微生物學(xué)檢驗技術(shù) 課件 20項目二十：腸桿菌科鑒定

項目二十腸桿菌科鑒定思維導(dǎo)圖項目二十腸桿菌科鑒定學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握腸桿菌科細菌的共同特征、大腸埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬的主要生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗方法及鑒定依據(jù)。2．熟悉克雷伯菌屬，變形桿菌屬，耶爾森菌屬，腸桿菌屬等腸道桿菌的生物學(xué)性狀及微生物學(xué)檢驗。3．了解常見腸桿菌科細菌的臨床意義。4．具有正確采集和處理大腸埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬等常見腸桿菌科細菌的檢驗標(biāo)本及進行相關(guān)檢測的能力。5．能正確選擇試驗項目對常見腸桿菌科細菌進行檢驗，能正確判斷和分析試驗結(jié)果并發(fā)出檢驗報告。項目二十腸桿菌科鑒定一、腸桿菌科概述項目二十腸桿菌科鑒定一、腸桿菌科概述概述腸桿菌科（Enterobacteriaceae）是由許多生物學(xué)性狀相似的革蘭陰性桿菌組成的菌群，廣泛分布于自然界，常棲居于人和動物的腸道。

包括：1.能引起烈性傳染病的鼠疫耶爾森菌；2.能引起腹瀉和腸道感染的埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬和耶爾森菌屬；3.能導(dǎo)致醫(yī)院感染相關(guān)的條件致病菌有克雷伯菌屬、變形桿菌屬、枸櫞酸菌屬、腸桿菌屬、泛菌屬、沙雷菌屬、普羅威登菌屬和摩根菌屬等。

目前已發(fā)現(xiàn)31個屬、120多個菌種，與醫(yī)學(xué)相關(guān)的有24個菌屬，臨床上常見的有14個菌屬，臨床標(biāo)本中常檢出的約有40種以上。

腸桿菌科細菌種類繁多，近年來主要采用細菌的形態(tài)、生化反應(yīng)、抗原結(jié)構(gòu)以及核酸相關(guān)性進行分類。目前，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最具權(quán)威的《伯杰系統(tǒng)細菌學(xué)手冊》中，將腸桿菌分為24個與醫(yī)學(xué)有關(guān)的菌屬（見表20-1）。（一）分類一、腸桿菌科概述一、腸桿菌科概述西地西菌屬枸櫞酸桿菌屬（檸檬酸桿菌屬）愛德華菌屬腸桿菌屬歐文菌屬埃希菌屬愛文菌屬哈夫尼亞菌屬克雷伯菌屬克盧瓦菌屬勒米諾菌屬穆勒菌屬摩根菌屬多源桿菌屬變形桿菌屬普羅威登斯菌屬拉恩菌屬沙門菌屬沙雷菌屬志賀菌屬塔特姆菌屬致病桿菌屬耶爾森菌屬約克菌屬表20-1腸桿菌科細菌的24個菌屬1．形態(tài)與染色

均為革蘭陰性桿菌，桿狀或球桿狀，多數(shù)有周鞭毛，無芽胞，少數(shù)有莢膜，致病性菌株多數(shù)有菌毛。2．培養(yǎng)特性

最適生長溫度為35℃，最適pH值為7.2～7.4；需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求常不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長。3．生化反應(yīng)

該科細菌的生化反應(yīng)非?；顫姡氰b定的主要依據(jù)之一。主要的生化反應(yīng)包括：發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣、觸酶陽性、氧化酶陰性、還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。（二）共同特征一、腸桿菌科概述4．抗原結(jié)構(gòu)

該科細菌抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜。主要包括菌體抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）、表面抗原等。

（1）O抗原：是細菌細胞壁里的脂多糖成分，耐熱，不易被破壞。

（2）H抗原：是不耐熱蛋白質(zhì)抗原。

（3）表面抗原：是包繞在O抗原外側(cè)的不耐熱的多糖抗原。5．變異性

該科細菌容易出現(xiàn)變異，6．抵抗力

腸桿菌科細菌抵抗力不強，加熱60℃30min即被殺死。（二）共同特征一、腸桿菌科概述

腸桿菌科細菌是臨床標(biāo)本中常分離到的一類細菌，約占臨床分離菌株總數(shù)的50%和臨床分離的革蘭陰性桿菌菌株總數(shù)的80%。對人類的感染有：1.人類腸道外感染

2.人類腸道內(nèi)（三）臨床意義一、腸桿菌科概述1.人類腸道外感染

除志賀菌外，許多腸桿菌科細菌均可引起腸外感染，如大腸埃希菌、奇異變形桿菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌等均可引起泌尿道、呼吸道、傷口和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染，且往往為醫(yī)院感染。鼠疫耶爾森菌可引起甲類傳染病鼠疫。2.人類腸道內(nèi)感染

該科許多細菌也是腸道感染的重要病原體，比較明確的腸道致病菌有埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬和耶爾森菌屬。主要引起各種急、慢性腸道感染、食物中毒及旅行者腹瀉等。（三）臨床意義一、腸桿菌科概述1.標(biāo)本采集

（1）腸外標(biāo)本：宜在發(fā)病早期或使用抗菌藥物前采集不同感染部位的標(biāo)本，如呼吸道分泌物、傷口、血液、尿液及其他體液等。

（2）糞便標(biāo)本：宜在疾病早期留取新鮮的糞便標(biāo)本，挑取其中含膿血或粘液部分，盡快送檢。培養(yǎng)應(yīng)在采到標(biāo)本后2h內(nèi)進行，以提高如志賀菌等的檢出率。如不能及時送檢，應(yīng)將糞便標(biāo)本置于運送培養(yǎng)基或甘油緩沖鹽水中冷藏待檢，但也不宜超過24h。(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述2.常規(guī)檢驗程序

見圖20-1(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述3.檢查方法

（1）標(biāo)本直接檢查

（2）分離培養(yǎng)與鑒定1）分離培養(yǎng)2）鑒定(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述3.檢查方法

（1）標(biāo)本直接檢查

將標(biāo)本涂片進行革蘭染色，顯微鏡檢查為革蘭陰性桿菌。能直接進行涂片染色鏡檢的標(biāo)本有痰液、傷口分泌物、中段尿和穿刺液的離心沉渣等。腸桿菌科多數(shù)細菌的形態(tài)和染色性在鑒定、鑒別上并無太大的意義。(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述

（2）分離培養(yǎng)與鑒定1）分離培養(yǎng)

①腸外標(biāo)本

無菌部位來源的標(biāo)本一般用血瓊脂平板或巧克力色平板進行培養(yǎng)；來源于泌尿道、呼吸道或傷口的標(biāo)本，往往含有雜菌，需采用選擇性培養(yǎng)基以提高腸桿菌科細菌的分離率，常用的有麥康凱（MAC）瓊脂和伊紅美藍（EMB）瓊脂，這兩種培養(yǎng)基可以促進腸桿菌科細菌表現(xiàn)出典型的性狀，且同時抑制其它革蘭陰性菌的生長，有利于初步鑒定。當(dāng)標(biāo)本含菌量少時，可先用肉湯增菌以提高檢出率；(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述

（2）分離培養(yǎng)與鑒定1）分離培養(yǎng)

①腸外標(biāo)本

②糞便標(biāo)本

常用的分離培養(yǎng)基包括非選擇性培養(yǎng)基（如BAP）、弱選擇性培養(yǎng)基（如MAC）及針對沙門菌和志賀菌的強選擇性培養(yǎng)基（如SS）。如疑為小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染，可用耶爾森菌選擇培養(yǎng)基（如CIN）。(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述

（2）分離培養(yǎng)與鑒定1）分離培養(yǎng)：2）鑒定①與弧菌科和非發(fā)酵菌的鑒別

臨床實驗室常通過菌體形態(tài)檢查、葡萄糖氧化或發(fā)酵試驗、氧化酶試驗及鞭毛特征等做出腸桿菌科細菌與弧菌科、非發(fā)酵菌的區(qū)別（見表20-4）；(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述試驗

