核醫(yī)學體外放射分析

體外放射分析

分類：爭性：放射免疫分析RIA競爭性蛋白結(jié)合分析CPBA放射受體分析RRA放射酶分析放射微生物分析非競爭性：免疫放射分析IRMA放射免疫分析RIA添加標題原理：P62添加標題競爭機制：添加標題Ag(不定量)添加標題+Ab（有限量）添加標題固定量*Ag添加標題免疫結(jié)合反應形成免疫復合物添加標題定量分析的數(shù)學基礎(chǔ)：免疫結(jié)合反應服從質(zhì)量作用定律P+Q===PQ[PQ]K=---------[Q]K值大表示親和力大由質(zhì)量作用定律推導的數(shù)學模型

[Q0]1[Q0]B2—B（1+------+--------）+-------==0[P0]K[P0][P0]

[PQ]B==----------×100%P0=Ag+*AgPQ=*Ag—Ab[P0]Q0=Ab的初始含量當*Ag為固定量時，P0為自變量（實際為Ag）P0與復合物B呈一定的函數(shù)關(guān)系放免反應的定量依據(jù)：劑量反應曲線或叫標準曲線劑量反應曲線的含義以已知的標準品為橫坐標，以放射性復合物測定值的某種表達式做縱坐標，繪制劑量---反應曲線P64圖4—1P74圖4—13單擊此處添加大標題內(nèi)容曲線的斜率是關(guān)鍵因素，斜率不同精密度不同（P64圖4—1）斜率=tgα（代表曲線或直線的傾斜度）影響斜率的常見因素有以下幾點：Ab親和力：K大，斜率也大Ag用量：Ag少，斜率大Ag的免疫活性：活性強，斜率大*Ag的比活度和放化純度：↑→↑Ab用量：B=33—50%斜率最大。反應條件和溫度（見后）免疫反應條件要求：PH：大多PH=7.5離子強度：常用0.05—0.1M反應溫度：實驗確定RIA方法學1、操作步驟：P1942、RIA的基本試劑標準抗原基本要求：

①標準抗原與待測物免疫性必須一致

②必須高純度：不純不能制備抗體，不純標記物放化純度達不到要求

③標準抗原的量必須準確：（用于標準曲線）

④具有良好的穩(wěn)定性（能保證較長時間不改變性能）標準抗原的用途：①制備抗體②制備*Ag③標準曲線抗血清檢查抗血清的指標：親和常數(shù)KP192交叉反應率P193滴度記抗原Ag*基本要求：免疫活性與待測物及標準品一致適度的比活度：太高、化學量少、不具競爭性，太低統(tǒng)計誤差大。足夠高的放化純度（>95%）01免疫活性檢驗：復合物放射性最大結(jié)合百分率（B%）=-----------------------------------×100%參與反應標記抗原放射性02分離方法單擊此處添加正文，文字是您思想的提煉，為了演示發(fā)布的良好效果，請言簡意賅地闡述您的觀點。您的內(nèi)容已經(jīng)簡明扼要，字字珠璣，但信息卻千絲萬縷、錯綜復雜，需要用更多的文字來表述；但請您盡可能提煉思想的精髓，否則容易造成觀者的閱讀壓力，適得其反。03非特異分離法：吸附法（活性炭）層析電泳法過濾法磁性分離法沉淀法（聚乙二醇，硫酸胺等）異分離法：雙抗法固相分離法葡萄球菌A蛋白（SPA）補充：對分離方法的基本要求使結(jié)合部分與游離部分盡可能完全分開分離的成份便于放射性測量分離效果不受外界干擾因素的影響操作簡便、分離迅速、重復性好與游離標記物的非特異結(jié)合盡可能小試劑來源廣泛，經(jīng)濟價廉單擊此處添加大標題內(nèi)容RIA加樣方法平衡法：三種反應物同時加樣優(yōu)：簡便易掌握重現(xiàn)性好競爭反應較典型缺：靈敏度不高順序加樣法：Ag+Ab溫育后再加*Ag優(yōu)：標準曲線起始段斜率高、靈敏度高缺：曲線工作波度范圍窄、重現(xiàn)性差一天法：（特殊情況下使用）IA數(shù)據(jù)處理的數(shù)學模型（補充概念）后頁樣品采集與保存應注意的幾個問題用原樣品、新鮮樣品、減少存放、最好不純化、濃縮萃取、減少變異盡快做實驗，避免反復凍融可能少用添加劑等，抗凝劑也少用。放射免疫法的數(shù)學模型及處理常用符號及英文縮寫的含意：NSB：非特異結(jié)合B0%：B0管的放射性測量值與加入總放之比。BQC：質(zhì)控探樣品測量值CPMBN：NSB管的樣品測量值CPMF：游離物質(zhì)樣品測量值CPMB：結(jié)合的沉淀物樣品測量值CPMED50：指B/B0為50%時對應劑量值。ED25、ED70指B/B0為25%、70%所對應的劑量。針對劑量反應的實際曲線模型：如多項式函數(shù)，光滑樣條函數(shù)，線性內(nèi)插模型直線化模型：（logit—log模型）常用：將標準曲線橫坐標各點取對數(shù)lgX而縱坐標用logitBx/B0,logitBx/B0=lgBx/B0—Bx該直線法標準曲線的零點丟失（零無對數(shù)）造成靈敏度降低線模型分類3、logistic模型：只能用于平衡反應兩點改進

a：橫坐標不取對數(shù)而用Db：不做NSB，靠計算機計算擬合扣除NSB。

a—d模型：Y=------------------+dx1+(------)bc

有四個參數(shù)：a=B0（也稱四參數(shù)logistic模型）c=ED50b=logit—log直線斜率d=NSB單擊此處添加大標題內(nèi)容五參logistic數(shù)模型：a—bY=---------------+dx[1+(----)b]Ec引入了一個不對稱因子E。E計算機能求出?？捎糜诜瞧胶夥磻到y(tǒng)5、四參數(shù)單位點質(zhì)量作用定律模式：按質(zhì)量作用定律導出的模式優(yōu)點：①質(zhì)量作用定律，穩(wěn)健回歸擬合；

