血細胞分析儀檢驗（臨床檢驗課件）

全自動血細胞分析儀應用目錄檢測原理1

臨床應用2

參數(shù)2

檢測原理概述血細胞分析儀(Bloodcellanalyzer,BCA)是指對一定體積全血內(nèi)血細胞異質(zhì)性進行自動分析的臨床檢驗常規(guī)儀器。它又稱血細胞自動計數(shù)儀(automatedbloodcellcounter,ABCC)、血液自動分析儀(automatedhematologyanalyzer,AHA)。血細胞分析儀的發(fā)展歷史手工法血細胞計數(shù):速度慢、精密度不高WallanceH.Coulter談到血細胞計數(shù)儀的發(fā)展史，在這個領域首開先河的人是1912年出生在美國阿肯色州一個小城的人WallanceH.Coulter。這種儀器看起來非常原始和簡單，好象一個示波器另加一些管道、電極和瓶瓶罐罐（圖）。它的計數(shù)原理是根據(jù)血細胞的不良導電性和產(chǎn)生電阻抗原理來計數(shù)血液中的細胞，也就是電阻式血細胞計數(shù)原理，這種原理現(xiàn)在已經(jīng)成為血細胞計數(shù)和分析中最為經(jīng)典的原理。

最初的血細胞計數(shù)儀是一種單參數(shù)測定儀器，只能對血液中的紅細胞和白細胞進行計數(shù)，并且需人工切換。此后，歐洲、日本也開始了血液細胞計數(shù)儀的開發(fā)和研制,我國在60年代中期也開始了這種儀器的開發(fā)和生產(chǎn)。以前因為只能進行細胞計數(shù)，因此我們一般將這類儀器叫做血細胞計數(shù)儀（BloodCellCounter）,由于技術的進步目前這類儀器可以提供除了血細胞計數(shù)以外的更多參數(shù)的聯(lián)合測定和分析，因此我們一般將這類儀器統(tǒng)稱為血液細胞分析儀(HematologyAnalyzer)。經(jīng)過多年的發(fā)展，特別是近年來電子計算機技術的發(fā)展，血細胞分析儀無論在技術上、形式上、功能上、參數(shù)上、用戶界面上等許多方面都有很大的改觀和進步。

01庫爾特原理PartOne庫爾特原理是利用電阻抗法測量細胞的數(shù)量和體積。其內(nèi)容為：血細胞是電的不良導體，當一個細胞通過計數(shù)小孔時，會導致小孔兩端電阻的變化，將其轉化成脈沖，感應器通過檢測脈沖的數(shù)量及大小，從而計算出通過小孔的細胞數(shù)量及體積。血細胞分析儀基本流程02流式光散射檢測原理PartTwo前鞘流后鞘流檢測窗03白細胞五分類檢測原理PartThree1）VCS原理體積(volume，V)電阻抗原理測定細胞體積和數(shù)量電導性(conductivity，C)高頻電磁探針，測量細胞內(nèi)部結構，細胞內(nèi)核漿比例、質(zhì)粒的大小和密度，從而區(qū)別體積完全相同而性質(zhì)不同的兩個細胞光散射(scatter，S)細胞內(nèi)粗顆粒的光散射強度要比細顆粒更強，通過測定單個細胞的散射光強度可以把粒細胞區(qū)分開VCS原理光散射電導性電阻抗每個細胞接受三維分析定義到三維散點圖的相應位置

VCS法血細胞分類流程圖

VCS可顯示3種細胞散點圖DF1（體積值和散射光值）DF2（體積值和電導值）DF3（體積值和電導值,但除去了嗜酸粒細胞和中性粒細胞部分，只顯示嗜堿粒細胞群）嗜酸性粒細胞檢測系統(tǒng)-嗜酸性粒細胞溶血素嗜堿性粒細胞檢測系統(tǒng)-嗜堿性粒細胞溶血素5種白細胞分類檢測系統(tǒng)-電阻抗(DC)和射頻(RF)聯(lián)合檢測的原理(L\M\N)幼稚細胞檢測系統(tǒng)-幼稚細胞溶血素

