專題32基因工程（串講）（原卷版）

專題32基因工程考點分布重點難點備考指南1.基因工程的基本工具2.基因工程的基本操作及其應(yīng)用3.蛋白質(zhì)工程及應(yīng)用1.基因工程的誕生2.基因工程的原理及技術(shù)（含PCR技術(shù)）3.基因工程的應(yīng)用4.蛋白質(zhì)工程理解掌握質(zhì)粒的類型和特點。理解并掌握基因工程用的兩種酶的作用。理解掌握基因工程的操作步驟和注意事項。掌握蛋白質(zhì)工程的流程考點一基因工程的操作工具1．基因工程的概念基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計，并通過體外和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在水平上進(jìn)行設(shè)計和施工的，因此又叫做DNA重組技術(shù)。基因工程的變異原理是。2．基因工程的基本工具(1)限制性內(nèi)切核酸酶（簡稱）。主要來自生物。具有性，斷裂特定的兩個核苷酸之間的。產(chǎn)生末端或末端①原核生物中存在限制酶的意義是什么？。②限制酶來源于原核生物，為什么不能切割自己的DNA分子？。(2)DNA連接酶①作用：將限制酶切割下來的DNA片段拼接成新的DNA分子，恢復(fù)被限制酶切開的兩個脫氧核苷酸之間的。②類型常用類型E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源T4噬菌體特點只縫合末端縫合DNA連接酶和DNA聚合酶不是一回事。原因是：①DNA連接酶連接的是，而DNA聚合酶是把單個的連接到已有的DNA片段上。②起作用時需要以一條DNA鏈為模板，而不需要模板。(3)載體①種類：、、等。②質(zhì)粒的特點：有、能、有特殊的。③運(yùn)載體的作用：攜帶外源DNA片段進(jìn)入受體細(xì)胞。1．與DNA有關(guān)的酶的比較名稱作用部位作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵將DNA切成兩個片段DNA連接酶磷酸二酯鍵將兩個DNA片段連接為一個DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯鍵將單個脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端DNA（水解）酶磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個脫氧核苷酸解旋酶堿基對之間的氫鍵將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈2.圖解限制酶的選擇原則(1)不破壞目的基因原則：如圖甲中可選擇PstⅠ，而不選擇SmaⅠ。(2)保留標(biāo)記基因原則：質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中不選擇SmaⅠ。(3)確保出現(xiàn)相同黏性末端原則：通常選擇與切割目的基因相同的限制酶，如圖甲中PstⅠ；為避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶。載體上標(biāo)記基因的作用載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒有抵抗相關(guān)抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素，所以在受體細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入該種抗生素就可以只保留轉(zhuǎn)入載體的受體細(xì)胞，原理如下圖所示：典例1.下列有關(guān)基因工程中載體的說法，正確的是()A．在進(jìn)行基因工程操作中，被用作載體的質(zhì)粒都是天然質(zhì)粒B．所有的質(zhì)粒都可以作為基因工程中的載體C．質(zhì)粒是一種獨立于細(xì)菌染色體外的鏈狀DNA分子D．作為載體的質(zhì)粒DNA分子上應(yīng)有對重組DNA進(jìn)行鑒定和選擇的標(biāo)記基因典例2.如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源。該酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達(dá)。已知當(dāng)甲醇作為唯一碳源時，該酵母菌中AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)[5′AOX1和3′AOX1(TT)分別是基因AOX1的啟動子和終止子]。請分析回答下列問題：(1)為實現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該選擇切割質(zhì)粒，并在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上，這樣設(shè)計的優(yōu)點是。(2)酶切獲取HBsAg基因后，需用將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取。(3)步驟3中應(yīng)選用限制酶來切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA，然后再將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。(4)為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入以便篩選；若要檢測轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，可以用方法進(jìn)行檢測。(5)轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入以維持其生活，同時誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)?？键c二基因工程的基本操作程序1．目的基因的獲取(1)目的基因：主要指的基因，也可以是一些具有作用的因子。(2)獲取目的基因的方法利用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增目的基因。原理：。過程第一步：變性加熱至90℃以上，DNA解鏈為單鏈；第二步：冷卻至50℃左右，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步：加熱至72℃左右，Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。如此重復(fù)循環(huán)多次。2.