外周血細(xì)胞檢驗(yàn)-紅細(xì)胞檢驗(yàn)（臨床檢驗(yàn)課件）

網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)2網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte，Ret)是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟紅細(xì)胞間的過渡細(xì)胞胞質(zhì)中殘存嗜堿性物質(zhì)核糖核酸(RNA)，經(jīng)煌焦油藍(lán)等活體染色后，嗜堿性物質(zhì)凝聚成藍(lán)黑色顆粒，連綴成線，線連接成網(wǎng)。屬于尚未完全成熟的紅細(xì)胞(當(dāng)嗜堿性物質(zhì)消耗殆盡后才被視為成熟紅細(xì)胞)，一般為8～9.5μm。34任務(wù)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)十PARTTEN目錄檢測原理1

參考范圍3

質(zhì)量保證2

4臨床意義

檢測原理

1.普通光學(xué)顯微鏡法

活體染色（新亞甲藍(lán)或煌焦油藍(lán))的堿性著色基團(tuán)網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA的磷酸基(帶負(fù)電荷)RNA膠體間的負(fù)電荷減少而發(fā)生凝縮，藍(lán)色的點(diǎn)狀、線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)

，顯微鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中所占的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，以百分比或分?jǐn)?shù)數(shù)表示。

流式細(xì)胞儀法2．儀器法網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀血液分析儀法。熒光染料與網(wǎng)織紅細(xì)胞中RNA結(jié)合，發(fā)出特定顏色的熒光進(jìn)行RNA定量精確計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞占成熟紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)(Ret％)。將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成高、中、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞比率(HFR、MFR、LFR)并計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞其他參數(shù)。

血液分析儀法

提供與網(wǎng)織紅細(xì)胞相關(guān)的多個(gè)參數(shù)，網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比、網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積、網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度、網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白濃度、網(wǎng)織紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度、

LFR、MFR、HFR、網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)。11質(zhì)量保證以手工計(jì)數(shù)法為重點(diǎn)

1．染料選擇2．正確辨認(rèn)網(wǎng)織紅細(xì)胞外周血中網(wǎng)織紅細(xì)胞主要為Ⅳ型，凡含有2個(gè)以上網(wǎng)織顆粒的紅細(xì)胞均應(yīng)計(jì)為網(wǎng)織紅細(xì)胞。

3．網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法

(1)Miller窺盤：(2)顯微成像系統(tǒng)：計(jì)算機(jī)和細(xì)胞形態(tài)分析軟件，①HFR：粗顆粒堆積成網(wǎng)狀。②MFR：粗顆粒在10個(gè)以上，或細(xì)小顆粒超過15個(gè)。③LFR：細(xì)胞內(nèi)含15個(gè)以下細(xì)小顆粒

參考范圍網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)成人和兒童:0.005～0.025新生兒:0.02～0.06網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)數(shù)成人和兒童:(24～84)X109／L參考值臨床意義41．評(píng)價(jià)骨髓增生能力，判斷貧血類型。

(1)網(wǎng)織紅細(xì)胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，各種增生性貧血

(2)網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：常見于再生障礙性貧血

(3)鑒別貧血：2．評(píng)價(jià)療效(1)觀察貧血療效：貧血隨訪缺鐵貧或巨幼貧有效治療后，2～3d后Ret開始上升，7～10d達(dá)到最高峰(約10％)，2周后漸降至正常。

(2)骨髓移植后監(jiān)測骨髓造血恢復(fù)：骨髓移植后第21天，如Ret大于15X109／L，常表示無移植并發(fā)癥；若骨髓開始恢復(fù)造血功能，首先HFR和MFR上升，其次為網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值上升。3．放療和化療的監(jiān)測

指導(dǎo)臨床適時(shí)調(diào)整治療方案，避免造成嚴(yán)重的骨髓抑制。機(jī)體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，而后網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)值降低；停止放、化療，骨髓功能恢復(fù)后，這些指標(biāo)依次上升。

