超敏反應(yīng)及臨床檢測(cè)（免疫學(xué)檢驗(yàn)課件）

Ⅰ型超敏反應(yīng)

超敏反應(yīng)（hypersensitivity）又稱變態(tài)反應(yīng)，是指機(jī)體再次接受相同抗原刺激后，發(fā)生的以組織細(xì)胞損傷或生理功能紊亂為主的特異性免疫應(yīng)答。

變應(yīng)原（allergen）：引起超敏反應(yīng)的抗原稱之為變應(yīng)原。

Ⅰ型超敏反應(yīng)及臨床檢測(cè)Ⅰ型超敏反應(yīng)(速發(fā)型超敏反應(yīng))Ⅲ型超敏反應(yīng)(免疫復(fù)合物型超敏反應(yīng))Ⅳ型超敏反應(yīng)(遲發(fā)型超敏反應(yīng))Ⅱ型超敏反應(yīng)(細(xì)胞毒型超敏反應(yīng))分類

I型超敏反應(yīng)及臨床檢測(cè)

發(fā)生快，消退快

IgE抗體介導(dǎo),無補(bǔ)體參與發(fā)病有明顯個(gè)體差異和遺傳傾向以機(jī)體生理功能紊亂為主要表現(xiàn)而不發(fā)生嚴(yán)重組織細(xì)胞損傷特點(diǎn)抗原（變應(yīng)原）：花粉、塵螨、真菌、動(dòng)物皮屑、異種血清、藥物、昆蟲毒液、寄生蟲、牛奶、魚蝦、蛋類（一）參與成分抗體：IgE一、I型超敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制細(xì)胞：1.肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞表面均具有FcRI（高親和力）2.嗜酸性粒細(xì)胞在一些細(xì)胞因子如IL-3、IL-5、GM-CSF激活后，可表達(dá)高親和力的FcRI效應(yīng)物質(zhì)：分為兩類儲(chǔ)備的物質(zhì)：組胺、激肽原酶（緩激肽）引起即刻（或速發(fā)相）反應(yīng)新合成的物質(zhì)：白三烯、前列腺素D2、PAF

引起晚期（遲緩相）反應(yīng)作用：平滑肌收縮、毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加，腺體分泌增多、嗜酸性粒細(xì)胞趨化I型超敏反應(yīng)的發(fā)生過程：致敏階段:

變應(yīng)原進(jìn)入機(jī)體后，誘導(dǎo)變應(yīng)原特異性B細(xì)胞產(chǎn)生IgE型抗體應(yīng)答，產(chǎn)生的IgE型抗體以其Fc段與肥大細(xì)胞/嗜堿性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的Fc

RI結(jié)合，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)（二）發(fā)生過程I型超敏反應(yīng)的發(fā)生過程：發(fā)敏階段機(jī)體再次接觸相同變應(yīng)原時(shí)，通過與致敏肥大細(xì)胞/嗜堿性粒細(xì)胞表面IgE抗體特異性的結(jié)合（使膜表面Fc

RI交聯(lián)），使之脫顆粒、釋放生物活性介質(zhì)發(fā)生機(jī)制即刻/早期相反應(yīng)：

在接觸變應(yīng)原后數(shù)秒鐘內(nèi)發(fā)生，可持續(xù)數(shù)小時(shí)

由儲(chǔ)備介質(zhì)引起：

晚期相反應(yīng)：

在接觸變應(yīng)原后6-12小時(shí)內(nèi)發(fā)生，可持續(xù)數(shù)天

由新合成的介質(zhì)引起：

變應(yīng)原主要包括藥物、昆蟲毒素、動(dòng)物免疫血清和食物藥物過敏性休克：如青霉素過敏血清過敏性休克1.超敏性休克2.呼吸道超敏反應(yīng)變態(tài)反應(yīng)性鼻炎：主要由吸入植物花粉引起支氣管哮喘：吸入和食入變應(yīng)原，呼吸道病毒感染二、常見疾病4.皮膚超敏反應(yīng)3.消化道超敏反應(yīng)如：嗜酸性粒細(xì)胞食管炎蕁麻疹特應(yīng)性皮炎特應(yīng)性濕疹血管性水腫1.查明變應(yīng)原，避免再接觸2.脫敏療法和減敏療法3.藥物治療

