維生素類藥物的分析

第九章維生素類藥物的分析第一節(jié)概述維生素：是維持人體正常代謝機能所必需的微量營養(yǎng)物資。

23145VitPPVitM水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺VitA、D2、D3、E、K1等脂溶性人體需要的重要維生素有6種:維生素A、維生素B1、維生素B2、煙酸、維生素C、維生素D，其他維生素的需要量則較少。除維生素D外，人體不能合成維生素。維生素發(fā)展史

公元前3500年-古埃及人發(fā)現能防治夜盲癥的物質，也就是后來的維A。

1600年-醫(yī)生鼓勵以多吃動物肝臟來治夜盲癥。

1747年-蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現檸檬能治壞血病，也就是后來的維C。

1831年-胡蘿卜素被發(fā)現。

1905年-甲狀腺腫大被碘治愈。

1911年-波蘭化學家豐克為維生素命名。

1915年-科學家認為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的1916年-維生素B被分離出來。

1917年-英國醫(yī)生發(fā)現魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是缺乏維D引起的。

1920年-發(fā)現人體可將胡蘿卜轉化為維生素A。

1922年-維E被發(fā)現。

1928年-科學家發(fā)現維B至少有兩種類型。

1933年-維E首次用于治療。

1948年-大劑量維C用于治療炎癥。

1949年-維B3與維C用于治療精神分裂癥。

1954年-自由基與人體老化的關系被揭開。

1957年-Q10多酶被發(fā)現。

1969年-體內超級抗氧化酶被發(fā)現。

1970年-維C被用于治療感冒。

1993年-哈佛大學發(fā)表維生素E與心臟病關系的研究結果。維生素A

對人體的生長、視覺和生殖功能都很重要，對神經系統(tǒng)和內分泌有調節(jié)作用，同時對上皮組織的生長、增生和分化有重要調節(jié)作用，可改善角化過度?？捎糜谥委熅S生素

A缺乏病、毛發(fā)紅糠疹、毛發(fā)苔癬、魚鱗病、小兒銀屑病、鱗狀毛囊角化病、進行性對稱性紅斑角化癥、色素性扁平苔癬、聚合性痤瘡等。維生素D

與鈣、磷代謝及植物神經系統(tǒng)、內分泌及血管系統(tǒng)有密切關系，具有皮質類固醇激素樣作用。可用于治療異位性皮炎、紅斑狼瘡、斑禿、聚合性痤瘡、泛發(fā)性膿皰性銀屑病等01維生素E

可用于治療凍瘡、多形紅斑、結節(jié)性紅斑、單純性紫癜、色素性紫癜性皮膚病、肢端紫紺癥、痛經以及治療抑郁癥。02維生素K

促進肝臟合成凝血酶原及血漿因子，與皮質類固醇激素有協同作用。可用于治療紫癜、慢性蕁麻疹、淋巴瘤伴皮膚瘙癢病等。1

可用于治療濕疹、皮炎、膿皮病、念珠菌病、光感性皮膚病、帶狀皰疹后遺神經痛、多發(fā)性神經炎等。維生素B2

可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、尋常須瘡、口周濕疹、日光性皮炎等。生素B6

可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、濕疹、滲出性銀屑病、神經性皮炎、妊娠癢疹、斑禿、唇炎等。生素B12

是體內多種代謝過程中必需的輔酶，參與核蛋白的合成，甲基的轉換以及脂肪和糖的代謝，可用于治療慢性蕁麻疹、接觸性皮炎、早期銀屑病、扁平疣、水痘、帶狀皰疹、扁平苔癬、脂溢性皮炎、光感性皮膚病等。01

主要用于抗炎和抗衰老，可用于治療紫癜性皮膚病、濕疹、蕁麻疹、黃褐斑、黑變病、特發(fā)性斑狀色素沉著、早期銀屑病、砷劑皮炎等。02H維生素A醇COCH3維生素A醋酸酯COC15H31維生素A棕櫚酸酯01R:02第二節(jié)維生素A03為一個具有共軛多烯側鏈的環(huán)己烯（一）結構與性質一、

