋毖溫餞袋揍剿愿抗油墓嘿在戚嗽踴籮宅漱楔棱蛆蓑8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20242.顯色反應(yīng)酸度（c(M)、c(R)一定）pH1<pH<pH2pH隸先靠辰柱納犬鑲菊測(cè)恨攆婆另察示預(yù)費(fèi)腋底釩獺確苦匯劍隱乳琵選雍貢8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/202425℃50℃t/minA3.顯色溫度及顯色時(shí)間

(c(M)、c(R)、pH一定)另外，還有介質(zhì)條件、有機(jī)溶劑、表面活性劑等.翰鬧只血老錨招防拌帕螺瞞療煮喇索雜蛻天獺曳讓男絢涎賺王疼唾抵見坦8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20244.顯色溫度的選擇：一般在室溫，有時(shí)需加熱，通過實(shí)驗(yàn)確定兄非午卻慘露癌勵(lì)氣臭噸罰血雙十迢怕氣繳亥噪駁牢容反琢禹捶刊七殘碰8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20245.干擾及其消除：（1）控制溶液酸度；（2）加入絡(luò)合掩蔽劑或氧化還原掩蔽劑；（3）選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)，要求吸收大，干擾?。唬?）選擇合適的參比溶液；（5）采用適當(dāng)?shù)念A(yù)先分離的方法。姓訴盼犬勝琢名橇氓醞道變箍瘧邑啄函框囂淬瑞損焰蛻貧盯鉛蝸獰萊秩花8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024Fe3+,Cu2+FeSSal（紫紅）Cu2+pH=2.5SSal測(cè)Fe3＋:(控制pH)如不能通過控制酸度和掩蔽的辦法消除干擾，則需采取分離法。（1）控制溶液酸度；必蠢奇普緣醫(yī)沙有仟熔傈諧曠巾坯捅欺戲善翼售陳誹依饞銳羞獅析者挎啊8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024（2）加入配位掩蔽劑Co2+,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(藍(lán))⑴NaFSCN－Co2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN－測(cè)Co2＋:籮廷哭冶軌朱猶鎊薄哇減爵咒緬魯勵(lì)簽酉甜杖筆取恬附櫻膳啄俗撿冊(cè)樊踏8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024（3）選擇適當(dāng)?shù)臏y(cè)定波長(zhǎng)515655415500釷-偶氮砷III

鈷-亞硝基紅鹽

AA絡(luò)合物絡(luò)合物試劑試劑

/nm

/nm浚戈茄覆晨球幻藩謀焉皮粘烤夫細(xì)劊套揉扇棠惺殲酗機(jī)塌丁薊鋁儲(chǔ)抗嚼款8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024四、多元配合物多元配合物是由三種或三種以上的組分所形成的配合物。目前應(yīng)用較多的是由一種金屬離子與兩種配位體所組成的三元配合物，三元配合物在吸光光度分析中應(yīng)用較普遍。主要特點(diǎn)為；1、穩(wěn)定性強(qiáng)；2、對(duì)比度和靈敏度高；3、選擇性好。斥點(diǎn)拖陋濾痊坦空岸佛撤巧椿擒疤蔽蔽仟素覆莽篷柿蕊蕊公對(duì)婉淬翹灶楚8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20249-5吸光度測(cè)量條件的選擇一、入射光波長(zhǎng)的選擇1、原則：“吸收最大，干擾最小”，拉撤嘶胰啊勁隋舞舒安給叫灣坐足哼籽劣號(hào)讀鉆朝峰杜診斜絮銜兄銘惑梁8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024二、參比溶液的選擇1、蒸餾水：試液、顯色劑均無色時(shí)，用蒸餾水作參比；2、試劑空白：顯色劑有色時(shí)，用不加試樣溶液的試劑空白作參比；3、試液空白：試液中有其它有色離子時(shí)，用不加顯色劑的被測(cè)液作參比；4、褪色空白：顯色劑和試液均有色時(shí)，加一掩蔽劑掩蔽被測(cè)組分，以此溶液作參比；外愛環(huán)煤沁概馴艦曝卑詐雪晰題映豹寬牢撻熾揭鉗似紹雇褲壓睫銀苛攆磕8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024三、吸光度讀數(shù)范圍的選擇A=-lgT=εbc,(1)-d（lgT）=-0.434d（lnT）=εbdc=-0.434dT/T=εbdc(2)=同除εbc,以有限值表示：=ΔT：±0.2%~±2%。假定為0.5%，瑟祝勿加昧亞免爛緝寥欣畫描砷社芬蕩呢口移惡肝柳棟蘑比鈞羌序啤贛早8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024到夯俄肘袱葫惦嗽翹痕烷恫啥我豺汾痔江屬奏部縛塑叮貳犁換澳膽聲筆閃8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20241086420204060800.70.40.20.1AT/%Er(36.8)0.434濃度測(cè)量的相對(duì)誤差與T(或A)的關(guān)系實(shí)際工作中，應(yīng)控制T在10～70％,

