豬血樣與組織樣品采集技能操作規(guī)范DB41-T 1702-2018

ICS11.220

B41

DB41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T1702—2018

豬血樣與組織樣品采集技能操作規(guī)范

2018-09-29發(fā)布2018-12-29實(shí)施

河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB41/T1702—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河南省畜牧局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：駐馬店市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、西平縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、遂平縣動(dòng)物疫病預(yù)防

控制中心、泌陽縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、正陽縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、確山縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：朱鳳霞、楊晴、付顯東、陳奎、薛雙、董宏偉、張煜、陶順啟、許瑞、張三軍、

劉明莉、羅志忠、王五臣、李春芳、韓宇、宋亞舉、李清蓮。

I

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豬血樣與組織樣品采集技能操作規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬前腔靜脈采血、耳靜脈采血、扁桃體活體采樣、鼻腔拭子采樣、水泡液和水泡皮采

樣、臟器及腦組織樣品采集技術(shù)與操作規(guī)范。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬病診斷、流行病學(xué)調(diào)查、疫情監(jiān)測、疫苗免疫效果評(píng)估、生豬調(diào)運(yùn)、評(píng)估認(rèn)證等豬

血樣和組織樣品的采集。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

該標(biāo)準(zhǔn)界定的下列術(shù)語和定義適用于本文件。為了便于使用，以下重復(fù)列出了NY/T541中的某些

術(shù)語和定義。

3.1

樣品

取自動(dòng)物或環(huán)境，擬通過檢驗(yàn)反映動(dòng)物個(gè)體、群體或環(huán)境有關(guān)狀況的材料或物品。

3.2

采樣

按照規(guī)定的程序和要求，從動(dòng)物或環(huán)境取得一定量的樣本，并經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚?，留作待檢樣品的過

程。

4個(gè)人防護(hù)

采樣人員應(yīng)做好個(gè)人安全防護(hù)，穿戴口罩、工作帽、防護(hù)服、防護(hù)靴、雙層手套，必要時(shí)戴防護(hù)眼

鏡、面罩。

5采樣原則

5.1先排除后采樣

凡發(fā)現(xiàn)急性死亡的動(dòng)物，懷疑患有炭疽時(shí)，不得解剖。應(yīng)先采集血樣，進(jìn)行血液抹片鏡檢，確定不

是炭疽后，方可解剖采樣。

5.2合理選擇采樣方法

5.2.1應(yīng)根據(jù)采樣的目的，內(nèi)容和要求合理選擇樣品采集的種類、數(shù)量、部位與抽樣方法。樣品數(shù)量

應(yīng)滿足流行病學(xué)調(diào)查和生物統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。

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5.2.2診斷或被動(dòng)監(jiān)測時(shí)，應(yīng)選擇癥狀典型成病變明顯或有患病征兆的畜禽，疑似污染物；在無法確

定病因時(shí)，采樣種類應(yīng)盡量全面。

5.2.3主動(dòng)監(jiān)測時(shí)，應(yīng)根據(jù)畜禽日齡，季節(jié)、周邊疫情情況估計(jì)其流行率，確定抽樣單元。在抽樣單

元內(nèi)，應(yīng)遵循隨機(jī)取樣原則。

5.3采樣時(shí)限

采集亡動(dòng)物的病料，應(yīng)于動(dòng)物死亡后2h內(nèi)采集，無法完成時(shí)，夏天不得超過6h，冬天不得超過

24h。

5.4無菌操作

采樣過程應(yīng)注意無菌操作，刀，剪、攝子，器皿，注射器，針頭等采樣用具應(yīng)事先嚴(yán)格滅菌，每種

樣品應(yīng)單獨(dú)采集。

5.5盡量減少應(yīng)激和損害

活體動(dòng)物采樣時(shí)，應(yīng)避免過度刺激或害動(dòng)物；也應(yīng)避免對(duì)采樣者造成危害。

5.6生物安全防護(hù)

采樣人員應(yīng)加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，嚴(yán)格遵守生物安全操作的相關(guān)規(guī)定，嚴(yán)防人獸共患病感染：同時(shí)，應(yīng)做