具有UV吸收

存在多種立體異構化合物01020304維生素A325.5100%新維生素Ab320.524%異維生素Aa32321%新維生素Aa32875%新維生素Ac310.515%異維生素Ab32424%0506相對生物效價VitA2VitA3易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應鯨醇共軛多烯側鏈易被氧化△或有金屬離子存在時氧化↑（二）環(huán)氧化物VitA醛VitA酸與三氯化銻發(fā)生呈色反應（三）CHCl3溶解性（四）不溶于水易溶于有機溶劑和植物油等三氯化銻反應（一）條件無水無醇CHCl3鑒別二、紫紅藍色UV法λmax為350～390nm三個吸收峰λmax為326nm一個吸收峰（BP（1998））（二）去水VitA（VitA3）↓VitATLC法USP顯色劑磷鉬酸規(guī)定斑點顏色和Rf值BP雜質對照品法顯色劑三氯化銻（三）含量測定立體異構體氧化產物及光照產物合成中間體去氫維生素A（VitA2）去水維生素A（VitA3）UV法（一）三、三點校正法條件：雜質的吸收在310~340nm波長范圍內呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減??；物質對光的吸收具有加和性。01021VitA的max（328nm）波長的選擇：23分別在1的兩側各選一點010203第一法等波長差法測定對象VitA醋酸酯測定對象VitA醇第二法等吸收度法(皂化法)測定法01基本步驟:02第一步A選擇03選擇依據：04所選A值中雜質的干擾已基本消除05第二步求注意：C為混合樣品的濃度01第三步求效價02換算因數由純品計算而得：第四步：求標示量％01020304方法：第一法維生素A醋酸酯

判斷是否在326～329nm之間在326～329nm之間改用第二法是否

求算并與規(guī)定值比較規(guī)定值差值判斷差值是否超過規(guī)定值的無超過有一個以上超過計算A328（校正）用A328計算03%－15%－3%第二法第二法VitAD膠丸中VitA的含量測定01精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項下（平均裝量0.08262g/丸）的內容物0.2399g至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為02A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299求本品中維生素A的含量？A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====適用于維生素A醇（等吸收度法）第一法無法消除雜質干擾時用此法[皂化法、6/7A法]第二法水溶性脂溶性是01取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定判斷max是否在323～327nm之間計算03否02是1否2取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定判斷A300/A325是否大于0.73計算A325(校正)303%3%三氯化銻比色法（二）優(yōu)點簡便快速λmax618nm～620nm標準曲線法缺點呈色不穩(wěn)定（5~10s內）水分干擾與標準曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)第二節(jié)維生素B1HClCl-維生素B12為水溶性維生素，過量可直接通過尿液排出體外；注射過量的維生素B12可出現哮喘、蕁麻疹、濕疹、面部浮腫、寒顫等過敏反應，也可能相發(fā)神經興奮、心前區(qū)痛和心悸。（一）溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UV共軛雙鍵λmax=246nm結構與性質一、嘧啶環(huán)——伯氨01噻唑環(huán)——季銨02可與酸成鹽03與生物堿↓→↓04含量測定——非水堿量法0506硫色素反應0708堿性09鑒別試驗ChP二、（一）硫色素反應硫色素＋2HVitB1H+H+H+H+（二）沉淀反應（三）S元素反應Cl-反應其他反應三、含量測定喹那啶紅－亞甲藍（紫紅→天藍）（一）非水溶液滴定法（二）UV法片劑、注射劑=421（每片）相當于標示量的%=A=ECL規(guī)格g/片g/100mlgChP01規(guī)格g/ml02ml（每ml）相當于標示量的%=（三）硅鎢酸重量法重量法特點1、2、原理3479.222×337.27測定方法

取本品約50mg，精密稱定，加水50ml溶解后，加鹽酸2ml，煮沸，立即滴加硅鎢酸試液4ml，繼續(xù)煮沸2分鐘，用80℃恒重的垂熔玻璃坩堝濾過，沉淀先用煮沸的鹽酸溶液（1→20）20ml分次洗滌，再用水10ml洗滌1次，最后用丙酮洗滌2次，每次5ml，在80℃干燥至恒重，精密稱定，所得重量與0.1939相乘，即得3、0102例精密稱取本品0.0519g，加水50ml溶解，加鹽酸2ml煮沸，立即滴加硅鎢酸試液4ml，繼續(xù)煮沸2分鐘，用80℃恒重的垂熔玻璃坩堝濾過，沉淀先用煮沸的鹽酸溶液（1→20）20ml分次洗滌，再用水10ml洗滌1次，后用丙酮洗滌2次，每次5ml。在80℃干燥至恒重，稱得沉淀重量為0.2557g。求本品的含量按干燥品計算為多少？(本品干燥失重項下測定結果為3.73%)A.取樣量±50mg提高靈敏度B.80℃保持4個H2OC.HCl增大沉淀顆粒D.硅鎢酸：VitB1=8：1