抑制生物活性介質(zhì)合成與釋放的藥物；生物活性介質(zhì)拮抗藥；改善效應(yīng)器官反應(yīng)性的藥物：如腎上腺素。

三、I型超敏反應(yīng)性疾病防治原則（一）激發(fā)試驗(yàn)（provocationtest）模擬自然發(fā)病條件，用少量變應(yīng)原引起一次較輕的超敏反應(yīng)發(fā)作，達(dá)到確定或排除變應(yīng)原的一種體內(nèi)試驗(yàn)。四、臨床檢測(cè)非特異性激發(fā)：用組胺等刺激物做霧化吸入，觀察患者敏感性，分析病因或評(píng)估療效特異性激發(fā)：用特異性抗原作刺激物，觀察是否誘發(fā)相應(yīng)反應(yīng)，有助于明確變應(yīng)原（一）皮膚激發(fā)試驗(yàn)皮膚試驗(yàn)

皮膚試驗(yàn)的最常用部位是前臂曲側(cè)，因此處皮膚較為光滑細(xì)膩，而且便于試驗(yàn)操作和結(jié)果觀察。按正規(guī)作法，左右兩臂一側(cè)作試驗(yàn)，另一側(cè)作對(duì)照。需要時(shí)也可選用上臂或背部皮膚。皮內(nèi)試驗(yàn)（intradermaltest）點(diǎn)刺試驗(yàn)（pricktest）斑貼試驗(yàn)（patchtest）皮內(nèi)試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)將試驗(yàn)抗原與對(duì)照液各0.02～0.03ml用皮試針頭分別注入皮內(nèi)（不是皮下），使局部產(chǎn)生一個(gè)圓形小丘。當(dāng)同時(shí)試驗(yàn)多種抗原時(shí)，相互間至少間隔4cm，以免強(qiáng)烈反應(yīng)時(shí)互相混淆結(jié)果。皮內(nèi)試驗(yàn)的敏感性比其他皮膚試驗(yàn)高，所用抗原應(yīng)適當(dāng)稀釋，以免出現(xiàn)嚴(yán)重反應(yīng)；當(dāng)高可疑性抗原出現(xiàn)陰性結(jié)果時(shí)，應(yīng)逐漸加大抗原濃度進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。皮內(nèi)試驗(yàn)是最常用的皮膚試驗(yàn)，應(yīng)用范圍也很廣，幾乎各類抗原及各型反應(yīng)都可用皮內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，只是不同類型的反應(yīng)觀察結(jié)果的時(shí)間和判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)不所不同。點(diǎn)刺試驗(yàn)將試驗(yàn)抗原與對(duì)照液分別滴于試驗(yàn)部位皮膚上，用針尖透過液滴或在皮膚上輕輕地挑刺一下，以刺破皮膚但以不出血為度；1min后拭（吸）去抗原溶液。同時(shí)試驗(yàn)多腫抗原時(shí)，千萬注意不要將不同的抗原液交叉混合，以免出現(xiàn)假陽性。挑刺試驗(yàn)主要用于Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，該法雖比皮內(nèi)試驗(yàn)法敏感性稍低，但假陽性較少，與臨床及其他試驗(yàn)的相關(guān)性較強(qiáng)。分級(jí)皮內(nèi)試驗(yàn)點(diǎn)刺試驗(yàn)—無風(fēng)團(tuán)反應(yīng)或小于陰性對(duì)照無風(fēng)團(tuán)反應(yīng)或小于陰性對(duì)照+風(fēng)團(tuán)3mm～5mm、紅暈＜20mm無風(fēng)團(tuán)，陰性對(duì)照＜紅暈≤20mm++風(fēng)團(tuán)6mm～9mm、伴紅暈無風(fēng)團(tuán)，紅暈＞20mm+++風(fēng)團(tuán)10mm～15mm、伴紅暈風(fēng)團(tuán)伴紅暈++++風(fēng)團(tuán)＞15mm伴紅暈且有偽足風(fēng)團(tuán)伴紅暈且有偽足

