醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)課件匯編-17免疫診斷與免疫治療

免疫診斷

Immunodiagnosis

免疫系王巍免疫診斷(Immunediagnosis)概念

利用免疫學(xué)原理進行臨床疾病的診斷或輔助診斷抗原抗體反應(yīng)的高度特異性親和力抗原抗體反應(yīng)的可逆結(jié)合解離度抗原抗體反應(yīng)需要合適的濃度和比例可見性抗原抗體反應(yīng)的兩個階段：特異性結(jié)合非共價，肉眼不可見，幾秒-幾分鐘可見性反應(yīng)電荷吸引，肉眼可見，數(shù)小時-數(shù)天抗原或抗體的檢測抗原抗體反應(yīng)的特點抗原抗體反應(yīng)的影響因素：抗原抗體比例合適溫度：37度酸堿度：pH6-8電解質(zhì)：失去表面電荷01檢測抗原或抗體的方法02凝集反應(yīng)（agglutination)：顆粒性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團塊03直接凝集反應(yīng)：顆粒性抗原+相應(yīng)抗體–ABO血型測定間接凝集反應(yīng)：可溶性抗原+顆粒載體+相應(yīng)抗體01沉淀反應(yīng)(precipitation)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)沉淀物02單向免疫擴散：可用于檢測血清中Ig的含量雙向免疫擴散：抗原抗體的定性分析免疫電泳：常用于血清蛋白種類分析免疫比濁：AgConcentrationDiameter2AgAgAgAgAbingel單向免疫擴散雙向免疫擴散Ag+AgAb免疫電泳用標(biāo)記的抗原或抗體進行的抗原抗體反應(yīng)免疫熒光法：熒光素與抗體連接熒光抗體直接免疫熒光：熒光素標(biāo)記的抗體直接作標(biāo)本染色間接免疫熒光：一抗與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色AgYFluorochromeLabeledAbTissueSectionAgYYFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAb酶免疫測定：酶標(biāo)記抗體進行的抗原抗體反應(yīng)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行。它將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。雙抗體夾心法檢測待測抗原間接法檢測待測抗體BAS-ELISA（生物素-親和素系統(tǒng)-ELISA）酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)免疫組化技術(shù)放射免疫測定法（radioimmunoassay,RIA）：放射性核素標(biāo)記抗原或抗體，131I、125I01化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（chemiluminescenceimmunoassay,CLIA）：化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，魯米諾02免疫膠體金（immunologicalcolloidalgoldsignature,ICS）：膠體金顆粒標(biāo)記抗原或抗體，氯金酸（HAuCl4）03免疫印跡技術(shù)（immunoblotting,westernblotting）：十二烷基磺酸鈉（SDS）聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）后轉(zhuǎn)膜孵育一抗二抗04免疫細(xì)胞的測定分析免疫細(xì)胞的數(shù)量和功能，評價病人的免疫功能包括CD分子測定、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、吞噬實驗、細(xì)胞毒實驗等磁珠分離：抗體與磁珠交聯(lián)免疫吸附分離法：將已知抗體包被培養(yǎng)皿，加入淋巴細(xì)胞懸液熒光激活細(xì)胞分選儀分離法（FACS）抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)淋巴細(xì)胞的分離與類型鑒定分離方法：密度梯度離心單個核細(xì)胞磁珠標(biāo)記的抗體磁珠分離法：流式細(xì)胞分選儀（FACS）免疫細(xì)胞功能測定：T細(xì)胞功能測定B細(xì)胞功能測定吞噬細(xì)胞功能測定T細(xì)胞功能測定：01T細(xì)胞增殖試驗細(xì)胞毒試驗細(xì)胞因子檢測皮膚試驗02010402033H-TdR摻入法：氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷，摻入新合成的DNA中，增殖越多3H-TdR摻入越多MTT法3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，被琥珀酸脫氫酶還原為紫褐色顆粒細(xì)胞增殖的檢測法：細(xì)胞毒實驗：細(xì)胞形態(tài)：臺盼藍染色51Cr的釋放LDH釋放凋亡細(xì)胞檢測法：細(xì)胞形態(tài)：瓊脂糖電泳:DNAladderbandFACS:DNA斷裂為非二倍體TUNEL：TdT-dUTP連接著色DNA3’斷裂末端死細(xì)胞生物活性檢測法：CTLL細(xì)胞株——IL-2依賴01.增殖vs細(xì)胞因子含量02.免疫學(xué)檢測：ELISAELISPOT03.細(xì)胞因子的檢測Ig定量：單向瓊脂擴散、免疫比濁法、ELISA01B細(xì)胞增殖試驗抗體形成細(xì)胞測定：溶血空斑實驗02B細(xì)胞功能測定吞噬細(xì)胞功能測定趨化功能測定（Boyden小室）吞噬功能測定硝基藍四氮唑NBT—淡黃色經(jīng)超氧陰離子O2-變?yōu)樗{黑色顆粒熒光標(biāo)記的生物顆粒、天然有色顆粒（雞紅細(xì)胞）免疫學(xué)檢測方法的應(yīng)用疾病的診斷：感染性疾病超敏反應(yīng)性疾病自身免疫病免疫缺陷病腫瘤免疫學(xué)監(jiān)測：12

