免疫學檢驗技術(shù)-凝集反應

知識目標掌握：凝集反應概念、特點及各類型反應的原理（重難點）。熟悉：各類型凝集反應的主要臨床應用。了解：各類型凝集反應的優(yōu)缺點及載體相關(guān)知識。能力目標掌握：凝集反應操作步驟和方法。熟悉：凝集反應結(jié)果判讀方法。思政-素質(zhì)目標愛崗敬業(yè)、責任心、誠信、生物安全意識、臨床免疫學思維。

教學目標凝集反應概念、特點及類型。直接凝集反應原理、方法類型及臨床應用。間接凝集反應原理、方法類型及臨床應用?？骨虻鞍自囼炘?、方法類型及臨床應用。冷凝集試驗的原理和臨床應用。本章要點概述一第一節(jié)直接凝集反應二第二節(jié)間接凝集反應三第三節(jié)抗球蛋白試驗四第四節(jié)冷凝集試驗五目錄早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。至1903年，Landsteiner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫(yī)學獎。

概述一、概念細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結(jié)合后，在適當電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。顆粒性抗原還包括可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒(O型人紅細胞、綿羊紅細胞、聚苯乙烯膠乳、炭粒等)結(jié)合成的致敏顆粒。二、特點1.抗原分子大，介質(zhì)中成均勻的顆粒懸液。2.抗原抗體復合物以抗原為主。3.試驗時稀釋抗體。4.效價報告抗體的稀釋度。三、主要技術(shù)類型按抗原的性質(zhì)和反應方式的不同分為直接凝集間接凝集反應板法試管法玻片法正向間接凝集試驗反向間接凝集試驗間接凝集抑制試驗協(xié)同凝集試驗反向正向間接血凝試驗膠乳凝集試驗抗球蛋白試驗第一節(jié)直接凝集反應細菌、紅細胞等顆?？乖谶m當電解質(zhì)參與下可直接與相應抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應（directagglutination）。凝集反應中的抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素（agglutinin）。常用的凝集試驗有玻片法和試管法兩種。一、玻片凝集試驗YYY+臨床應用:1.菌種鑒定2.血清學分型3.血型鑒定方法評價:1.操作簡單、快速2.敏感度低3.定性檢測

二、試管凝集試驗在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。為半定量試驗方法，在微生物學檢驗中常用已知菌液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常以產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋倍數(shù)作為血清中抗體的效價，亦稱為滴度。試管法結(jié)果判讀+很小的凝集顆?；鞚?無凝集現(xiàn)象與對照相同++小、部分凝集塊中等混濁+++大多凝集管底輕度混濁++++大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清凝集程度記錄為：＋＋＋＋（100％凝集）＋＋＋（75％凝集）＋＋（50％凝集）＋（25％凝集）臨床應用：1.肥達試驗Widaltest2.外斐氏試驗Weil-felixtest3.交叉配血試驗方法評價：1.半定量試驗2.操作簡便、快速3.敏感度不高4.可有假陽性第二節(jié)間接凝集反應

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應的抗體或抗原反應，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。一、載體

RBC

聚苯乙烯膠乳載體的種類離子交換樹脂活性炭明膠顆粒載體的條件：1.不溶于水，理化性質(zhì)穩(wěn)定且無化學和免疫學活性。2.大小均勻，密度與介質(zhì)相近。3.能直接吸附和通過偶聯(lián)劑牢固結(jié)合抗原抗體。二、方法類型

根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應的方式不同，間接凝集反應可分為4類:1.正向間接凝集試驗

2.反向間接凝集試驗

3.間接凝集抑制試驗

4.協(xié)同凝集試驗三、間接血凝試驗抗原致敏紅細胞紅細胞+抗原抗原致敏紅細胞凝集抗體四、膠乳凝集試驗

膠乳凝集試驗也是間接凝集反應，因所用的載體顆粒為聚苯乙烯膠乳而得名。膠乳凝集抑制試驗檢測HCG：標本中加入相應量的HCG抗體，抗體與尿中HCG結(jié)合，再加入HCG膠乳抗原，本應凝集反應受到抑制，說明尿中含HCG，妊娠反應陽性。第三節(jié)抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗由Coombs于1945年建立，故又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的經(jīng)典方法。Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接結(jié)合在紅細胞表面抗原的不完全抗體，使紅細胞凝集。常用試驗方法有直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗。一、直接抗球蛋白試驗直接抗球蛋白試驗既可用玻片法定性測定，也可用試管法作半定量分析。常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病等的檢測。二、間接抗球蛋白試驗此試驗可用于檢測母體Rh（D）抗體，以便及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的出現(xiàn)?？捎糜趯t細胞不相容輸血所產(chǎn)生的血型抗體進行檢測。還可對某些細菌、立克次體感染后產(chǎn)生的不完全抗體進行檢測。