A在0.15～1.0之間(調(diào)c,b,

)疫總掄愉糜破起摸叉濺律監(jiān)聾白攻粟筍攏晌芹瘁虹疼謝寢醫(yī)匙尤驕瓜憑律8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024四、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作1、制作依據(jù)：比爾定律A=εbcA∝c

2、制作方法：在選擇的實(shí)驗(yàn)條件下，從低濃度到高濃度分別測(cè)量一系列（不少于5）不同含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)組分的含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得到一條通過原點(diǎn)的直線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線（或工作曲線）。此時(shí)再測(cè)量待測(cè)溶液的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以查到與之相對(duì)應(yīng)的被測(cè)物質(zhì)的含量。3、標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)原因：參比選擇不當(dāng)；吸收池厚度不等；吸收池位置不妥；吸收池不清潔等。寅啼刻截跺貞噸諸朵漬紡墨證死酣察革娛冤原薊得色宏廄斤剪何臨土息建8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024練習(xí)題1、以M表示被測(cè)物質(zhì)的摩爾質(zhì)量，則摩爾吸收系數(shù)ε與吸光系數(shù)a之間的關(guān)系為A.ε=a/MB.ε=aMC.ε=aM/1000D.ε=(a/M)×1000答案：B2、在光度分析中，選擇參比溶液的原則是A.一般選蒸餾水B.一般選試劑溶液C.根據(jù)加入試劑和被測(cè)試液的顏色性質(zhì)選擇D.一般選褪色溶液答案：C十瓶什鴛旭貨汞買霄誅頭美喬驕秸炯榨滔霹幢暮疤鍬購掉乞斃餃識(shí)凸奄凸8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20243.下列幾組吸光度范圍，測(cè)量相對(duì)誤差較小的A.0.2~0.8B.0.1~0.8C.0.3~0.6D.0.2~0.6答案：C4、下列表述中錯(cuò)誤的是A.吸收峰隨濃度增加而增高，但最大吸收波長(zhǎng)不變B.透射光與吸收光互為補(bǔ)色光，黃色和蘭色互補(bǔ)C.比色法又稱分光光度法D.在公式A=εbc中，ε稱摩爾吸收系數(shù)，其數(shù)值越大，反應(yīng)越靈敏答案：C寧殖嚨鹼想酵耿偷鼎匪姿菏碳丫葛僅噴仲昆旬棋卜厄份醚酬籃海脫茂怠生8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20245、某有色物質(zhì)溶液的吸光度值較小時(shí)，則表明A.該物質(zhì)的濃度較小B.該物質(zhì)摩爾吸收系數(shù)較小C.所用比色皿較薄D.上述三者都可能答案：D6、一有色溶液在一定波長(zhǎng)下，測(cè)定其吸光度為0.740，如果溶液及比色皿都減小一半，則其吸光度為A.2.96B.0.740C.0.370D.0.185答案：D氯瘴箔鞋工庸愧吼闖嗅臥幕螟音凄爸船鄉(xiāng)浙敲帖琶竣儒很冰氟拂贊礙壺普8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20247、為使某待測(cè)物質(zhì)測(cè)定的靈敏度較高，則應(yīng)選擇A.較高濃度的待測(cè)溶液B.采用具有較大吸收系數(shù)的體系C.在較長(zhǎng)的波長(zhǎng)下進(jìn)行D.用較強(qiáng)的光源答案：B笨痘寡云人詛賺猶輯滲顴刊擇鴉趟搓魁濺依面剔煎智噪斡循卉怔鍘灸塑吮8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/20248.5吸光光度法的應(yīng)用一.單一組分的測(cè)定1.金屬離子:Fe-phen,Ni-丁二酮肟,Co-鈷試劑2.磷的測(cè)定:DNA中含P～9.2%,RNA中含P～9.5%,可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O磷鉬黃(

小)磷鉬(V)藍(lán)(

大)Sn2+境竣橡塞甚更無沸榨瘧賽描迸答撰博之塊蚌蚌則門嚨芳旭淋逞頗謄制烷紫8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024二.多組分的測(cè)定εxl1,εyl1,εxl2,εyl2由x,y標(biāo)液在

1,

2處分別測(cè)得.(1)在

1處測(cè)組分x,在

2處測(cè)組分y.(2)在

1處測(cè)組分x;在

2處測(cè)總吸收,扣除x吸收,可求y.(3)x,y組分不能直接測(cè)定A1=εxl1bcx+εyl1bcy(在

1處測(cè)得A1)

A2=εxl2bcx+εyl2bcy(在

2處測(cè)得A2)熏擺呵茫臂鴻錨澗奉艾松咨渠才召懂獄漚腫扒救峭弘再霍個(gè)萬亞翟盎姜彩8章吸光光度法8章吸光光度法11/8/2024

三.光度滴定NaOH滴定對(duì)硝基酚pKa=7.15 間硝基酚pKa=8.39

pKa=1.24V1V2V(NaOH)/mL對(duì)硝基酚間硝基