血細(xì)胞分析儀檢驗(yàn)（臨床檢驗(yàn)課件）

全自動血細(xì)胞分析儀應(yīng)用目錄檢測原理1

臨床應(yīng)用2

參數(shù)2

檢測原理概述血細(xì)胞分析儀(Bloodcellanalyzer,BCA)是指對一定體積全血內(nèi)血細(xì)胞異質(zhì)性進(jìn)行自動分析的臨床檢驗(yàn)常規(guī)儀器。它又稱血細(xì)胞自動計(jì)數(shù)儀(automatedbloodcellcounter,ABCC)、血液自動分析儀(automatedhematologyanalyzer,AHA)。血細(xì)胞分析儀的發(fā)展歷史手工法血細(xì)胞計(jì)數(shù):速度慢、精密度不高WallanceH.Coulter談到血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的發(fā)展史，在這個領(lǐng)域首開先河的人是1912年出生在美國阿肯色州一個小城的人WallanceH.Coulter。這種儀器看起來非常原始和簡單，好象一個示波器另加一些管道、電極和瓶瓶罐罐（圖）。它的計(jì)數(shù)原理是根據(jù)血細(xì)胞的不良導(dǎo)電性和產(chǎn)生電阻抗原理來計(jì)數(shù)血液中的細(xì)胞，也就是電阻式血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理，這種原理現(xiàn)在已經(jīng)成為血細(xì)胞計(jì)數(shù)和分析中最為經(jīng)典的原理。

最初的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是一種單參數(shù)測定儀器，只能對血液中的紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且需人工切換。此后，歐洲、日本也開始了血液細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的開發(fā)和研制,我國在60年代中期也開始了這種儀器的開發(fā)和生產(chǎn)。以前因?yàn)橹荒苓M(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，因此我們一般將這類儀器叫做血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（BloodCellCounter）,由于技術(shù)的進(jìn)步目前這類儀器可以提供除了血細(xì)胞計(jì)數(shù)以外的更多參數(shù)的聯(lián)合測定和分析，因此我們一般將這類儀器統(tǒng)稱為血液細(xì)胞分析儀(HematologyAnalyzer)。經(jīng)過多年的發(fā)展，特別是近年來電子計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀無論在技術(shù)上、形式上、功能上、參數(shù)上、用戶界面上等許多方面都有很大的改觀和進(jìn)步。

01庫爾特原理PartOne庫爾特原理是利用電阻抗法測量細(xì)胞的數(shù)量和體積。其內(nèi)容為：血細(xì)胞是電的不良導(dǎo)體，當(dāng)一個細(xì)胞通過計(jì)數(shù)小孔時，會導(dǎo)致小孔兩端電阻的變化，將其轉(zhuǎn)化成脈沖，感應(yīng)器通過檢測脈沖的數(shù)量及大小，從而計(jì)算出通過小孔的細(xì)胞數(shù)量及體積。血細(xì)胞分析儀基本流程02流式光散射檢測原理PartTwo前鞘流后鞘流檢測窗03白細(xì)胞五分類檢測原理PartThree1）VCS原理體積(volume，V)電阻抗原理測定細(xì)胞體積和數(shù)量電導(dǎo)性(conductivity，C)高頻電磁探針，測量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)核漿比例、質(zhì)粒的大小和密度，從而區(qū)別體積完全相同而性質(zhì)不同的兩個細(xì)胞光散射(scatter，S)細(xì)胞內(nèi)粗顆粒的光散射強(qiáng)度要比細(xì)顆粒更強(qiáng)，通過測定單個細(xì)胞的散射光強(qiáng)度可以把粒細(xì)胞區(qū)分開VCS原理光散射電導(dǎo)性電阻抗每個細(xì)胞接受三維分析定義到三維散點(diǎn)圖的相應(yīng)位置

VCS法血細(xì)胞分類流程圖

VCS可顯示3種細(xì)胞散點(diǎn)圖DF1（體積值和散射光值）DF2（體積值和電導(dǎo)值）DF3（體積值和電導(dǎo)值,但除去了嗜酸粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞部分，只顯示嗜堿粒細(xì)胞群）嗜酸性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)-嗜酸性粒細(xì)胞溶血素嗜堿性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)-嗜堿性粒細(xì)胞溶血素5種白細(xì)胞分類檢測系統(tǒng)-電阻抗(DC)和射頻(RF)聯(lián)合檢測的原理(L\M\N)幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng)-幼稚細(xì)胞溶血素

IMI（immaturemyeloidinformation）未成熟細(xì)胞信息2）電阻抗、射頻與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合SE-9000血液分析儀

—射頻與直流電聯(lián)合檢測技術(shù)RF:射頻電流DC:直流電細(xì)胞大小的信息細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息電阻抗與射頻法白細(xì)胞分類檢測散點(diǎn)圖

幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng)檢測原理

3）

光散射與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測技術(shù)

這類儀器是應(yīng)用激光散射與細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)對白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。（1）激光與過氧化物酶檢測通道：不同白細(xì)胞的過氧化物酶活性不同，從強(qiáng)到弱依次為：嗜酸粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞，而淋巴細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞則無。因此，細(xì)胞經(jīng)過氧化物酶染色后，胞質(zhì)內(nèi)即出現(xiàn)細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)，以X軸為吸光率（酶反應(yīng)強(qiáng)度），Y軸為光散射（細(xì)胞大?。╋@示檢測結(jié)果，每個細(xì)胞產(chǎn)生的這2個信號可定位在細(xì)胞散點(diǎn)圖上。由于淋巴細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞均無過氧化物酶活性，儀器獲得白細(xì)胞4個亞群(EO、NEUT、MONO、LYM十BASO)。（1）過氧化物酶檢測通道酶反應(yīng)強(qiáng)度細(xì)胞體積大?。?）嗜堿粒細(xì)胞細(xì)胞檢測通道：該通道可進(jìn)一步區(qū)分淋巴細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞。嗜堿粒細(xì)胞利用“時間差”與紅細(xì)胞/血小板使用共同的檢測通道。當(dāng)血液進(jìn)入嗜堿粒細(xì)胞通道時（此時紅細(xì)胞、血小板已檢測完畢），血液與酸性表面活性劑反應(yīng)，紅細(xì)胞被溶解，除嗜堿粒細(xì)胞外，其他所有白細(xì)胞膜均被破壞，胞質(zhì)溢出，僅剩裸核；激光照射嗜堿粒細(xì)胞后，產(chǎn)生散射光的變化，形成二維細(xì)胞圖。完整的嗜堿粒細(xì)胞呈高狹角散射，定位于圖的上半部，裸核位于圖下半部。嗜堿粒細(xì)胞通道試劑反應(yīng)示意圖

4）多角度激光散射聯(lián)合檢測技術(shù)

基本原理是：基于細(xì)胞大小、折射率、核形、核漿比值、以及顆粒性質(zhì)等，均可影響不同角度下的散射光強(qiáng)度不同白細(xì)胞在以上幾個方面完全一致的幾率很小，從而對白細(xì)胞進(jìn)行分類0°：前角光散射（1°～3°），可粗略測定細(xì)胞大小。10°：狹角光散射（7°～11°），可測定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對特征。90°：垂直光散射（70°～110°），測定細(xì)胞核分葉情況。90°：消偏振光散射（70°～110°），區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞。

0°和90°垂直光散射單核（淋巴、單核、嗜堿性）多個核（嗜中性、嗜酸性）90°垂直光散射和90°消偏振光散射嗜酸性嗜中性0°和10°淋巴單核嗜堿性04紅細(xì)胞檢測原理PartRour05血紅蛋白檢測原理PartFive06血小板檢測原理PartSix與紅細(xì)胞在同一檢測通道07網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測原理PartSeven網(wǎng)織紅細(xì)胞中嗜堿性物質(zhì)RNA，在活體狀態(tài)下與特殊的熒光染料結(jié)合熒光強(qiáng)度與RNA含量成正比用流式細(xì)胞術(shù)檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞大小和

RNA含量及血紅蛋白的含量細(xì)胞與試劑反應(yīng)前后的變化反應(yīng)前反應(yīng)后熒光(RNA)強(qiáng)度ReticulocytesPLTRBC高熒光強(qiáng)度低熒光強(qiáng)度中熒光強(qiáng)度WBC前向散射光(細(xì)胞大小)血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度分類血細(xì)胞分析的基本參數(shù)

1.LYM%（小細(xì)胞%或淋巴細(xì)胞%）

2.LYM#（小細(xì)胞絕對數(shù)或淋巴細(xì)胞絕對數(shù)）

3.MID%（中等大小細(xì)胞%，包括嗜酸、嗜堿粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及幼稚細(xì)胞）

