細胞培養(yǎng)優(yōu)點與基本要求匯集

第第頁細胞培養(yǎng)優(yōu)點與基本要求聚集細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細胞處理好，依據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：1.研究的對象是活細胞在試驗過程中，依據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包含活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。2.研究條件可以人為掌控pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以依據(jù)實際需要進行人為的掌控，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行試驗察看，這些因素同樣可以處于嚴格掌控之下。3.研究的樣本可以實現(xiàn)比較均一性通過細胞培養(yǎng)肯定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以實現(xiàn)均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞實現(xiàn)純化。4.研究內(nèi)容便于察看、檢測和記錄采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。5.研究的范圍比較廣泛應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。6.研究的費用相對較經(jīng)濟可供應大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相像的試驗對象。細胞培養(yǎng)基的基本要求：體外培養(yǎng)的細胞直接生活在培養(yǎng)基中，因此培養(yǎng)基應能滿足細胞對營養(yǎng)成分、促生長因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求。一、營養(yǎng)成分維持細胞生長的營養(yǎng)條件一般包含以下幾個方面：1、氨基酸：是細胞合成蛋白質(zhì)的原材料。全部細胞都需要12種必需氨基酸：纈氨酸、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精氨酸、胱氨酸。另外還需要谷氨酰胺，它在細胞代謝過程中有緊要作用，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源，同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸。2、單糖：培養(yǎng)中的細胞可以進行有氧與無氧酵解，六碳糖是重要能源。另外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原材料。細胞對葡萄糖的汲取本領最高，半乳糖低。體外培養(yǎng)動物細胞時，將近全部的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。3、維生素：重要扮演輔酶、輔基的角色。生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培養(yǎng)基常有的成分。4、無機離子與微量元素：細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素，還需要微量元素，如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。二、促生長因子及激素已證明：各種激素、生長因子對于維持細胞的功能、保持細胞的狀態(tài)（分化或未分化）具有十分緊要的作用。有些激素對很多細胞生長有促生長作用，如胰島素，它能促進細胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素對某一類細胞有明顯促進作用，如氫化可的松可促進表皮細胞的生長，泌乳素有促進乳腺上皮細胞生長作用等。三、滲透壓細胞必需生活在等滲環(huán)境中，大多數(shù)培養(yǎng)細胞對滲透壓有肯定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg,可視為培養(yǎng)人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數(shù)哺乳動物細胞，滲透壓在260—320mOsm/kg的范圍都適合。四、pH氣體也是細胞生存的必需條件之一，所需氣體豐要是氧和二氧化碳。氧參加三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生能量供應細胞生長、增殖和合成各種成分。一些細胞在缺氧情況下，借糖酵解也可取得能量，但多數(shù)細胞缺氧不能生存。在開放培養(yǎng)時，一般置細胞于95％空氣加5％二氧化碳的混合氣體環(huán)境中培養(yǎng)。二氧化碳既是細胞代謝產(chǎn)物，也是細胞所需成分，它重要與維持培養(yǎng)基的pH有直接關系。動物細胞大多數(shù)需要細小的堿性條件，pH值約在7．2～7．4℃在細胞生長過程中，隨細胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強，二氧化碳不絕被釋放，培養(yǎng)液變酸，PH值發(fā)生變動。由于NaHCO3容易分解為二氧化碳，很不穩(wěn)定，致使緩沖系統(tǒng)難以精準明確地掌控。故這一緩沖系統(tǒng)適合密閉培養(yǎng)。HEPES結合碳酸氫鈉使用，可供應更有效的緩沖體系，重要是防止pH值快速更改，但最大缺點是在開放培養(yǎng)或察看時難以維持正常的pH值。造成pH波動重要是代謝產(chǎn)生的CO2，在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結合產(chǎn)生碳酸，培養(yǎng)基pH很快下降。為解決這一問題，合成培養(yǎng)基中使用了NaHCO3—CO2緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng)，使細胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調(diào)整溫箱中CO2濃度（5％），與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)。五、無毒、無污染體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有防范本領，因此培養(yǎng)基應實現(xiàn)無化學物質(zhì)污染、無微生物污染（如細菌、真菌、支原體、病毒等）、無其他對細胞產(chǎn)生損傷