IMI（immaturemyeloidinformation）未成熟細胞信息2）電阻抗、射頻與細胞化學聯(lián)合SE-9000血液分析儀

—射頻與直流電聯(lián)合檢測技術RF:射頻電流DC:直流電細胞大小的信息細胞內(nèi)部結構信息電阻抗與射頻法白細胞分類檢測散點圖

幼稚細胞檢測系統(tǒng)檢測原理

3）

光散射與細胞化學聯(lián)合檢測技術

這類儀器是應用激光散射與細胞化學染色技術對白細胞進行分類計數(shù)。（1）激光與過氧化物酶檢測通道：不同白細胞的過氧化物酶活性不同，從強到弱依次為：嗜酸粒細胞、中性粒細胞、單核細胞，而淋巴細胞和嗜堿粒細胞則無。因此，細胞經(jīng)過氧化物酶染色后，胞質(zhì)內(nèi)即出現(xiàn)細胞化學反應，以X軸為吸光率（酶反應強度），Y軸為光散射（細胞大?。╋@示檢測結果，每個細胞產(chǎn)生的這2個信號可定位在細胞散點圖上。由于淋巴細胞和嗜堿粒細胞均無過氧化物酶活性，儀器獲得白細胞4個亞群(EO、NEUT、MONO、LYM十BASO)。（1）過氧化物酶檢測通道酶反應強度細胞體積大?。?）嗜堿粒細胞細胞檢測通道：該通道可進一步區(qū)分淋巴細胞和嗜堿粒細胞。嗜堿粒細胞利用“時間差”與紅細胞/血小板使用共同的檢測通道。當血液進入嗜堿粒細胞通道時（此時紅細胞、血小板已檢測完畢），血液與酸性表面活性劑反應，紅細胞被溶解，除嗜堿粒細胞外，其他所有白細胞膜均被破壞，胞質(zhì)溢出，僅剩裸核；激光照射嗜堿粒細胞后，產(chǎn)生散射光的變化，形成二維細胞圖。完整的嗜堿粒細胞呈高狹角散射，定位于圖的上半部，裸核位于圖下半部。嗜堿粒細胞通道試劑反應示意圖

4）多角度激光散射聯(lián)合檢測技術

基本原理是：基于細胞大小、折射率、核形、核漿比值、以及顆粒性質(zhì)等，均可影響不同角度下的散射光強度不同白細胞在以上幾個方面完全一致的幾率很小，從而對白細胞進行分類0°：前角光散射（1°～3°），可粗略測定細胞大小。10°：狹角光散射（7°～11°），可測定細胞內(nèi)部結構相對特征。90°：垂直光散射（70°～110°），測定細胞核分葉情況。90°：消偏振光散射（70°～110°），區(qū)分嗜酸性粒細胞與其他細胞。

0°和90°垂直光散射單核（淋巴、單核、嗜堿性）多個核（嗜中性、嗜酸性）90°垂直光散射和90°消偏振光散射嗜酸性嗜中性0°和10°淋巴單核嗜堿性04紅細胞檢測原理PartRour05血紅蛋白檢測原理PartFive06血小板檢測原理PartSix與紅細胞在同一檢測通道07網(wǎng)織紅細胞檢測原理PartSeven網(wǎng)織紅細胞中嗜堿性物質(zhì)RNA，在活體狀態(tài)下與特殊的熒光染料結合熒光強度與RNA含量成正比用流式細胞術檢測網(wǎng)織紅細胞大小和

RNA含量及血紅蛋白的含量細胞與試劑反應前后的變化反應前反應后熒光(RNA)強度ReticulocytesPLTRBC高熒光強度低熒光強度中熒光強度WBC前向散射光(細胞大小)血細胞分析儀網(wǎng)織紅細胞成熟度分類血細胞分析的基本參數(shù)