第四節(jié)冷凝集試驗

冷凝集試驗是用于檢測血清中冷凝集素的方法。冷凝集素（coldagglutinin）是冷反應型抗紅細胞抗體，具有較強的凝集紅細胞的作用，屬于IgM型抗體，可存在于正常人血清中，但是正常人血清抗紅細胞抗原的lgM冷凝集素效價比較低。冷凝集試驗可協(xié)助診斷肺炎支原體感染引起的肺炎，可用于輔助診斷冷凝集素綜合征、傳染性單核細胞增多癥、瘧疾、肝硬化、淋巴瘤及多發(fā)性骨髓瘤等。冷凝集試驗是傳統(tǒng)的實驗方法，但是其敏感度和特異性不強。小結(jié)方法類型原理臨床用途方法評價玻片凝集試驗抗原與抗體在玻片上直接反應血型的鑒定、菌種診斷或分型簡便、快速，敏感度低，多用于定性試驗試管凝集試驗抗原與系列倍比稀釋的血清在試管內(nèi)反應交叉配血、輔助診斷傷寒和斑疹傷寒操作簡單，敏感度不高，為半定量試驗間接凝集試驗抗原（抗體）致敏載體，檢測標本中相應抗體（抗原）檢測病原微生物和自身免疫病相關(guān)抗體操作簡單、快速，敏感度和特異性高間接凝集抑制試驗抗原致敏載體檢測是否存在與致敏抗原相同的抗原絨毛膜促性腺激素(HCG)的檢測靈敏度高于上面間接凝集試驗協(xié)同凝集試驗抗體致敏金黃葡萄球菌顆粒作為診斷試劑檢測抗原適用于細菌的直接檢測操作簡單、快速，便于推廣應用抗球蛋白試驗利用抗球蛋白抗體連接結(jié)合在紅細胞表面抗原的不完全抗體，使紅細胞凝集新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血、醫(yī)源性溶血性疾病等是檢測抗紅細胞不完全抗體的經(jīng)典方法知識目標掌握：凝集反應概念、特點及各類型反應的原理（重難點）。熟悉：各類型凝集反應的主要臨床應用。了解：各類型凝集反應的優(yōu)缺點及載體相關(guān)知識。能力目標掌握：凝集反應操作步驟和方法。熟悉：凝集反應結(jié)果判讀方法。思政-素質(zhì)目標愛崗敬業(yè)、責任心、誠信、生物安全意識、臨床免疫學思維。

教學目標凝集反應概念、特點及類型。直接凝集反應原理、方法類型及臨床應用。間接凝集反應原理、方法類型及臨床應用?？骨虻鞍自囼炘?、方法類型及臨床應用。冷凝集試驗的原理和臨床應用。本章要點概述一第一節(jié)直接凝集反應二第二節(jié)間接凝集反應三第三節(jié)抗球蛋白試驗四第四節(jié)冷凝集試驗五目錄早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。至1903年，Landsteiner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫(yī)學獎。

概述一一、概念細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結(jié)合后，在適當電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。顆粒性抗原還包括可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒(O型人紅細胞、綿羊紅細胞、聚苯乙烯膠乳、炭粒等)結(jié)合成的致敏顆粒。二、特點1.抗原分子大，介質(zhì)中成均勻的顆粒懸液。2.抗原抗體復合物以抗原為主。3.試驗時稀釋抗體。4.效價報告抗體的稀釋度。三、主要技術(shù)類型按抗原的性質(zhì)和反應方式的不同分為直接凝集間接凝集反應板法試管法玻片法正向間接凝集試驗反向間接凝集試驗間接凝集抑制試驗協(xié)同凝集試驗反向正向間接血凝試驗膠乳凝集試驗抗球蛋白試驗知識目標掌握：凝集反應概念、特點及各類型反應的原理（重難點）。熟悉：各類型凝集反應的主要臨床應用。了解：各類型凝集反應的優(yōu)缺點及載體相關(guān)知識。能力目標掌握：凝集反應操作步驟和方法。熟悉：凝集反應結(jié)果判讀方法。思政-素質(zhì)目標愛崗敬業(yè)、責任心、誠信、生物安全意識、臨床免疫學思維。

教學目標凝集反應概念、特點及類型。直接凝集反應原理、方法類型及臨床應用。間接凝集反應原理、方法類型及臨床應用。抗球蛋白試驗原理、方法類型及臨床應用。冷凝集試驗的原理和臨床應用。本章要點概述一第一節(jié)直接凝集反應二第二節(jié)間接凝集反應三第三節(jié)抗球蛋白試驗四第四節(jié)冷凝集試驗五目錄第一節(jié)直接凝集反應細菌、紅細胞等顆?？乖谶m當電解質(zhì)參與下可直接與相應抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應（directagglutination）。凝集反應中的抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素（agglutinin）。常用的凝集試驗有玻片法和試管法兩種。一、玻片凝集試驗YYY+臨床應用:1.菌種鑒定2.血清學分型3.血型鑒定方法評價:1.操作簡單、快速2.敏感度低3.定性檢測