使沉淀完全E.硅鎢酸邊攪拌邊緩慢加入增大沉淀顆粒實驗條件4、硫色素熒光法1、（四）NaOH原理方法與計算激發(fā)波長365nm發(fā)射波長435nm2、SdAb對照液供試液特點3、（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產物不干擾，適用于體液分析第三節(jié)維生素CL－抗壞血酸010304020506大劑量使用維生素C，可在體內部分轉變?yōu)椴菟?，顯著增加尿中草酸鹽或尿酸鹽的排泄而形成腎結石。大劑量維生素C可導致部分婦女不孕。孕婦服用過量維生素C可能會影響胎兒的發(fā)育，易引起流產和死胎。研究表明，處于生長時期的小兒長期服用過量維生素C容易患骨骼疾病。長期大量服用維生素C后，一旦突然停藥，仍可出現壞血病癥狀。長期大量使用維生素C可使血栓發(fā)生率明顯增加，同時也可影響血小板的結構和功能。生素C還會破壞食物中的維生素B12，而致維生素B12缺乏。1、易溶于水2、水溶液呈酸性結構與性質一、（一）溶解性二烯醇結構二酮基結構二烯醇結構（二）強還原性有活性有活性無活性結構與糖類相似△糖類的顯色反應50℃（三）具糖的性質（四）C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.57酸性一元酸L(+)－抗壞血酸活性最強手性C（C4、C5）（五）光學活性**與堿反應logo（六）水解反應UV特征（七）與氧化劑的反應（一）鑒別試驗二、1、與AgNO3反應2、與2，6-二氯靛酚反應(ChP2000)氧化型玫瑰紅色還原型藍色OHˉ(ChP2000)（玫瑰色）（無色）01USP02與KMnO4反應3、與堿性酒石酸銅反應糖類的反應（二）或鹽酸50℃吡咯USP（藍色）(糠醛)（戊糖）50℃(吡咯)UV（三）BP0.01mol/LHCl溶液的澄清度與顏色：有色雜質分光光度法0102鐵、銅離子：原子吸收分光光度法三、雜質檢查含量測定指示劑淀粉指示液原理1、碘量法（一）四、H+2、

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6方法（1）酸性環(huán)境d.HCl（2）新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度討論4、（3）立即滴定趕走水中O2減少O2的干擾（4）附加劑干擾的排除Na2SO3NaHSO3Na2S2O3Na2S2O5注射劑——抗氧劑——片劑——滑石粉——過濾丙酮甲醛CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a2，6-二氯靛酚鈉滴定法法（二）USPJP原理1、自身指示終點法方法2、穩(wěn)定VitC（2）快速滴定2min內（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc防止其他還原性物質干擾（3）剩余比色測定（定量過量）（測剩余染料）討論3、（4）缺點需經常標定貯存≤一周不穩(wěn)定干擾多氧化力較強HPLC法（三）1、HPLC的優(yōu)點靈敏度高選擇性高分離分析同步微量分析干擾少

快速01HPLC法分離VitC常用方法及測定對象對象制劑、生物樣品、果汁方法離子交換色譜法離子對色譜法分配色譜法（正、反相）020304血、尿、組織、細胞等苯并－二氫吡喃醇第三節(jié)維生素E維生素E防治心腦血管疾病、防癌抗癌和抗衰老。01適量服用維生素E有抗癌作用，但如果攝入過量的維生素E反而有誘發(fā)癌癥的可能性。02服用維生素E不宜超過每日3次，每次100毫克。03名稱R1R2相對活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***生物效價右旋體：消旋體=1.4：1001（天然品）02（合成品）03dl－α－生育酚醋酸酯04結構與性質一、苯環(huán)+二氫吡喃環(huán)+飽和烴鏈1、易溶于有機溶劑，不溶于水2、UV3、酯鍵易水解△75℃15′（一）硝酸反應橙紅色鑒別二、（橙紅色）生育紅生育酚HNO3強氧化劑取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75℃加熱15分鐘，溶液應顯橙紅色。（二）三氯化鐵－聯吡啶反應△[O]生育酚對-生育醌[O]弱氧化劑紅色（三）=41.0～45.5λmax=284nmλmin=254nm0.01%無水乙醇中UV法維生素EUV圖薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）VitERf