腸桿菌科

弧菌科

非發(fā)酵菌

形態(tài)

桿狀

弧狀

桿狀葡萄糖FFO/—

氧化酶

—++

鞭毛

周毛或無

單毛

單毛、叢毛、周毛、無表20-4腸桿菌科與弧菌科、非發(fā)酵菌的主要區(qū)別注：O為氧化；F為發(fā)酵。

（2）分離培養(yǎng)與鑒定②腸桿菌科內(nèi)屬間的鑒別

常用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗將腸桿菌科進行初步分類（見課本表20-5）。很多臨床細菌室目前仍習(xí)慣用KIA試驗和MIU試驗的結(jié)果將細菌初步分屬（見課本表20-6）；(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述

（2）分離培養(yǎng)與鑒定1）分離培養(yǎng)：2）鑒定①與弧菌科和非發(fā)酵菌的鑒別②腸桿菌科內(nèi)屬間的鑒別

③屬內(nèi)菌種的鑒定

主要有常規(guī)生化鑒定法、商品化和標(biāo)準(zhǔn)化鑒定試劑盒法、血清學(xué)鑒定法和分子生物學(xué)鑒定法等。(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述知識拓展：

超級細菌（superbug）

并不是特指某一種細菌，而是泛指那些對多種抗生素具有耐藥性的細菌，它的準(zhǔn)確稱呼應(yīng)該是“多重耐藥性細菌”。這類細菌對抗生素的殺菌作用有強大的抵抗力，能逃避被殺滅的危險。近年來陸續(xù)發(fā)現(xiàn)的超級細菌主要有：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、抗萬古霉素腸球菌（VRE）、耐多藥肺炎鏈球菌（MDRSP）、多重耐藥性結(jié)核桿菌（MDR-TB）、多重耐藥鮑曼不動桿菌（MRAB）以及最近發(fā)現(xiàn)的攜帶有NDM-1基因的大腸桿菌和碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(KPC)等等。超級細菌的可怕之處，并不在于它對人類及動物的殺傷力,而是它對常用殺菌藥物——抗生素的抵抗能力。這類細菌一旦感染人和動物,會造成患者的醫(yī)治困難,甚至還會威脅到生命。這就是“超級細菌”的可怕之處。(四)微生物學(xué)檢驗一、腸桿菌科概述埃希菌屬（Escherichia)

包括六個種：大腸埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌、傷口埃希菌和近年來新報告與兒童腹瀉有關(guān)的E.albertii。

本節(jié)以臨床標(biāo)本中最常分離出的大腸埃希菌為代表菌種敘述。二、埃希菌屬鑒定概述1.生物學(xué)性狀（1）形態(tài)與染色：菌體直短的桿菌，革蘭染色陰性，多數(shù)有周鞭毛，能運動。二、埃希菌屬鑒定大腸埃希菌1.生物學(xué)性狀（2）培養(yǎng)特性：大腸埃希菌兼性厭氧菌，最適pH值為7.0～7.4。對營養(yǎng)要求不高。

在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，形成較大的圓形、光滑、濕潤、灰白色的菌落。

在血平板上，某些菌株可產(chǎn)生β-溶血。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀

（2）培養(yǎng)特性：

在腸道選擇性培養(yǎng)基上若能生長的菌株可因發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，并依據(jù)培養(yǎng)基所含指示劑的不同而形成不同顏色的菌落：

在SS和麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基上生長呈粉紅色或紅色菌落。

在伊紅美藍瓊脂平板培養(yǎng)基上生長呈紫黑色菌落并有金屬光澤。

大部分大腸埃希菌在腸道強選擇性培養(yǎng)SS平板上不生長。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀

（3）生化反應(yīng)：

本菌能發(fā)酵多種糖類如葡萄糖、乳糖、麥芽糖等產(chǎn)酸產(chǎn)氣，對蔗糖的分解力因菌種而異。有些菌株分解葡萄糖不產(chǎn)氣，遲緩分解乳糖或不分解乳糖，無動力，易與志賀菌混淆。IMViC試驗結(jié)果為：++--；MIU試驗結(jié)果為：++-，KIA試驗結(jié)果為斜面和底層均產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2S陰性（AA+-）。

（IMViC試驗、MIU試驗和KIA試驗見圖20-2）。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀

（4）抗原構(gòu)造：

本菌抗原構(gòu)造比較復(fù)雜，主要由菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（K）抗原組成。

（1）O抗原：成分為多糖磷脂復(fù)合物，比較耐熱，加熱100℃不能滅活，目前已知171種，是血清學(xué)分型的基礎(chǔ)。

（2）H抗原：成分為不耐熱的蛋白質(zhì)，目前已知56種。

（3）K抗原：成分為多糖莢膜抗原，對熱較穩(wěn)定，在K抗原存在時，可阻止O抗原凝集反應(yīng)。目前已知100種，不是每個菌株都有K抗原。

大腸埃希菌的血清型別按O：K：H的順序排列，以數(shù)字表示，如O111：K58：H2、O157：H7等。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀

（5）抵抗力：

大腸埃希菌在水和土壤中可存活數(shù)周至數(shù)月，但對多種理化因素的抵抗力不強。60℃維持30min即死亡，能耐低溫，對常用化學(xué)消毒劑如含氯石灰或氯氣等敏感，膽鹽、煌綠對其有選擇性抑制作用。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義（1）致病因素：

1）侵襲力：構(gòu)成大腸埃希菌侵襲力的主要物質(zhì)是其K抗原和菌毛。K抗原能抵抗吞噬細胞的吞噬和中和抗體及補體的作用。菌毛的粘附作用能幫助細菌在人體黏膜細胞表面定植，進而侵入機體引起感染。此外，有侵襲力的菌株還可以直接侵犯腸道黏膜上皮引起炎癥。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義（1）致病因素：

2）內(nèi)毒素：該菌細胞壁內(nèi)所含的脂多糖（LPS）成分即為內(nèi)毒素，能引起發(fā)熱、休克、彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）等癥狀。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義（1）致病因素：

3）腸毒素：大腸埃希菌的腸毒素屬于外毒素，有兩種。一種是不耐熱腸毒素（LT），加熱65℃30min即可被破壞；另一種是耐熱腸毒素（ST），100℃10～20min不被破壞。LT和ST均可促使腸道細胞中cAMP水平異常升高，引起腸液大量分泌而造成腹瀉。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義（2）．所致疾病1）腸道外感染：大腸埃希菌是臨床分離的革蘭陰性桿菌中最常見的菌種，也是醫(yī)院感染的常見病原菌，可引起人類多個部位的感染，尤以泌尿系統(tǒng)感染最常見，此外還可以引起膽囊炎、新生兒腦膜炎、肺炎和菌血癥等。2）腸道內(nèi)感染：大腸埃希菌雖是人類腸道正常菌群的成員，但其中有些菌株能引起輕微腹瀉至霍亂樣嚴(yán)重腹瀉，甚至能引起致死性并發(fā)癥如溶血性尿毒綜合征。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義（2）．所致疾病

根據(jù)不同的血清型別、毒力和所致臨床癥狀的不同，將能致腹瀉大腸埃希菌分為以下5類。1）腸毒素型大腸埃希菌（ETEC）：2）致病性大腸埃希菌（EPEC）：3）腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：4）腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：5）腸凝聚型大腸埃希菌（EaggEC）：大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義1）腸毒素型大腸埃希菌（ETEC）：

該菌是兒童腹瀉和旅行者腹瀉的常見病原菌，能產(chǎn)生耐熱和不耐熱兩種腸毒素，可引起患者出現(xiàn)惡心、腹痛、低熱或類似輕型霍亂的大量水樣腹瀉。由ETEC引起的旅行者腹瀉有時甚為嚴(yán)重，但很少致死。2）致病性大腸埃希菌（EPEC）：