網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)試劑操作步驟目

錄CONTENTS計(jì)算參考值注意事項(xiàng)思考題實(shí)驗(yàn)原理

用等滲稀釋液將血液按一定倍數(shù)稀釋，充人計(jì)數(shù)池后顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)，換算求出每升血液中紅細(xì)胞的數(shù)量試驗(yàn)器材、試劑顯微鏡、改良Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等試驗(yàn)器材試劑紅細(xì)胞稀釋液改良牛鮑氏計(jì)數(shù)板操作步驟01取中號(hào)試管1支，加紅細(xì)胞稀釋液2.0ml。02用清潔干燥微量吸管取末梢血10μl，擦去管外余血后加至紅細(xì)胞稀釋液底部，再輕吸上層清洗吸管2-3次立即混勻。03混勻后，用干凈微量吸管將紅細(xì)胞懸液充人計(jì)數(shù)池，不得有空泡或外溢，充池后靜置2-3min后計(jì)數(shù)。04高倍鏡下依次計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角和正中共5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞。對(duì)壓線細(xì)胞按"數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右"的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)原則計(jì)算紅細(xì)胞數(shù)/L=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×5×10×200×106=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×1010=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)÷100×1012式中：×55個(gè)中方格換算成1個(gè)大方格；×101個(gè)大方格容積為0.1μl，換算成1.0μl；×200血液的實(shí)際稀釋倍數(shù)應(yīng)為201倍，按200是便于計(jì)算；×106由1μl換算成1L。男：（4.09～5.74）×1012/L女：（3.68～5.13）×1012/L新生兒：（5.2～6.4）×1012/L參考區(qū)間注意事項(xiàng)1采血時(shí)不能擠壓過甚，因此針刺深度必須適當(dāng)。。2稀釋液要過濾，試管、計(jì)數(shù)板均須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為紅細(xì)胞3參考范圍數(shù)值內(nèi)，兩次紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相差不得超過5%4不允許以血紅蛋白濃度來折算紅細(xì)胞數(shù)5充池要均勻，不能有氣泡混入、溢出或不滿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法手工顯微鏡法1

血液分析儀法2

計(jì)數(shù)板01質(zhì)量控制02方法學(xué)評(píng)價(jià)03紅細(xì)胞計(jì)數(shù)測定每升血液中所含紅細(xì)胞數(shù)目，用？.？X1012/L表示參考值04臨床意義0301計(jì)數(shù)板PartOne40改良牛鮑計(jì)數(shù)板41421準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板2加稀釋液2ml3加血：10μl混勻4充池5計(jì)數(shù)操作6計(jì)算：紅細(xì)胞數(shù)=N/5*25*10*200*106/L1手工法誤差來源：標(biāo)本、操作、器材、固有誤差2儀器法嚴(yán)格按照操作規(guī)程、定期進(jìn)行室內(nèi)和室間質(zhì)控。質(zhì)量控制①血液分析儀的校正②白細(xì)胞減少時(shí)的對(duì)照核實(shí)。③血小板計(jì)數(shù)受小紅細(xì)胞干擾時(shí)的校正方法精確，且操作簡便、快速，已廣泛應(yīng)用方法學(xué)評(píng)價(jià)成年男性（4～5.5）×1012/L女性（3.5～5.0）×1012/L新生兒（6.0～7.0）×1012/L參考值(1)年齡與性別的差異(2)精神因素(3)劇烈體力運(yùn)動(dòng)和勞動(dòng)(4)氣壓降低(5)妊娠中、后期生理性變化(1)紅細(xì)胞和血紅蛋白量減少1）紅細(xì)胞生成障礙2）造血原料缺乏3）利用障礙紅細(xì)胞4）破壞過多和失血(2)紅細(xì)胞增多1)原發(fā)性紅細(xì)胞增多2)繼發(fā)性紅細(xì)胞增多3)相對(duì)性紅細(xì)胞增多病理性變化①高于6.8×l012/L，應(yīng)采取相應(yīng)的治療措施。②低于3.5×1012/L為診斷貧血的界限，應(yīng)繼續(xù)尋找原因。③低于1.5×l012／L應(yīng)考慮輸血醫(yī)學(xué)決定水平臨床意義