速發(fā)型皮膚試驗(yàn)的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)假陰性出現(xiàn)的常見原因：試驗(yàn)抗原的濃度過低或者抗原失效患者皮膚反應(yīng)差，或者試驗(yàn)前服用免疫抑制劑或抗組胺藥物操作誤差時(shí)間選擇不當(dāng)結(jié)果分析與注意事項(xiàng)假陽性出現(xiàn)的常見原因：試驗(yàn)抗原不純?cè)囼?yàn)溶液非特異性刺激；皮膚反應(yīng)性過強(qiáng)手法過重或操作不當(dāng)結(jié)果分析與注意事項(xiàng)（二）血清lgE檢測(cè)1、血清tlgE檢測(cè)2、血清slgE檢測(cè)針對(duì)特定變應(yīng)原的特異性IgE（specificIgE，sIgE）1、血清tlgE檢測(cè)1.酶聯(lián)免疫測(cè)定法：酶標(biāo)顯色，敏感性高，操作方便2.化學(xué)發(fā)光法：用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗IgE，更敏感、特異、自動(dòng)化程度高，臨床普遍使用檢測(cè)方法臨床意義體外試驗(yàn)檢測(cè)總IgE含量，作為過敏性疾病診斷的參考血清tIgE水平一般用國(guó)際單位（IU）或ng表示正常人群血清tIgE水平存在一定差異（20-200IU/ml）一般認(rèn)為大于333IU/ml（800ng/ml）時(shí)為異常升高過敏患者tIgE水平可高于正常人數(shù)千倍藥物間質(zhì)性肺炎、支氣管肺曲菌病和某些寄生蟲感染時(shí)tIgE也會(huì)升高需注意有些過敏患者血清tIgE水平不高，而tIgE水平高的并非都是過敏患者2、血清slgE檢測(cè)檢測(cè)方法RAST(放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn))公認(rèn)最有效的檢測(cè)手段之一，特異性強(qiáng)、敏感性高、影響因素少；但存在放射性危害，操作復(fù)雜ELISA

常用間接法，酶標(biāo)記抗IgE，操作敏感性、特異性較高，操作簡(jiǎn)便、且費(fèi)用較低IBT（免疫印跡法）將多種特異性變應(yīng)原提取物包被于硝酸纖維素膜上，酶標(biāo)記抗IgE，操作簡(jiǎn)單，可一次性測(cè)定多種變應(yīng)原（+）YYYYYYYEYEYEYYYYEYEYE洗滌洗滌洗滌結(jié)果ELISA間接法檢測(cè)特異性IgE特異性變應(yīng)原加入待檢血清轉(zhuǎn)印至NC膜NC膜待檢血清特異性IgE抗-IgE·HRP底物特異性抗原條帶顯色NC膜—變應(yīng)原—特異性IgE—抗-IgE·HRPIBT檢測(cè)特異性IgE臨床意義sIgE測(cè)定是體外檢測(cè)變應(yīng)原的重要手段，主要用于Ⅰ型超敏反應(yīng)的診斷根據(jù)sIgE含量可確定患者變應(yīng)原種類，評(píng)價(jià)患者過敏狀態(tài)、脫敏治療的療效，對(duì)過敏性疾病的診斷和鑒別診斷有重要幫助

Ⅱ型超敏反應(yīng)Ⅱ型超敏反應(yīng)及臨床檢測(cè)

1.抗原在靶細(xì)胞表面；

2.抗體：IgG、IgM參與；

3.在補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞和NK細(xì)胞參與下造成細(xì)胞溶解或組織損傷。

特點(diǎn)（一）抗原（靶細(xì)胞表面）：同種異型抗原輸入（如血型抗原、組織相容性抗原）共同抗原交叉反應(yīng)（如鏈球菌株細(xì)胞壁與腎小球毛細(xì)血管基底膜等是共同抗原）自身抗原變性外來抗原吸附（一）參與成分（二）抗體：IgG和IgM類一、Ⅱ型超敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制（三）補(bǔ)體和細(xì)胞補(bǔ)體的C1-9、單核-巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及NK細(xì)胞等（二）發(fā)生過程1.輸血反應(yīng)：分為溶血性與非溶血性

2.新生兒溶血癥：母子間Rh血型不符是引起新生兒溶血癥的主要原因。二、臨床常見疾病新生兒溶血癥的發(fā)生機(jī)制3.藥物過敏性血細(xì)胞減少癥4.自身免疫性甲亢(Graves)藥物粘附血細(xì)胞——產(chǎn)生抗體——藥物再次進(jìn)入粘附——激活補(bǔ)體和殺傷細(xì)胞——溶血垂體甲狀腺