免疫學(xué)防治

Immunoprophylaxisandimmunotherapy

010203040506安全有效實用自然免疫：機體感染病原體后建立的特異性免疫，包括胎兒或新生兒經(jīng)胎盤或乳汁從母體獲得抗體。疫苗（vaccine）：一些能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性免疫的人工主動免疫制劑如細(xì)菌性制劑、病毒性制劑以及類毒素等統(tǒng)稱為疫苗。人工主動免疫:用疫苗接種機體使之產(chǎn)生特異性免疫,從而預(yù)防感染的措施。人工被動免疫：給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細(xì)胞因子等制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。疫苗的基本要求:一、免疫預(yù)防01人工主動免疫02減毒活疫苗：免疫原性強，類似輕癥感染，只需接種一次?？ń槊?、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、風(fēng)疹疫苗03滅活疫苗（死疫苗）：免疫原性強，理化滅火，誘導(dǎo)特異性抗體的產(chǎn)生，無法誘導(dǎo)CTL，需接種多次。狂犬病、傷寒、流感疫苗04類毒素：細(xì)菌的外毒素經(jīng)0.3%-0.4%甲醛處理，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗毒素。白喉、破傷風(fēng)04030102人工被動免疫抗毒素：用細(xì)菌外毒素或類毒素免疫動物制備的免疫血清，具有中和外毒素的作用。破傷風(fēng)抗毒素、白喉抗毒素人免疫球蛋白制劑：從大量混合血漿或胎盤血中分離制成的免疫球蛋白濃縮劑。甲型肝炎、丙型肝炎、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎等疾病的預(yù)防細(xì)胞因子和單克隆抗體佐劑（adjuvant)：預(yù)先或與抗原同時注入體內(nèi)，可增強機體對該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的非特異性免疫增強物質(zhì)。增加局部抗原濃度刺激單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，增強抗原處理和提呈能力刺激淋巴細(xì)胞增殖分化常用佐劑：

