DB41T 873-2013 櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)范

DB41Technicalspecificationforpropagatiomofvirus-freeseedingofcherry河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙改榮、李明、劉聰利、黃貞光、1櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)范NY/T328蘋果無病毒苗木繁育不攜帶李矮縮病毒(Prunedwarfvirus,PDV)、李屬壞死環(huán)斑病毒(Prunusnecroticringspotvirus,CGRMV）、櫻桃病毒A(CherryvirusA,CVA)、櫻桃壞死銹斑病毒(CCNRMV)、蘋果褪綠葉斑病毒(Applechloroticleafspotviru2應(yīng)經(jīng)有資質(zhì)的檢測機構(gòu)檢測認證，確定不帶上每株編號、掛牌標(biāo)識，繪制定植圖。加強肥水管理，保證樹勢無病毒原種圃常用工具要專用，剪枝剪等修剪工具每株使用前用70%酒精溶液消毒。工作人員進4無病毒母本圃建立4.1無病毒母本圃圃地選擇4.2無病毒母本圃設(shè)計規(guī)劃4.3無病毒母本圃苗木來源4.4無病毒母本圃定植無病毒品種采穗圃和砧木采種圃株行距為1m～2m×2m～4m；無性系砧木圃株行距為0.5m~4.5無病毒母本圃管理4.5.1加強母本圃肥水管理和病蟲害防治，保證4.5.2無病毒無性系砧木圃的樹體，應(yīng)每年短截更新，其方法與普通無性系砧木母株相同。不允許在4.5.3無病毒母本圃常用工具要專用，剪枝剪等修剪工具每35.1苗圃建立各級道路、排灌系統(tǒng)，并統(tǒng)籌安排。平整土地，改良土壤，土壤消毒及增施5.2實生砧木苗培育5.3無性系砧木苗培育株編號分別繁殖。繪制各品種及株系分布圖，田間插牌標(biāo)記，不得壓條、分株繁殖法組織培養(yǎng)法扦插繁殖法5.4嫁接在陰涼處立即剪去葉片。按品種扎成捆，掛牌標(biāo)記母株編號。接穗存放同普通櫻桃接穗。5.4.2嫁接應(yīng)分品種及不同母株分別嫁接。采用帶木質(zhì)部芽接法嫁接，嫁接位置距地面10cm～20cm處。嫁4接后應(yīng)按品種及母株編號分別記載。補接時，應(yīng)與原來嫁接的接穗來源相5.5苗圃管理綠葉斑病毒可以采用木本指示植物檢測法進能獲得抗血清的櫻桃病毒可以采用A蛋白酶聯(lián)免檢測。每2年對每株母本樹進行一次病毒檢測。7.4.1每年在生長季節(jié)對無病毒苗木進行兩次全面觀察，發(fā)現(xiàn)有病毒癥狀（參見56A.3解剖鏡放置在超凈臺上，用棉球蘸消毒酒精擦拭手及臺A.4將外植體接種于接種培養(yǎng)基（表A.1、表A.2）上，2527NAA----8定32℃,白晝溫度每天增加1℃,達到37℃時，保持在白晝37℃16h/d、黑暗32℃8h/d、濕9于溫室內(nèi)，溫室溫度白天20℃~28℃,夜間9℃~15℃。Na2CO30.159gNaHCO30.294gNaClNaH2PO4·12H2OK2HPO4NaN3pH7.4gggggPBST+2%聚乙烯吡咯烷酮+0.2%卵蛋白(或牛血清蛋白BSA)NaH2PO4·12H2O8.689gD.1.7終止液（2mol/LH2SO4100mL）D.2.3加抗原樣品，取櫻桃嫩葉或一年生休眠枝條內(nèi)皮白對照。4℃冰箱過夜，沖洗方法同D.2.1D.2.7終止反應(yīng)：每孔加25μL2moD.2.8目測比色后，用酶標(biāo)光度計測定讀數(shù)，波長492nm，OD值大于2倍陰性對照值（即P/N>2）E.1十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)溶液配制2帶毒性；與陰性對照ddH2O一樣，未觀察到目的條帶的樣品為陰性，無病毒；與陰性對照無病毒PNRSVACGCGCAAAAGTGTCGAAATPNRSV-RPDV-RATGGATGGGATGGATAAAATAAGTCTACAGGCTATTTATTATAARPII-RF.1李矮縮病毒（Prunedwarfvirus,PDV）F.2李屬壞死環(huán)斑病毒（PrunusnecroticringspotvirF.3櫻桃小果病毒（Littlecherryvirus,影響的果實呈現(xiàn)暗紅色，三角狀，口味下降，果實成熟過晚等F.4櫻桃綠環(huán)斑駁病毒（CherrygreenringmottleF5