4.MID#（中等大小細(xì)胞絕對數(shù)）

5.GRAN%（大細(xì)胞%或中性粒細(xì)胞%）

6.GRAN#（大細(xì)胞絕對數(shù)或中性粒細(xì)胞絕對數(shù)）白細(xì)胞三分群1.NE%或NEUT%（中性粒細(xì)胞%）

2.NE#或NEUT#（中性粒細(xì)胞絕對數(shù)）

3.LY%或LYMPH%（淋巴細(xì)胞%）

4.LY#或LYMPH#（淋巴細(xì)胞絕對數(shù)）

5.MO%或MONO%（單核細(xì)胞%）

6.MO#或MONO#（單核細(xì)胞絕對數(shù)）

7.EO%（嗜酸性粒細(xì)胞%）

8.EO#（嗜酸性粒細(xì)胞絕對數(shù)）

9.BA%或BASO%（嗜堿性粒細(xì)胞%）

10.BA#或BASO#（嗜堿性粒細(xì)胞絕對數(shù)）

11.IG%（未成熟粒細(xì)胞數(shù)%）

12.IG#（未成熟粒細(xì)胞絕對數(shù)）白細(xì)胞五分類1.RBC（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)）2.Hb（血紅蛋白測定）3.HCT（血細(xì)胞比容）4.MCV（平均紅細(xì)胞體積）5.MCH（平均血紅蛋白含量）6.MCHC（血紅蛋白平均濃度）7.RDW（紅細(xì)胞體積分布寬度）8.RET%（網(wǎng)織紅細(xì)胞%）

9.RET#（網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對數(shù)）

10.LFR（低螢光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞）

11.MFR（中螢光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞）

12.HFR（高螢光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞）

13.RMI（網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)）紅細(xì)胞參數(shù)

1.PLT（血小板計(jì)數(shù)）

2.PCV（平均血小板體積）

3.PDW（血小板體積分布寬度）4.PCT（血小板比容）

血小板參數(shù)血細(xì)胞直方圖2005.3臨檢1.直方圖觀察的內(nèi)容：（1）峰的位置：反映主細(xì)胞群位置有無異常。（2）峰的高低：反映主細(xì)胞群數(shù)量的多少。（3）峰底的寬度：反映細(xì)胞群體積大小的

不均一性或離散程度大小。（4）有無異常峰出現(xiàn)：有多提示血液中有異常細(xì)胞群或干擾因素存在。（5）峰的起始處或結(jié)尾處有無異常：若有多提示有干擾因素。（6）波谷的位置高或低：多提示細(xì)胞比例有變化或有異常細(xì)胞群或有干擾因素存在。白細(xì)胞直方圖在35～450fL范圍內(nèi)將白細(xì)胞分為3群紅細(xì)胞直方圖在36-360fl范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞，正常紅細(xì)胞主要分布在50-200fl。血小板直方圖電阻抗法在2-30fl范圍內(nèi)分析PLT，但大多數(shù)在2-15fl范圍，正常血小板直方圖，呈現(xiàn)左偏正態(tài)分布。血細(xì)胞分析儀參數(shù)的臨床應(yīng)用4臨檢

（1）正常白細(xì)胞直方圖

三個細(xì)胞分布區(qū)：左側(cè)：高、陡的峰處于35-90fl，成熟淋巴細(xì)胞為主；最右側(cè)：低、寬的峰160-450fl，中性粒細(xì)胞為主；兩個峰之間：平坦區(qū)，從90-160fl，為單個核細(xì)胞區(qū)即中間細(xì)胞區(qū)，以單核細(xì)胞為主。2005.3臨檢（2）異常白細(xì)胞直方圖①中性粒細(xì)胞比率增高中性粒細(xì)胞峰明顯增大，淋巴細(xì)胞峰明顯減小。②淋巴細(xì)胞比例增高淋巴細(xì)胞峰明顯增大，中性粒細(xì)胞峰明顯減小。③嗜酸性粒細(xì)胞比例增高在150-250fl區(qū)域出現(xiàn)一個明顯峰，儀器報(bào)警。④單核細(xì)胞增高90-150fl出現(xiàn)一個明顯的細(xì)胞峰。2005.3臨檢⑤異常淋巴細(xì)胞增高90-150fl區(qū)域出現(xiàn)一個與淋巴細(xì)胞峰等大的細(xì)胞峰，儀器報(bào)警。⑥急性淋巴細(xì)胞性白血病單核細(xì)胞區(qū)出現(xiàn)一個高大的細(xì)胞峰，并與淋巴細(xì)胞峰融合，粒細(xì)胞峰變小右移。⑦慢性粒細(xì)胞性白血病在100-300fl區(qū)域出現(xiàn)一個高大的細(xì)胞峰。2005.3臨檢（3）白細(xì)胞直方圖變化的應(yīng)用價值白細(xì)胞直方圖記錄了0～450fl范圍內(nèi)的所有粒子出現(xiàn)的頻率，只能反映體積相近的某群細(xì)胞的大致變化情況，對臨床診斷無特異性。2005.3臨檢（1）正常紅細(xì)胞直方圖

正常紅細(xì)胞集中在50-150fl范圍，基本呈正態(tài)分布。右側(cè)不與X軸重合拖尾部分，分布在130-185fl之間的區(qū)域，稱“足趾部”多為一些白細(xì)胞、大紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、兩個或兩個以上粘合聚集的紅細(xì)胞所致。2005.3臨檢（2）異常紅細(xì)胞直方圖小細(xì)胞不均一性