該菌是世界各地嬰兒腹瀉的重要病原菌，主要引起嬰幼兒腸道感染，可引起發(fā)熱、嘔吐、大量水樣腹瀉，便中含有黏液但無血液。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義3）腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：

該菌引起的腸炎類似于志賀菌，能直接侵犯腸黏膜，在黏膜上皮細胞里增殖，并破壞這些細胞，使患者出現(xiàn)像被志賀菌感染一樣的發(fā)熱、腹痛、水樣腹瀉或典型細菌性痢疾樣癥狀，排黏液膿血樣便。4）腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：

臨床上最具代表的血清型是O157：H7。多為水源性或食源性感染，通過糞-口途徑傳播，可產(chǎn)生Vero毒素，引起出血性結(jié)腸炎。以腹痛、水樣腹瀉、血便為主要特征，多無發(fā)熱，成人患者往往自愈。由O157：H7感染引起腹瀉的患者中，有2%～7%可發(fā)展成為溶血性尿毒綜合征者，病死率為3%～10%。該菌是4歲以下兒童急性腎衰竭的主要病原菌。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定2.臨床意義5）腸凝聚型大腸埃希菌（EaggEC）：

該菌與世界各地嬰幼兒急性或慢性腹瀉有關(guān)，可引起水樣腹瀉、嘔吐、脫水，偶有腹痛、發(fā)熱及血便。

對于大腸埃希菌感染的預(yù)防，一方面是增強體質(zhì)，防止內(nèi)源性感染；另一方面是加強飲食衛(wèi)生和水源、糞便的管理。若發(fā)生感染應(yīng)進行及時有效的抗菌治療，必要時應(yīng)同時進行耐藥性的檢測。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定3.微生物學(xué)檢驗（1）．標(biāo)本采集

根據(jù)不同的感染部位，采集相應(yīng)的標(biāo)本。1）腸道外感染的標(biāo)本：

①血液標(biāo)本，以無菌技術(shù)采集靜脈血5mL，注入血培養(yǎng)瓶；

③痰標(biāo)本，取自患者清晨口腔清潔后從下呼吸道深處咳出的痰液；

③膿、分泌物等標(biāo)本，深部膿液以無菌技術(shù)用注射器抽取，開放性膿腫及分泌物用無菌棉簽拭子直接采取。2）腸道內(nèi)感染標(biāo)本：

取腹瀉和食物中毒者的糞便、肛拭、殘留食物和嘔吐物。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定3.微生物學(xué)檢驗（2）．腸道外感染標(biāo)本的細菌學(xué)檢驗1）檢驗程序：見圖20-2大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定二、埃希菌屬鑒定3.微生物學(xué)檢驗（2）．檢驗方法

1）直接檢查：除血液標(biāo)本外，其它標(biāo)本均可做涂片革蘭染色鏡檢。尿液、腦脊液等各種體液標(biāo)本應(yīng)先以3000rpm/min離心10min沉淀后，取沉淀物制成涂片。膿、痰、分泌物可直接涂片革蘭染色鏡檢。油鏡下可見革蘭陰性短桿菌。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定3.微生物學(xué)檢驗（2）．檢驗方法

2）分離培養(yǎng)：血液標(biāo)本應(yīng)先接種肉湯培養(yǎng)基作增菌培養(yǎng)，待生長后再移種血瓊脂平板。體液標(biāo)本取離心沉淀物、膿汁、痰、分泌物等直接劃線接種于血瓊脂平板和腸道弱選擇培養(yǎng)基上，35℃培養(yǎng)18~24h后觀察菌落形態(tài)。MAC上粉紅色或紅色菌落；EMB上呈扁平、粉紅色有金屬光澤菌落；在SS平板上如生長的話，菌落呈中央紅色，邊緣粉紅色或中央粉紅色，邊緣周圍為無色。此外，尿液標(biāo)本還應(yīng)同時做菌落計數(shù)，以每毫升尿液中細菌數(shù)超過10萬個才有診斷意義。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定3.微生物學(xué)檢驗（2）．檢驗方法3）鑒定：

根據(jù)涂片染色鏡檢結(jié)果和菌落特征，挑取可疑菌落做生化反應(yīng)。常用氧化酶、觸酶、KIA、MIU和IMViC試驗進行初步鑒定。必要時依據(jù)全面的生化反應(yīng)及血清學(xué)試驗做鑒定。

典型的大腸埃希菌基本生化反應(yīng)特征見表20-7大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定3.微生物學(xué)檢驗（3）．腸道感染的常規(guī)檢驗1）分離培養(yǎng)：糞便標(biāo)本接種腸道弱選擇培養(yǎng)基上（MAC/EMB），35℃培養(yǎng)18~24h后觀察菌落形態(tài)。2）鑒定：引起腹瀉的大腸埃希菌的生化反應(yīng)符合腸外感染的大腸埃希菌，但分別具有特殊的血清型(見表20-8)、腸毒素和毒力因子。大腸埃希菌二、埃希菌屬鑒定

沙門菌屬(Salmonella)

可從人和動物中分離得到，有許多血清型，目前已發(fā)現(xiàn)有2200多種，是腸桿菌科最復(fù)雜的菌屬。其致病性具有種系特異性，人類是傷寒和副傷寒甲、乙、丙型沙門菌的天然宿主。有些沙門菌專對動物致病，也有些對人和動物都能致病。三、沙門菌屬鑒定概述1.生物學(xué)性狀（1）形態(tài)與染色：

革蘭陰性直桿菌，較細長，菌體大?。?.7～1.5）μm×（2.0～5.0）μm。有菌毛。除雞沙門菌和雛沙門菌外，都有周鞭毛（見圖20–3）。一般無莢膜。均無芽胞。三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（2）培養(yǎng)特性

兼性厭氧菌，最適生長溫度35～37℃，最適生長pH為6.8～7.8。對營養(yǎng)要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂上生長出圓形、光滑、濕潤、半透明、邊緣整齊的菌落，有時可出現(xiàn)粗糙型菌落。在腸道選擇性培養(yǎng)基上菌落小至中等大小，透明或半透明；大多數(shù)菌株產(chǎn)生硫化氫，在SS瓊脂培養(yǎng)基上可形成中心黑色菌落。三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（3）生化反應(yīng)

常見沙門菌的主要生化反應(yīng)見表20-9。(4)抗原構(gòu)造

沙門菌屬主要有：菌體（O）抗原

鞭毛（H）抗原

表面抗原

常見沙門菌的抗原組分見表20-10。

三、沙門菌屬鑒定三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀抗原構(gòu)造（1）O抗原：

為多糖-類脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物，具耐熱性，能耐受100℃2.5h。O抗原是沙門菌分群的依據(jù)，共有58種，它們以阿拉伯?dāng)?shù)字順序排列，目前已排至67，但其中有9種被刪除，故數(shù)字是不連續(xù)的。每個沙門菌的血清型具有一種或數(shù)種O抗原。

將具有共同抗原成分的血清型歸為一個群，臨床上對人致病常見的是A～F群。O抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體以IgM為主，與相應(yīng)抗血清反應(yīng)可產(chǎn)生顆粒狀凝集。三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀抗原構(gòu)造（2）H抗原：

為不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)抗原，加熱或用乙醇處理均被破壞。

沙門菌H抗原有兩個相，是沙門菌分型的依據(jù)。同時具有第一相和第二相H抗原的細菌稱雙相菌，僅有一相者稱單相菌。H抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體以IgG為主，與相應(yīng)的抗血清反應(yīng)可產(chǎn)生絮狀凝集。三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀抗原構(gòu)造（3）表面抗原：