——基因工程的核心①目的：使目的基因，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。②基因表達(dá)載體的組成：目的基因、復(fù)制原點、啟動子、終止子、標(biāo)記基因。啟動子≠起始密碼子，終止子≠終止密碼子（1）啟動子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端。它是的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。（2）終止子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，位于基因的尾端。作用是。（3）起始密碼子和終止密碼子位于上，分別控制翻譯過程的。3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類植物動物微生物常用方法轉(zhuǎn)化法技術(shù)感受態(tài)細(xì)胞法受體細(xì)胞原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上→表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動物處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子（4）目的基因的檢測與鑒定利用技術(shù)檢測染色體DNA上是否插入了目的基因和是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，用，檢測目的基因是否翻譯成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。1.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。一個基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、啟動子、終止子及標(biāo)記基因等。圖中抗生素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因，鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。2.PCR技術(shù)相關(guān)分析(1)關(guān)于引物的2點提醒：①引物是一小段單鏈的DNA或RNA，作為新子鏈的合成起點，只能結(jié)合在母鏈的3′端；②只有通過引物，DNA才可以開始進(jìn)行復(fù)制。(2)PCR技術(shù)和DNA復(fù)制的比較3．基因表達(dá)載體構(gòu)建過程若考慮兩兩相連，則DNA連接酶連接DNA片段會出現(xiàn)三種情況：目的基因與目的基因的連接、目的基因與質(zhì)粒的連接、質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接，需篩選出重組質(zhì)粒。1.目的基因的插入位點不是隨意的：基因表達(dá)需要啟動子與終止子的調(diào)控，所以目的基因的插入位點應(yīng)在啟動子與終止子之間。2．受體細(xì)胞選擇時需注意：要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素必須用真核生物酵母菌（需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌）；一般不用支原體，因為它營寄生生活；一定不能用哺乳動物成熟的紅細(xì)胞，因為它無細(xì)胞核，不能合成蛋白質(zhì)。典例1.土壤農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時，Ti質(zhì)粒上的T－DNA片段轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞的基因組中。利用農(nóng)桿菌以Ti質(zhì)粒作為載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因，下列相關(guān)敘述正確的是()A．目的基因應(yīng)插入T－DNA片段外，以防止破壞T－DNAB．用Ca2＋處理農(nóng)桿菌，以利于其侵染植物細(xì)胞C．Ti質(zhì)粒是一種環(huán)狀DNA分子，屬于細(xì)菌的擬核DNAD．T－DNA片段有利于介導(dǎo)外源DNA整合到植物細(xì)胞的染色體上典例2.乙肝病毒是一種DNA病毒。中國的乙肝病毒攜帶者約占總?cè)丝诘?0%。我國科學(xué)家通過基因工程生產(chǎn)出乙型肝炎病毒疫苗，為預(yù)防乙肝提供了有力的保障。回答下列問題：（1）乙肝病毒專一侵染肝細(xì)胞的原因是________________________________________。（2）乙肝病毒的基因組可編碼的蛋白質(zhì)及功能如下：Core蛋白是外殼蛋白；Pre－core與抑制宿主的免疫反應(yīng)有關(guān)；X蛋白與病毒復(fù)制有關(guān)；S蛋白是病毒的包膜蛋白，與病毒進(jìn)入細(xì)胞有關(guān)。通過基因工程生產(chǎn)的乙肝疫苗的有效成分是上述病毒蛋白中的____________________。（3）通過基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗的過程如圖所示：乙肝病毒eq\o(→,\s\up11(①),\s\do4(分離))有關(guān)基因eq\o(→,\s\up11(②),\s\do4(導(dǎo)入))細(xì)菌eq\f(③,發(fā)酵)大量生產(chǎn)疫苗a．若要獲得大量的目的基因，可采用PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，該技術(shù)中使用的引物有________種，其作用是________________________。b．在①②過程中需使用的工具酶是________________。②過程中常用的載體是________。c．為提高②過程的轉(zhuǎn)化效率，常采用的方法是______________________________。（4）使用酵母菌作為受體菌生產(chǎn)乙肝疫苗的效果更好，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角度分析，原因是________________________________________________________________________?？键c三基因工程的應(yīng)用和蛋白質(zhì)工程1.