波峰左移、峰底變寬，RDW增高。小細(xì)胞均一性

波峰左移、峰底變窄，RDW正常。大細(xì)胞不均一性

波峰右移、峰底變寬，RDW增高。大細(xì)胞均一性

波峰右移、峰底基本不變，RDW正常。2005.3臨檢（3）紅細(xì)胞直方圖的應(yīng)用價值正常情況-正態(tài)分布曲線。在某些病理情況下，紅細(xì)胞直方圖會有明顯的改變，這些改變是無法用數(shù)據(jù)來衡量的，因多數(shù)貧血患者的紅細(xì)胞體積，各有其獨(dú)特的變化，該變化可較直觀的反映到直方圖上，結(jié)合其他參數(shù)綜合分析，對貧血的診斷與鑒別診斷及療效觀察頗有價值。2005.3臨檢

紅細(xì)胞直方圖比白細(xì)胞直方圖的應(yīng)用價值大。要注意觀察圖形峰的位置、峰底的寬度、峰頂?shù)男螤罴坝袩o雙峰現(xiàn)象。紅細(xì)胞直方圖與MCV、RDW的關(guān)系見表2005.3臨檢MCVRDW直方圖貧血類型常見疾病或病因正常正常正常正細(xì)胞均一性部分再生障礙性貧血、急性出血正常增高波底變寬或有雙峰正細(xì)胞不均一性缺鐵性貧血、慢性失血早期等減低正常峰左移小細(xì)胞均一性輕型β-海洋性貧血

減低增高峰左移、雙峰、底變寬小細(xì)胞不均一性缺鐵性貧血、血紅蛋白S病、增高正常峰右移大細(xì)胞均一性部分再生障礙性貧血、葉酸或VitB12缺乏早期增高增高峰右移、雙峰、底變寬大細(xì)胞不均一性葉酸或VitB12缺乏性貧血

MCV、RDW分類法與直方圖、貧血的關(guān)系

2005.3臨檢

3.血小板直方圖儀器的計(jì)算機(jī)將血小板體積從2-30fl分為64個計(jì)數(shù)通道，依血小板體積大小不同，將其分別儲存于不同的計(jì)數(shù)通道內(nèi)，打印出相應(yīng)的血小板體積直方圖。（1）正常血小板直方圖

正常情況下血小板主要集中在2-20fl范圍內(nèi)，呈偏態(tài)分布。（2）異常血小板直方圖大血小板增多：曲線右移，在35fl處接近X軸，紅細(xì)胞直方圖及MCV正常。小紅細(xì)胞干擾：右側(cè)曲線抬高，不與X軸重合，呈拖尾狀，紅細(xì)胞直方圖峰明顯左移，MCV明顯變小。聚集血小板干擾：右側(cè)曲線抬高，不與X軸重合,紅細(xì)胞直方圖峰異常

其它干擾因素plt2005.3臨檢正常白細(xì)胞直方圖2005.3臨檢紅細(xì)胞體積分布寬度2005.3臨檢貧血時紅細(xì)胞體積分布直方圖變化2005.3臨檢血小板體積直方圖2005.3臨檢血小板分析與干擾因素2005.3臨檢缺鐵性貧血2005.3臨檢缺鐵性貧血2005.3臨檢巨幼細(xì)胞性貧血2005.3臨檢巨幼細(xì)胞性貧血2005.3臨檢微血管病性溶血性貧血2005.3臨檢海洋性貧血2005.3臨檢紅細(xì)胞直徑與體積比較2005.3臨檢骨髓增生異常綜合征2005.3臨檢骨髓增生異常綜合征2005.3臨檢傳染性淋巴細(xì)胞增多癥2005.3臨檢中性粒細(xì)胞增多癥2005.3臨檢嗜酸性粒細(xì)胞增多癥2005.3臨檢血小板無力癥2005.3臨檢冷球蛋白血癥2005.3臨檢慢性粒細(xì)胞白血病2005.3臨檢正常血片2005.3臨檢假性血小板減少全自動血細(xì)胞分析儀應(yīng)用實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)試劑和標(biāo)本操作步驟目

錄CONTENTS實(shí)驗(yàn)原理BF6800采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞分析與細(xì)胞化學(xué)染色法、電阻抗法進(jìn)行細(xì)胞分類、計(jì)數(shù)；采用環(huán)保無氰化物進(jìn)行比色測HGB前鞘流后鞘流檢測窗光散射電導(dǎo)性電阻抗每個細(xì)胞接受三維分析定義到三維散點(diǎn)圖的相應(yīng)位置

檢測