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)試劑操作步驟目

錄CONTENTS計(jì)算參考值注意事項(xiàng)思考題實(shí)驗(yàn)原理

用等滲稀釋液將血液按一定倍數(shù)稀釋，充人計(jì)數(shù)池后顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)，換算求出每升血液中紅細(xì)胞的數(shù)量試驗(yàn)器材、試劑顯微鏡、改良Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等試驗(yàn)器材試劑紅細(xì)胞稀釋液改良牛鮑氏計(jì)數(shù)板操作步驟01取中號(hào)試管1支，加紅細(xì)胞稀釋液2.0ml。02用清潔干燥微量吸管取末梢血10μl，擦去管外余血后加至紅細(xì)胞稀釋液底部，再輕吸上層清洗吸管2-3次立即混勻。03混勻后，用干凈微量吸管將紅細(xì)胞懸液充人計(jì)數(shù)池。04高倍鏡下依次計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角和正中共5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞。計(jì)數(shù)原則計(jì)算紅細(xì)胞數(shù)/L=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×5×10×200×106=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×1010=5個(gè)中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)÷100×1012式中：×55個(gè)中方格換算成1個(gè)大方格；×101個(gè)大方格容積為0.1μl，換算成1.0μl；×200血液的實(shí)際稀釋倍數(shù)應(yīng)為201倍，按200是便于計(jì)算；×106由1μl換算成1L。男：（4.09～5.74）×1012/L女：（3.68～5.13）×1012/L新生兒：（5.2～6.4）×1012/L參考區(qū)間注意事項(xiàng)1采血時(shí)不能擠壓過甚。2試管、計(jì)數(shù)板均須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為紅細(xì)胞。3參考范圍數(shù)值內(nèi)。4不允許以血紅蛋白濃度來折算紅細(xì)胞數(shù)5充池要均勻，不能有氣泡混入、溢出或不滿紅細(xì)胞沉降率測定紅細(xì)胞沉降率(erythrocytesedimentationrate，ESR)簡稱血沉，指在規(guī)定條件下，離體抗凝全血中的紅細(xì)胞自然下沉的速率。血沉過程一般分為3期：①緡錢狀紅細(xì)胞形成期，一般要經(jīng)過數(shù)分鐘至10min。②快速沉降期，形成緡錢狀紅細(xì)胞以等速下降，約40min。

③細(xì)胞堆積期，又稱緩慢沉積期或擠緊期，此時(shí)紅細(xì)胞堆積在試管底部。目錄檢測原理1

質(zhì)量保證3

方法學(xué)評(píng)價(jià)2

4臨床意義

檢測原理

1．魏氏法(Westergren法)

將離體抗凝血液置于特制刻度測定管內(nèi)，垂直立于室溫中，記錄1h時(shí)紅細(xì)胞層下沉的距離(上層血漿的高度

)，用毫米(mm)數(shù)值報(bào)告。

2．血沉儀法

血液經(jīng)抗凝靜置后，紅細(xì)胞下降，紅細(xì)胞與血漿分離，其界面隨時(shí)間而下移，血沉儀用發(fā)光二極管和光電管檢測此界面的透光度改變，得到血沉值并顯示紅細(xì)胞沉降高度H與對(duì)應(yīng)時(shí)間t相關(guān)的H—t曲線。66方法學(xué)評(píng)價(jià)

1．手工法

魏氏法：為傳統(tǒng)方法，為國內(nèi)規(guī)范方法

.EDTA或枸櫞酸鈉抗凝血液標(biāo)本充分混合后，吸入魏氏血沉管200mm刻度處，將血沉管垂直室溫放置至少60min，應(yīng)避免振動(dòng)、風(fēng)吹、陽光直射，然后讀取柱中紅細(xì)胞沉淀上透明血漿層約lmm處結(jié)果。ICSH方法:參考方法,用于驗(yàn)證其他方法的可靠性。2．儀器法血沉儀可動(dòng)態(tài)記錄整個(gè)血沉過程的變化，描繪出紅細(xì)胞沉降的曲線，

ESR測定在30min或lmin內(nèi)得到檢測結(jié)果，大大縮短了臨床等候報(bào)告的時(shí)間。

72質(zhì)量保證

紅細(xì)胞數(shù)量、表面積、厚度、直徑、血紅蛋白量和血漿中各種蛋白比例。影響紅細(xì)胞緡錢狀形成的主要因素有：

1.血漿中各種蛋白的比例，與總蛋白濃度無關(guān)。清蛋白帶負(fù)電荷，球蛋白與纖維蛋白原帶正電荷，紅細(xì)胞因唾液酸而帶負(fù)電荷，彼此排斥。促緡錢狀聚集的物質(zhì)：纖維蛋白原＞γ球蛋白＞αβ球蛋白、膽固醇、甘油三酯等；清蛋白及卵磷脂則抑制紅細(xì)胞緡錢狀的形成。影響因素

2．紅細(xì)胞數(shù)量和形狀

①紅細(xì)胞數(shù)量：一般情況下，紅細(xì)胞沉降率和血漿逆阻力保持一定的平衡狀態(tài)，如紅細(xì)胞數(shù)量減少，其總面積減少，所承受的血漿逆阻力也減少，因此血沉加快；但如紅細(xì)胞數(shù)量太少，則影響紅細(xì)胞緡錢狀形成，血沉也減慢；反之，紅細(xì)胞增多時(shí)，血沉減慢。②紅細(xì)胞直徑和形狀：直徑愈大血沉愈快，球形紅細(xì)胞、鐮形紅細(xì)胞不易聚集，因而血沉減慢。影響因素3．血沉管與血沉架