已被證實的沙門菌屬表面抗原有Vi抗原、M抗原和5抗原三種，均為不穩(wěn)定的表面抗原，常存在于傷寒沙門菌、丙型副傷寒沙門菌的部分柏林沙門菌中。最有意義的表面抗原是Vi抗原，其存在時可阻止O抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，加熱可將其破壞，人工傳代也可消失，故在沙門菌血清學(xué)鑒定時常事先加熱以消除Vi抗原的影響。

三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀抗原構(gòu)造（5）變異性：

沙門菌在一定條件下易發(fā)生變異，主要有以下幾種形式。1）S-R變異2）H-O變異3）V-W變異4）相位變異三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（5）變異性：1）S-R變異：

臨床標(biāo)本初次分離出的菌株一般都是光滑（S）型，經(jīng)人工傳代培養(yǎng)后可逐漸變成粗糙（R）型菌落，此時菌體表面的特異多糖抗原喪失，在生理鹽水中可出現(xiàn)自凝現(xiàn)象。2）H-O變異：

是指有鞭毛的沙門菌失去鞭毛的變異。三、沙門菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（5）變異性：3）V-W變異：

是指沙門菌失去Vi抗原的變異。

它包括：①初次分離得到的具有Vi抗原、O不凝集的沙門菌稱為V型菌；

②Vi抗原部分喪失、既可與O抗血清發(fā)生凝集又可與Vi抗血清凝集者稱VW型菌；

③Vi抗原完全喪失、與O抗血清發(fā)生凝集而與Vi抗血清不凝集者稱W型菌。V-W變異的過程是V型菌經(jīng)人工傳代培養(yǎng)，Vi抗原逐漸部分喪失而成為VW型菌，當(dāng)全部喪失時成為W型菌。三、沙門菌屬鑒定2.

臨床意義（1）致病因素1）侵襲力：

有Vi抗原的沙門菌具有侵襲力。沙門菌能穿過小腸上皮到達固有層，細菌在此部位常被吞噬細胞吞噬，但由于有Vi抗原的保護作用，被吞噬后的細菌在細胞內(nèi)不但沒被破壞，反而在細胞內(nèi)繼續(xù)生長繁殖，并隨游走的吞噬細胞將其攜帶至機體的其他部位。2）內(nèi)毒素：

沙門菌死亡后釋放毒性較強的內(nèi)毒素，可引起機體發(fā)熱、白細胞改變、中毒性休克等一系列病理生理變化。3）腸毒素：

某些沙門菌（如鼠傷寒沙門菌）能產(chǎn)生類似大腸埃希菌的腸毒素。。三、沙門菌屬鑒定2.

臨床意義（2）所致疾病

沙門菌主要通過被污染的食品和水源經(jīng)口感染，引起人類和動物沙門菌病，主要的感染類型有以下幾種。1）急性胃腸炎或食物中毒2）菌血癥或敗血癥3）傷寒和副傷寒4）攜帶者三、沙門菌屬鑒定2.

臨床意義（2）所致疾病1）急性胃腸炎或食物中毒

最為常見，如鼠傷寒沙門、豬霍亂沙門菌引起的輕型或爆發(fā)性腹瀉，伴有低熱、惡心和嘔吐等癥狀。2）菌血癥或敗血癥

多由豬霍亂沙門菌感染引起，無明顯的胃腸炎癥狀，多表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)等，常伴有局部感染如膽囊炎、骨髓炎等。往往出現(xiàn)血培養(yǎng)陽性而糞便培養(yǎng)陰性的結(jié)果。三、沙門菌屬鑒定2.

臨床意義（2）所致疾病3）傷寒和副傷寒

也稱為腸熱癥。分別由傷寒沙門菌和副傷寒沙門菌引起。

這二種病發(fā)病機制和臨床癥狀基本相似，最典型的是由傷寒沙門菌引起的傷寒，表現(xiàn)為發(fā)熱，血培養(yǎng)或肥達反應(yīng)陽性；副傷寒的病情較輕，病程較短。

腸熱癥也可由其他沙門菌引起，多表現(xiàn)為輕度發(fā)熱和腹瀉。三、沙門菌屬鑒定腸熱癥發(fā)病過程：

細菌隨污染的食物或飲水經(jīng)口進入人體后，穿過小腸上皮進入黏膜下組織。細菌在此被吞噬細胞吞噬后不被消滅反在吞噬細胞內(nèi)繁殖，并隨游走的吞噬細胞經(jīng)淋巴管將其帶去淋巴結(jié)，在淋巴結(jié)內(nèi)大量繁殖后，經(jīng)胸導(dǎo)管進入血流（第一次菌血癥）。此時病人在臨床上出現(xiàn)發(fā)熱、不適等癥狀。隨血流播散至肝、脾、膽囊、腎臟和骨髓等實質(zhì)器官中的細菌繼續(xù)大量繁殖后，再次進入血流（第二次菌血癥），并隨血液擴散至全身各器官及皮膚，此時病人多出現(xiàn)持續(xù)高熱、肝脾腫大、皮疹和全身中毒癥狀。膽囊中的細菌隨膽汁流入腸腔，經(jīng)糞便排出，腎盂中的細菌隨尿排出體外。本病潛伏期7～20d，典型病程3～4周，發(fā)病2周后機體出現(xiàn)免疫反應(yīng)，但同時也引起遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，可導(dǎo)致腸壁壞死和潰瘍，嚴(yán)重者可因此造成腸穿孔而危及生命。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（1）標(biāo)本采集

根據(jù)疾病的類型、病情和病程的不同分別采集不同的標(biāo)本。傷寒病原學(xué)診斷原則上是發(fā)病第1周取血，第2、3周取糞便作培養(yǎng)，第3周也可取尿液培養(yǎng)，全病程均可作骨髓培養(yǎng)。血清學(xué)診斷應(yīng)在病程的不同時期分別采集2～3份標(biāo)本。（圖20-4）三、沙門菌屬鑒定三、沙門菌屬鑒定圖20-4腸熱癥病程中糞便、血液和尿液細菌培養(yǎng)陽性率3.

微生物學(xué)檢驗（2）檢驗程序

沙門菌屬的檢驗程序見圖20-5三、沙門菌屬鑒定三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法1）分離培養(yǎng)與增菌培養(yǎng)：

標(biāo)本接種于腸道選擇培養(yǎng)基（MAC或EMB、SS平板培養(yǎng)基），若標(biāo)本含菌量少應(yīng)先進行増菌培養(yǎng)。①血液和骨髓：靜脈血5mL或骨髓液0.5mL，注入0.5%膽鹽葡萄糖肉湯50mL中，35℃増菌培養(yǎng)，每日觀察，若有細菌生長，則移種至血瓊脂平板和腸道選擇培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法②糞便：

直接接種至腸道選擇培養(yǎng)中，最好作床邊接種，或用卡-布（Cary-Blair）運送培養(yǎng)基。糞便量少時，可先用亞硒酸鹽增菌肉湯增菌后再接種到平板培養(yǎng)基上。③尿液等體液：

無菌采集的中段尿、胸腹水、膽汁、腦脊液等經(jīng)3000rpm/min離心沉淀后接種于GN增菌液、血瓊脂和腸道選擇培養(yǎng)基。

三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法2）鑒定①顯微鏡檢查：

標(biāo)本涂片染色鏡檢為革蘭陰性桿菌。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法2）鑒定②生化反應(yīng)鑒定：

挑選疑為沙門菌的菌落（EMB上無色或不透明琥珀色；MAC上較小、無色透明；SS上不透明或透明、無色或中央為黑色的菌落；XLD上呈紅色或中央為黑色的菌落），進一步鑒定到屬和種（生化、血清學(xué)試驗）。

常見沙門菌的生化反應(yīng)見表20-9。初步反應(yīng)疑為沙門菌的菌株須經(jīng)全面生化反應(yīng)證實和血清學(xué)分型后才能發(fā)出報告。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法2）鑒定③血清學(xué)鑒定：

利用沙門菌屬O抗原多價診斷血清和O、H、Vi抗原單價診斷血清進行鑒定試驗。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗

血清學(xué)鑒定順序：

①用沙門菌屬A～F群O抗原多價診斷血清與待檢菌做玻片凝集試驗，這是由于臨床上絕大多數(shù)沙門菌感染是由A～F群引起，故一般用A～F多價O抗原診斷血清；

②用O因子血清分群，選擇代表A～F群的因子血清分別進行試驗，確定相應(yīng)菌群；

③用H因子血清確定血清型。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法3）沙門菌屬鑒定中常遇到的一些問題及處理方法：

試驗時應(yīng)注意，生化反應(yīng)符合沙門菌，而與多價診斷血清不凝集時，應(yīng)考慮可能有表面抗原（Vi）的影響，可將細菌于玻璃試管內(nèi)用生理鹽水配成濃菌液，隔著試管置于沸水中加熱15～30min，冷卻后再次做凝集試驗。沸水處理能破壞菌體表面的Vi抗原。若多價抗血清不凝集且Vi抗原陰性者考慮為A～F以外菌群。僅出現(xiàn)單相H抗原（第一相或第二相）時，需用位相誘導(dǎo)法誘導(dǎo)出另一相抗原后再進行檢查。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法4）血清學(xué)診斷（肥達反應(yīng)）：

用已知傷寒、副傷寒沙門菌的O、H抗原，檢測受檢血清中有無相應(yīng)的抗體及其效價的半定量凝集試驗，稱為肥達反應(yīng)(Widalreaction)。與細菌分離培養(yǎng)同時進行或在細菌分離培養(yǎng)陰性的情況下，能輔助診斷傷寒、副傷寒甲、乙和丙型引起的腸熱癥。三、沙門菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗（3）檢驗方法4）血清學(xué)診斷（肥達反應(yīng)）：①方法：將受檢血清用生理鹽水作倍比稀釋，每個稀釋度需作5個復(fù)管，分別加入等量的傷寒沙門菌O、H抗原及副傷寒沙門菌甲、乙、丙的H抗原(以A、B、C表示）進行凝集試驗，凡血清最高稀釋度出現(xiàn)明顯凝集者為凝集效價。三、沙門菌屬鑒定血清學(xué)診斷（肥達反應(yīng)）

結(jié)果解釋：

①正常值：各地區(qū)有所不同，一般O凝集效價＞1:80，H凝集效價＞1:160，A、B、C副傷寒的H凝集效價＞1:80才有臨床意義。如在疾病早期及中后期分別采集兩次血清，若第二份血清比第一份血清的效價增高4倍以上具有診斷價值；

②O抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體為IgM,出現(xiàn)較早，存在于血清內(nèi)的時間較短；H抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體為IgG，出現(xiàn)較遲，持續(xù)存在的時間較長。因抗原、抗體性質(zhì)的不同，可影響肥達反應(yīng)的結(jié)果，從而使結(jié)果的解釋變得更為復(fù)雜；三、沙門菌屬鑒定血清學(xué)診斷（肥達反應(yīng)）

結(jié)果解釋：

③O高H不高，可能為疾病的早期，沙門菌屬中其他菌種感染引起的交叉反應(yīng)，或H-O變異的沙門菌引起的感染等。建議一周后復(fù)查。如一周后H也有升高，可證實為腸熱癥；

④H高O不高，可能為疾病的晚期；以往患過傷寒，副傷寒或接受過預(yù)防接種；回憶反應(yīng)等。三、沙門菌屬鑒定三、沙門菌屬鑒定崗位對接

案例分析2019年6月18日上午9點,某市疾病預(yù)防控制中心接到其轄區(qū)內(nèi)某中學(xué)校醫(yī)報告,該校近3d來有90多名學(xué)生出現(xiàn)類似的發(fā)燒癥狀,原因不明。為查明事件的發(fā)生原因,以采取針對性的控制措施,市疾病預(yù)防控制中心立即派出調(diào)查小組開展調(diào)查處置工作。根據(jù)現(xiàn)場衛(wèi)生學(xué)調(diào)查、流行病學(xué)調(diào)查和實驗室檢測結(jié)果等綜合分析,確定為一起腸炎型沙門菌引起的食物中毒事件。請問：1.對群體性食物中毒事件，應(yīng)采集那些標(biāo)本？2.如何對該微生物進行檢驗？3.鑒定該微生物的依據(jù)有哪些？

志賀菌屬（Shigellae）

是人和靈長類動物細菌性痢疾最常見的病原體，與沙門菌屬一樣是主要的腸道病原菌之一。四、志賀菌屬鑒定概述1.生物學(xué)性狀（1）形態(tài)與染色：

革蘭陰性桿菌，菌體短小。無鞭毛，無莢膜，無芽胞，有菌毛。胞質(zhì)中存在大小兩種質(zhì)粒，與該菌的侵襲性和耐藥性有關(guān)，大質(zhì)粒與腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）有同源性。（2）培養(yǎng)特性

兼性厭氧，最適的生長溫度為37℃，最適pH為7.2～7.4。本菌屬對營養(yǎng)要求不高，能在普通的培養(yǎng)基上生長。在腸道鑒別培養(yǎng)基上形成不發(fā)酵乳糖，中等大小，無色半透明的菌落。志賀菌屬中的宋內(nèi)志賀菌常形成較大、扁平、粗糙型菌落。四、志賀菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（3）生化反應(yīng)

志賀菌屬分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，除宋內(nèi)志賀菌遲緩分解乳糖外，其他均不分解乳糖，不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素。甲基紅試驗陽性，VP試驗陰性，枸櫞酸鹽利用試驗陰性，吲哚試驗因不同菌型而異，氧化酶試驗陰性。四、志賀菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（4）抗原構(gòu)造與分類

志賀菌屬有菌體（O）抗原，無鞭毛（H）抗原，部分菌種有K抗原。O抗原是分類的依據(jù)，有群特異性和型特異性兩種抗原。根據(jù)生化反應(yīng)和O抗原的不同，可將志賀菌屬分為4個血清群，即痢疾志賀菌（A群）、福氏志賀菌（B群）、鮑氏志賀菌（C群）和宋內(nèi)志賀菌（D群）。血清型（含亞型）有40余個。O抗原是一種多糖復(fù)合物，耐熱，加熱100℃60min不被破壞。K抗原在分類上無意義，但其存在時能阻斷O抗原與相應(yīng)抗血清的凝集作用。K抗原不耐熱，加熱100℃60min可消除K抗原對O抗原的阻斷作用。

志賀菌屬抗原分類見表20–10。四、志賀菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（5）變異性1）S-R變異：

宋內(nèi)志賀菌的菌落由光滑型向粗糙型變異，此過程尚伴有生化特征、抗原構(gòu)造和致病性的變異，從而出現(xiàn)不典型菌株。部分不典型菌株可通過10％膽汁肉湯返祖為典型菌株。在細菌性痢疾恢復(fù)期、慢性患者或帶菌者糞便檢查時?？煞蛛x到不典型菌株，對這類不典型的菌株要特別注意，必須反復(fù)檢查，對傳染源的發(fā)現(xiàn)和疾病的控制有重要意義。2）耐藥性變異：

志賀菌屬于上世紀(jì)50年代首先出現(xiàn)對磺胺的耐藥，之后相繼出現(xiàn)了對四環(huán)素、氨芐西林、鏈霉素和氯霉素的耐藥。志賀菌屬的多重耐藥已成為一個嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)問題。四、志賀菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（5）變異性3）毒力變異：

志賀菌屬的某些菌株可產(chǎn)生毒力變異。某種抗生素耐藥的菌株伴隨毒力減弱時，仍存在免疫原性，因此可用于制備口服疫苗預(yù)防細菌性痢疾?？诜〖不钜呙缡悄壳笆澜缟衔┮灰恢戢@準(zhǔn)生產(chǎn)的基因工程口服痢疾活疫苗。四、志賀菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀（6）抵抗力

志賀菌屬細菌對理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細菌為弱，在1%的苯酚中15～30min或加熱60℃10min即被殺死，對酸較敏感，在運送標(biāo)本時須使用含有緩沖劑的培養(yǎng)基。四、志賀菌屬鑒定2.