好環(huán)境消毒以及動(dòng)物或組織的無害化處理，而免污染環(huán)境，防止疫病傳播。

6耳靜脈采血

6.1采樣準(zhǔn)備

保定器、采樣箱、保溫箱或保溫瓶、酒精棉、碘伏、鑷子、采血器及針頭、離心管及自封袋、簽字

筆、記號(hào)筆、采樣單、采樣登記表、垃圾袋和防護(hù)用品等。

6.2保定及消毒

站立或側(cè)臥保定，或用保定器具保定，耳靜脈局部用碘伏棉球由里向外做點(diǎn)狀螺旋式消毒。

6.3采樣

6.3.1用手指捏壓耳根部靜脈血管處，使靜脈充盈、怒張(或用酒精棉反復(fù)局部涂擦以引起其充血)；

6.3.2左手把持耳朵，將其托平使采血部位稍高；

6.3.3右手持采血器，沿靜脈管使針頭與皮膚呈30°～45°角，刺入皮膚及血管內(nèi)，輕輕回抽針芯，

如有回血即證明已刺入血管，再將針管放平并沿血管稍向前伸入，把針芯向外緩慢拉，使血液流入采血

器；

6.3.4拔出針頭后用干棉球壓迫止血；

6.3.5采血后，將采血器活塞外拉預(yù)留血清析出空間。將采血器套上護(hù)針帽，去除推桿；

6.3.6對(duì)所采樣品進(jìn)行編號(hào)并放入保溫箱或保溫瓶；

6.3.7填寫樣品采集登記表（見附錄A）。

7前腔靜脈采血

2

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7.1采樣準(zhǔn)備

保定器、采樣箱、保溫箱或保溫瓶、酒精棉、碘伏、鑷子、采血器及針頭、離心管及自封袋、簽字

筆、記號(hào)筆、采樣單、采樣登記表、垃圾袋和防護(hù)用品等。

7.2保定消毒

7.2.1站立保定：用保定器保定豬，使豬的頭頸與背線呈30°以上角度，并稍偏向一側(cè)。選擇頸部最

低凹處，用鑷子夾取碘伏棉球由里向外做點(diǎn)狀螺旋式消毒。

7.2.2仰臥保定：將豬仰臥保定，其中一助手抓握兩后肢，盡量向后牽引，另一助手用手將下頜骨下

壓，使頭部貼地，并使兩前肢與體中線基本垂直。選取胸骨端與耳基部的連線上胸骨端旁2cm的凹陷

處，用鑷子夾取碘伏棉球由里向外做點(diǎn)狀螺旋式消毒。

7.3采樣

7.3.1站立保定時(shí)，使針頭偏向氣管約15°方向進(jìn)針，回抽見有回血時(shí)，即把針芯向外拉，使血液流

入采血器；

7.3.2仰臥保定時(shí)，使針頭與地面呈60°方向進(jìn)針，當(dāng)進(jìn)入約2cm時(shí)，回抽見有回血時(shí)，即把針芯

向外拉，使血液流入采血器；

7.3.3拔出針頭后用干棉球壓迫止血；

7.3.4采血后，將采血器活塞外拉預(yù)留血清析出空間。將采血器套上護(hù)針帽，去除推桿；

7.3.5對(duì)所采樣品進(jìn)行編號(hào)并放入保溫箱或保溫瓶；

7.3.6填寫樣品采集登記表（見附錄A）。

8扁桃體活體采樣

8.1采樣準(zhǔn)備

保定器、豬活體扁桃體采樣器、牙簽、一次性離心管、自封袋、消毒液盆、3%的燒堿或1%聚維酮碘、

保溫箱或保溫瓶、采樣單、記號(hào)筆、簽字筆。

8.2保定消毒

站立保定，將采樣槍放入3%的燒堿或說明濃度的聚維酮碘消毒液中浸泡消毒，取出后放入無菌清水

中洗算；采樣結(jié)束后再將采樣器放入用3%的燒堿或說明濃度的聚維酮碘消毒液中浸泡消毒。

8.3采樣

8.3.1安裝照明燈、校準(zhǔn)和固定槍頭；

8.3.2用開口器打開口腔，可以看到突起的扁桃體，把采樣鉤放在扁桃體上；

8.3.3快速扣動(dòng)扳機(jī)采取扁桃體，樣品應(yīng)如綠豆般大??；

8.3.4用滅菌牙簽將樣品挑至1.5mL滅菌離心管中，密閉離心管；

8.3.5對(duì)所采樣品進(jìn)行編號(hào)并放入保溫箱或保溫瓶；

8.3.6填寫樣品采集登記表（見附錄A）。

9鼻腔拭子采樣

9.1采樣準(zhǔn)備

3

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保定器、棉拭子、一次性離心管、自封袋、30%甘油磷酸鹽緩沖液（見附錄B）、保溫箱或保溫瓶、