血沉管與血沉架規(guī)格必須符合標(biāo)準(zhǔn)。血沉管置血沉架上應(yīng)完全垂直，傾斜時(shí)，會(huì)加速沉降。4.血標(biāo)本

避免脂肪血；抗凝劑濃度增加使血沉減慢，每周配制1次，置冰箱血與抗凝劑比例要準(zhǔn)確。抽血應(yīng)在30s內(nèi)完成，不得混入消毒劑，避免形成凝塊。影響因素5．溫度

18～25~C的室溫下測定。室溫過高時(shí)血沉加快，可以按溫度系數(shù)校正。6．其他注射器、試管、血沉管要干燥潔凈，以避免溶血。7．及時(shí)測定采血后應(yīng)盡快進(jìn)行測定，室溫下，標(biāo)本置放時(shí)間不應(yīng)超過4h，置4℃冰箱時(shí)枸櫞酸鈉抗凝血可6h,EDTA抗凝血可24h。影響因素參考范圍4

<50歲男性<15mm／h女性<20mm／h>50歲男性<20mm／h女性<30mm／h參考值>85歲男性<30mm／h女性<42mm／h兒童<10mm／h臨床意義501血沉增快PartOne生理性女性高于男性。婦女月經(jīng)期由于子宮內(nèi)膜破損及出血，血沉略有增快；妊娠3個(gè)月以上可因生理性貧血及血漿纖維蛋白原增加使血沉增快；老年人，特別是70歲以上的高齡者，多因纖維蛋白原增高而血沉增快。1各種炎癥感染是血沉加快最常見原因。急性細(xì)菌性炎癥時(shí)，由于血中急性時(shí)相反應(yīng)蛋白增多，包括α1胰蛋白酶、α2巨球蛋白、C反應(yīng)蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原等。在炎癥發(fā)生后2～3d可出現(xiàn)血沉增快；慢性炎癥，如結(jié)核病、結(jié)締組織炎癥、風(fēng)濕熱等，于活動(dòng)期常見血沉增快，病情好轉(zhuǎn)時(shí)血沉減慢，非活動(dòng)期血沉可正常。2組織損傷及壞死范圍較大的組織損傷或手術(shù)創(chuàng)傷常致血沉增快，若無合并癥，一般2～3周內(nèi)恢復(fù)正常；心肌梗死時(shí)，于發(fā)病后3～4d可見血沉增快(急性時(shí)相反應(yīng)蛋白)，并持續(xù)1～3周，而心絞痛時(shí)血沉多正常。3惡性腫瘤

血沉可作為惡性腫瘤的普查篩選的輔助指標(biāo)，通常迅速增長的惡性腫瘤血沉均增快，良性腫瘤血沉多正常。惡性腫瘤手術(shù)切除后或治療較徹底，血沉可趨于正常，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移時(shí)又可增快。4高球蛋白血癥多種因素導(dǎo)致的免疫球蛋白增高可見血沉增快，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、亞急性感染性心內(nèi)膜炎、肝硬化、慢性腎炎等。高粘滯性綜合征時(shí)，血沉可不增快甚至減慢。5貧血及高膽固醇血癥貧血患者血紅蛋白低于90g／L時(shí)，血沉可輕度增快，并隨貧血加增快。高膽固醇血癥：如動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、腎病綜合征、粘液性水腫、原發(fā)性家族性高膽固醇血癥等，血沉常常增快。病理性02血沉減慢PartTwo

一般臨床意義較小，主要見于真紅、低纖維蛋白原血癥、充血性心力衰竭、紅細(xì)胞形態(tài)異常(如異形紅細(xì)胞、球形紅細(xì)胞、鐮形紅細(xì)胞)。

血沉減慢

紅細(xì)胞沉降率實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)?zāi)康臉?biāo)本采集實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)試劑操作步驟目

錄CONTENTS注意事項(xiàng)思考題實(shí)驗(yàn)?zāi)康募t細(xì)胞沉降率是指紅細(xì)胞于一定的條件下沉降的速度，簡稱血沉（ESR）。ESR的檢查屬非特異性試驗(yàn)，在許多病理情況下，ESR均可增快，將ESR結(jié)果結(jié)合臨床資料及其他檢查結(jié)果進(jìn)行分析時(shí)，對(duì)判斷機(jī)體有無炎癥、病變有無活動(dòng)性以及治療效果的好壞有重要的參考價(jià)值，故ESR檢查臨床上仍在廣泛應(yīng)用實(shí)驗(yàn)原理在血液中，由于紅細(xì)胞膜表面的唾