基因工程的應(yīng)用表現(xiàn)方面具體內(nèi)容農(nóng)牧業(yè)方面①轉(zhuǎn)基因抗蟲植物；②轉(zhuǎn)基因抗病植物；③轉(zhuǎn)基因抗除草劑植物；④利用轉(zhuǎn)基因改良植物品質(zhì)⑤提高動物的生長速率⑥改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域①生產(chǎn)藥物②建立器官移植的工廠食品工業(yè)方面利用基因工程菌生產(chǎn)食品工業(yè)用酶、氨基酸、維生素等；將牛凝乳酶的基因?qū)胛⑸铮a(chǎn)凝乳酶；2．蛋白質(zhì)工程(1)概念①基礎(chǔ)：蛋白質(zhì)分子的及其與的關(guān)系。②手段：改造基因或基因合成。③結(jié)果：對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行或制造出。1.對天然蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，你認(rèn)為應(yīng)該直接對蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作，還是通過對基因的操作來實現(xiàn)？原因是什么？應(yīng)該通過對基因的操作來實現(xiàn)對天然蛋白質(zhì)的改造。主要原因有：①蛋白質(zhì)具有十分復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)，基因的結(jié)構(gòu)相對簡單，容易改造；②改造后的基因可以遺傳給下一代，被改造的蛋白質(zhì)無法遺傳。2.蛋白質(zhì)工程與基因工程的比較（1）區(qū)別項目蛋白質(zhì)工程基因工程過程預(yù)期蛋白質(zhì)的功能→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列獲取目的基因→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定實質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的生物類型和生物產(chǎn)品結(jié)果可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)（2）聯(lián)系①蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程。②基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造。(1)青霉素是青霉菌產(chǎn)生的，不是通過基因工程產(chǎn)生的。(2)動物基因工程主要是為了改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)，而不是為了產(chǎn)生體型巨大的個體。(3)原核生物的基因(如抗蟲基因)可以作為真核生物(棉花)的目的基因。(4)Bt毒蛋白基因產(chǎn)生的Bt毒蛋白只在某些昆蟲腸道的堿性環(huán)境中才能表現(xiàn)出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也無特異性受體，因此，Bt毒蛋白不會對人畜產(chǎn)生危害。典例1.紅細(xì)胞生成素(EPO)是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種激素物質(zhì)，是當(dāng)今最成功的基因工程藥物，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，目前臨床使用的紅細(xì)胞生成素主要來自基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素(rhEPO)。其簡要生產(chǎn)流程如圖，下列相關(guān)敘述正確的是()A．過程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA連接酶B．構(gòu)建的重組表達(dá)載體中終止子的作用是終止翻譯過程C．檢測重組細(xì)胞是否表達(dá)出rhEPO常用抗原—抗體雜交技術(shù)D．用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)EPO可將人EPO基因?qū)氩溉閯游矬w細(xì)胞獲得典例2.甜蛋白是一種高甜度的特殊蛋白質(zhì)。為了改善黃瓜的品質(zhì)，科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將一種甜蛋白基因成功導(dǎo)入黃瓜細(xì)胞，得到了轉(zhuǎn)基因植株?；卮鹣铝袉栴}：(1)用農(nóng)桿菌感染時，應(yīng)優(yōu)先選用黃瓜(填“受傷的”或“完好的”)葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是。(2)若在轉(zhuǎn)基因黃瓜中檢測到這種甜蛋白，則表明該重組質(zhì)粒中的已轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中且能夠表達(dá)；用該轉(zhuǎn)基因黃瓜的某一植株與一株非轉(zhuǎn)基因植株雜交，發(fā)現(xiàn)子代中含甜蛋白個體數(shù)與不含甜蛋白個體數(shù)之比為1∶1，則說明甜蛋白基因已經(jīng)整合到(填“核基因組”“線粒體基因組”或“葉綠體基因組”)中。(3)假設(shè)某種轉(zhuǎn)基因作物因為受到病毒感染而減產(chǎn)，若要以該轉(zhuǎn)基因作物為材料獲得脫毒苗，應(yīng)選用作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。(4)通常，基因工程操作主要有4個步驟，即目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。因此，基因工程的含義可概括為。1．限制酶是一類酶，而不是一種酶。2．將一個基因從DNA分子上切割下來，需要切兩處，同時產(chǎn)生四個黏性末端或平末端。3．不同DNA分子用同一種限制酶切割，產(chǎn)生的末端都相同，同一個DNA分子用不同的限制酶切割，產(chǎn)生的末端一般不相同。4．限制酶切割位點應(yīng)位于標(biāo)記基因之外，不能破壞標(biāo)記基因，以便進(jìn)行檢測。1.（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）紫外線引發(fā)的DNA損傷，可通過“核苷酸切除修復(fù)（NER）”方式修復(fù)，機(jī)制如圖所示。著色性干皮癥（XP）患者的NER酶系統(tǒng)存在缺陷，受陽光照射后，皮膚出現(xiàn)炎癥等癥狀。患者幼年發(fā)病，20歲后開始發(fā)展成皮膚癌。下列敘述錯誤的是（）