氫氧化鋁

ISCOMs（免疫刺激復(fù)合物）

含CpG寡核苷酸細(xì)胞因子瘧疾疫苗、肝癌疫苗處于臨床試驗階段合成肽疫苗：03炎球菌、肺炎球菌疫苗已獲準(zhǔn)使用）結(jié)合疫苗：細(xì)菌夾膜多糖+白喉類毒素（腦膜02肝炎病毒表面抗原制成的乙型肝炎疫苗亞單位疫苗：有效免疫原成分制成的疫苗，如乙型01新型疫苗重組抗原疫苗：乙型肝炎疫苗獲準(zhǔn)使用重組載體疫苗DNA疫苗：用編碼有效免疫原的基因與表達質(zhì)粒構(gòu)建重組體直接免疫機體。轉(zhuǎn)基因植物疫苗：將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤玫闹参锛?xì)胞基因組中，使其在植物的可食用部分穩(wěn)定表達，通過攝取食物達到免疫接種的目的?；蚬こ桃呙缥覈媱澝庖叱绦蛞呙缑Q第一次第二次第三次加強預(yù)防傳染病卡介苗出生肺結(jié)核乙肝疫苗出生1月齡6月齡乙型病毒性肝炎脊灰疫苗2月齡3月齡4月齡4周歲脊髓灰質(zhì)炎百白破疫苗3月齡4月齡5月齡18-24月齡，6周歲百日咳白喉破傷風(fēng)麻疹疫苗8月齡麻疹麻腮風(fēng)疫苗18-24月齡風(fēng)疹流行性腮腺炎乙腦疫苗8月齡2周歲流行性乙型腦炎A群流腦疫苗6-18月齡（1、2次間隔3個月）流行性腦脊膜炎A+C群流腦疫苗3周歲6周歲甲肝疫苗18月齡甲型肝炎以上為兒童免疫規(guī)劃疫苗，以下為重點人群接種疫苗出血熱雙價純化疫苗出血熱炭疽減毒活疫苗炭疽鉤體滅活疫苗鉤體病01許多疾病無有效疫苗：02病毒：HIV，皰疹病毒03細(xì)菌：葡萄球菌，A組鏈球菌04真菌：假絲酵母05原生動物：瘧疾，利什曼病06蠕蟲感染：血吸蟲病抗腫瘤防止免疫病理損傷傳染病計劃生育疫苗的應(yīng)用免疫治療（Immunotherapy）利用免疫學(xué)原理，針對疾病的發(fā)生機制，人為地調(diào)整機體的免疫功能，達到治療母的所采取的措施。免疫抑制、免疫增強主動或被動特異或非特異0302010405分子疫苗：合成肽疫苗、重組載體疫苗和DNA疫苗可作為腫瘤和感染性疾病的治療性疫苗抗體：多克隆抗體、單克隆抗體、基因工程抗體細(xì)胞因子：外源性細(xì)胞因子治療、細(xì)胞因子拮抗療法、微生物抗原疫苗微生物抗原疫苗（一）、分子治療在臨床應(yīng)用的多克隆抗體包括：胎盤球蛋白、丙種球蛋白、破傷風(fēng)抗毒素、白喉抗毒素、抗淋巴細(xì)胞抗血清、抗Rh抗體、抗SARS病毒抗體等多克隆抗體在臨床應(yīng)用的鼠源單克隆抗體：抗CD3（OKT3）：抗器官移植排斥抗CD20：治療B細(xì)胞淋巴瘤鼠源單克隆抗體基因工程抗體已經(jīng)成為治療性抗體的主流產(chǎn)品。包括：嵌合抗體（chimericAb)人源化抗體（humanizedAb）人抗體基因工程抗體抗體藥物鼠源單克隆抗體治療存在的主要問題是HAMA（Humananti-mouseantibody）反應(yīng)，導(dǎo)致療效下降，副作用增加。基因工程抗體01抗細(xì)胞因子及其受體抗體02抗TNF及其受體的抗體治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎03抗IL-2及其受體治療自身免疫病和抗移植排斥04抗VEGF抗體治療腫瘤05抗EGFR2、EGFR1抗體治療腫瘤06抗CD分子抗體07抗CD20嵌合抗體治療B細(xì)胞淋巴瘤08抗CD33治療急性髓性白血病09抗CD52治療淋巴瘤10抗CD11a治療銀屑病01臨床用量大02成本高，價格昂貴03生產(chǎn)工藝復(fù)雜，硬件設(shè)備高投入04治療性免疫靶標(biāo)的鑒定有很大難度05存在臨床風(fēng)險抗體藥物的主要問題治療性抗體名稱（括號內(nèi)為商品名）適應(yīng)癥腫瘤抗CD20（Rituxan，Zevalin，Bexxar，Arzerra）非霍奇金淋巴瘤抗HER2/CD340（Herceptin）轉(zhuǎn)移性乳腺癌抗CD33（Mylotarg）急性髓樣細(xì)胞白血病抗CD52（Campath）B細(xì)胞白血病、T細(xì)胞白血病和T細(xì)胞淋巴瘤抗EGFR（Erbitux，Vectibix）轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌和頭頸部腫瘤抗RANKL（Prolia/Xgeva）預(yù)防已經(jīng)轉(zhuǎn)移并損害骨質(zhì)的腫瘤患者的骨骼相關(guān)事件急性移植排斥反應(yīng)抗CD3（OrthocloneOKT3）腎移植后急性排斥反應(yīng)抗CD25（Zanapax，Simulect）腎移植后急性排斥反應(yīng)自身免疫病和過敏性疾病抗TNFα（Remicade，Humira，Simponi）Crohn病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、強直性脊椎炎抗IgE（Xolair）持續(xù)性哮喘抗CD（Raptiva）斑狀牛皮癬抗α4整合素（Tysabri）多發(fā)性硬化癥抗VEGF（Lucentis）年齡相關(guān)性黃斑病變抗CD45RO+（Amevive）銀屑病及其他自身免疫紊亂疾病抗TNF（Cimzia）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎抗IL-1β（Ilaris）自身炎癥性疾病抗IL-12/IL-23（Stelara）成年患者中度至嚴(yán)重的斑塊性銀屑病人源型抗C5（Soliris）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥其他抗gpⅡb/Ⅲa（ReoPro）預(yù)防冠狀動脈血管成形術(shù)中發(fā)生血栓抗呼吸道合胞病毒（Synagis）預(yù)防兒童在高危期呼吸道合胞病毒感染抗IgGⅠ（OncoScint）檢測結(jié)直腸腺癌和卵巢上皮細(xì)胞癌，診斷乳房癌、肺小細(xì)胞癌、胰腺癌、胃癌和食管癌抗PSMA（ProstaScint）評估疑有復(fù)發(fā)的前列腺患者、用于患者的分期抗CEA（CEA-Scan）檢測原發(fā)性、結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移，乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移抗肌凝蛋白單株（Myoscint）心肌梗塞引起的胸痛定位、心肌梗塞和心肌炎的造影抗SCLC抗體片段-NR-LU-10-Fab（Verluma）診斷常規(guī)方法檢查經(jīng)常無效的小細(xì)胞肺癌抗CD15（NeutroSpec）用于闌尾炎疑似患者的鑒別診斷美國FDA已批準(zhǔn)生產(chǎn)和臨床使用的單克隆抗體（截至2011年）重組蛋白質(zhì)藥物