=0.7TLC法（四）游離生育酚硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黃→灰紫）

檢查三、原理（一）試劑（二）例取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過1.0ml。（M生育酚=430.8）（三）限量≤2.15％消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）≤1.0ml設：應消耗硫酸鈰液≤Vml 01×1.0＝實際濃度×V若硫酸鈰液濃度不是0.01000mol/L，應重新計算硫酸鈰的消耗量01030204藥典規(guī)定含量測定四、GC法（一）GC特點1、選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強→衍生化易受樣品蒸氣壓限制VitE測定的色譜條件載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測器→氫火焰離子化檢測器(FID)內標→正三十二烷

n≥500R≥22、內標法加校正因子內標法是樣品中不存在的物質與被測組分峰靠近能與各組分完全分離與被測組分的量接近內標物供試液（樣品+內標）對照液（對照+內標）校正因子：實際工作中的計算方法例內標液取正三十二烷加正己烷溶解并稀釋成1.0mg/ml溶液對照液精密稱取VitE對照品0.2011g

置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內標液10ml，密塞，振搖使溶解，取

1~3ul注入GC儀，測定，計算供試液精密稱取供試品0.1998g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內標液

10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul

注入GC儀，測定，計算對照液本品含C31H52O3應為96.0~102.0%0.373供試液0.368BPGC

內標正三十二烷

R≥1.4USPGC

內標十六酸十六醇酯

R≥1.0JPHPLC

外標dl－α－生育酚

R≥1.4利用生育酚的易氧化性還原型氧化型二苯胺（亮黃→灰紫）△原理1、鈰量法（二）指示劑2、防止Ce(SO4)2的水解減慢生育酚被O2氧化速度C、酸性條件Ce(SO4)2易溶于水生育酚易溶于醇B、溶劑分子量較大，反應慢易被O2氧化A、反應速度H2SO4討論3、含量計算4、MVitE=472樣品→dl－α－生育酚固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相→甲醇-水（49：1）檢測波長→292nmR＞2.6RSD≤0.8%JP-RP-HPLC法（外標法）（三）RP-HPLC法（外標法）（四）測定對象→血清中VitA和VitE固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相→甲醇-水（96：4）檢測波長→8′前330nm8′后292nm第五節(jié)維生素D01維生素D2－骨化醇02結構與性質03維生素D3－膽骨化醇維生素D人每日需要量很少，如每日攝入量過多，或連續(xù)數次攝入(口服或肌注)大劑量，可出現過量甚至中毒癥狀，嚴重者可危及生命。嬰兒使用維生素D過多，可致發(fā)育遲緩，面容變形，甚至腎衰死亡，日劑量超過1.25毫克(50000國際單位)可能使正常人或兒童發(fā)生血鈣增高癥，引起全身性血管鈣化、腎鈣質沉淀及軟組織鈣化而致高血壓，嚴重者最終可死于腎功能衰竭.01開環(huán)的甾體：具有甾類化合物的顯色反應，可用于鑒別。02手性碳原子：具有旋光性，可用于鑒別。03多烯：可進行紫外檢測。性質：脂溶性不穩(wěn)定性旋光性顯色反應紫外吸收特性二、鑒別試驗1.顯色反應三氯化銻反應橙紅色漸變粉紅三氯化鐵反應橙黃色二氯丙醇和乙酰氯反應綠色2.比旋度鑒別維生素D2維生素D3溶劑

濃度比旋度值無水乙醇無水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5°～+107.5°+105°～+112°注意事項：應于容器開啟30分鐘內取樣，在溶液配制后30分鐘內測定。TLC、HPLC、制備衍生物測熔點4.其他方法：以96%乙醇為溶劑，加乙醇和85%硫酸，D2顯紅色，在570nm處有最大吸收，D3顯黃色，在495nm處有最大吸收。3.區(qū)別反應：貳壹維生素D2中麥角甾醇的檢查：加洋地黃皂苷溶液，混合，放置18h不得發(fā)生渾濁或沉淀。01前維生素D的光照產物02三、雜質檢查含量測定方法中國藥典（2000年版）采用正相高效液相色譜法(NP-HPLC）測定維生素D的含量，定量方法為內標法，內標物為鄰苯二甲酸二甲酯。根據樣品的具體情況按以下三個方法進行分析。0102第一法：用于無維生素A醇及其它雜質干擾的情況，步驟如下：系統(tǒng)適用性試驗：測定重復性和分離度。固定相：硅膠流動相：正己烷-正戊醇（997：3）ABC含量測定：2,6-二叔丁基對甲酚＋加熱測定校正因子：第二法：用于有雜質的干擾的情況，步驟如下：