二、試管凝集試驗在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。為半定量試驗方法，在微生物學檢驗中常用已知菌液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常以產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋倍數(shù)作為血清中抗體的效價，亦稱為滴度。試管法結(jié)果判讀+很小的凝集顆?；鞚?無凝集現(xiàn)象與對照相同++小、部分凝集塊中等混濁+++大多凝集管底輕度混濁++++大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清凝集程度記錄為：＋＋＋＋（100％凝集）＋＋＋（75％凝集）＋＋（50％凝集）＋（25％凝集）臨床應用：1.肥達試驗Widaltest2.外斐氏試驗Weil-felixtest3.交叉配血試驗方法評價：1.半定量試驗2.操作簡便、快速3.敏感度不高4.可有假陽性一、玻片凝集反應

未知抗原+已知抗體凝集團塊混濁?二、試管凝集反應定量抗原+系列稀釋抗體不同程度的凝集反應YESNO確定抗體的滴度知識目標掌握：凝集反應概念、特點及各類型反應的原理（重難點）。熟悉：各類型凝集反應的主要臨床應用。了解：各類型凝集反應的優(yōu)缺點及載體相關(guān)知識。能力目標掌握：凝集反應操作步驟和方法。熟悉：凝集反應結(jié)果判讀方法。思政-素質(zhì)目標愛崗敬業(yè)、責任心、誠信、生物安全意識、臨床免疫學思維。

教學目標凝集反應概念、特點及類型。直接凝集反應原理、方法類型及臨床應用。間接凝集反應原理、方法類型及臨床應用?？骨虻鞍自囼炘?、方法類型及臨床應用。冷凝集試驗的原理和臨床應用。本章要點概述一第一節(jié)直接凝集反應二第二節(jié)間接凝集反應三第三節(jié)抗球蛋白試驗四第四節(jié)冷凝集試驗五目錄第二節(jié)間接凝集反應

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應的抗體或抗原反應，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。一、載體

RBC

聚苯乙烯膠乳載體的種類離子交換樹脂活性炭明膠顆粒載體的條件：1.不溶于水，理化性質(zhì)穩(wěn)定且無化學和免疫學活性。2.大小均勻，密度與介質(zhì)相近。3.能直接吸附和通過偶聯(lián)劑牢固結(jié)合抗原抗體。二、方法類型

根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應的方式不同，間接凝集反應可分為4類:1.正向間接凝集試驗

2.反向間接凝集試驗

3.間接凝集抑制試驗

4.協(xié)同凝集試驗1.正向間接凝集試驗2.反向間接凝集試驗3.間接凝集抑制試驗4.協(xié)同凝集試驗三、間接血凝試驗抗原致敏紅細胞紅細胞+抗原抗原致敏紅細胞凝集抗體四、膠乳凝集試驗

膠乳凝集試驗也是間接凝集反應，因所用的載體顆粒為聚苯乙烯膠乳而得名。膠乳凝集抑制試驗檢測HCG：標本中加入相應量的HCG抗體，抗體與尿中HCG結(jié)合，再加入HCG膠乳抗原，本應凝集反應受到抑制，說明尿中含HCG，妊娠反應陽性。知識目標掌握：凝集反應概念、特點及各類型反應的原理（重難點）。熟悉：各類型凝集反應的主要臨床應用。了解：各類型凝集反應的優(yōu)缺點及載體相關(guān)知識。能力目標掌握：凝集反應操作步驟和方法。熟悉：凝集反應結(jié)果判讀方法。思政-素質(zhì)目標愛崗敬業(yè)、責任心、誠信、生物安全意識、臨床免疫學思維。

教學目標凝集反應概念、特點及類型。直接凝集反應原理、方法類型及臨床應用。間接凝集反應原理、方法類型及臨床應用?？骨虻鞍自囼炘?、方法類型及臨床應用。冷凝集試驗的原理和臨床應用。本章要點概述一第一節(jié)直接凝集反應二第二節(jié)間接凝集反應三第三節(jié)抗球蛋白試驗四第四節(jié)冷凝集試驗五目錄第三節(jié)抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗由Coombs于1945年建立，故又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的經(jīng)典方法。Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接結(jié)合在紅細胞表面抗原的不完全抗體，使紅細胞凝集。常用試驗方法有直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗。一、直接抗球蛋白試驗直接抗球蛋白試驗既可用玻片法定性測定，也可用試管法作半定量分析。常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病等的檢測。二、間接抗球蛋白試驗此試驗可用于檢測母體Rh（D）抗體，以便及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的出現(xiàn)?？捎糜趯t細胞不相容輸血所產(chǎn)生的血型抗體進行檢測。還可對某些細菌、立克次體感染后產(chǎn)生的不完全抗體進行檢測。

知識目標掌握：凝集反應概念、特點及各類型反應的原理（重難點）。熟悉：各類型凝集反應的主要臨床應用。了解：各類型凝集反應的優(yōu)缺點及載體相關(guān)知識。能力目標掌握：凝集反應操作步驟和方法。熟悉：凝集反應結(jié)果判讀方法。思政-素質(zhì)目標愛崗敬業(yè)、責任心、誠信、生物安全意識、臨床免疫學思維。

教學目標凝集反應概念、特點及