批準(zhǔn)上市的重組細(xì)胞因子藥物

IFNα

白血病、肝炎、Kaposi肉瘤

IFNγ 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、慢性肉芽腫、生殖器疣

G-CSF

自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的粒細(xì)胞減少癥、再生障礙性貧血

GM-CSF自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的血細(xì)胞減少癥、再生障礙性貧血

Epo

慢性腎衰導(dǎo)致貧血、癌癥或癌癥化療導(dǎo)致的貧血、失血后貧血

IL-2 癌癥、免疫缺陷、疫苗佐劑

IFNβ多發(fā)性硬化癥

IL-11放化療所致血小板減少癥

SCF與G-CSF聯(lián)合應(yīng)用與外周血干細(xì)胞移植

PDGF糖尿病導(dǎo)致的皮膚潰瘍

EGF外用藥治療燒傷、潰瘍（僅在中國上市）

bFGF外用藥治療燒傷、外周神經(jīng)炎（僅在中國上市）

TNF

局部灌注治療晚期骨髓瘤（僅在德國上市）

TNF

突變體晚期腫瘤（僅在中國上市）

Tpo治療血小板減少癥（僅在中國上市）批準(zhǔn)上市的重組可溶性受體藥物可溶性TNF受體-Ig（Enbrel）：治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Amgen),2006年銷售額超過45億美元可溶性CD152-IgCTLA4-Ig）:商品名Abatacept，治療自身免疫病（Bristol-MyersSquibb）,2005年12月批準(zhǔn)上市半衰期短，需要反復(fù)給藥能夠誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)藥物的主要問題基因治療將正常人體基因通過invivo或exvivo的途徑導(dǎo)入病人體內(nèi)，通過體內(nèi)表達正?；蛑委熂膊　Ｖ匕Y聯(lián)合免疫缺陷（SCID）的基因治療腺苷脫氨酶（ADA）基因治療(1990)AshantideSilva,wasthefirstpatienttobetreatedwithgenetherapy.XSCID的IL-2受體鏈基因治療性聯(lián)SCID的發(fā)病是由于IL-2R基因缺陷2000年法國科學(xué)家在Science首次報道2例成功基因治療的結(jié)果；至2002年法、英、美共治療14例，12例成功。第一例成功接受IL-2R基因治療的男孩RhysEvansXSCID基因治療原理01病毒載體的安全性02靶基因選擇03基因?qū)胄?4基因的可調(diào)控表達基因治療的主要問題樹突狀細(xì)胞疫苗：使用腫瘤提取物抗原或腫瘤抗原多肽等體外刺激樹突狀細(xì)胞，或用攜帶腫瘤相關(guān)抗原基因的病毒載體轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞，再回輸給患者，可有效的激活抗腫瘤免疫應(yīng)答基因修飾的瘤苗：用基因修飾的方法改變腫瘤細(xì)胞的遺傳性狀，降低致瘤性，增強免疫原性腫瘤細(xì)胞疫苗：滅活瘤苗、異構(gòu)瘤苗。自體或同種腫瘤細(xì)胞經(jīng)理化方法處