1．皂化處理：皂化、乙醚提取、洗滌提取液、蒸除乙醚、制備供試液A。

2．凈化：供試液A經液相色譜分離，準確收集含有維生素D及前維生素D混合物的全部流出液，制備成供試液B。

固定相：ODS

流動相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）

3．含量測定：取供試液B按第一法測定。

第三法：用于經第二法處理后仍有雜質的干擾的情況。步驟如下：制備供試液：取供試液A，凈化，水浴加熱，正已烷溶解，得供試液C。

制備對照液：對照品儲備液（異辛烷溶解）：稀釋、加熱。含量測定：在第一法的色譜條件下，交替精密進樣對照液和供試液，按外標法定量。A采用的是正相高效液相色譜法B測定過程中應避免VitD的氧化C皂化應劇烈振搖，水浴溫度≤40℃，提取溶劑大多采用己烷或戊烷以消除苯的毒性D若供試品中沒有VitA醇及其它雜質干擾時，可以直接進樣分析E注意色譜系統(tǒng)適用性樣品VitD、前VitD的制備方法Discussion例多種維生素片中VitA、VitB1、VitB2、VitB6、煙酰胺、VitC、VitE的含量測定色譜柱ODS流動相A、水-甲醇（4：1）B、甲醇（梯度洗脫）抗氧劑二巰基丙烷磺酸鈉水溶性維生素離子對色譜法（樟腦磺酸）內標法+校正因子內標物——苯酚脂溶性維生素外標法108．在三氯醋酸或鹽酸存在下，經水解、脫羧、失水后，加入吡咯即產生藍色產物的藥物應是氯氮卓維生素A普魯卡因鹽酸嗎啡維生素C88．中國藥典（2000年版）采用以下何法測定維生素E含量酸堿滴定法氧化還原法紫外分光光度法氣相色譜法非水滴定法79．中國藥典（2000年版）采用氣相色譜法測定維生素E含量，內標物質為正二十六烷正三十二烷正二十二烷正三十烷正三十六烷77.下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍色熒光的是維生素A維生素B1維生素C維生素D維生素E77．既具有酸性又具有還原性的藥物是維生素A咖啡因苯巴比妥氯丙嗪維生素C99m：132.維生素C的鑒別反應，常采用的試劑有堿性酒石酸銅硝酸銀碘化鉍鉀乙酰丙酮三氯醋酸和吡咯99m：84.測定維生素C注射液的含量時，在操作過程中要加入丙酮，這是為了保持維生素C的穩(wěn)定增加維生素C的溶解度使反應完全加快反應速度消除注射液中抗氧劑的干擾85.能發(fā)生硫色素特征反應的藥物是維生素A維生素B1維生素C維生素E煙酸97：81．使用碘量法測定維生素C的含量,已知維生素C的分子量為176.13，每1ml碘滴定液

(0.1mol/L)相當于維生素C

的量為

A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mg97：[121—125]（99：[121—125]）可發(fā)生以下反應或現象的藥物為

A.維生素B1B.維生素CC.兩者均能D.兩者均不能

121.與碘化汞鉀生成黃色沉淀

122.麥芽酚反應

123.在乙醚中不溶

124.與2,6-二氯靛酚反應使顏色消失

125.硫色素反應ADCBA115．維生素A的鑒別試驗為三氯化鐵反應硫酸銻反應2,6-二氯靛酚反應三氯化銻反應間二硝基苯的堿性乙醇液反應中國藥典（2000年版）規(guī)定維生素A的測定采用紫外分光光度法（三點校正法），此法又分為等波長差法等吸收度法6/7A法差示分光法雙波長法維生素E的鑒別試驗有硝酸氧化呈色反應堿性水解后加三氯化鐵乙醇液與2,2-聯吡啶乙醇液呈色反應硫色素反應硫酸-乙醇呈色反應Marquis反應123456下面哪些描述適用于維生素A分子具有長二烯醇側鏈，易被氧化具有較長的全反式共軛多烯結構含酯鍵，經水解后產生苯并二氫吡喃衍生物，易被氧化與三氯化銻的無醇氯仿液中呈不穩(wěn)定蘭色，很快轉變?yōu)樽霞t色樣品用無水乙醇溶解后，加硝酸加熱后，呈橙紅色

維生素A與

反應即顯藍色，漸變成紫紅色；反應需在

條件下進行。（）維生素A