臨床意義（1）致病因素

志賀菌屬的致病因素主要有侵襲力和毒素1）侵襲力：

該菌借助菌毛，可粘附在回腸末端和結(jié)腸的黏膜上皮細胞上，進而入侵腸上皮細胞，在細胞層間繁殖，引起炎癥反應(yīng)。四、志賀菌屬鑒定2.

臨床意義（1）致病因素

志賀菌屬的致病因素主要有侵襲力和毒素2）毒素：

志賀菌屬各菌株均有強烈的內(nèi)毒素，作用于腸壁使其通透性增加，促進毒素的吸收，可引起發(fā)熱、白細胞增加、微循環(huán)障礙、中毒性休克及DIC等一系列癥狀。釋放的內(nèi)毒素還可破壞腸黏膜形成炎癥，導(dǎo)致其壞死、脫落和潰瘍，臨床上出現(xiàn)典型的黏液膿血便。內(nèi)毒素還能作用于腸壁的自主神經(jīng)系統(tǒng)，引起腸道功能紊亂，出現(xiàn)腸痙攣、腹痛、腹瀉及里急后重等癥狀。志賀菌A群的Ⅰ型菌株還可產(chǎn)生外毒素，同時具有細胞毒素、神經(jīng)毒素和腸毒素3種毒性，可引起細胞壞死、神經(jīng)麻痹和水樣腹瀉。四、志賀菌屬鑒定2.

臨床意義(2)所致疾病

志賀菌屬引起的細菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：1）急性細菌性痢疾：

包括典型、非典型及中毒型細菌性痢疾。典型細菌性痢疾臨床癥狀典型，患者先出現(xiàn)為腹痛、發(fā)熱、大量水樣便，1～2d后轉(zhuǎn)為少量腹瀉（有里急后重現(xiàn)象），便中含有多量的血、黏液和白細胞。非典型細菌性痢疾因癥狀不典型，容易造成誤診和漏診。中毒性細菌性痢疾多見于少兒患者，發(fā)病急，常無明顯的消化道癥狀就出現(xiàn)全身中毒癥狀，若搶救不及時，往往造成死亡。四、志賀菌屬鑒定2.

臨床意義(2)所致疾病

2）慢性細菌性痢疾：常因急性細菌性痢疾治療不徹底，機體抵抗力低，營養(yǎng)不良，造成反復(fù)發(fā)作、遷延不愈，病程超過2個月以上的視為慢性細菌性痢疾。此外有痢疾病史、但無癥狀，結(jié)腸鏡檢查或大便培養(yǎng)陽性者稱為隱匿型細菌性痢疾，此型在流行病學(xué)中有重要意義。3）帶菌者：有恢復(fù)期帶菌、慢性帶菌和健康帶菌3種類型，后者是主要的傳染源。帶菌者不能從事餐飲行業(yè)和幼教等工作。四、志賀菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗(1)標(biāo)本采集

志賀菌屬細菌很少進入血流，因此只選用糞便或肛拭標(biāo)本做培養(yǎng)。最好在發(fā)病早期（治療前）采集黏液膿血便，床邊接種或立即送檢。如不能及時接種，可將標(biāo)本置于甘油保存液或卡-布運送培養(yǎng)基內(nèi)及時送檢。健康體檢者可用肛拭取樣。(2)檢驗程序

見圖20–6

四、志賀菌屬鑒定四、志賀菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗(3)檢驗方法

分離培養(yǎng)和鑒定1）分離培養(yǎng)：

取糞便或肛拭標(biāo)本，挑取帶有膿血和黏液的部分進行培養(yǎng)。常用分離培養(yǎng)基有腸道鑒別培養(yǎng)基（MAC）和選擇培養(yǎng)基（SS）。也可選用對志賀菌屬分離效果較好的木糖-賴氨酸-去氧膽酸鹽（XLD）培養(yǎng)基。

志賀菌屬細菌很少進入血流，因此只選用糞便或肛拭標(biāo)本做培養(yǎng)。最好在發(fā)病早期（治療前）采集黏液膿血便，床邊接種或立即送檢。如不能及時接種，可將標(biāo)本置于甘油保存液或卡-布運送培養(yǎng)基內(nèi)及時送檢。健康體檢者可用肛拭取樣。

四、志賀菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗(3)檢驗方法

2）鑒定：①顯微鏡檢查：

標(biāo)本涂片染色鏡檢為革蘭陰性桿菌。②初步鑒定：

取可疑菌落（EMB上無色或者不透明的琥珀色菌落；MAC上無色不透明菌落；SS上不透明或透明菌落；XLD上呈紅色菌落）。接種到KIA和MIU培養(yǎng)基中，再將在KIA上出現(xiàn)KA－－，在MIU上出現(xiàn)－－/＋－菌落的菌落進一步鑒定到屬和種（生化、血清學(xué)試驗）。志賀菌的基本生化反應(yīng)特征表現(xiàn)為：KIA（KA－－），MIU（－－/＋－），IMViC（－＋－－），賴氨酸脫羧酶陰性。志賀菌屬主要生化反應(yīng)見表20-10。四、志賀菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗(3)檢驗方法

2）鑒定：③最終鑒定：

須作全面生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗。4個血清群（種）間的鑒定依據(jù)為痢疾志賀菌甘露醇陰性，宋內(nèi)志賀菌β-半乳糖苷酶和鳥氨酸脫羧酶陽性。偶爾出現(xiàn)生化反應(yīng)符合志賀菌鑒定但與志賀菌診斷血清不凝集的現(xiàn)象，可制成細菌懸液置100℃水浴加熱15～30min并重復(fù)做凝集試驗，以與EIEC鑒別。志賀菌屬各群主要生化反應(yīng)結(jié)果見表20-11。四、志賀菌屬鑒定四、志賀菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗(3)檢驗方法

3）鑒別試驗：①志賀菌屬與腸侵襲性大腸埃希菌（EIEC）的鑒別：志賀菌屬與EIEC之間在血清學(xué)上有交叉反應(yīng)，DNA相關(guān)性很高，尤其是與EIEC在生化特征上難以鑒別。

下列特征有助于鑒定志賀菌種：a.無動力，賴氨酸陰性；b.發(fā)酵糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；c.分解粘多糖，在醋酸鹽和枸櫞酸鹽瓊脂上產(chǎn)堿。四、志賀菌屬鑒定3.

微生物學(xué)檢驗(3)檢驗方法

3）鑒別試驗：②志賀菌屬與類志賀鄰單胞菌鑒別：

可用動力和氧化酶試驗加以鑒別，志賀菌屬均為陰性而類志賀鄰單胞菌為陽性。③志賀菌屬與傷寒沙門菌的鑒別：

傷寒沙門菌在KIA培養(yǎng)基上的表現(xiàn)與志賀菌相似，鑒別要點是傷寒沙門菌硫化氫和動力陽性，能與沙門菌因子血清凝集而不與志賀菌屬因子血清凝集。④血清學(xué)鑒定：

凡生化反應(yīng)符合志賀菌屬者均需作血清學(xué)鑒定，應(yīng)先用志賀菌屬4種多價診斷血清作玻片凝集試驗，凝集者進一步作定型鑒定。

四、志賀菌屬鑒定

凡生化反應(yīng)符合志賀菌屬者均需作血清學(xué)鑒定，應(yīng)先用志賀菌屬4種多價診斷血清作玻片凝集試驗，凝集者進一步作定型鑒定。1）A群：痢疾志賀菌，甘露醇陰性，共有10個血清型，以1型、2型為主，其他型別罕見。各型之間無共同抗原關(guān)系，A群的各菌型均有K抗原。2）B群：在我國最為常見，且抗原結(jié)構(gòu)最為復(fù)雜。3）C群：鮑氏志賀菌，型別較多，抗原結(jié)構(gòu)較單純，各型均有K抗原。4）D群：宋內(nèi)志賀菌，僅有一個血清型，但有光滑型（S）和粗糙型（R）兩種菌落。R型菌落不能被S型診斷血清凝集，因此宋內(nèi)志賀菌的診斷血清應(yīng)同時含有S和R兩種因子血清（I相和II相）。四、志賀菌屬鑒定

3.