②適于平衡和非平衡系統(tǒng)；

③個別壞點對曲線影響小。模型的選擇（擬合優(yōu)度法來選）問題：一組數(shù)據(jù)可用多種模型去處理，如何選用？①

線性擬合用最小二乘法，選殘差平方和最小的模型。②

非線性擬合用百分比偏差DEV%DEV%=（X’—X）/X100% DEV%<10%即可使用。放射免疫的質(zhì)量控制RIA的誤差來源：試劑（變性，核素脫落、貯存不當免疫活性↙等）樣品（放置不當，存放條件不同，制備、采集的差異等）操作（加樣不準，反應條件改變、分離不統(tǒng)一等）儀器與設(shè)備（不統(tǒng)一，差異等）測量（統(tǒng)計漲落）數(shù)據(jù)處理：擬合不當、方法不一致等。誤差分類系統(tǒng)誤差：原因是確定因素如試劑變性，稱量不準，批號不同。隨機誤差：原因?qū)倥既?，難以確定，測量結(jié)果忽高忽低呈雙向圍某數(shù)值波動。過失誤差：過失造成的誤差，結(jié)果失真無規(guī)律性可查。質(zhì)控目的：找出誤差原因、采取必要措施，保證實驗結(jié)果的可信性。質(zhì)控分類實驗室內(nèi)質(zhì)控實驗室間質(zhì)控常用的質(zhì)控指標：靈敏度、特異性、精密度、偏差、準確度、穩(wěn)定性、臨床有效性。1、靈敏度：10個B0管均值減去2SD后在標準曲線上查得的劑量值。2、特異性：用交叉反應率來表示3、精密度：同一樣品多份測量結(jié)果變異的大小。

SD可用SD或CV=-------×100%X4、偏差：偏離真值的程度測定值—真值 偏差b=--------------------×100%

真值單擊此處添加大標題內(nèi)容準確度：測量值與真值的符合程度，也叫回收率回收管測量值—對照管測量值回收率=-----------------------------------------×100%回收管內(nèi)加入的已知量反應準確度評價指標在空白樣品中加入已知劑量的待測物得測定值—空白值樣品回收率=-----------------------×100%已知值

回收率應在90~110%之間測定值—真值偏差=-----------------------------×100%真值偏差允許在±10%之內(nèi)。

注意：測定值應取高、中、低三個劑量區(qū)的樣品分別求出高、中低三個劑量的回收率和偏差。穩(wěn)定性：指批間重復性。對曲線穩(wěn)定性考核的常用指標有：ED25、ED50、ED75、B0%、NSB%等。不同批實驗中這些值應大體接近。臨床有效性：陽性率與臨床診斷的符合率。與正常值的確定有關(guān)。上述幾種指標間的關(guān)系；靶圖。若某點的CV%大于10%應做為壞點剔除。反應精密度的幾個指標（1、2、3）：1、平均批變異系數(shù)（ABCV）：指一批實驗數(shù)據(jù)的CV平均值：

∑SDABCV%=------------------------------×100%∑X2、反應誤差關(guān)系（RER）：指一批實驗各復管的SD與其X之間的函數(shù)關(guān)系。SD為CPM的誤差。它是反應實驗復管平行性好壞的綜合指標，不是劑量的誤差。RER的計算公式見P85，4—23RER≤0.04優(yōu)秀0.12<RER>0.04<0良好

RER>0.12差單擊此處可添加副標題精密度圖（P、P圖）：以劑量lgD為橫坐標，以各劑量復管的SD為縱坐標做的圖。P、P圖步驟：立劑量反應曲線算各樣品的放射性測量值X和誤差SDR放射性的X和SDR通過劑量反應曲線查得劑量D并計算D的SD即SD0，或換為SD0/D=CV%LgD為橫坐標：以CVD或SDD為縱坐標做圖。單擊此處添加大標題內(nèi)容P．P圖的用途定方法的靈敏度定劑量反應曲線的有效工作范圍價RIA的最佳工作條件IA的質(zhì)控評價斷剔除壞點健全性試驗：指用標準品繪制的標準曲線與用不同釋稀度病人樣品繪制的曲線應平行。影響健全性的因素：標準品與待測物性質(zhì)不同反應系統(tǒng)有干擾反應待測物在標準品確定的環(huán)境中不適宜。youden圖：在多批實驗中每一實驗測量的首部和尾部放置二個相同濃度的質(zhì)控樣品，將其測量值求X±SD。在直角坐標中，做圖如下：QC—H首 QC—MQC—LQC首 首樣品 2SDABD尾樣品QC尾A區(qū)：準確區(qū)B區(qū)：正偏差區(qū)C區(qū)：負偏差區(qū)D區(qū)：不精密區(qū)意義：一種簡便，直觀、有效地評價精密度和偏倚的方法。Cusum圖：把每批實驗的QC測定值與靶值相減后做圖。評價：小斜線連續(xù)上升或下降提示有正、負偏差小斜線的斜率反映偏差的大小斜線兩端點落差的絕對值超出QC的3SD說明有偏差出現(xiàn)，超出5S