濾泡甲狀腺

激素正常情況Graves病人甲狀腺激素調(diào)節(jié)性產(chǎn)生甲狀腺激素不受調(diào)節(jié)地

過度性產(chǎn)生促甲狀腺激素自身免疫性甲亢（Graves?。┤⑴R床檢測(cè)（一）檢測(cè)項(xiàng)目：1、Rh抗體檢測(cè)2、抗球蛋白檢測(cè)（coombs試驗(yàn)）（二）臨床意義

Ⅲ型超敏反應(yīng)1.抗體：主要是IgG、IgM；2.中等大小可溶性免疫復(fù)合物在致病上起主要作用；3.補(bǔ)體及中性粒細(xì)胞釋放的溶酶體酶是引起組織損傷的主要原因；4.病變局部主要是中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主，炎癥反應(yīng)多見于血管及其周圍。特點(diǎn)

Ⅲ型超敏反應(yīng)及臨床檢測(cè)免疫復(fù)合物沉積的條件未能及時(shí)清除組織局部易沉積量過大補(bǔ)體障礙吞噬細(xì)胞障礙局部血管高壓與渦流血管通透性增加一、發(fā)生機(jī)制

局部免疫復(fù)合物病馬血清

家兔

2.人類局部免疫復(fù)合物?。?）胰島素

糖尿病人

局部出現(xiàn)紅腫。（2）過敏性肺炎皮下多次注射局部紅腫、出血及壞死。局部多次注射

1.Arthus反應(yīng)二、臨床常見疾病

1.血清病

2.鏈球菌感染后腎小球腎炎

3.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

4.系統(tǒng)性紅斑狼瘡

全身免疫復(fù)合物病血清病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎免疫復(fù)合物（immunecomplex,IC）:指由抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合而成的復(fù)合物局部免疫復(fù)合物：沉積在機(jī)體的某一局部循環(huán)IC（circulatingIC,CIC）：血液中存在的IC三、臨床檢測(cè)免疫復(fù)合物檢測(cè)抗原特異性IC抗原非特異性IC檢測(cè)已知抗原與相應(yīng)抗體形成的IC不考慮形成IC抗原的性質(zhì)，檢測(cè)未知抗原與相應(yīng)抗體形成的IC總量（一）抗原非特異性CIC檢測(cè)技術(shù)CIC：分子量600kD以上，沉降系數(shù)＞19S熱聚合IgG（HAHG)：

作為參考標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行CIC定量或測(cè)定A值代表CIC相當(dāng)于HAHG的含量CIC的檢測(cè)方法：按抗體分子在結(jié)合抗原后發(fā)生的物理學(xué)和生物學(xué)特性的改變而設(shè)計(jì)，主要方法：PEG比濁法ELISA法Raji細(xì)胞法以ELISA法為例1.基本原理ELISA法測(cè)定的CIC，是能夠結(jié)合C1q的

IgG類抗體與其特異性抗原形成的CIC2.技術(shù)要點(diǎn)將聚苯乙烯包被上C1q，加入受檢血清，

CIC中IgG的Fc段與C1q結(jié)合，再加抗人IgG·HRP，形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP復(fù)合物，加底物顯色靈敏度高于PEG比濁法，可檢測(cè)到0.1μg/mL重復(fù)性好，相對(duì)穩(wěn)定；C1q制品不易精制,純品不穩(wěn)定，只能檢出與補(bǔ)體結(jié)合的CIC3.方法評(píng)價(jià)以ELISA法為例原理技術(shù)要點(diǎn)

Raji細(xì)胞(C1q、C3d、C3b等補(bǔ)體受體)吸附已結(jié)合補(bǔ)體的免疫復(fù)合物熒光標(biāo)記或放射核素標(biāo)記的抗人IgG抗體待檢血清、標(biāo)準(zhǔn)品+Raji細(xì)胞孵育洗滌I125標(biāo)記的抗人IgG抗體洗滌丫計(jì)數(shù)儀檢測(cè)沉淀細(xì)胞繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及測(cè)定待檢血清以細(xì)胞技術(shù)-Raji細(xì)胞法為例（二）CIC檢測(cè)方法評(píng)價(jià)及應(yīng)用1、尚未