微生物學(xué)檢驗(3)檢驗方法

4）毒力試驗：

豚鼠眼結(jié)膜試驗，是志賀菌對豚鼠眼結(jié)膜實驗性感染試驗。凡以新分離出的志賀菌接種豚鼠眼結(jié)膜均能在24h內(nèi)引起豚鼠的眼結(jié)膜炎；而實驗室保存的志賀菌菌株和腸桿菌科的其他細菌,如傷寒、副傷寒桿菌,大腸桿菌,變形桿菌等,若接種于豚鼠眼結(jié)膜,并不能引起與志賀菌相似的病變。

四、志賀菌屬鑒定

克雷伯菌屬（Klebsiella）

廣泛分布，在自然界中的水、土壤及正常人和動物的呼吸道、腸道中均能分離到克雷伯菌。有7個種，包括肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、鼻硬結(jié)克雷伯菌、解鳥氨酸克雷伯菌、植生克雷伯菌、臭鼻克雷伯菌和土壤克雷伯菌。肺炎克雷伯菌包括肺炎亞種、臭鼻亞種和鼻硬結(jié)亞種。以肺炎克雷伯菌肺炎亞種對人致病性最強，是重要的條件致病菌和醫(yī)源性感染菌之一。概述五

克雷伯菌屬鑒定

1.

生物學(xué)性狀（1）形態(tài)與染色

革蘭陰性短桿菌，卵圓形或球桿狀，常單個、成雙或短鏈狀排列。無芽胞和鞭毛，病人標(biāo)本直接涂片或取營養(yǎng)豐富培養(yǎng)基上生長的培養(yǎng)物涂片染色鏡檢可見菌體外有較明顯的莢膜。（2）培養(yǎng)特性

兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通營養(yǎng)平板上經(jīng)35℃18～24h培養(yǎng)后，形成較大、凸起、灰白色、不透明的黏液型菌落，用接種環(huán)沾取時有黏性，挑起易拉成長絲狀細絲。在血平板上不溶血；在麥康凱或SS上發(fā)酵乳糖等瓊脂平板上，形成較大、黏液狀，互相融合的粉紅色菌落。五

克雷伯菌屬鑒定

1.

生物學(xué)性狀（3）生化反應(yīng)

氧化酶陰性，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，脲酶陽性，硝酸鹽還原試驗陽性，吲哚陰性（產(chǎn)酸克雷伯菌和解鳥氨酸克雷伯菌陽性），硫化氫試驗陰性，精氨酸雙水解酶試驗陰性，賴氨酸脫羧酶陽性，鳥氨酸脫羧酶陰性。肺炎克雷伯菌肺炎亞種IMViC―/＋―＋＋。（4）抗原構(gòu)造

克雷伯菌屬有O抗原和K抗原。K抗原的主要成分是莢膜多糖，用以分型。五

克雷伯菌屬鑒定

2.

臨床意義

肺炎克雷伯菌屬是條件致病菌，以肺炎克雷伯菌引起的感染最常見，所致疾病占克雷伯菌屬感染的95%以上。肺炎克雷伯菌屬可引起典型的原發(fā)性肺炎，對老人和嬰幼兒等免疫力低下者更具危險性，此外還可引起其他部位的感染，如創(chuàng)傷感染、敗血癥、泌尿道感染、腦膜炎等。鼻硬結(jié)克雷伯菌主要侵犯口咽、鼻、喉等部位，發(fā)生慢性肉芽腫病變和硬結(jié)形成，造成組織壞死。臭鼻克雷伯菌能引起慢性萎縮性鼻炎。五

克雷伯菌屬鑒定

3.

微生物學(xué)檢驗（1）采集標(biāo)本

采集痰、血液、尿液、膿、腦脊液、糞便、胸腹水等。（2）檢驗方法及鑒定1）顯微鏡檢查

標(biāo)本涂片革蘭染色鏡檢為革蘭陰性桿菌，多呈球桿狀，菌體邊緣有明顯的莢膜。2）分離培養(yǎng)

血液穿刺液標(biāo)本先經(jīng)肉湯增菌后，取增菌培養(yǎng)物或其他標(biāo)本接種血平板或麥康凱瓊脂平板，35℃培養(yǎng)孵育18～24h，挑取可疑的菌落涂片染色鏡檢，并做進一步鑒定到屬和種。3）生化鑒定

克雷伯菌屬典型生化反應(yīng)模式為：氧化酶陰性，硫化氫試驗陰性，動力陰性，硝酸鹽還原試驗陽性，KIA：AA＋－；MIU：－－/＋＋；IMViC：－/＋－＋＋，鳥氨酸脫羧酶陰性，丙二酸鹽陽性。4）鑒定

克雷伯菌屬與其他相近菌屬之間的鑒別見表20–13。五

克雷伯菌屬鑒定五

克雷伯菌屬鑒定

3.

微生物學(xué)檢驗（2）檢驗方法及鑒定5）血清學(xué)鑒定

本菌屬與類似菌屬的鑒別可用特異性抗血清進行莢膜腫脹試驗加以鑒定。方法是取一張潔凈的載玻片，玻片左右兩側(cè)各加待檢菌液（華-弗培養(yǎng)基35℃，18～24h孵育）1～2接種環(huán)，于一側(cè)加抗血清，另一側(cè)不加抗血清作為空白對照，再于兩側(cè)各加1滴墨汁（或美藍），混勻后加蓋玻片，置顯微鏡油鏡下觀察，在細菌周圍出現(xiàn)較大空白圈者判為陽性。對照側(cè)無此現(xiàn)象。五

克雷伯菌屬鑒定

變形桿菌屬（Proteus）

腸桿菌科的一屬，廣泛存在于泥土、水、和被糞便污染的物質(zhì)中，包括5個種：普通變形桿菌、奇異變形桿菌、產(chǎn)粘變形桿菌、潘尼變形桿菌和豪氏變形桿菌。一般不致病，但在特定情況下，可引起多種感染，是醫(yī)院感染的常見致病菌。六、變形桿菌屬鑒定概述

1.

生物學(xué)性狀

（

1）形態(tài)與染色

革蘭陰性桿菌，大小0.4～0.6μm×1.0～3.0μm。有明顯的多形性，呈球形或絲狀。有周身鞭毛，運動活潑，無莢膜和芽胞，有菌毛。

六、變形桿菌屬鑒定

1.

生物學(xué)性狀（2）培養(yǎng)特性

兼性厭氧，對營養(yǎng)無特殊要求,生長溫度在10～43℃，在普通培養(yǎng)基中即可生長。

普通變形桿菌和奇異變形桿菌大多數(shù)菌株在普通瓊脂培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基上有遷徙生長現(xiàn)象，即細菌以接種點為中心，向外呈同心圓形擴散生長，薄霧狀菌膜很快就會布滿整個培養(yǎng)基表面，此現(xiàn)象稱為遷徙生長現(xiàn)象，為本屬的一個重要特征。

在腸道選擇性培養(yǎng)基（麥康凱和SS瓊脂平板）上，因不發(fā)酵乳糖而形成無色、圓形、較扁平、透明或半透明的小菌落。產(chǎn)硫化氫的菌株在SS瓊脂平板生長易形成中心呈黑色的菌落，與沙門菌很相似。普通變形桿菌、奇異變形桿菌的一些菌株和產(chǎn)粘變形桿菌在血平板上溶血。六、變形桿菌屬鑒定

1.