采樣單、記號(hào)筆、簽字筆和垃圾袋等。

9.2采樣

9.2.1采樣人蹲于豬的左側(cè)，左手抓緊豬的上下鄂，使豬嘴緊閉，右臂肘部與右腿將豬頸部夾住，對(duì)

其進(jìn)行固定；

9.2.2右手持棉拭子，將棉拭子與豬鼻中隔成45度角輕輕插入，遇到鼻中隔后，稍作拐彎，繞過骨狀

瓣膜，與鼻中隔平行方向插入約2cm；

9.2.3輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)棉簽，刺激豬的噴嚏反射，當(dāng)打2～3個(gè)噴嚏后，輕輕拔出棉簽；

9.2.4將棉簽放入含有甘油磷酸鹽緩沖液的1.5mL塑料離心管中，斷多余部的棉棒，密閉離心管；

9.2.5對(duì)所采樣品進(jìn)行編號(hào)并放入保溫箱或保溫瓶；

9.2.6填寫樣品采集登記表（見附錄A）。

10水泡液和水泡皮采樣

10.1采樣準(zhǔn)備

酒精棉球、干棉球、生理鹽水、鑷子、手術(shù)剪刀、注射器、1.5mL離心管、抗生素、自封袋、簽字

筆、記號(hào)筆、保溫箱或保溫瓶和垃圾袋等。

10.2消毒

用75%酒精消毒水泡皮表面，盡量去除污物，再用滅菌生理鹽水擦去酒精。

10.3采樣

10.3.1用無菌注射器穿刺水泡吸取水泡液。置于滅菌離心管中，加入抗生素；

10.3.2采取水泡液后，用無菌手術(shù)剪將水泡皮剪下，放入PH7.4PBS配制的30%甘油緩沖液、加入抗

生素、如果水泡已經(jīng)破潰，用生理鹽水洗掉水泡皮上的污物，然后將水泡皮放入上述甘油緩沖液中，加

入抗生素；

10.3.3對(duì)所采樣品進(jìn)行編號(hào)并放入保溫箱或保溫瓶；

10.3.4填寫樣品采集登記表（見附錄A）。

11臟器及腦組織樣品采集

11.1采樣準(zhǔn)備

手術(shù)刀、手術(shù)剪、骨刀、骨鋸、骨錘、酒精棉球、酒精燈、火柴、鑷子、自封袋、樣品采集登記表、

簽字筆、記號(hào)筆、保溫箱或保溫瓶、消毒液桶和垃圾袋等。

11.2消毒

每剪開一個(gè)部位或采集完一種組織均應(yīng)用酒精棉球擦拭、火焰消毒剪刀兩面和鑷子/手術(shù)刀等解剖

器具。

11.3采樣

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11.3.1仰臥動(dòng)物尸體，從腹股溝、腋窩處切開皮膚、肌肉，使關(guān)節(jié)脫臼，四肢平攤于臺(tái)面，固定好，

采集腹股溝淋巴結(jié)；

11.3.2以胸骨前緣切開皮膚至骨盆處剝開皮膚切開胸腔摘除網(wǎng)膜和脾臟，左手拇指和食指固定腎臟右

手用刀沿著腎臟凸面輕輕切開包膜并剝離，采集腎臟；

11.3.3切開兩側(cè)肋軟骨，依次采集心臟，肝臟、肺臟；

11.3.4沿下頜正切開至胸骨柄，采集頜下淋巴結(jié)，舌根扁桃體、腭扁桃體；

11.3.5必要時(shí)打開腦蓋，無菌采集大腦小腦及延髓；

11.3.6每種樣品要求無菌采集大小為1cm～2cm見方的切塊，采集后立即放入無菌的封口袋中；

11.3.7對(duì)所采樣品進(jìn)行編號(hào)并保存至冰盒；

11.3.8填寫樣品采集登記表（見附錄A）。

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AA

附錄A

（規(guī)范性附錄）

樣品采集登記表

樣品采集登記表見表A.1。

表A.1樣品采集登記表

被采樣單位名稱

采樣地點(diǎn)