1.LYM%（小細胞%或淋巴細胞%）

2.LYM#（小細胞絕對數(shù)或淋巴細胞絕對數(shù)）

3.MID%（中等大小細胞%，包括嗜酸、嗜堿粒細胞、單核細胞及幼稚細胞）

4.MID#（中等大小細胞絕對數(shù)）

5.GRAN%（大細胞%或中性粒細胞%）

6.GRAN#（大細胞絕對數(shù)或中性粒細胞絕對數(shù)）白細胞三分群1.NE%或NEUT%（中性粒細胞%）

2.NE#或NEUT#（中性粒細胞絕對數(shù)）

3.LY%或LYMPH%（淋巴細胞%）

4.LY#或LYMPH#（淋巴細胞絕對數(shù)）

5.MO%或MONO%（單核細胞%）

6.MO#或MONO#（單核細胞絕對數(shù)）

7.EO%（嗜酸性粒細胞%）

8.EO#（嗜酸性粒細胞絕對數(shù)）

9.BA%或BASO%（嗜堿性粒細胞%）

10.BA#或BASO#（嗜堿性粒細胞絕對數(shù)）

11.IG%（未成熟粒細胞數(shù)%）

12.IG#（未成熟粒細胞絕對數(shù)）白細胞五分類1.RBC（紅細胞計數(shù)）2.Hb（血紅蛋白測定）3.HCT（血細胞比容）4.MCV（平均紅細胞體積）5.MCH（平均血紅蛋白含量）6.MCHC（血紅蛋白平均濃度）7.RDW（紅細胞體積分布寬度）8.RET%（網(wǎng)織紅細胞%）

9.RET#（網(wǎng)織紅細胞絕對數(shù)）

10.LFR（低螢光強度網(wǎng)織紅細胞）

11.MFR（中螢光強度網(wǎng)織紅細胞）

12.HFR（高螢光強度網(wǎng)織紅細胞）

13.RMI（網(wǎng)織紅細胞成熟指數(shù)）紅細胞參數(shù)

1.PLT（血小板計數(shù)）

2.PCV（平均血小板體積）

3.PDW（血小板體積分布寬度）4.PCT（血小板比容）

血小板參數(shù)血細胞直方圖2005.3臨檢1.直方圖觀察的內(nèi)容：（1）峰的位置：反映主細胞群位置有無異常。（2）峰的高低：反映主細胞群數(shù)量的多少。（3）峰底的寬度：反映細胞群體積大小的

不均一性或離散程度大小。（4）有無異常峰出現(xiàn)：有多提示血液中有異常細胞群或干擾因素存在。（5）峰的起始處或結尾處有無異常：若有多提示有干擾因素。（6）波谷的位置高或低：多提示細胞比例有變化或有異常細胞群或有干擾因素存在。白細胞直方圖在35～450fL范圍內(nèi)將白細胞分為3群紅細胞直方圖在36-360fl范圍內(nèi)分析紅細胞，正常紅細胞主要分布在50-200fl。血小板直方圖電阻抗法在2-30fl范圍內(nèi)分析PLT，但大多數(shù)在2-15fl范圍，正常血小板直方圖，呈現(xiàn)左偏正態(tài)分布。血細胞分析儀參數(shù)的臨床應用4臨檢

（1）正常白細胞直方圖

三個細胞分布區(qū)：左側：高、陡的峰處于35-90fl，成熟淋巴細胞為主；最右側：低、寬的峰160-450fl，中性粒細胞為主；兩個峰之間：平坦區(qū)，從90-160fl，為單個核細胞區(qū)即中間細胞區(qū)，以單核細胞為主。2005.3臨檢（2）異常白細胞直方圖①中性粒細胞比率增高中性粒細胞峰明顯增大，淋巴細胞峰明顯減小。②淋巴細胞比例增高淋巴細胞峰明顯增大，中性粒細胞峰明顯減小。③嗜酸性粒細胞比例增高在150-250fl區(qū)域出現(xiàn)一個明顯峰，儀器報警。④單核細胞增高90-150fl出現(xiàn)一個明顯的細胞峰。2005.3臨檢⑤異常淋巴細胞增高90-150fl區(qū)域出現(xiàn)一個與淋巴細胞峰等大的細胞峰，儀器報警。⑥急性淋巴細胞性白血病單核細胞區(qū)出現(xiàn)一個高大的細胞峰，并與淋巴細胞峰融合，粒細胞峰變小右移。⑦慢性粒細胞性白血病在100-300fl區(qū)域出現(xiàn)一個高大的細胞峰。2005.3臨檢（3）白細胞直方圖變化的應用價值白細胞直方圖記錄了0～450fl范圍內(nèi)的所有粒子出現(xiàn)的頻率，只能反映體積相近的某群細胞的大致變化情況，對臨床診斷無特異性。2005.3臨檢（1）正常紅細胞直方圖