A．修復(fù)過程需要限制酶和DNA聚合酶B．填補(bǔ)缺口時，新鏈合成以5’到3’的方向進(jìn)行C．DNA有害損傷發(fā)生后，在細(xì)胞增殖后進(jìn)行修復(fù)，對細(xì)胞最有利D．隨年齡增長，XP患者幾乎都會發(fā)生皮膚癌的原因，可用突變累積解釋2.（2023·湖南·統(tǒng)考高考真題）鹽堿脅迫下植物應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的H2O2對細(xì)胞有毒害作用。禾本科農(nóng)作物AT1蛋白通過調(diào)節(jié)細(xì)胞膜上PIP2s蛋白磷酸化水平，影響H2O2的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，如圖所示。下列敘述錯誤的是（

）

A．細(xì)胞膜上PIP2s蛋白高磷酸化水平是其提高H2O2外排能力所必需的B．PIP2s蛋白磷酸化被抑制，促進(jìn)H2O2外排，從而減輕其對細(xì)胞的毒害C．敲除AT1基因或降低其表達(dá)可提高禾本科農(nóng)作物的耐鹽堿能力D．從特殊物種中發(fā)掘逆境脅迫相關(guān)基因是改良農(nóng)作物抗逆性的有效途徑3.（2023·湖北·統(tǒng)考高考真題）用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯誤的是（）

A．若用HindⅢ酶切，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因C．若用SphⅠ酶切，可通過DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否D．若用SphⅠ酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落4.（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如圖甲所示。實驗得到能正常表達(dá)兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示。

下列敘述正確的是（）A．Gata3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達(dá)B．翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白C．2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3GFP基因純合子D．若用引物1和引物3進(jìn)行PCR，能更好地區(qū)分雜合子和純合子5.（2023·湖南·統(tǒng)考高考真題）基因檢測是診斷和預(yù)防遺傳病的有效手段。研究人員采集到一遺傳病家系樣本，測序后發(fā)現(xiàn)此家系甲和乙兩個基因存在突變：甲突變可致先天性耳聾；乙基因位于常染色體上，編碼產(chǎn)物可將葉酸轉(zhuǎn)化為N5甲基四氫葉酸，乙突變與胎兒神經(jīng)管缺陷（NTDs）相關(guān)；甲和乙位于非同源染色體上。家系患病情況及基因檢測結(jié)果如圖所示。不考慮染色體互換，回答下列問題：

(1)此家系先天性耳聾的遺傳方式是。11和12生育育一個甲和乙突變基因雙純合體女兒的概率是。(2)此家系中甲基因突變?nèi)缦聢D所示：正?；騿捂溒?'ATTCCAGATC……（293個堿基）……CCATGCCCAG3'突變基因單鏈片段5'ATTCCATATC……（293個堿基）……CCATGCCCAG3'研究人員擬用PCR擴(kuò)增目的基因片段，再用某限制酶（識別序列及切割位點為

）酶切檢測甲基因突變情況，設(shè)計了一條引物為5′GGCATG3'，另一條引物為（寫出6個堿基即可）。用上述引物擴(kuò)增出家系成員Ⅱ1的目的基因片段后，其酶切產(chǎn)物長度應(yīng)為bp（注：該酶切位點在目的基因片段中唯一）。1，NTDs生育史女性補(bǔ)充4mg.d1。經(jīng)基因檢測胎兒（Ⅲ2）的乙基因型為/，據(jù)此推薦該孕婦（Ⅱ1）葉酸補(bǔ)充劑量為mg.d1。6.（2023·山東·高考真題）科研人員構(gòu)建了可表達(dá)JV5融合蛋白的重組質(zhì)粒并進(jìn)行了檢測，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖甲所示，其中V5編碼序列表達(dá)標(biāo)簽短肽V5。

(1)與圖甲中啟動子結(jié)合的酶是。除圖甲中標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，作為載體，質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有（答出2個結(jié)構(gòu)即可）。(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒后，為了確定J基因連接到質(zhì)粒中且插入方向正確，需進(jìn)行PCR檢測，若僅用一對引物，應(yīng)選擇圖甲中的引物