聯(lián)系人聯(lián)系電話郵編

動(dòng)物類別樣品類型采樣日期

動(dòng)物種類日齡存欄量樣品數(shù)量樣品編號(hào)

動(dòng)物臨床情況

末次免疫

免疫末次

疫苗類型疫苗廠家疫苗批號(hào)免疫次數(shù)至采樣

病種免疫劑量

的間隔天數(shù)

動(dòng)物免

疫情況

檢測目的

被采樣單位蓋章或簽名采樣單位蓋章采樣人簽名

年月日年月日

備注

注1：樣品類型指全血、扁桃體、鼻腔拭子、淋巴結(jié)等。

注2：動(dòng)物種類指種公豬、種母豬、后備母豬等。

注3：此單一式三份，第一聯(lián)由采樣單位保存、第二聯(lián)隨樣品、第三聯(lián)由被采樣單位留存。

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附錄B

（規(guī)范性附錄）

樣品保存液的配置

B.1PH7.2、0.01mol/LPBS的配制

（1）配制25×PBS：稱量2.74g磷酸氫二鈉和0.79g磷酸二氫鈉加蒸餾水至100mL。

（2）配制1×PBS：稱量40mL25×PBS，加入8.5g氯化鈉，加蒸餾水至1000mL。

（3）用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)PH至7.2。

（4）滅菌或過濾。

（5）PBS一經(jīng)使用，于4℃保存不超過3周。

B.130%甘油磷酸鹽緩沖液（PH7.6）

甘油30mL

氯化鈉（NaCl）4.20g

磷酸二氫鉀KH2PO41.00g

磷酸氫二鉀K2HPO43.10g

0.02%酚紅1.5mL

蒸餾水加至100mL

調(diào)配方法：加熱融化，校正PH為7.6，，以100kPa，15min滅菌。保存于冰箱中備用。

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DB41/T1702—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河南省畜牧局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：駐馬店市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、西平縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、遂平縣動(dòng)物疫病預(yù)防

控制中心、泌陽縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、正陽縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、確山縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：朱鳳霞、楊晴、付顯東、陳奎、薛雙、董宏偉、張煜、陶順啟、許瑞、張三軍、

劉明莉、羅志忠、王五臣、李春芳、韓宇、宋亞舉、李清蓮。

I

DB41/T1702—2018

豬血樣與組織樣品采集技能操作規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬前腔靜脈采血、耳靜脈采血、扁桃體活體采樣、鼻腔拭子采樣、水泡液和水泡皮采

樣、臟器及腦組織樣品采集技術(shù)與操作規(guī)范。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬病診斷、流行病學(xué)調(diào)查、疫情監(jiān)測、疫苗免疫效果評(píng)估、生豬調(diào)運(yùn)、評(píng)估認(rèn)證等豬

血樣和組織樣品的采集。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

該標(biāo)準(zhǔn)界定的下列術(shù)語和定義適用于本文件。為了便于使用，以下重復(fù)列出了NY/T541中的某些

術(shù)語和定義。

3.1

樣品

取自動(dòng)物或環(huán)境，擬通過檢驗(yàn)反映動(dòng)物個(gè)體、群體或環(huán)境有關(guān)狀況的材料或物品。

3.2

采樣

按照規(guī)定的程序和要求，從動(dòng)物或環(huán)境取得一定量的樣本，并經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚?，留作待檢樣品的過

程。

4個(gè)人防護(hù)

采樣人員應(yīng)做好個(gè)人安全防護(hù)，穿戴口罩、工作帽、防護(hù)服、防護(hù)靴、雙層手套，必要時(shí)戴防護(hù)眼

鏡、面罩。

5采樣原則

5.1先排除后采樣

凡發(fā)現(xiàn)急性死亡的動(dòng)物，懷疑患有炭疽時(shí)，不得解剖。應(yīng)先采