正常紅細胞集中在50-150fl范圍，基本呈正態(tài)分布。右側不與X軸重合拖尾部分，分布在130-185fl之間的區(qū)域，稱“足趾部”多為一些白細胞、大紅細胞、網(wǎng)織紅細胞、兩個或兩個以上粘合聚集的紅細胞所致。2005.3臨檢（2）異常紅細胞直方圖小細胞不均一性

波峰左移、峰底變寬，RDW增高。小細胞均一性

波峰左移、峰底變窄，RDW正常。大細胞不均一性

波峰右移、峰底變寬，RDW增高。大細胞均一性

波峰右移、峰底基本不變，RDW正常。2005.3臨檢（3）紅細胞直方圖的應用價值正常情況-正態(tài)分布曲線。在某些病理情況下，紅細胞直方圖會有明顯的改變，這些改變是無法用數(shù)據(jù)來衡量的，因多數(shù)貧血患者的紅細胞體積，各有其獨特的變化，該變化可較直觀的反映到直方圖上，結合其他參數(shù)綜合分析，對貧血的診斷與鑒別診斷及療效觀察頗有價值。2005.3臨檢

紅細胞直方圖比白細胞直方圖的應用價值大。要注意觀察圖形峰的位置、峰底的寬度、峰頂?shù)男螤罴坝袩o雙峰現(xiàn)象。紅細胞直方圖與MCV、RDW的關系見表2005.3臨檢MCVRDW直方圖貧血類型常見疾病或病因正常正常正常正細胞均一性部分再生障礙性貧血、急性出血正常增高波底變寬或有雙峰正細胞不均一性缺鐵性貧血、慢性失血早期等減低正常峰左移小細胞均一性輕型β-海洋性貧血

減低增高峰左移、雙峰、底變寬小細胞不均一性缺鐵性貧血、血紅蛋白S病、增高正常峰右移大細胞均一性部分再生障礙性貧血、葉酸或VitB12缺乏早期增高增高峰右移、雙峰、底變寬大細胞不均一性葉酸或VitB12缺乏性貧血

MCV、RDW分類法與直方圖、貧血的關系

2005.3臨檢

3.血小板直方圖儀器的計算機將血小板體積從2-30fl分為64個計數(shù)通道，依血小板體積大小不同，將其分別儲存于不同的計數(shù)通道內(nèi)，打印出相應的血小板體積直方圖。（1）正常血小板直方圖

正常情況下血小板主要集中在2-20fl范圍內(nèi)，呈偏態(tài)分布。（2）異常血小板直方圖大血小板增多：曲線右移，在35fl處接近X軸，紅細胞直方圖及MCV正常。小紅細胞干擾：右側曲線抬高，不與X軸重合，呈拖尾狀，紅細胞直方圖峰明顯左移，MCV明顯變小。聚集血小板干擾：右側曲線抬高，不與X軸重合,紅細胞直方圖峰異常

其它干擾因素plt2005.3臨檢正常白細胞直方圖2005.3臨檢紅細胞體積分布寬度2005.3臨檢貧血時紅細胞體積分布直方圖變化2005.3臨檢血小板體積直方圖2005.3臨檢血小板分析與干擾因素2005.3臨檢缺鐵性貧血2005.3臨檢缺鐵性貧血2005.3臨檢巨幼細胞性貧血2005.3臨檢巨幼細胞性貧血2005.3臨檢微血管病性溶血性貧血2005.3臨檢海洋性貧血2005.3臨檢紅細胞直徑與體積比較2005.3臨檢骨髓增生異常綜合征2005.3臨檢骨髓增生異常綜合征2005.3臨檢傳染性淋巴細胞增多癥2005.3臨檢中性粒細胞增多癥2005.3臨檢嗜酸性粒細胞增多癥2005.3臨檢血小板無力癥2005.3臨檢冷球蛋白血癥2005.3臨檢慢性粒細胞白血病2005.3臨檢正常血片2005.3臨檢假性血小板減少全自動血細胞分析儀應用實驗原理實驗器材實驗試劑和標本操作步驟目

錄CONTENTS實驗原理BF6800采用半導體激光流式細胞分析與細胞化學染色法、電阻抗法進行細胞分類、計數(shù)；采用環(huán)保無氰化物進行比色測HGB前鞘流后鞘流檢測窗光散射電導性電阻抗每個細胞接受三維分析定義到三維散點圖的相應位置

檢測