生物學(xué)性狀

（

3）形態(tài)與染色

本菌屬的生化特征硫化氫陽性，脲酶強陽性（2～4h就因能迅速分解尿素而呈陽性），分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖，苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性。變形桿菌屬細菌種間主要生化反應(yīng)鑒別要點見表20-14。（4）抗原構(gòu)造

變形桿菌屬O抗原是分群的主要依據(jù)，H抗原是分型的依據(jù)。普通變形桿菌的OΧ19、OΧ2和OΧk菌株與立克次體有共同抗原成分，可發(fā)生交叉反應(yīng)。臨床上利用這一現(xiàn)象，將變形桿菌的OΧ19、OΧ2和OΧk菌株代替立克次體作抗原，與病人血清進行凝集試驗，用以輔助診斷立克次體病，此試驗稱為外斐試驗（Weil-Felix）。六、變形桿菌屬鑒定六、變形桿菌屬鑒定

2.

臨床意義

臨床標(biāo)本中分離出的變形桿菌主要有普通變形桿菌和奇異變形桿菌，可感染人體多個部位，其中以泌尿系統(tǒng)感染最常見，還可引起食物中毒、呼吸道感染、創(chuàng)口感染及嬰幼兒腸炎等。普通變形桿菌引起尿路感染，發(fā)病率僅次于大腸埃希菌，醫(yī)源性感染較多見。奇異變形桿菌多為社區(qū)獲得性感染，導(dǎo)致泌尿系統(tǒng)感染及少數(shù)的呼吸道感染。在堿性環(huán)境中，變形桿菌生長較快，腎結(jié)石和膀胱結(jié)石的形成可能與變形桿菌感染有關(guān)。六、變形桿菌屬鑒定

3.

微生物學(xué)檢驗（1）采集標(biāo)本

可采集的標(biāo)本有血液、尿、膿、痰、傷口分泌物、嬰兒糞便、可疑食物等。（2）檢驗方法1）涂片檢查

標(biāo)本經(jīng)涂片革蘭染色，鏡檢可見革蘭陰性桿菌。2）分離培養(yǎng)

血液和穿刺液先用肉湯增菌培養(yǎng)后，取增菌培養(yǎng)物或其他標(biāo)本接種血平板、麥康凱瓊脂平板或SS瓊脂平板，經(jīng)35℃18～24h后，挑取不發(fā)酵乳糖菌落或呈遷徙生長的菌落，再作屬鑒定和種鑒定。

六、變形桿菌屬鑒定

3.

微生物學(xué)檢驗3）生化鑒定

變形桿菌屬典型生化反應(yīng)模式：氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性，硝酸鹽還原陽性，分解尿素，硫化氫試驗陽性，KIA：KA＋＋；MIU：＋－/＋＋。普通變形桿菌吲哚試驗陽性，鳥氨酸脫羧酶試驗陰性，而奇異變形桿菌相反。4）屬和種的鑒定

變形桿菌屬和普羅威登菌屬及摩根菌屬在生化反應(yīng)及致病性上有一些共同之處，這些相似菌屬之間的主要鑒別要點見表20–13。變形桿菌屬內(nèi)種的鑒別見表20-15。六、變形桿菌屬鑒定六、變形桿菌屬鑒定

耶爾森菌屬（Yersinia）

已知13個種和亞種，均可從臨床標(biāo)本中分離到。目前至少有3種是人類致病菌：鼠疫耶爾森菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌和假結(jié)核耶爾森菌，都是人畜共患病的病原菌。

七、耶爾森菌屬鑒定概述

鼠疫耶爾森菌，俗稱鼠疫桿菌，是引起烈性傳染病鼠疫的病原體，鼠疫為自然疫源性疾病。人類鼠疫可通過被感染的鼠蚤叮咬或直接接觸感染動物而傳染，病死率較高，我國將其列為甲類傳染病。（一）鼠疫耶爾森菌七、耶爾森菌屬鑒定1.生物學(xué)性狀

（1）形態(tài)與染色

革蘭陰性小桿菌，常呈球桿狀或直桿狀，兩端鈍圓，在新分離菌株及動物體液中呈兩極濃染，無芽胞，無鞭毛，有莢膜；在22～25℃時無動力表現(xiàn)。（2）培養(yǎng)特性

兼性厭氧，最適生長溫度為27～30℃，PH為6.9～7.2。在普通培養(yǎng)基上生長緩慢。在血平板上生長良好，菌落呈細小、粗糙、黏液狀。在肉湯培養(yǎng)基中，開始為混濁生長，24h后，培養(yǎng)基底部開始出現(xiàn)絮狀沉淀物，48h后形成菌膜，稍加搖動菌膜呈“石鐘乳”狀下垂。此特征有助于該菌的鑒別。七、耶爾森菌屬鑒定（一）鼠疫耶爾森菌1.生物學(xué)性狀（3）生化反應(yīng)

本菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對大多數(shù)糖不分解；氧化酶陰性；吲哚和脲酶試驗陰性；鳥氨酸、賴氨酸脫羧酶、苯丙氨酸脫氨酶均為陰性；IMViC：―＋――；KIA：KA――；MIU：―――；不液化明胼，當(dāng)穿刺培養(yǎng)時，培養(yǎng)物表面呈膜狀，細菌沿穿刺線呈縱樹狀生長。（4）抗原構(gòu)造

鼠疫耶爾森菌抗原構(gòu)造復(fù)雜，已證實的至少有18種，比較重要的有FI、V／W、T三種抗原。七、耶爾森菌屬鑒定（一）鼠疫耶爾森菌1.生物學(xué)性狀

鼠疫耶爾森菌的FI、V／W、T三種抗原：1）FI抗原

是本菌的莢膜或包膜抗原，為蛋白質(zhì)多糖復(fù)合物，100℃15min可失去抗原性；其抗原性強，特異性高，刺激機體產(chǎn)生的抗體有免疫保護作用，因其易致機體超敏反應(yīng)，故不用于人工主動免疫，只作為鼠疫血清學(xué)試驗的診斷抗原。2）V／W抗原

本菌的表面抗原為蛋白質(zhì)和脂蛋白，具有抗吞噬作用，與本菌毒力有關(guān)。3）T抗原

為蛋白質(zhì)抗原即外毒素，對鼠類有劇烈毒性，對其他動物毒性低，故稱鼠毒素。可用0.2％甲醛脫毒成類毒素，免疫馬可制成抗毒素。七、耶爾森菌屬鑒定（一）鼠疫耶爾森菌2.臨床意義

鼠疫耶爾森菌的侵襲力有內(nèi)毒素和鼠毒素，及FI、V/W和T抗原等多種因子協(xié)同作用。人對本菌的感受性沒有年齡的差別，主要取決于感染的方式。感染主要是由帶菌鼠蚤的叮咬，人和染疫動物（包括人）接觸所致。鼠疫耶爾森菌致病的臨床類型主要有3種：腺鼠疫、敗血癥鼠疫和肺鼠疫。鼠疫是烈性傳染病，病死率高，列入我國法定傳染病中的甲類傳染病。七、耶爾森菌屬鑒定（一）鼠疫耶爾森菌3.微生物學(xué)檢驗

本菌傳染性極強，出現(xiàn)病例，必須立即向省市衛(wèi)生防疫部們報告。微生物檢驗時標(biāo)本應(yīng)送到本地疾病預(yù)防控制中心，有嚴(yán)格防護措施的專用實驗室進行檢測。根據(jù)疾病不同類型，采集臨床病人的血液、痰、淋巴結(jié)穿刺液、咽喉分泌物等作為標(biāo)本，進行直接涂片染色、分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)、動物試驗、噬菌體裂解試驗、血清學(xué)試驗及核酸檢測等鑒定。七、耶爾森菌屬鑒定（一）鼠疫耶爾森菌